USP藥典培訓(xùn)注射劑微粒檢查曾長(zhǎng)金

USP藥典培訓(xùn)注射劑微粒檢查曾長(zhǎng)金文檔ppt第一節(jié)概述1、微粒檢查介紹2、不溶性微定義3、微粒檢查的意義4、微粒檢查的要求5、微粒評(píng)估一、微粒檢查介紹在美國(guó)標(biāo)準(zhǔn)USP中，就靜脈注射液和滴眼液進(jìn)行微粒檢查，主要涉及光阻法和膜顯微鏡法。這些方法并不是最好的，不一定對(duì)每一種配方和劑型都最合適（乳劑就不合適），但是它代表了微粒測(cè)定的基礎(chǔ)和標(biāo)準(zhǔn)的方法，可以理解成最常用的方法。就這些方法而言，許多公司積累了許多寶貴的和豐富了經(jīng)驗(yàn)和歷史數(shù)據(jù)。此外，分析方法和限度是隨著技術(shù)進(jìn)步而演化，標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)定并不是不變的，但是方法和限度的改變受監(jiān)管機(jī)構(gòu)、市場(chǎng)、商業(yè)等方面的影響。3二、什么是不溶性微粒？subject不溶性微粒是指在注射劑或溶液中不應(yīng)該出現(xiàn)的、外來(lái)的、流動(dòng)的物質(zhì)（不是氣泡）。任何半固體或固體，無(wú)論軟硬、透明與否，都可被作為微粒來(lái)計(jì)算。本質(zhì)：1、不溶的、流動(dòng)的固體或半固體；2、單體或集合物；3、單品種或多品種；4、化學(xué)作用形成。來(lái)源：1、工藝中的外來(lái)物；2、工藝或產(chǎn)品中的一部分（渣、屑）；2、配方中固有的（如：蛋白質(zhì)產(chǎn)品在一定溫度下的沉降，或本身就有）。4三、微粒檢查的意義微粒檢查是在可見(jiàn)異物檢查符合規(guī)定后，用以檢查靜脈用注射劑（溶液型注射液、注射用無(wú)菌粉末、注射用濃溶液）及供靜脈注射用無(wú)菌原料藥中不溶性微粒的大小及數(shù)量。微粒的定量檢測(cè)對(duì)于產(chǎn)品的質(zhì)量分析和控制是非常必要的。通過(guò)膜顯微鏡法對(duì)產(chǎn)品中出現(xiàn)的微粒進(jìn)行定性分析，可以有利于產(chǎn)品的質(zhì)量跟蹤和控制。此外，通過(guò)微粒分析可以對(duì)配方的穩(wěn)定性進(jìn)行研究。5微粒來(lái)源反映產(chǎn)品配方的不穩(wěn)定性：1、過(guò)程控制的失??；2、配方的設(shè)計(jì)不好，影響了產(chǎn)品的使用、儲(chǔ)存和相容；3、就生物制劑而言，特別考慮產(chǎn)品的穩(wěn)定性；4、容器和密封系統(tǒng)的問(wèn)題；5、包裝的問(wèn)題（有的包裝隨時(shí)間的增加，會(huì)改性產(chǎn)生污染）；6、泄露或過(guò)量的氣體泄露；7、不可控或未知的輔料因素；8、活性成分（某些成分分解）。6試驗(yàn)人員（需要培訓(xùn)和資質(zhì)確認(rèn)，必需熟悉粒子計(jì)數(shù)的原理和測(cè)試操作）B—Solutionsforparenteralinfusionorsolutionsforinjectionsuppliedincontainerswithanominalcontentoflessthan100ml.微粒的外形與球形有差異時(shí)，就會(huì)出現(xiàn)偏差。至少取3份供試品測(cè)定。Forsmall-volumeparenteralslessthan25mlinvolume,thecontentsof10ormoreunitsiscombinedinacleanedcontainertoobtainavolumeofnotlessthan25ml;thetestsolutionmaybepreparedbymixingthecontentsofasuitablenumberofvials小瓶anddilutingto25mlwithparticle-freewaterorwithanappropriateparticle-freesolvent溶劑whenparticle-freewaterisnotsuitable.微粒的外形與球形有差異時(shí)，就會(huì)出現(xiàn)偏差。1、采用過(guò)濾的方式將單個(gè)容器或多個(gè)容器中的樣品中的不溶性微粒過(guò)濾在濾膜上；通常儀器生產(chǎn)商在校準(zhǔn)、驗(yàn)證和技術(shù)支持上能給予強(qiáng)烈支持；（2）標(biāo)示裝量為100ml以下的靜脈用注射液、靜脈注射用無(wú)菌粉末、注射用濃溶液及供注射用無(wú)菌原料除另有規(guī)定外，每個(gè)供試品容器（份）中含10μm以上的微粒不得過(guò)6000粒，含25μm以上的微粒不得過(guò)600粒。2、對(duì)于濾膜（孔徑小于1μm）上收集的顯微可見(jiàn)微粒、固體和半固體微粒進(jìn)行計(jì)數(shù)；Thefilterassemblyforretainingparticulatematterconsistsofafilterholdermadeofglassorothersuitablematerial,andisequippedwithavacuumsourceandasuitablemembranefilter.一、Introduction介紹Powdersforparenteralusearereconstituted再現(xiàn)withparticle-freewaterorwithanappropriateparticle-freesolventwhenparticle-freewaterisnotsuitable.Afterthemembranefilterhasbeendried,placethePetridishonthestageofthemicroscope,scantheentiremembranefilterunderthereflectedlightfromtheilluminatingdevice,andcountthenumberofparticlesthatareequaltoorgreaterthan10μmandthenumberofparticlesthatareequaltoorgreaterthan25μm.Alternatively,partialmembranefiltercountanddeterminationofthetotalmembranefiltercountbycalculationisallowed.四、微粒檢測(cè)要求靜脈注射液和滴眼液都是無(wú)菌液體，在產(chǎn)品放行前，在物理外觀和穩(wěn)定性應(yīng)該符合一定的要求，它們?cè)诜判星氨仨毞蟽蓚€(gè)關(guān)于微粒限度的測(cè)試。1、可見(jiàn)微粒必須‘基本沒(méi)有’；2、顯微可見(jiàn)微粒含量必須很低。7方法1：光阻法（LO）方法2：顯微鏡法注射液體積≥10μm≥25μm≥10μm≥25μm小容量注射液（體積小于100ml）6000個(gè)（每個(gè)容器）600個(gè)（每個(gè)容器）3000個(gè)（每個(gè)容器）此主要針對(duì)研發(fā)和有實(shí)力的單位。300個(gè)（每個(gè)容器）大容量注射液（體積大于100ml）25個(gè)（每ml）3個(gè)（每ml）12個(gè)（每ml）2個(gè)（每ml）8五、微粒評(píng)估1、終產(chǎn)品100%通過(guò)目視檢查（微粒的限度：50~100μm）2、容器含有的顯微可見(jiàn)微粒應(yīng)受控并滿足最低標(biāo)準(zhǔn)（主要通過(guò)光阻法&膜顯微鏡法）。結(jié)合目視檢查和不溶性微粒的限度檢查可以檢查：1、產(chǎn)品的物理性狀的改變（色彩改變，混濁，沉淀，聚集，結(jié)晶，透明度改變）；2、悲劇性的微粒增加。9測(cè)試方法目視法光阻法膜顯微鏡法101、目視檢查法目視法是單借助人眼粗略的觀察產(chǎn)品是否變色，混濁，沉淀，聚集，結(jié)晶來(lái)估計(jì)產(chǎn)品的質(zhì)量。目視檢查法所能見(jiàn)的微粒大小位于光阻法的檢測(cè)上限，有許多局限性，帶有主觀性，重復(fù)性較差。光阻法檢測(cè)屬于儀器分析，有局限性（容易誤判），但重復(fù)性較好。112、限度檢查光阻法和膜顯微鏡法當(dāng)光阻法測(cè)定結(jié)果不符合規(guī)定或供試品不適于用光阻法測(cè)定時(shí)，應(yīng)采用顯微計(jì)數(shù)法進(jìn)行測(cè)定，并以顯微計(jì)數(shù)法的測(cè)定結(jié)果作為判定依據(jù)。光阻法不適用于黏度過(guò)高和易析出結(jié)晶的制劑，也不適用于進(jìn)入傳感器時(shí)容易產(chǎn)生氣泡的注射劑。對(duì)于黏度過(guò)高，采用兩種方法都無(wú)法直接測(cè)定的注射液，可用適宜的溶劑經(jīng)適當(dāng)稀釋后測(cè)定。123、雙重法不溶性微粒檢查的兩種方法均適用于批放行檢驗(yàn)或者穩(wěn)定性試驗(yàn)檢測(cè)，一般說(shuō)來(lái)，首先采用光阻法，如果必要才采用膜顯微鏡法，每次檢查可以結(jié)合兩種方法一起用。條件：1、必需保證供試品溶液不被污染；2、通過(guò)藥品的生產(chǎn)進(jìn)度建立合適的批取樣檢測(cè)計(jì)劃；3、在整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程中采用純水清洗容器、純水稀釋樣品和純水作為空白；4、不溶性微粒檢查可以適用于大容量和微量注射液；13第二節(jié)光阻法與膜顯微鏡法簡(jiǎn)述內(nèi)容Others可見(jiàn)度visuality光阻法LightObscurationParticleCountTest膜顯微鏡法MicroscopicParticleCountTest對(duì)比contrast14一、微粒的可見(jiàn)度影響可見(jiàn)度的因素：1、實(shí)驗(yàn)人員的視力/實(shí)驗(yàn)儀器的靈敏度；2、微粒的物理特性；3、實(shí)驗(yàn)環(huán)境（背景和光線設(shè)置）。許多藥品生產(chǎn)企業(yè)采用儀器和人聯(lián)合進(jìn)行系列檢查，同時(shí)培訓(xùn)質(zhì)量控制內(nèi)審人員，以提高檢驗(yàn)的可靠性。15二、光阻法原理：當(dāng)液體中的微粒通過(guò)一窄小的檢測(cè)區(qū)時(shí)，與液體流向垂直的入射光，由于被微粒阻擋而減弱，因此由傳感器輸出的信號(hào)降低，這種信號(hào)變化與微粒的截面積大小相關(guān)，光阻法檢查注射劑中不溶性微粒即依據(jù)此原理。1617光阻法1、顯微可見(jiàn)的固體微粒、液體和氣體微粒都被計(jì)數(shù)（缺點(diǎn)：造成測(cè)定值比較大）；2、樣品測(cè)試液需被量化(嚴(yán)格的取樣程序)；3、有相應(yīng)的日常校準(zhǔn)和取樣程序（儀器系統(tǒng)化標(biāo)準(zhǔn)化測(cè)試）；4、測(cè)試人員數(shù)目和環(huán)境要求受控；5、要有空白對(duì)照；6、有專門的測(cè)試供應(yīng)系統(tǒng)（水，專用的器皿工具，稀釋和匯集系統(tǒng)，文件化系統(tǒng)等）；7、某些物質(zhì)不能用該法測(cè)試。18三、膜顯微鏡法計(jì)數(shù)測(cè)試原理：將一個(gè)或多個(gè)容器中的產(chǎn)品中的固體物質(zhì)截留在過(guò)濾膜上，計(jì)算在膜表面上的亞可見(jiàn)的到可見(jiàn)的，固體或半固體顆粒。通過(guò)計(jì)算100倍復(fù)合雙眼光學(xué)顯微鏡上掃描截留表面上的顆粒計(jì)數(shù)。該方法高度依賴操作員，操作員對(duì)微粒和可接受性做出決策。此外，該法要求全部計(jì)數(shù)，也即對(duì)濾膜上的微粒一個(gè)接一個(gè)的數(shù)。但是部分計(jì)數(shù)是允許的，也即只數(shù)網(wǎng)格中的一部分，然后估算整個(gè)濾膜上的微粒數(shù)目，不過(guò)<788>和<1788>沒(méi)有定義。建議：如果少于1000個(gè)微粒則應(yīng)當(dāng)全部計(jì)數(shù)，如果計(jì)數(shù)標(biāo)尺視野（GFOV）中央和邊緣的微粒計(jì)數(shù)小于2個(gè)那么就計(jì)算20個(gè)GFOV25mm膜的總計(jì)數(shù)或計(jì)算100個(gè)GFOV47mm膜的總計(jì)數(shù)。19膜顯微鏡法1、采用過(guò)濾的方式將單個(gè)容器或多個(gè)容器中的樣品中的不溶性微粒過(guò)濾在濾膜上；2、對(duì)于濾膜（孔徑小于1μm）上收集的顯微可見(jiàn)微粒、固體和半固體微粒進(jìn)行計(jì)數(shù)；3、將濾膜放在視野放大100倍的顯微鏡下觀察進(jìn)行微粒計(jì)數(shù)；4、試驗(yàn)人員在計(jì)數(shù)的同時(shí)確定微粒的大小，同時(shí)對(duì)是否符合標(biāo)準(zhǔn)要求做出判斷。依賴于實(shí)驗(yàn)員；膜顯微鏡法最理想的操作條件是在兩個(gè)靠得很近的單向氣流工作臺(tái)上進(jìn)行操作，濕的層流罩專用于過(guò)濾操作，干層流操作工作臺(tái)專用于顯微鏡檢查。膜顯微鏡法可適用于大小容量的注射液的不溶性微粒檢查，但是也可以適用于非常規(guī)機(jī)型的檢查（乳劑，懸液）；對(duì)于較小量的供試品而言，可以不進(jìn)行稀釋至最小檢驗(yàn)體積就可以直接進(jìn)行測(cè)定。20四、比較光阻法膜顯微鏡法對(duì)于乳劑或某些劑型不合適容易受氣體，不溶性油滴等的影響，測(cè)得數(shù)據(jù)往往較高，準(zhǔn)確度不是很好！微電子計(jì)數(shù)，重復(fù)性較高可以對(duì)注射劑直接測(cè)量，適用性較廣，對(duì)于小劑量昂貴的產(chǎn)品可以直接測(cè)量，不必匯集和稀釋到測(cè)量水平。很大程度上依賴于操作員操作，企業(yè)要有嚴(yán)格的操作員培訓(xùn)和考核機(jī)制。目視計(jì)數(shù)，依賴于操作員的判斷，重復(fù)性較差。光阻法其局限性在于微粒的形狀，優(yōu)勢(shì)在于球形顆粒。其將所有的微粒模擬成球形，當(dāng)微粒的外形與球形有差異時(shí)，就會(huì)出現(xiàn)偏差。膜顯微鏡法直接將膜上的微粒與校準(zhǔn)過(guò)的直徑為10μm和25μm的圓進(jìn)行比較，同時(shí)還有一個(gè)鏡臺(tái)標(biāo)尺。操作者還可以在操作的時(shí)候?qū)⒁曇爸械奈⒘Ｅc直徑為10μm和25μm的圓進(jìn)行比對(duì)計(jì)數(shù)。21第三節(jié)光阻法測(cè)試詳細(xì)介紹內(nèi)容1.Introduction2.條件3.測(cè)試方法和步驟4.結(jié)果判定22一、Introduction注射劑及非口服輸液中的懸浮微粒是非故意存在于溶液中的可移動(dòng)的不溶性的粒子（非氣泡）。下文將陳述光阻法和膜顯微鏡法對(duì)注射劑及非口服輸液中的懸浮微粒進(jìn)行測(cè)試。光阻法已經(jīng)較好的應(yīng)用于注射劑及非口服輸液中的懸浮微粒的測(cè)試，但是有必要在光阻法測(cè)試基礎(chǔ)上結(jié)合膜顯微鏡法測(cè)試來(lái)確認(rèn)測(cè)試結(jié)果的可靠性和合理性。這兩種方法并不是適用于對(duì)所有的非口服的注射或輸液進(jìn)行懸浮微粒測(cè)試。如：乳劑、膠體和脂質(zhì)體供試液不適合用光阻法測(cè)試，而用膜顯微鏡法比較合理。相類似，當(dāng)置入傳感器，會(huì)產(chǎn)生氣體或氣泡的產(chǎn)品，不適合用光阻法而選用膜顯微鏡法。如果供試品的粘度比較高，需要對(duì)其進(jìn)行稀釋后才能用兩種方法進(jìn)行分析測(cè)試。隨機(jī)的一個(gè)或一組樣本測(cè)試的結(jié)果并不能推測(cè)未被測(cè)試的產(chǎn)品微粒情況，因此可靠的符合統(tǒng)計(jì)學(xué)采樣的程序開(kāi)發(fā)時(shí)非常重要的。對(duì)儀器的一般要求儀器通常包括取樣器、傳感器和數(shù)據(jù)處理器三部分。測(cè)量粒徑范圍為2～50μm，檢測(cè)微粒濃度為0～5000個(gè)/ml。儀器的校正與檢定所用儀器應(yīng)至少每6個(gè)月校正一次。23二、Generalprecautions測(cè)試要求在微粒較少并受控的環(huán)境下進(jìn)行，最好是在層流生物安全柜里操作。用溫和的清洗劑小心地清洗要用的玻璃器皿及過(guò)濾設(shè)備（除過(guò)濾膜外），然后用大量的清潔水沖洗清洗劑。在設(shè)備使用前，從上到下，從外到內(nèi)地用無(wú)塵水沖洗設(shè)備。尤其是小量的供試液轉(zhuǎn)移至測(cè)試容器的過(guò)程中，小心不要產(chǎn)生氣泡于待測(cè)的供試液中。為了檢驗(yàn)環(huán)境是否適合于微粒限度測(cè)試，常進(jìn)行空白對(duì)照，具體程序是：在無(wú)微粒器皿和水準(zhǔn)備就緒條件下，測(cè)試5個(gè)裝有5ml無(wú)微粒水的空白品的微粒數(shù)。如果總共25ml的空白中大于等于10μm的微粒數(shù)超過(guò)25個(gè)，那么準(zhǔn)備工作是做得不充分的，那么就得重新調(diào)整和采取措施，并再次測(cè)試直到環(huán)境器皿水適合測(cè)試為止。241、推薦用層流臺(tái)；2、人員流動(dòng)控制在最小；3、專用的玻璃器皿；4、為產(chǎn)品容量和類別而開(kāi)發(fā)的稀釋和匯集系統(tǒng)；5、已經(jīng)建立儀器標(biāo)準(zhǔn)化測(cè)試（IST）與實(shí)驗(yàn)室控制；6、供應(yīng)商提供校準(zhǔn)支持或者自己建立有關(guān)程序文件支持的內(nèi)部體系。測(cè)定微粒的光阻計(jì)數(shù)儀器可能不同；通常儀器生產(chǎn)商在校準(zhǔn)、驗(yàn)證和技術(shù)支持上能給予強(qiáng)烈支持；試驗(yàn)人員（需要培訓(xùn)和資質(zhì)確認(rèn)，必需熟悉粒子計(jì)數(shù)的原理和測(cè)試操作）目標(biāo)是對(duì)注射劑中的微粒的大小和數(shù)目測(cè)定和良好的重現(xiàn)性。光阻法微粒測(cè)定儀器的校準(zhǔn)必需通過(guò)手動(dòng)校準(zhǔn)的方式進(jìn)行，儀器應(yīng)有標(biāo)準(zhǔn)化校準(zhǔn)的硬件和軟件。

要點(diǎn)25Thenumberoftestspecimensmustbeadequatetoprovideastatisticallysoundassessment.Theinnerdiameterofthetransparentgraticulereferencecirclesisusedtosizewhiteandtransparentparticles,whiledarkparticlesaresizedbyusingtheouterdiameteroftheblackopaquegraticulereferencecircles.這些方法并不是最好的，不一定對(duì)每一種配方和劑型都最合適（乳劑就不合適），但是它代表了微粒測(cè)定的基礎(chǔ)和標(biāo)準(zhǔn)的方法，可以理解成最常用的方法。1、必需保證供試品溶液不被污染；Thefilterassemblyforretainingparticulatematterconsistsofafilterholdermadeofglassorothersuitablematerial,andisequippedwithavacuumsourceandasuitablemembranefilter.固定濾器，倒置，反復(fù)用微粒檢查用水（或其他適宜溶劑）沖洗濾器內(nèi)壁，瀝干后安裝在抽濾瓶上，備用。Afterthemembranefilterhasbeendried,placethePetridishonthestageofthemicroscope,scantheentiremembranefilterunderthereflectedlightfromtheilluminatingdevice,andcountthenumberofparticlesthatareequaltoorgreaterthan10μmandthenumberofparticlesthatareequaltoorgreaterthan25μm.稀釋程序：將產(chǎn)品裝入或稀釋在無(wú)塵水或合適的溶劑中，20次反轉(zhuǎn)混合，至少5ml/分，脫氣，重復(fù)測(cè)定4次，舍棄第一次數(shù)據(jù)。1、終產(chǎn)品100%通過(guò)目視檢查（微粒的限度：50~100μm）Powdersforparenteraluseareconstitutedwithparticle-freewaterorwithanappropriateparticle-freesolventwhenparticle-freewaterisnotsuitable.小容量注射液（體積小于100ml）第一次數(shù)據(jù)不計(jì)，取后續(xù)測(cè)定結(jié)果的平均值，計(jì)算每個(gè)容器所含的微粒數(shù)。1、單個(gè)產(chǎn)品容量≤25ml微粒檢查是在可見(jiàn)異物檢查符合規(guī)定后，用以檢查靜脈用注射劑（溶液型注射液、注射用無(wú)菌粉末、注射用濃溶液）及供靜脈注射用無(wú)菌原料藥中不溶性微粒的大小及數(shù)量。Thenumberoftestspecimens試樣mustbeadequatetoprovideastatisticallysoundassessment.儀器標(biāo)準(zhǔn)化測(cè)試（IST）:1、流速的確認(rèn)；2、傳感器的確認(rèn)和校準(zhǔn)（確定傳感器的測(cè)試濃度范圍、傳感器的靈敏度及檢測(cè)最小微粒的粒徑）；3、供試品取樣體積的準(zhǔn)確性確認(rèn)；4、系統(tǒng)適用性試驗(yàn)（微粒計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性，系統(tǒng)確認(rèn)和實(shí)驗(yàn)室控制）。26校準(zhǔn)1、分離度判定傳感器分辨大小的能力，使用校準(zhǔn)微粒來(lái)判斷反應(yīng)的平均值或峰值。2、準(zhǔn)確度判定計(jì)數(shù)結(jié)果與外部標(biāo)準(zhǔn)的相似程度。3、計(jì)數(shù)比率判斷大小的界限是否設(shè)定正確，使用美國(guó)藥店標(biāo)準(zhǔn)品15μm進(jìn)行設(shè)定。通過(guò)對(duì)部分供試品溶液中的微粒計(jì)數(shù)的結(jié)果來(lái)確定整個(gè)產(chǎn)品的微粒數(shù)目；小于25ml裝量的樣品要求多個(gè)容器取出混合；可以直接從注射液容器中取樣檢測(cè)；通過(guò)光從發(fā)生器中產(chǎn)生通過(guò)供試品溶液，被傳感器接收（當(dāng)微粒經(jīng)過(guò)光束時(shí)，引起傳感器上電壓的增高，增高程度與被檢測(cè)到的微粒大小有關(guān)）。

27儀器標(biāo)準(zhǔn)化測(cè)試（IST）取相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差不大于5%，平均粒徑為10μm的標(biāo)準(zhǔn)粒子，制成每1ml中含1000～1500微粒數(shù)的懸浮液，靜置2分鐘脫氣，開(kāi)啟攪拌器，緩慢攪拌使其均勻（避免氣泡產(chǎn)生），依法測(cè)定3次，記錄5μm通道的累計(jì)計(jì)數(shù)，第一次數(shù)據(jù)不計(jì)，后兩次測(cè)定結(jié)果的平均值與已知粒子數(shù)之差應(yīng)在±20%以內(nèi)。28傳感器分辨率取相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差不大于5%，平均粒徑為10μm的標(biāo)準(zhǔn)粒子（均值粒徑的標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于1μm），制成每1ml中含1000～1500微粒數(shù)的懸浮液，靜置2分鐘脫氣，開(kāi)啟攪拌器，緩慢攪拌使其均勻（避免氣泡產(chǎn)生），依法測(cè)定8μm、10μm和12μm三個(gè)通道的粒子數(shù)，計(jì)算8μm與10μm兩個(gè)通道的差值計(jì)數(shù)和10μm與12μm兩個(gè)通道的差值計(jì)數(shù)，上述兩個(gè)差值計(jì)數(shù)與10μm通道的累計(jì)計(jì)數(shù)之比都不得小于68%。若校正結(jié)果不符合規(guī)定，應(yīng)重新調(diào)試儀器后再次進(jìn)行校正，符合規(guī)定后方可使用。注：如所使用儀器附有自檢軟件，可進(jìn)行自檢。29光阻法空白對(duì)照1、將容器敞開(kāi)脫氣超聲脫氣（80~120W，30秒）、靜置脫氣、疏散樣品脫氣（也即增加與空氣接觸的表面積）；2、漩渦振搖借助手或渦旋儀振搖裝有空白對(duì)照的容器，將氣泡趕至液體表面。3、測(cè)定5個(gè)5ml的無(wú)塵潔凈水，保留所有計(jì)數(shù)；4、目標(biāo)：在混合的25ml樣品中大于等于10μm的微粒不超過(guò)25個(gè)（每ml不超過(guò)1個(gè)）。30三、Method測(cè)試程序

通過(guò)連續(xù)翻轉(zhuǎn)混合供試品樣本20次，必要時(shí)，謹(jǐn)慎放入密封的包裝中，用噴射的無(wú)微粒水清洗該外包裝以避免污染。通過(guò)適當(dāng)?shù)姆椒ㄌ幚?，以減少供試品中的氣泡，如：通過(guò)超聲處理2min脫氣泡。就大劑量的樣本而言，取一個(gè)樣本測(cè)試。Forlarge-volumeparenterals,singleunitsaretested.Forsmall-volumeparenteralslessthan25mlinvolume,thecontentsof10ormoreunitsiscombinedinacleanedcontainertoobtainavolumeofnotlessthan25ml;thetestsolutionmaybepreparedbymixingthecontentsofasuitablenumberofvials小瓶anddilutingto25mlwithparticle-freewaterorwithanappropriateparticle-freesolvent溶劑whenparticle-freewaterisnotsuitable.Small-volumeparenteralshavingavolumeof25mlormoremaybetestedindividually.Powdersforparenteralusearereconstituted再現(xiàn)withparticle-freewaterorwithanappropriateparticle-freesolventwhenparticle-freewaterisnotsuitable.Thenumberoftestspecimens試樣mustbeadequatetoprovideastatisticallysoundassessment.Forlarge-volumeparenteralsorforsmall-volumeparenteralshavingavolumeof25mlormore,fewerthan10unitsmaybetested,basedonanappropriatesamplingplan.Removefourportions份,eachofnotlessthan5ml,andcountthenumberofparticlesequaltoorgreaterthan10μmand25μm.Disregard忽略theresultobtainedforthefirstportion,andcalculatethemeannumberofparticlesforthepreparationtobeexamined.31光阻法采樣體積取樣注意：1、單個(gè)產(chǎn)品容量≤25ml

混合10個(gè)或更多的容器以保證足夠；2、單個(gè)產(chǎn)品容量大于25ml

至少一個(gè)容器3、單個(gè)產(chǎn)品很昂貴且量很少

優(yōu)先考慮膜顯微鏡法，可以多個(gè)匯集，但增加了成本。也可以稀釋，不過(guò)要驗(yàn)證稀釋后液體的穩(wěn)定性。稀釋程序：將產(chǎn)品裝入或稀釋在無(wú)塵水或合適的溶劑中，20次反轉(zhuǎn)混合，至少5ml/分，脫氣，重復(fù)測(cè)定4次，舍棄第一次數(shù)據(jù)。

32檢查法（1）標(biāo)示裝量為25ml或25ml以上的靜脈用注射液或注射用濃溶液除另有規(guī)定外，取供試品，用水將容器外壁洗凈，小心翻轉(zhuǎn)20次，使溶液混合均勻，立即小心開(kāi)啟容器，先倒出部分供試品溶液沖洗開(kāi)啟口及取樣杯，再將供試品溶液倒入取樣杯中，靜置2分鐘或適當(dāng)時(shí)間脫氣，置于取樣器上（或?qū)⒐┰嚻啡萜髦苯又糜谌悠魃希?。開(kāi)啟攪拌或以手緩緩轉(zhuǎn)動(dòng)，使溶液混勻（避免氣泡產(chǎn)生），依法測(cè)定至少3次，每次取樣應(yīng)不少于5ml，記錄數(shù)據(jù)；另取至少2個(gè)供試品，同法測(cè)定。每個(gè)供試品第一次數(shù)據(jù)不計(jì)，取后續(xù)測(cè)定結(jié)果的平均值計(jì)算。（2）標(biāo)示裝量為25ml以下的靜脈用注射液或注射用濃溶液除另有規(guī)定外，取供試品，用水將容器外壁洗凈，小心翻轉(zhuǎn)20次，使溶液混合均勻，靜置2分鐘或適當(dāng)時(shí)間脫氣，小心開(kāi)啟容器，直接將供試品容器置于取樣器上，開(kāi)啟攪拌或以手緩緩轉(zhuǎn)動(dòng)，使溶液混勻（避免產(chǎn)生氣泡），由儀器直接抽取適量溶液（以不吸入氣泡為限），測(cè)定并記錄數(shù)據(jù)；另取至少3個(gè)供試品，同法測(cè)定。第一個(gè)供試品的數(shù)據(jù)不計(jì)，取后續(xù)測(cè)定結(jié)果的平均值計(jì)算。33檢查法（1）和（2）項(xiàng)下的注射用濃溶液如黏度太大，不便直接測(cè)定時(shí)，可經(jīng)適當(dāng)稀釋，依法測(cè)定。也可采用適宜的方法，在層流凈化臺(tái)上小心合并至少3個(gè)供試品的內(nèi)容物（使總體積不少于25ml），置于取樣杯中，靜置2分鐘或適當(dāng)時(shí)間脫氣，置于取樣器上。開(kāi)啟攪拌或以手緩緩轉(zhuǎn)動(dòng)，使溶液混勻（避免氣泡產(chǎn)生），依法測(cè)定至少4次，每次取樣應(yīng)不少于5ml。第一次數(shù)據(jù)不計(jì)，取后續(xù)測(cè)定結(jié)果的平均值，根據(jù)取樣體積與每個(gè)容器的標(biāo)示裝量體積，計(jì)算每個(gè)容器所含的微粒數(shù)。34檢查法（3）靜脈注射用無(wú)菌粉末除另有規(guī)定外，取供試品，用水將容器外壁洗凈，小心開(kāi)啟瓶蓋，精密加入適量微粒檢查用水（或適宜的溶劑），小心蓋上瓶蓋，緩緩振搖使內(nèi)容物溶解，超聲處理（80～120W）30秒或靜置適當(dāng)時(shí)間（凍干靜注人免疫球蛋白不超過(guò)4小時(shí)）脫氣，小心開(kāi)啟容器，直接將供試品容器置于取樣器上，開(kāi)啟攪拌或以手緩緩轉(zhuǎn)動(dòng)，使溶液混勻（避免氣泡產(chǎn)生），由儀器直接抽取適量溶液（以不吸入氣泡為限），測(cè)定并記錄數(shù)據(jù)；另取至少3個(gè)供試品，同法測(cè)定。第一個(gè)供試品的數(shù)據(jù)不計(jì)，取后續(xù)測(cè)定結(jié)果的平均值計(jì)算。也可采用適宜的方法，取至少3個(gè)供試品，在凈化臺(tái)上用水將容器外壁洗凈，小心開(kāi)啟瓶蓋，分別精密加入適量微粒檢查用水（或適宜的溶劑），緩緩振搖使內(nèi)容物溶解，小心合并容器中的溶液（使總體積不少于25ml），置于取樣杯中，超聲處理（80～120W）30秒或靜置適當(dāng)時(shí)間（凍干靜注人免疫球蛋白不超過(guò)4小時(shí)）脫氣，置于取樣器上。開(kāi)啟攪拌或以手緩緩轉(zhuǎn)動(dòng)，使溶液混勻（避免氣泡產(chǎn)生），依法測(cè)定至少4次，每次取樣應(yīng)不少于5ml。第一次數(shù)據(jù)不計(jì)，取后續(xù)測(cè)定結(jié)果的平均值，計(jì)算每個(gè)容器所含的微粒數(shù)。（4）供注射用無(wú)菌原料藥按品種項(xiàng)下規(guī)定，取供試品適量（相當(dāng)于單個(gè)制劑的最大規(guī)格量），置取樣杯或適宜的容器中，照上述（3）法，自“精密加入適量微粒檢查用水（或適宜的溶劑），緩緩振搖使內(nèi)容物溶解……”起，依法操作并測(cè)定。至少取3份供試品測(cè)定。計(jì)算每份所含的微粒數(shù)。35四、Evaluation評(píng)估

Forpreparationssuppliedincontainerswithanominalvolumeofmorethan100ml,applythecriteriaoftest1.A.Forpreparationssuppliedincontainerswithanominalvolumeoflessthan100ml,applythecriteriaoftest1.B.Forpreparationssuppliedincontainerswithanominalvolumeof100ml,applythecriteriaoftest1.B[Note:Test1.AisusedintheJapanesePharmacopoeia]Iftheaveragenumberofparticlesexceedsthelimits,testthepreparationbytheMicroscopicParticleCountTest.Test1.A—Solutionsforparenteralinfusionorsolutionsforinjectionsuppliedincontainerswithanominalcontentofmorethan100mL.Thepreparationcomplieswiththetestiftheaveragenumberofparticlespresentintheunitstesteddoesnotexceed25permLequaltoorgreaterthan10μmanddoesnotexceed3permLequaltoorgreaterthan25μm.Test1.B—Solutionsforparenteralinfusionorsolutionsforinjectionsuppliedincontainerswithanominalcontentoflessthan100ml.Thepreparationcomplieswith遵守thetestiftheaveragenumberofparticlespresentintheunitstesteddoesnotexceed6000percontainerequaltoorgreaterthan10μmanddoesnotexceed600percontainerequaltoorgreaterthan25μm.36結(jié)果判定（1）標(biāo)示裝量為100ml或100ml以上的靜脈用注射液除另有規(guī)定外，每1ml中含10μm以上的微粒不得過(guò)25粒，含25μm以上的微粒不得過(guò)3粒。（2）標(biāo)示裝量為100ml以下的靜脈用注射液、靜脈注射用無(wú)菌粉末、注射用濃溶液及供注射用無(wú)菌原料除另有規(guī)定外，每個(gè)供試品容器（份）中含10μm以上的微粒不得過(guò)6000粒，含25μm以上的微粒不得過(guò)600粒。方法1：光阻法（LO）注射液體積≥10μm≥25μm小容量注射液（體積小于100ml）6000個(gè)（每個(gè)容器）600個(gè)（每個(gè)容器）大容量注射液（體積大于100ml）25個(gè)（每ml）3個(gè)（每ml）注：光阻法容易產(chǎn)生‘假陽(yáng)性’，所以要結(jié)合膜顯微鏡進(jìn)行測(cè)試。37第四節(jié)膜顯微鏡法測(cè)試詳細(xì)內(nèi)容1.Introduction2.條件3.測(cè)試方法和步驟4.結(jié)果判定38一、Introduction介紹Useasuitablebinocularmicroscope,filterassemblyforretaining

particulatematterandmembranefilterforexamination.Themicroscopeisequippedwithanocularmicrometer

calibratedwithanobjectivemicrometer,amechanicalstage

capableofholdingandtraversing

theentirefiltrationareaofthemembranefilter,twosuitableilluminators

toprovideepiscopic

illuminationinadditiontoobliqueillumination

,andisadjustedto100±10magnifications.Theocularmicrometerisacirculardiameter

graticule

(seeFigure1)andconsistsofalargecircledividedbycrosshairs

intoquadrants

,transparentandblackreferencecircles

10μmand25μmindiameter

at100magnifications

,andalinearscale

graduated

in10μmincrements.Itiscalibratedusingastagemicrometerthatiscertifiedbyeitheradomestic

orinternationalstandardinstitution

.Arelativeerrorofthelinearscaleofthegraticule

within±2percentisacceptable.Thelargecircleisdesignatedthegraticulefieldofview(GFOV).Twoilluminatorsarerequired.Oneisanepiscopicbrightfield

illuminatorinternaltothemicroscope,theotherisanexternal,focusable

auxiliary

illuminatoradjustabletogivereflectedobliqueillumination

atanangleof10°to20°.Thefilterassemblyforretainingparticulatematterconsistsofafilterholdermadeofglassorothersuitablematerial,andisequippedwithavacuumsourceandasuitablemembranefilter.Themembranefilterisofsuitablesize,blackordarkgrayincolor,non-gridded非格子的orgridded,and1.0μmorfiner

innominalporesize.39要求對(duì)儀器的一般要求儀器通常包括層流凈化臺(tái)、顯微鏡、微孔濾膜及其濾器、平皿等。層流凈化臺(tái)高效空氣過(guò)濾器孔徑0.45μm，氣流方向由里向外，應(yīng)定期檢查風(fēng)速及凈化臺(tái)上空氣中的微粒數(shù)。顯微鏡雙筒大視野顯微鏡，目鏡內(nèi)附標(biāo)定的測(cè)微尺（每格0.05～0.1mm）。坐標(biāo)軸前后、左右移動(dòng)范圍均應(yīng)大于30mm，顯微鏡裝置內(nèi)附有光線投射角度、光強(qiáng)度均可調(diào)節(jié)的照明裝置。檢測(cè)時(shí)放大100倍。微孔濾膜白色，孔徑0.45μm、直徑25mm或13mm，一面印有間隔3mm的格柵；膜上如有10μm以上的不溶性微粒，應(yīng)在5粒以下，并不得有25μm以上的微粒，必要時(shí)，可用微粒檢查用水沖洗使符合要求。檢查前的準(zhǔn)備試驗(yàn)環(huán)境檢測(cè)符合規(guī)定后，在層流凈化臺(tái)上將濾器用微粒檢查用水（或其他適宜溶劑）沖洗至潔凈，用平頭無(wú)齒鑷子夾取測(cè)定用濾膜，用微粒檢查用水（或其他適宜溶劑）沖洗后，置濾器托架上；固定濾器，倒置，反復(fù)用微粒檢查用水（或其他適宜溶劑）沖洗濾器內(nèi)壁，瀝干后安裝在抽濾瓶上，備用。401、人員流動(dòng)控制在最?。?、濕過(guò)濾和干計(jì)數(shù)步驟在潔凈區(qū)進(jìn)行；3、專用玻璃器皿；4、為產(chǎn)品容量和類別而開(kāi)發(fā)的稀釋和匯集系統(tǒng)；5、建立實(shí)驗(yàn)室控制；6、操作人員必須進(jìn)行嚴(yán)格的培訓(xùn)；7、有必要的操作員績(jī)效評(píng)估。

測(cè)試環(huán)境與制備1、在實(shí)驗(yàn)室中最潔凈的區(qū)域進(jìn)行測(cè)試和分析（與人員流動(dòng)隔離，最好選擇層流工作臺(tái)，拆包在分析和測(cè)試區(qū)外面）；2、在空白對(duì)照制備前考慮包裝的影響（如何開(kāi)啟，是否混合產(chǎn)品，有沒(méi)有部分取樣）；3、產(chǎn)品有沒(méi)有毒性。

要求41

儀器標(biāo)準(zhǔn)化1、儀器經(jīng)過(guò)驗(yàn)證；2、設(shè)備負(fù)責(zé)人；3、設(shè)備使用和維護(hù)程序（遵守相關(guān)的原則和方法）。

設(shè)備和要求1、100倍（±10倍）放大，帶有計(jì)數(shù)視野的鏡頭；2、兩條照明路徑（垂直或斜射）；3、計(jì)數(shù)線窗（±2%）；需要驗(yàn)證該計(jì)數(shù)線4、標(biāo)準(zhǔn)沒(méi)有要求但很重要：日常校準(zhǔn)，空白對(duì)照，資格認(rèn)證（操作員，實(shí)驗(yàn)室等）；5、過(guò)濾設(shè)備6、無(wú)塵水7、過(guò)濾膜設(shè)備42二、GeneralprecautionsThetestiscarriedoutunderconditionslimitingparticulatematter,preferablyinalaminar-flowcabinet.Verycarefullywashtheglasswareandfilterassemblyused,exceptforthemembranefilter,withawarmdetergentsolutionandrinsewithabundantamountsofwatertoremovealltracesofdetergent.Immediatelybeforeuse,rinsebothsidesofthemembranefilterandtheequipmentfromtoptobottom,outsideandtheninside,withparticle-freewater.Inordertocheckthattheenvironmentissuitableforthetest,thattheglasswareandthemembranefilterareproperlycleanedandthatthewatertobeusedisparticle-free,thefollowingtestiscarriedout:determinetheparticulatematterofa50mlvolumeofparticle-freewateraccordingtothemethoddescribedbelow.Ifmorethan20particles10μmorlargerinsizeorifmorethan5particles25μmorlargerinsizearepresentwithinthefiltrationarea,theprecautionstakenforthetestarenotsufficient.Thepreparatorystepsmustberepeateduntiltheenvironment,glassware,membranefilterandwateraresuitableforthetest.43三、Method檢查法Mixthecontentsofthesamplesbyslowlyinvertingthecontainer20timessuccessively.Ifnecessary,cautiouslyremovethesealingclosure.Cleantheoutersurfacesofthecontaineropeningusingajetofparticle-freewaterandremovetheclosure,avoidinganycontaminationofthecontents.Forlarge-volumeparenterals,singleunitsaretested.Forsmall-volumeparenteralslessthan25mlinvolume,thecontentsof10ormoreunitsiscombinedinacleanedcontainer;wherejustifiedandauthorized,thetestsolutionmaybepreparedbymixingthecontentsofasuitablenumberofvialsanddilutingto25mlwithparticle-freewaterorwithanappropriateparticle-freesolventwhenparticle-freewaterisnotsuitable.Small-volumeparenteralshavingavolumeof25mlormoremaybetestedindividually.44Powdersforparenteraluseareconstitutedwithparticle-freewaterorwithanappropriateparticle-freesolventwhenparticle-freewaterisnotsuitable.Thenumberoftestspecimensmustbeadequatetoprovideastatisticallysoundassessment.Forlarge-volumeparenteralsorforsmall-volumeparenteralshavingavolumeof25mlormore,fewerthan10unitsmaybetested,basedonanappropriatesamplingplan.Wettheinsideofthefilterholderfittedwiththemembranefilterwithseveralmilliliter

ofparticle-freewater.Transfertothefiltrationfunnel

thetotalvolumeofasolutionpool

orofasingleunit,andapplyvacuum.Ifneededaddstepwise

aportionofthesolutionuntiltheentirevolumeisfiltered.Afterthelastadditionofsolution,beginrinsingtheinnerwallsofthefilterholderbyusingajetofparticle-freewater.Maintainthevacuumuntilthesurfaceofthemembranefilterisfreefromliquid.PlacethemembranefilterinaPetridish

andallowthemembranefiltertoair-drywiththecoverslightlyajar

.Afterthemembranefilterhasbeendried,placethePetridishonthestageofthemicroscope,scantheentiremembranefilterunderthereflectedlightfromtheilluminatingdevice,andcountthenumberofparticlesthatareequaltoorgreaterthan10μmandthenumberofparticlesthatareequaltoorgreaterthan25μm.Alternatively

,partialmembranefiltercountanddeterminationofthetotalmembranefiltercountbycalculationisallowed.Calculatethemeannumberofparticlesforthepreparationtobeexamined.452、人員流動(dòng)控制在最小；儀器標(biāo)準(zhǔn)化測(cè)試（IST）Ifmorethan20particles10μmorlargerinsizeorifmorethan5particles25μmorlargerinsizearepresentwithinthefiltrationarea,theprecautionstakenforthetestarenotsufficient.6、泄露或過(guò)量的氣體泄露；B—Solutionsforparenteralinfusionorsolutionsforinjectionsuppliedincontainerswithanominalcontentoflessthan100ml.不溶性微粒檢查的兩種方法均適用于批放行檢驗(yàn)或者穩(wěn)定性試驗(yàn)檢測(cè)，一般說(shuō)來(lái)，首先采用光阻法，如果必要才采用膜顯微鏡法，每次檢查可以結(jié)合兩種方法一起用。Forpreparationssuppliedincontainerswithanominalvolumeoflessthan100ml,applythecriteriaoftest2.Useasuitablebinocularmicroscope,filterassemblyforretainingparticulatematterandmembranefilterforexamination.Thepreparationcomplieswith遵守thetestiftheaveragenumberofparticlespresentintheunitstesteddoesnotexceed6000percontainerequaltoorgreaterthan10μmanddoesnotexceed600percontainerequaltoorgreaterthan25μm.一、Introduction介紹可見(jiàn)度visuality混合10個(gè)或更多的容器以保證足夠；2、在空白對(duì)照制備前考慮包裝的影響（如何開(kāi)啟，是否混合產(chǎn)品，有沒(méi)有部分取樣）；優(yōu)先考慮膜顯微鏡法，可以多個(gè)匯集，但增加了成本。小容量注射液（體積小于100ml）47Theparticlesizingprocesswiththeuseofthecirculardiametergraticule格子線iscarriedoutbytransformingmentallytheimageofeachparticleintoacircleandthencomparingittothe10μmand25μmgraticulereferencecircles.Therebytheparticlesarenotmovedfromtheirinitiallocationswithinthegraticulefieldofviewandarenotsuperimposedonthereferencecirclesforcomparison.Theinnerdiameterofthetransparentgraticulereferencecirclesisusedtosizewhiteandtransparentparticles,whiledarkparticlesaresizedbyusingtheouterdiameteroftheblackopaquegraticulereferencecircles.Inperformingthemicroscopicparticlecounttestdonotattempttosizeorenumerate