動物細(xì)胞融合與單克隆抗體課件

動物組織塊細(xì)胞懸液原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)胰蛋白酶處理分散成單個細(xì)胞幼齡動物的器官組織；動物胚胎細(xì)胞貼壁接觸抑制原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)加入培養(yǎng)液用胰蛋白酶等處理貼壁細(xì)胞適宜條件不死性細(xì)胞課前復(fù)習(xí)1編輯版ppt電激處理使供體核進入受體卵母細(xì)胞構(gòu)建重組胚胎卵母細(xì)胞采集、培養(yǎng)MⅡ期卵母細(xì)胞供體牛供體細(xì)胞注入去核卵母細(xì)胞代孕母牛克隆牛體細(xì)胞培養(yǎng)去核卵母細(xì)胞去核胚胎移植體細(xì)胞核移植過程

（體細(xì)胞克隆動物）

存在的問題（1）成功率非常低（2）克隆動物表現(xiàn)出遺傳和生理缺陷等健康問題（3）對克隆動物食品的安全性問題也存在爭議。2編輯版ppt專題2細(xì)胞工程2.2.2動物細(xì)胞融合與單克隆抗體主備人：姚雪豐議課時間：第15周上課時間：第17周環(huán)節(jié)Ⅰ：學(xué)習(xí)目標(biāo)1.掌握動物細(xì)胞融合與植物體細(xì)胞雜交的區(qū)別和聯(lián)系。2.簡述動物細(xì)胞融合和單克隆抗體制備的過程。3.了解單克隆抗體在醫(yī)學(xué)實踐中的應(yīng)用，并說出其應(yīng)用實例。3編輯版ppt閱讀教材52∽54頁，回答下列問題：環(huán)節(jié)Ⅱ：問題導(dǎo)學(xué)1.植物體細(xì)胞雜交技術(shù)與動物細(xì)胞融合技術(shù)有什么不同？2.常規(guī)血清抗體與單克隆抗體有何區(qū)別？3.單克隆抗體怎么制備？4.單克隆抗體主要有哪幾方面的用途？4編輯版ppt一、動物細(xì)胞融合9:45環(huán)節(jié)Ⅲ：點撥精講細(xì)胞融合是正常的生命活動兩個細(xì)胞正在融合

受精作用5編輯版ppt1、概念：指兩個或多個動物細(xì)胞結(jié)合形成一個細(xì)胞的過程。2、結(jié)果形成單核的雜交細(xì)胞3、原理細(xì)胞膜的流動性4、誘導(dǎo)方式物理法：離心、振動、電激化學(xué)法：聚乙二醇（PEG)生物法：滅活的病毒一、動物細(xì)胞融合6編輯版ppt

動物細(xì)胞融合過程示意圖不同DNA的兩個細(xì)胞

滅活的病毒有絲分裂兩個完整的雜交細(xì)胞技巧歸納滅活的病毒能作為誘導(dǎo)劑,不滅活的病毒不能作為誘導(dǎo)劑1.滅活的病毒能使細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)重新排布,細(xì)胞膜打開,細(xì)胞發(fā)生融合。2.不滅活的病毒會感染細(xì)胞,而不能誘導(dǎo)細(xì)胞融合。7編輯版ppt5、過程：動物細(xì)胞A動物細(xì)胞B誘導(dǎo)，融合1個完整的雜交細(xì)胞AB（膜融合、質(zhì)融合）（核融合）細(xì)胞融合完成的標(biāo)志:細(xì)胞核融合成一個核6、意義：突破了有性雜交方法的局限，使遠緣雜交（種間、屬間、科間、動植物之間）成為可能。7、應(yīng)用：

成為研究細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤和生物新品種培育等的重要手段。最有價值的應(yīng)用制備單克隆抗體8編輯版ppt動物細(xì)胞融合雜種細(xì)胞愈傷組織雜種植株植物細(xì)胞A植物細(xì)胞B

原生質(zhì)體A原生質(zhì)體B植物體細(xì)胞雜交去壁原生質(zhì)體融合植物組織培養(yǎng)物理法化學(xué)法生物法：滅活的病毒動物細(xì)胞A動物細(xì)胞B雜種細(xì)胞常用方法8.植物體細(xì)胞雜交、動物細(xì)胞融合的比較9編輯版ppt主要用于制備單克隆抗體獲得雜種植株用途物理、化學(xué)方法（同左）滅活的病毒物理（離心、振蕩、電刺激）化學(xué)（聚乙二醇）誘導(dǎo)方法使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合細(xì)胞融合的方法細(xì)胞膜的流動性細(xì)胞膜的流動性、植物細(xì)胞全能性原理動物細(xì)胞融合植物體細(xì)胞雜交比較項目8.植物體細(xì)胞雜交、動物細(xì)胞融合的比較10編輯版ppt

例1下圖表示細(xì)胞融合技術(shù)的一些過程,請據(jù)圖回答:(1)若A、B細(xì)胞為動物細(xì)胞,從A和B細(xì)胞到C細(xì)胞的過程中,常用

作為

來誘導(dǎo)融合。A、B融合為C的過程說明細(xì)胞膜具有

特性。其融合完成的標(biāo)志是

。得到的C細(xì)胞可稱為

。

滅活的病毒誘導(dǎo)劑

流動性

細(xì)胞核融合雜交細(xì)胞

(2)若A、B細(xì)胞為植物細(xì)胞,那么這樣的細(xì)胞已經(jīng)用酶降解去掉了

,這種酶可能是

酶,由此生成的A和B細(xì)胞稱為

。A、B到C細(xì)胞的過程中,常用的物理方法是

;融合完成的標(biāo)志是

;形成的D細(xì)胞還要應(yīng)用

技術(shù)把D培養(yǎng)成植株。

(3)若A為人細(xì)胞,B為鼠細(xì)胞,并分別用紅、綠熒光染料標(biāo)記細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì),在形成C細(xì)胞時,細(xì)胞一半發(fā)紅色熒光,一半發(fā)綠色熒光。到D細(xì)胞階段,兩種顏色的熒光均勻分布,原因是

。

細(xì)胞壁纖維素酶和果膠原生質(zhì)體離心、振動、電激形成新的細(xì)胞壁植物組織培養(yǎng)細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)是可以運動的11編輯版ppt二、單克隆抗體什么是抗體？由何種細(xì)胞產(chǎn)生？主要分布在哪里？起何作用？效應(yīng)B細(xì)胞血清特異性免疫作用抗體：機體受抗原刺激后產(chǎn)生的，并且能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白。

12編輯版ppt讀下面一段文字資料，思考以下問題：長期以來，為了獲得抗體，采用的是把某種抗原反復(fù)注射到動物體內(nèi)，然后從動物血清中分離出所需抗體的方法。用這種方法獲得的抗體，不僅產(chǎn)量低，而且抗體的特異性差，純度低，反應(yīng)不夠靈敏。人們發(fā)現(xiàn)，在動物發(fā)生免疫反應(yīng)的過程中，體內(nèi)的B細(xì)胞可以產(chǎn)生多達百萬種以上的特異性抗體，但是每個B細(xì)胞只分泌一種化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強的抗體。要想獲得大量的單一抗體，必須用單個B細(xì)胞進行無性繁殖，即克隆。1、請從以上文字資料中找出單克隆抗體的概念2、怎樣才能獲得單克隆抗體？提示1：僅用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)可行嗎？提示2：我們所學(xué)的哪種細(xì)胞是可以無限增殖的？提示3：有什么方法能使B細(xì)胞產(chǎn)生抗體的能力和腫瘤細(xì)胞無限增殖能力同時具備呢？用單個B細(xì)胞進行無性繁殖（克隆），得到的細(xì)胞群能夠分泌一種化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強的抗體，這種抗體就叫做單克隆抗體。13編輯版ppt

接受抗原刺激后，能分泌針對該抗原的特異性抗體，在體液免疫中具有重要功能。B淋巴細(xì)胞本身是一種終末分化細(xì)胞，通常不再進行細(xì)胞分裂，存活一段時間后便會死亡——短命細(xì)胞B淋巴細(xì)胞

所以B淋巴細(xì)胞在體外培養(yǎng)時不能無限增殖，而癌細(xì)胞是可以無限增殖的。骨髓瘤細(xì)胞:

惡性增殖的轉(zhuǎn)化細(xì)胞，只要營養(yǎng)條件適合可永遠分裂和存活——長命細(xì)胞。經(jīng)篩選與馴化，現(xiàn)已建立多種骨髓瘤細(xì)胞株——沒有抗體分泌物。

因此可以利用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與之融合，就可獲得既能無限增殖又能產(chǎn)生單一抗體的細(xì)胞。14編輯版ppt②特點：產(chǎn)量低、特異性差、純度低、反應(yīng)不夠靈敏常規(guī)抗體制備一個B淋巴細(xì)胞：只分泌一種特異性抗體單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞：能無限增殖融合單克隆抗體

培養(yǎng)①向動物體內(nèi)反復(fù)注射抗原，使動物產(chǎn)生抗體，然后從血清中分離所需抗體。優(yōu)點：特異性強，靈敏度高。15編輯版ppt雜交細(xì)胞滅活的病毒等手段小鼠骨髓瘤細(xì)胞B淋巴細(xì)胞經(jīng)免疫的小鼠提取雜交瘤細(xì)胞第一次篩選用特定的選擇性培養(yǎng)基第二次篩選能產(chǎn)生特定抗體、培養(yǎng)條件下能無限增殖的雜交瘤細(xì)胞體外培養(yǎng)注射到小鼠腹腔提取單克隆抗體二、單克隆抗體的制備1.單克隆抗體的制備過程16編輯版ppt3.為何要進行兩次篩選？4.如何進行第2次篩選？培養(yǎng)在多孔培養(yǎng)板上，每孔只有一個雜交瘤細(xì)胞。第1次篩選得到雜交瘤細(xì)胞（多種）。第2次篩選得到能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞群。1.本過程利用了哪些原理？免疫原理，細(xì)胞融合原理和動物細(xì)胞培養(yǎng)原理2.為什么選用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與B細(xì)胞融合？這樣融合成的雜交瘤細(xì)胞，繼承了雙親細(xì)胞的遺傳物質(zhì)，不僅具有B細(xì)胞分泌抗體的能力，而且還有無限增殖的本領(lǐng)，因而可以獲得大量單克隆抗體。思考：17編輯版ppt2.單克隆抗體的優(yōu)點：3.單克隆抗體的應(yīng)用特異性強，靈敏度高，可大量制備（1）作為診斷試劑——最廣泛應(yīng)用

具有準(zhǔn)確、高效、簡易、快速（2）用于治療疾病和運載藥物“生物導(dǎo)彈”＝單克隆抗體＋藥物單抗導(dǎo)向，藥物為彈頭主要用于治療癌癥治療，單克隆抗體作為載體，運載抗癌藥物，形成“生物導(dǎo)彈”，準(zhǔn)確殺傷癌變細(xì)胞。18編輯版ppt例2

下圖是單克隆抗體的制備過程,請據(jù)圖回答問題:(1)抗體的化學(xué)本質(zhì)是

,主要分布于

中,也分布于組織液及外分泌液中。

(2)若想通過①過程獲得所需的B淋巴細(xì)胞,應(yīng)先對小鼠進行的處理是

,該處理的實質(zhì)是在小鼠體內(nèi)發(fā)生

的過程。制備單克隆抗體的B淋巴細(xì)胞一般從

中采集。

球蛋白

血清

注射(相應(yīng)的)抗原體液免疫脾

(3)②過程除了采用誘導(dǎo)植物細(xì)胞原生質(zhì)體融合的方法外,還可以用

作為誘導(dǎo)劑。細(xì)胞兩兩融合后,可出現(xiàn)

種融合細(xì)胞。

(4)③過程中雜交瘤細(xì)胞從培養(yǎng)基中吸收葡萄糖、氨基酸的方式是

。

(5)④過程要挑選出能產(chǎn)生

的細(xì)胞群繼續(xù)培養(yǎng)。

特定抗體滅活的病毒3

主動運輸19編輯版ppt兩個“過程”動物細(xì)胞融合過程單克隆抗體制備過程三個“一”一個誘導(dǎo)細(xì)胞融合的新方法－－滅活病毒一個新細(xì)胞－－雜交瘤細(xì)胞一個優(yōu)勢－－單克隆抗體特異性強、靈敏度高的優(yōu)勢重點環(huán)節(jié)Ⅳ：課堂總結(jié)20編輯版ppt1．在動物細(xì)胞融合和植物體細(xì)胞雜交的比較中，正確的是（）A．結(jié)果是相同的B．雜種細(xì)胞的形成過程基本相同C．操作過程中酶的作用相同D．誘導(dǎo)融合的手段相同Ｂ環(huán)節(jié)Ⅴ：當(dāng)堂檢測2.能使動物細(xì)胞融合的特有的誘導(dǎo)因子是()。A.離心B.滅活的病毒C.電刺激 D.振動B3、科學(xué)家用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與某種細(xì)胞融合，得到雜交細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量的單克隆抗體，與骨髓疤細(xì)胞融合的是（）A.經(jīng)過免疫的B淋巴細(xì)胞B.沒經(jīng)過免疫的T淋巴細(xì)胞

C.經(jīng)過免疫的T淋巴細(xì)胞D.沒經(jīng)過免疫的Ｂ淋巴細(xì)胞A21編輯版ppt4.要想獲得大量的單克隆抗體就必須用單個的B淋巴細(xì)胞進行無性繁殖,形成細(xì)胞群。其原因是(

)。A.在體外培養(yǎng)條件下,B淋巴細(xì)胞可以無限增殖B.在動物體內(nèi)B淋巴細(xì)胞可產(chǎn)生多達百萬種以上的抗體C.每一個B淋巴細(xì)胞都參與特異性免疫反應(yīng)D.每一個B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體D5.某同學(xué)在學(xué)習(xí)“細(xì)胞工程”時,列表比較動植物細(xì)胞工程的有關(guān)內(nèi)容,你認(rèn)為錯誤的是(

)。選項比較內(nèi)容植物細(xì)胞工程動物細(xì)胞工程A特殊處理酶解法去除細(xì)胞壁用胰蛋白酶處理后制成細(xì)胞懸液B融合方法物理方法、化學(xué)方法、生物方法物理方法、化學(xué)方法C典型應(yīng)用人工種子、種間雜種植物單克隆抗體的制備D培養(yǎng)基區(qū)別蔗糖是離體組織中賴以生長的成分動物血清不可缺少B22編輯版ppt6.單克隆抗體制備過程中，骨髓瘤細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)融合后，要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞，在這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細(xì)胞是（）①淋巴細(xì)胞②小鼠骨髓瘤細(xì)胞③B淋巴細(xì)胞自身融合細(xì)胞④小鼠骨髓瘤細(xì)胞自身融合細(xì)胞⑤雜交瘤細(xì)胞A．②④B．①③⑤C．①②③④D．②③C23編輯版ppt7、下圖是單克隆抗體制備流程階段示意圖。（1）_______________技術(shù)是單克隆抗體技術(shù)的基礎(chǔ)。（2）根據(jù)培養(yǎng)基的用途分類，圖中HAT培養(yǎng)基屬于________培養(yǎng)基。（3）單克隆抗體與常規(guī)的血清抗體相比，最大的優(yōu)越性是________________。（