醫(yī)學(xué)教程 革蘭陰性球菌

第九章革蘭陰性球菌第一頁，編輯于星期四：一點(diǎn)十分。奈瑟菌屬（Neisseria）奈瑟氏菌屬是一群革蘭陰性球菌，常成雙排列，無鞭毛，無芽胞，有菌毛。人類為奈瑟氏菌屬的自然宿主，在奈瑟菌屬10個種中，對人致病的只有腦膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌，兩種細(xì)菌DNA序列有70％的同源性，其余8個種視為條件致病菌。主要區(qū)別點(diǎn)為，淋病奈瑟菌寄居于尿道黏膜，引起泌尿生殖系統(tǒng)疾?。欢X膜炎奈瑟菌和其他奈瑟菌均存在于鼻咽腔黏膜。腦膜炎奈瑟菌有多糖成分。第二頁，編輯于星期四：一點(diǎn)十分。第一節(jié)腦膜炎奈瑟菌N.meningitismeningococcus第三頁，編輯于星期四：一點(diǎn)十分。1.腦膜炎奈瑟菌腦膜炎奈瑟菌（N.meningitidis）簡稱為腦膜炎球菌（meningococcus），是流行性腦膜炎（簡稱流腦）的病原菌。腦膜炎奈瑟菌第四頁，編輯于星期四：一點(diǎn)十分。1.1生物學(xué)性狀——形態(tài)腦膜炎奈瑟菌純培養(yǎng)的鏡下形態(tài)（革蘭染色）腦膜炎奈瑟菌為革蘭染色陰性，常呈雙排列，直徑約為0.6-0.8μm的雙球菌。單個菌體呈腎形或豆形。成雙排列時，兩個凹面相對。無鞭毛，不形成芽胞。新分離菌株大多有莢膜和菌毛。第五頁，編輯于星期四：一點(diǎn)十分。在腦脊液(CSF)直接涂片中，常位于中性粒細(xì)胞內(nèi)外。第六頁，編輯于星期四：一點(diǎn)十分。1.1生物學(xué)性狀——培養(yǎng)專性需氧，但在5%~10%CO2條件下生長最佳。營養(yǎng)要求高，需血液血清，最常用巧克力平板。形成光滑透明“露滴樣”菌落。可產(chǎn)生自溶酶，需及時轉(zhuǎn)種，培養(yǎng)物如不及時轉(zhuǎn)種，超過48h可死亡。第七頁，編輯于星期四：一點(diǎn)十分。巧克力平板：成分：普通營養(yǎng)瓊脂（或哥倫比亞瓊脂），氯化血紅素，萬古霉素（多粘菌素），輔酶A制法：取所需要量的普通營養(yǎng)瓊脂，加蒸餾水溶解后，高壓滅菌。冷卻至60度左右加入一定量的羊血，置85度水浴中搖動10-15分鐘，冷卻到50度左右后加入相應(yīng)量的萬古霉素和輔酶A，搖勻后傾注平板。用途：除可以分離奈瑟菌，嗜血桿菌外，由于加入了萬古霉素，可抑制絕大多數(shù)的革蘭陽性菌的生長，在分離培養(yǎng)基上具有重要意義。血液中有V、X因子是位于紅細(xì)胞中的，一般細(xì)菌不能利用，輕微的加熱使紅細(xì)胞破壞釋放到細(xì)胞外方可利用。第八頁，編輯于星期四：一點(diǎn)十分。腦膜炎奈瑟菌在巧克力瓊脂平板上的菌落特征腦膜炎奈瑟菌在巧克力平板上形成圓形、凸起、濕潤、光滑、透明露滴狀菌落。

第九頁，編輯于星期四：一點(diǎn)十分。血平板：成分：普通營養(yǎng)瓊脂（或哥倫比亞瓊脂），脫纖維羊血制法：取所需要量的普通營養(yǎng)瓊脂，加蒸餾水溶解后，高壓滅菌。冷卻至50度，加入一定量（5%）羊血，傾注平板。用途：適于各類細(xì)菌的生長。第十頁，編輯于星期四：一點(diǎn)十分。腦膜炎奈瑟菌在血瓊脂平板上的菌落特征腦膜炎奈瑟菌在培養(yǎng)基上形成圓形隆起、表面有光澤、透明或半透明、直徑約1mm～5mm的露滴樣粘液型菌落。無色素形成。血平板上無溶血現(xiàn)象。第十一頁，編輯于星期四：一點(diǎn)十分。第十二頁，編輯于星期四：一點(diǎn)十分。第十三頁，編輯于星期四：一點(diǎn)十分。1.1生物學(xué)性狀——生化反應(yīng)可產(chǎn)生自溶酶，人工培養(yǎng)時若不及時移種，48h后菌體自溶。大多數(shù)腦膜炎奈瑟菌分解葡萄糖和麥芽糖，產(chǎn)酸，不產(chǎn)氣。氧化酶和觸酶實(shí)驗(yàn)陽性。第十四頁，編輯于星期四：一點(diǎn)十分。1.1生物學(xué)性狀——抗原構(gòu)造根據(jù)莢膜多糖抗原不同，分為13個血清群。目前我國流行的血清群，95%以上A群，B群次之，C群較少見，但致病力最強(qiáng)。第十五頁，編輯于星期四：一點(diǎn)十分。1.1生物學(xué)性狀——抵抗力很弱：對干燥、熱力、化學(xué)因素敏感，室溫3h即死亡。各種消毒劑敏感。第十六頁，編輯于星期四：一點(diǎn)十分。1.1生物學(xué)性狀——致病性及免疫性致病物質(zhì)莢膜（抗吞噬作用，增強(qiáng)細(xì)菌侵襲力）菌毛（黏附細(xì)胞表面，利于進(jìn)一步侵襲）內(nèi)毒素（主要致病物質(zhì)）所致疾病流行性腦膜炎（簡稱流腦）人類是唯一的易感宿主，常存在于患者或帶菌者的鼻咽腔黏膜中，主要通過飛沫直接從空氣中傳播。致病機(jī)制目前尚未完全清楚。免疫性6月～2歲年齡組嬰兒免疫力最低，是易感人群第十七頁，編輯于星期四：一點(diǎn)十分。1.2.1標(biāo)本采集與分離培養(yǎng)1.病人腦脊液、血液和出血點(diǎn)滲出液的分離培養(yǎng)腦脊液離心取上清液檢測腦膜炎奈瑟菌特異抗原，沉淀物直接接種巧克力瓊脂平板，5%CO2，37℃培養(yǎng)，同時直接染色鏡檢。病人急性期靜脈血用葡萄糖血清肉湯增菌，5%CO2，37℃培養(yǎng)24-72h。每日從肉湯培養(yǎng)物中取樣分離培養(yǎng)，余下的血液分離血清檢查抗原和抗體效價，病人恢復(fù)期血液血清也檢測抗體效價。新鮮出血點(diǎn)滲出物接種巧克力平板，同時直接染色鏡檢。2.健康者咽拭子的分離培養(yǎng)咽拭子直接接種含多粘菌素B和萬古霉素的巧克力平板。第十八頁，編輯于星期四：一點(diǎn)十分。1.2.2腦膜炎奈瑟菌的鑒定生化鑒定（光滑露珠樣菌落）

氧化酶：+DNA酶：-營養(yǎng)瓊脂生長：-葡萄糖：+麥芽糖：+第十九頁，編輯于星期四：一點(diǎn)十分。氧化酶又名細(xì)胞色素氧化酶(C)、或呼吸酶。原理：氧化酶在有分子氧或細(xì)胞色素C存在時，可氧化四甲基對苯撐二胺出現(xiàn)紫色反應(yīng)。用于檢測細(xì)菌是否有該酶的存在。細(xì)菌在與試劑接觸10秒內(nèi)呈紫紅色，為陽性。氧化酶實(shí)驗(yàn)(oxidasetest)第二十頁，編輯于星期四：一點(diǎn)十分。1.3鑒定標(biāo)準(zhǔn)1.菌體和菌落特征典型。2.生化反應(yīng)為分解葡萄糖、麥芽糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。3.普通培養(yǎng)基上不生長。4.能與腦膜炎球菌分群診斷血清發(fā)生凝集反應(yīng)。第二十一頁，編輯于星期四：一點(diǎn)十分。1.4防治原則綜合性預(yù)防措施隔離病人、檢查帶菌者、預(yù)防性投藥，室內(nèi)通風(fēng)流腦疫苗：6個月-2歲接種兩次，間隔1月A群腦膜炎球菌多糖抗原。制備疫苗青霉素、磺胺大劑量治療腦膜炎接種第二十二頁，編輯于星期四：一點(diǎn)十分。第二節(jié)淋病奈瑟菌Gonococcus第二十三頁，編輯于星期四：一點(diǎn)十分。淋病奈瑟菌通稱淋球菌，是淋病的病原體。主要引起人類泌尿生殖系統(tǒng)黏膜的急性或慢性化膿性感染。淋病是危害比較大性傳播疾病，也是目前我國流行的發(fā)病率最高的性傳播疾病。第二十四頁，編輯于星期四：一點(diǎn)十分。2.1生物學(xué)性狀——形態(tài)革蘭染色陰性，0.6-0.8μm腎形、成雙排列有菌毛，無芽胞和鞭毛，新分離株有莢膜第二十五頁，編輯于星期四：一點(diǎn)十分。2.1生物學(xué)性狀——形態(tài)男性急性淋病患者的尿道分泌物標(biāo)本直接涂片淋球菌（n.gonorrhoeae）為嚴(yán)格的人體寄生菌，常存在于急性尿道炎與陰道炎的膿性分泌物的白細(xì)胞中，形態(tài)染色類似于腦膜炎球菌。圖片顯示白細(xì)胞內(nèi)擠滿了革蘭陰性雙球菌，此種表現(xiàn)為典型的淋病柰瑟菌的特征。第二十六頁，編輯于星期四：一點(diǎn)十分。男性慢性淋病患者尿道分泌物涂片（革蘭染色）

急性病人：細(xì)菌位于中性粒細(xì)胞內(nèi)

慢性病人：細(xì)菌位于細(xì)胞外

第二十七頁，編輯于星期四：一點(diǎn)十分。女性急性淋病患者陰道分泌物涂片（革蘭染色）第二十八頁，編輯于星期四：一點(diǎn)十分。2.1生物學(xué)性狀——培養(yǎng)專性需氧，首次分離時，需供給5%CO2。營養(yǎng)要求高，常用巧克力平板。抵抗力弱，不耐干燥和寒冷，對一般消毒劑敏感，對磺胺、青霉素較敏感，但易產(chǎn)生耐藥性。第二十九頁，編輯于星期四：一點(diǎn)十分。2.1生物學(xué)性狀——生化反應(yīng)生化反應(yīng)只分解葡萄糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，不分解其它糖類。不分解麥芽糖，區(qū)別于腦膜炎球菌。氧化酶及觸酶試驗(yàn)均陽性。第三十頁，編輯于星期四：一點(diǎn)十分。淋病奈瑟菌在血瓊脂平板上的菌落特征淋病柰瑟菌在血瓊脂平板上，菌落較小、光滑凸起，無色透明或呈灰白色第三十一頁，編輯于星期四：一點(diǎn)十分。淋病奈瑟菌在巧克力瓊脂平板上的菌落特征淋病奈瑟菌在巧克力瓊脂平板上，菌落較小，凸起，光滑，圓形，無色或灰白色第三十二頁，編輯于星期四：一點(diǎn)十分。與腦膜炎奈瑟菌相似，營養(yǎng)要求更高，只能在巧克力平板及專用培養(yǎng)基上生長，形成灰白色細(xì)小S型呈滴露樣菌落第三十三頁，編輯于星期四：一點(diǎn)十分。2.1生物學(xué)性狀——主要菌體表面抗原構(gòu)造菌毛與粘附有關(guān)，免疫原性不強(qiáng)脂多糖抗原經(jīng)常變異，相應(yīng)抗體不能防止再感染外膜蛋白PI：主要外膜蛋白，將淋病奈瑟菌分為18個血清型PII：吸附易感細(xì)菌的蛋白第三十四頁，編輯于星期四：一點(diǎn)十分。2.1生物學(xué)性狀——致病物質(zhì)及所致疾病致病物質(zhì)菌毛脂多糖（內(nèi)毒素）淋病人類是淋球菌唯一的天然宿主。成人淋病絕大多數(shù)通過性接觸感染，是重要的性傳播疾病（sexuallytransmitteddisease，STD），目前我國流行的發(fā)病率最高的性傳播疾病。新生兒淋球菌性眼結(jié)膜炎“膿漏眼”第三十五頁，編輯于星期四：一點(diǎn)十分。2.2細(xì)菌學(xué)檢查標(biāo)本采集與注意事項(xiàng)男性急性尿道炎患者尿道膿性分泌物；慢性尿道炎患者要求在尿道口內(nèi)3-4cm處采樣；前列腺炎患者采前列腺液。女性尿道炎患者采尿道分泌物；宮頸炎患者在宮頸口內(nèi)1-1.5cm處取樣。取時用特制棉簽旋轉(zhuǎn)數(shù)周，并停留數(shù)秒種后取出。最好床旁接種，或立即置運(yùn)送培養(yǎng)基中，盡快送至實(shí)驗(yàn)室接種培養(yǎng)。保暖（運(yùn)送時35oC保溫）、保濕、立即送檢第三十六頁，編輯于星期四：一點(diǎn)十分。檢驗(yàn)方法直接涂片鏡檢對男性尿道炎患者鏡下見大量白細(xì)胞，其內(nèi)有革蘭陰性雙球菌可判為陽性。分離培養(yǎng)與鑒定巧克力色培養(yǎng)基快速診斷法：觀察典型菌落。ELISA法、核酸雜交、PCR技術(shù)生化反應(yīng)免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)藥敏實(shí)驗(yàn)第三十七頁，編輯于星期四：一點(diǎn)十分。淋病奈瑟菌鑒定依據(jù)：1.涂片染色為革蘭陰性雙球菌；2.巧克力平板上為半透明、灰白色、凸起滴露狀菌落；3.氧化酶及觸酶均陽性；4.只分解葡萄糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣；5.血清學(xué)試驗(yàn)陽性。第三十八頁，編輯于星期四：一點(diǎn)十分。2.3細(xì)菌鑒別1.與腦膜炎奈瑟菌鑒別腦膜炎球菌可發(fā)酵葡萄糖，麥芽糖產(chǎn)酸，淋球菌只分解葡萄糖產(chǎn)酸，還可用血清學(xué)試驗(yàn)加以鑒別。2.與其他奈瑟菌鑒別一般沒有必要鑒別。利用細(xì)菌形態(tài)、色素、糖發(fā)酵試驗(yàn)。第三十九頁，編輯于星期四：一點(diǎn)十分。2.4防治原則預(yù)防淋病應(yīng)防止不正當(dāng)?shù)膬尚躁P(guān)系。新生兒1%硝酸銀滴眼，或紅霉素、四環(huán)素眼藥膏。藥物首選青霉素，但多有耐藥性，應(yīng)用新型青霉素族抗生素。第四十頁，編輯于星期四：一點(diǎn)十分。比較內(nèi)容腦膜炎奈瑟菌淋病奈瑟菌生物學(xué)性狀形態(tài)結(jié)構(gòu)G－雙球菌；有莢膜、菌毛(新)同左培養(yǎng)特性高營養(yǎng)、5%CO2露滴狀、自溶酶高營養(yǎng)、5%CO2

生化反應(yīng)分解葡萄糖、麥芽糖只分解葡萄糖抗原與分類莢膜多糖群特異Ag外膜蛋白型特異Ag脂多糖Ag核蛋白Ag菌毛蛋白Ag脂多糖Ag外膜蛋白Ag(PⅠ、PⅡ、PⅢ)抵抗力冷、熱、干燥、消毒劑均敏感同左致病性致病物質(zhì)莢膜、菌毛、內(nèi)毒素莢膜、菌毛、外膜蛋白、IgA1所致疾病