第十二章生物化學(xué)肝功能

第十二章生物化學(xué)肝功能優(yōu)選第十二章生物化學(xué)肝功能掌握肝功能試驗(yàn)的意義及評(píng)價(jià)，賴氏法、速率法測(cè)定ALT，改良J-G法和膽紅素氧化酶法測(cè)定膽紅素的原理、注意事項(xiàng)及主要臨床意義。熟悉金氏法、速率法測(cè)定ALP，GGT測(cè)定方法、酶比色法測(cè)定血清膽汁酸的原理、注意事項(xiàng)及主要臨床意義。了解肝臟的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及生物化學(xué)功能，某些肝病的生物化學(xué)。本章教學(xué)要求：

肝臟是人體最重要的器官之一，肝臟病變會(huì)引起多種功能的障礙，臨床上常通過(guò)一些試驗(yàn)來(lái)了解肝功能，幫助對(duì)肝膽疾病的診斷，預(yù)后判斷及療效觀察，這些試驗(yàn)統(tǒng)稱為肝功能試驗(yàn)。第一節(jié)概述

肝臟是人體最大的實(shí)質(zhì)性器官，成人肝臟占體重的2%，約1.2～1.5kg。它幾乎參與了體內(nèi)各種化學(xué)反應(yīng)，如分泌、排泄、解毒以及各種物質(zhì)代謝過(guò)程，故肝臟有“物質(zhì)代謝中樞”之稱。（三）肝細(xì)胞的亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)特點(diǎn)Z蛋白膽紅素-Z蛋白還有過(guò)氧化物酶體，能分解代謝中產(chǎn)生的過(guò)氧化氫，減輕活性氧的損傷。金氏法測(cè)定血清堿性磷酸酶靈敏度較高，顯色穩(wěn)定，不需去蛋白，操作簡(jiǎn)單、快速準(zhǔn)γ-谷氨酰基轉(zhuǎn)移酶（γ-glutamyltransferase，GGT)NADPH＋H+＋O2NADP+＋H2O2在室溫（25℃）可維持2d，在4℃冰箱可維持1周。次級(jí)膽汁酸的生成與膽汁酸的腸肝循環(huán)未結(jié)合膽紅素氧氣和肝外組織代謝廢物一、血清（漿）蛋白測(cè)定4-甲基傘形花內(nèi)酯酰磷酸鹽（二）改良J-G法肝動(dòng)脈是肝的營(yíng)養(yǎng)性血管，給肝帶來(lái)大量的氧氣，同時(shí)也帶來(lái)肝外組織代謝產(chǎn)生的大量廢物，其血流量占肝總血流量的25%。一、肝結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)

（一）肝具有雙重的血流輸入系統(tǒng)即門(mén)靜脈和肝動(dòng)脈。門(mén)靜脈是肝的功能性血管，它匯集了胃腸、脾及胰腺的靜脈血流入肝，給肝帶來(lái)腸道吸收的大量營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和腐敗物。門(mén)靜脈血占肝總血量的75%。肝動(dòng)脈是肝的營(yíng)養(yǎng)性血管，給肝帶來(lái)大量的氧氣，同時(shí)也帶來(lái)肝外組織代謝產(chǎn)生的大量廢物，其血流量占肝總血流量的25%。

（二）肝具有雙重輸出系統(tǒng)即血液輸出系統(tǒng)和膽道輸出系統(tǒng)。血液輸出系統(tǒng)是指肝靜脈，出肝后經(jīng)下腔靜脈與體循環(huán)相通，使經(jīng)肝處理后的代謝物通過(guò)腎臟隨尿排出。膽道輸出系統(tǒng)是指肝細(xì)胞分泌的膽汁通過(guò)膽道排入腸道，隨膽汁排出的有膽汁酸鹽和一些代謝產(chǎn)物。（一）肝臟具有雙重的血流輸入系統(tǒng)門(mén)靜脈(功能性血管)肝動(dòng)脈(營(yíng)養(yǎng)性血管)（二）肝臟具有雙重的輸出系統(tǒng)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和腐敗物氧氣和肝外組織代謝廢物肝靜脈膽道

肝臟下腔靜脈體循環(huán)腸道肝處理后的代謝物腎臟(尿)膽汁酸鹽和代謝產(chǎn)物

（三）肝細(xì)胞的亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)特點(diǎn)肝細(xì)胞中亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)豐富。含有豐富的線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和核糖體。使肝臟能量供應(yīng)充分，并大量合成蛋白質(zhì)和脂類。含有大量的溶酶體和高爾基復(fù)合體。促進(jìn)對(duì)吞噬產(chǎn)物的分解和一些蛋白質(zhì)的加工與成熟。還有過(guò)氧化物酶體，能分解代謝中產(chǎn)生的過(guò)氧化氫，減輕活性氧的損傷。

（四）肝細(xì)胞的再生肝細(xì)胞是體內(nèi)唯一具有再生能力的實(shí)質(zhì)細(xì)胞，而且再生能力很強(qiáng)。新生肝細(xì)胞的來(lái)源有兩種：1.由已分化的肝細(xì)胞增殖而來(lái)。2.由未分化的小葉內(nèi)膽管上皮細(xì)胞分裂而來(lái)。由于肝細(xì)胞有很強(qiáng)的再生能力，所以輕度的損傷，難以通過(guò)肝功能試驗(yàn)檢測(cè)出來(lái)。（三）肝細(xì)胞的亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)特點(diǎn)（四）肝細(xì)胞的再生新生肝細(xì)胞的來(lái)源①由已分化的肝細(xì)胞增殖而來(lái)②由未分化的小葉內(nèi)膽管上皮細(xì)胞分裂而來(lái)①細(xì)胞表面有大量的微絨毛②細(xì)胞膜具有較高的通透性③肝細(xì)胞中亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)豐富④肝細(xì)胞含有豐富的酶系二、肝臟的生物化學(xué)功能

（一）排泄功能肝臟能分泌膽汁，很多代謝物可隨膽汁通過(guò)膽道排入腸道而排泄。如膽汁酸、膽紅素、氨等物質(zhì)。1.膽汁酸代謝（1）膽汁：由肝細(xì)胞分泌的液體，正常人每天分泌量500～1000ml，稱為肝膽汁。進(jìn)入膽囊后水分被重吸收而濃縮，稱為膽囊膽汁。膽汁中含有膽汁酸鹽、膽色素、膽固醇、卵磷脂、粘蛋白、酶、尿素和無(wú)機(jī)鹽等物質(zhì)。其中膽汁酸鹽占固體成分50%以上。膽汁既是一種消化液，也是排泄液。膽固醇7α-羥膽固醇膽酸鵝脫氧膽酸甘氨膽酸?；悄懰岣拾冰Z脫氧膽酸牛磺鵝脫氧膽酸腸道復(fù)雜反應(yīng)甘氨酸?；撬崮懼懙莱跫?jí)游離膽汁酸初級(jí)結(jié)合膽汁酸初級(jí)膽汁酸的生成

HO

OH

COOH

HO

OHCONHCH2COOH

HOHO

OHCONHCH2CH2SO2H膽酸鵝脫氧膽酸牛磺鵝脫氧膽酸甘氨膽酸初級(jí)膽汁酸

HOHO

OHCOOH脫氧膽酸石膽酸次級(jí)膽汁酸大部分通過(guò)主動(dòng)重吸收經(jīng)門(mén)靜脈入肝腸肝循環(huán)次級(jí)膽汁酸的生成與膽汁酸的腸肝循環(huán)甘氨膽酸腸?；悄懰岬栏拾冰Z脫氧膽酸牛磺鵝脫氧膽酸膽酸鵝脫氧膽酸腸菌水解腸菌還原一部分通過(guò)被動(dòng)重吸收經(jīng)門(mén)靜脈入肝隨糞便排出

HOHO

OHCOOH

HO

HO

COOH脫氧膽酸

HO

OH

COOH

HOCOOH石膽酸膽酸鵝脫氧膽酸次級(jí)膽汁酸7－脫氧7－脫氧

2.膽紅素代謝膽色素是鐵卟啉化合物分解代謝的產(chǎn)物，主要包括膽紅素、膽綠素、膽素原和膽素，主要隨膽汁排泄。（1）膽紅素（bilirubin）的生成衰老RBC

單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)（肝、脾、骨髓）珠蛋白血紅素加氧酶膽綠素還原酶脂溶性，可進(jìn)入細(xì)胞產(chǎn)生毒害血紅素血紅蛋白

膽紅素COFe膽綠素

（2）膽紅素在血中的運(yùn)輸膽紅素血液水溶性，不能進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，也不透過(guò)腎小球未結(jié)合膽紅素間接膽紅素

膽紅素-清蛋白復(fù)合物清蛋白

①限制了膽紅素自由通過(guò)細(xì)胞膜，免除了對(duì)細(xì)胞的毒害作用。②增加了水溶性，有利于在血液中的運(yùn)輸。（3）肝臟在膽紅素代謝中的作用未結(jié)合膽紅素

Y-蛋白-膽紅素Z-蛋白-膽紅素Y-蛋白Z-蛋白葡萄糖醛酸-膽紅素UDPGA水溶性，不通過(guò)細(xì)胞膜，可通過(guò)腎小球肝細(xì)胞結(jié)合膽紅素直接膽紅素隨膽汁排入腸道攝取轉(zhuǎn)化排泄（4）膽紅素在腸道的變化及腸肝循環(huán)結(jié)合膽紅素膽素原腸道細(xì)菌還原大部分隨糞便排出80%～90%少部分被重吸收10%～20%大部分又隨膽汁排入腸道形成腸肝循環(huán)少部分進(jìn)入體循環(huán)通過(guò)腎隨尿排出經(jīng)門(mén)靜脈入肝0.6～4mg膽素原膽素O2膽素原膽素O240～280mg

血紅蛋白珠蛋白血紅素

COOFeNADPH

膽綠素

NADPH

膽紅素膽紅素胞液Y蛋白膽紅素-Y蛋白

Z蛋白膽紅素-Z蛋白

UDPGA內(nèi)質(zhì)網(wǎng)

UDP葡萄糖醛酸膽紅素腎小部分大部分膽素原膽紅素－清蛋白復(fù)合物膽素原膽素尿少量腸道膽素膽素原葡萄糖醛酸膽紅素糞便膽紅素葡萄糖醛酸單核－吞噬細(xì)胞肝細(xì)胞血液清蛋白

3.血氨代謝（1）血氨的來(lái)源：①氨基酸的脫氨基作用及含氮化合物的分解，稱為內(nèi)源性氨。②腸道吸收，由未消化的蛋白質(zhì)和未吸收的氨基酸腐敗產(chǎn)生。（2）血氨的去路：①合成尿素；②合成谷氨酰胺；③合成其他含氮化合物。（3）尿素的合成與排泄：血氨進(jìn)入肝臟經(jīng)鳥(niǎo)氨酸循環(huán)合成尿素，經(jīng)腎臟隨尿排去。

（1）在蛋白質(zhì)代謝中的作用：是機(jī)體合成蛋白質(zhì)的重要器官。除合成肝臟本身所需蛋白質(zhì)外，還合成近100種血漿蛋白。

（2）在氨基酸代謝中的作用：是體內(nèi)氨基酸分解代謝的主要場(chǎng)所。如脫氨基作用，調(diào)節(jié)血液中氨基酸的比例，合成尿素和一些含氮化合物。（二）物質(zhì)代謝功能1.營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)代謝維持血糖濃度恒定合成肝糖原肝糖異生血糖高（3）在糖代謝中的作用：維持血糖濃度的恒定。血糖低肝糖原分解分泌膽汁酸鹽，促進(jìn)脂類的消化吸收。合成各種脂類，如TG，Ch，PL等。進(jìn)行脂肪酸的β-氧化，產(chǎn)生酮體。參與脂蛋白代謝，合成HDL、VLDL；

（4）在脂類代謝中的作用：對(duì)脂類的消化、吸收、分解、合成及運(yùn)輸?shù)冗^(guò)程均起有重要作用肝功能受損脂肪肝

2.激素及維生素代謝（1）在激素代謝中的作用：對(duì)多種激素進(jìn)行滅活和排泄，如類固醇激素、胰島素、腎上腺素、甲狀腺激素等。滅活后的產(chǎn)物大部分隨尿排出。肝功能嚴(yán)重?fù)p害激素調(diào)節(jié)功能紊亂（2）在維生素代謝中的作用膽汁酸鹽有助于脂溶性Vit的吸收。儲(chǔ)存維生素(A,K,D,B12)。參與維生素的轉(zhuǎn)化。二、肝臟的生物轉(zhuǎn)化定義：

生物轉(zhuǎn)化:

機(jī)體對(duì)許多外源性或內(nèi)源性非營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)進(jìn)行化學(xué)轉(zhuǎn)變，增加其水溶性(或極性)，使其易隨膽汁、尿排出，這種體內(nèi)變化過(guò)程稱生物轉(zhuǎn)化(biotransformation)。

轉(zhuǎn)化對(duì)象：轉(zhuǎn)化特點(diǎn)：生理意義：保護(hù)機(jī)體

通過(guò)滅活對(duì)活性物質(zhì)的作用時(shí)間和強(qiáng)度進(jìn)行調(diào)節(jié)

利于機(jī)體對(duì)代謝廢物和進(jìn)入體內(nèi)的異物的排泄內(nèi)源性非營(yíng)養(yǎng)物:氨、胺、膽色素、激素外源性非營(yíng)養(yǎng)物:藥物、毒物、食品防腐劑、色素①連續(xù)性，②多樣性，

③失活與活化雙重性

1.溶血性黃疸（肝前性黃疸）由于各種原因使紅細(xì)胞大量破壞，以致未結(jié)合膽紅素明顯增加，超過(guò)肝臟的轉(zhuǎn)化能力，但結(jié)合膽紅素正常。新生兒血腦屏障發(fā)育不全，游離膽紅素易進(jìn)入腦組織，與腦部基底核的脂類結(jié)合，將神經(jīng)核染成黃色，稱為核黃疸（膽紅素腦?。?/p>

2.阻塞性黃疸（肝后性黃疸）由于膽道阻塞，膽汁不能排出而淤積在膽管內(nèi)，使上端膽管內(nèi)壓力不斷升高，最后使小膽管和毛細(xì)膽管擴(kuò)張，通透性增加，甚至破裂，使膽汁返流入血，血中結(jié)合膽紅素增加。

3.肝細(xì)胞性黃疸（肝源性黃疸）由于肝細(xì)胞病變，肝功能減退，使肝臟對(duì)膽紅素的攝取、轉(zhuǎn)化和排泄作用發(fā)生障礙。一方面肝臟不能將未結(jié)合膽紅素轉(zhuǎn)化成結(jié)合膽紅素，使血中未結(jié)合膽紅素增加；另一方面，病變區(qū)壓迫毛細(xì)膽管，使結(jié)合膽紅素返流入血，血中結(jié)合膽紅素也增加。2.黃疸的生化檢查（1）血清總膽紅素和結(jié)合膽紅素的測(cè)定（2）尿三膽的測(cè)定:尿膽紅素、尿膽素原、尿膽素（3）膽紅素葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶的誘導(dǎo)試驗(yàn)黃疸類型的鑒別肝細(xì)胞損害程度和預(yù)后判斷

（二）黃疸的生化診斷1.血清總膽紅素和結(jié)合膽紅素的測(cè)定用于黃疸類型的鑒別，肝細(xì)胞損害程度和預(yù)后判斷。2.尿三膽的測(cè)定尿膽紅素、尿膽素原、尿膽素合稱為尿三膽。由于尿膽素是由尿膽素原遇空氣氧化而來(lái)，故臨床上一般只測(cè)定尿膽紅素和尿膽素原。3.膽紅素葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶的誘導(dǎo)試驗(yàn)（1）糖皮質(zhì)激素的誘導(dǎo)試驗(yàn)：糖皮質(zhì)激素能誘導(dǎo)肝細(xì)胞內(nèi)尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶的合成，促進(jìn)未結(jié)合膽紅素的轉(zhuǎn)化與排泄，使血清膽紅素迅速下降。（2）苯巴比妥試驗(yàn)：苯巴比妥類藥物能誘導(dǎo)肝細(xì)胞內(nèi)Y蛋白和尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶的合成，苯巴比妥類藥物可用于核黃疸的治療。二、肝硬化的生化是由于多種損傷因素長(zhǎng)期或反復(fù)作用于肝，使肝細(xì)胞彌漫性變性、壞死，以及肝結(jié)締組織彌漫性增生，導(dǎo)致肝廣泛的纖維化和結(jié)節(jié)的形成稱為肝硬化。

（一）肝硬化病因的分類1.確定的病因：①乙型、丙型病毒性肝炎；②乙醇中毒；③代謝性疾?。貉　ilson病、半乳糖血癥等；④肝內(nèi)、外長(zhǎng)期膽汁淤積；⑤門(mén)靜脈回流受阻；⑥免疫功能紊亂：狼瘡性肝炎；毒素及治療性藥物：氨甲蝶呤、異煙肼等。

乙醇的飲用量與肝硬化的發(fā)病率有密切關(guān)系，飲酒量越高的國(guó)家其肝硬化死亡率也越高。如飲酒量年人均量在10升以下的瑞典、英國(guó)、丹麥等國(guó)家，肝硬化死亡率在10/10萬(wàn)以下；而飲酒量年人均在27升左右的法國(guó)，肝硬化死亡率為30/10萬(wàn)以上。由于長(zhǎng)期飲酒易形成乙醇性脂肪肝、乙醇性肝炎、乙醇性肝硬化。乙醇在胃和小腸上部迅速被吸收（胃30%、小腸上部70%），被吸收的乙醇90%～98%在肝內(nèi)被代謝，其余的隨尿和呼出氣排出。乙醇的代謝途徑有乙醇脫氫酶（alcoholdehydrogenase，ADH）乙醇氧化體系、微粒體乙醇氧化體系（microsomalethanoloxidizingsystem，MEOS）、NADPH氧化酶-過(guò)氧化氫酶體系、黃嘌呤氧化酶-過(guò)氧化氫酶體系。前二者最重要。

ADH乙醇氧化體系：CH3CH2OH＋NAD+CH3CHO＋NADH＋H+CH3CHOCH3COOH乙酰輔酶A

三羧酸循環(huán)微粒體乙醇氧化體系（MEOS）：CH3CH2OH＋NADPH＋H+＋O2CH3CHO＋NADP+＋2H2ONADPH氧化酶-過(guò)氧化氫酶體系：NADPH＋H+＋O2NADP+＋H2O2H2O2＋CH3CH2OH2H2O＋CH3CHOADH乙醛脫氫酶MEOSNADPH氧化酶過(guò)氧化氫酶黃嘌呤氧化酶-過(guò)氧化氫酶體系：次黃嘌呤＋H2O＋O2

黃嘌呤＋H2O2H2O2＋CH3CH2OH2H2O＋CH3CHO

2.可能的原因：①營(yíng)養(yǎng)不良；②感染：新生兒梅毒、血吸蟲(chóng)病蟲(chóng)卵所致門(mén)管區(qū)纖維組織增生；③隱原性肝硬化；④肉芽腫性肝硬化。黃嘌呤氧化酶過(guò)氧化氫酶

（二）肝硬化的生物化學(xué)檢查肝硬化的早期診斷非常困難。近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的幾項(xiàng)生化檢查為肝硬化的早期診斷提供了重要信息。1.單胺氧化酶（MAO）測(cè)定血清MAO與肝纖維化程度成正比。肝纖維化僅限于門(mén)脈區(qū)或中央靜脈周圍時(shí)，血清MAO幾乎全部正常。

門(mén)靜脈纖維增生侵入肝小葉實(shí)質(zhì)內(nèi)時(shí)，半數(shù)患者血清MAO活性增高。門(mén)靜脈區(qū)間或門(mén)靜脈區(qū)間與中央靜脈之間結(jié)締組織相連時(shí)，80%患者血清MAO活性增高。當(dāng)有假小葉形成時(shí)，則100%患者血清MAO活性增高。

2.β-脯氨酸羥化酶（β-PH）測(cè)定β-PH在膠原合成中起關(guān)鍵作用。當(dāng)肝纖維化時(shí)其含量和活性明顯增高。正常人為29.2±5.9ng/ml，肝硬化患者為654.9±90.2ng/ml。3.血清透明質(zhì)酸（HA）測(cè)定肝纖維化時(shí)，門(mén)-腔靜脈分流增大，進(jìn)入肝內(nèi)清除的HA減少，使血清HA明顯增高。H2O2＋CH3CH2OH2H2O＋CH3CHO最近在血清中還發(fā)現(xiàn)了第三種膽紅素，稱為δ-膽紅素，性質(zhì)與結(jié)合膽紅素相似，含量很低。乙醇的代謝途徑有乙醇脫氫酶（alcoholdehydrogenase，ADH）乙醇氧化體系、微粒體乙醇氧化體系（microsomalethanoloxidizingsystem，MEOS）、NADPH氧化酶-過(guò)氧化氫酶體系、黃嘌呤氧化酶-過(guò)氧化氫酶體系。（1）在激素代謝中的作用：對(duì)多種激素進(jìn)行滅活和排泄，如類固醇激素、胰島素、腎上腺素、甲狀腺激素等。如脫氨基作用，調(diào)節(jié)血液中氨基酸的比例，合成尿素和一些含氮化合物。膽固醇7α-羥膽固醇加速劑常用的有甲醇、乙醇、苯甲酸鈉、尿素。速率法測(cè)定血清γ-谷氨?；D(zhuǎn)移酶1608μmolNADH被氧化）。膽素膽素原葡萄糖醛酸膽紅素掌握肝功能試驗(yàn)的意義及評(píng)價(jià)，賴氏法、速率法測(cè)定ALT，改良J-G法和膽紅素氧化酶法測(cè)定膽紅素的原理、注意事項(xiàng)及主要臨床意義。血清總蛋白測(cè)定方法有化學(xué)法、物理法、染料結(jié)合法、電泳法等臨床上常用的是雙縮脲法。第一節(jié)概述尿三膽的測(cè)定尿膽紅素、尿膽素原、尿膽素合稱為尿三膽。UDPGA4.血清Ⅲ型前膠原肽（PⅢP）是由Ⅲ型前膠原經(jīng)內(nèi)切酶作用而產(chǎn)生的多肽。正常人為7.91±0.86μg/L，肝硬化患者明顯增高，診斷肝硬化的敏感性為95%，特異性為93%。三、肝性腦病的生化機(jī)制

肝性腦病又稱肝昏迷，是由嚴(yán)重的肝病所致的中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能紊亂，是嚴(yán)重肝病的重危合并癥。目前認(rèn)為氨基酸的代謝障礙可能是肝性腦病發(fā)生的生化基礎(chǔ)。

（一）氨中毒學(xué)說(shuō)由于肝功能不全，肝臟合成尿素的功能障礙，血氨升高，血氨易通過(guò)血腦屏障，進(jìn)入腦組織，氨對(duì)腦組織有嚴(yán)重的毒害作用。如抑制丙氨酸脫氫酶的活性，影響乙酰輔酶A的生成；與三羧酸循環(huán)中α-酮戊二酸結(jié)合生成谷氨酸，耗竭三羧酸循環(huán)中α-酮戊二酸，減少ATP的生成；與谷氨酸結(jié)合生成谷氨酰胺，增加ATP的消耗。影響腦組織的能量代謝。

（二）假神經(jīng)遞質(zhì)學(xué)說(shuō)在腸道，芳香族氨基酸，如酪氨酸和苯丙氨酸經(jīng)腸菌的氨基酸脫羧酶作用，生成苯乙胺和酪胺，在正常情況下可被肝內(nèi)單胺氧化酶分解而清除，肝功能不全時(shí)，單胺氧化酶活性低下，苯乙胺和酪胺進(jìn)入腦組織，經(jīng)腦組織的非特異性羥化酶作用，生成苯乙醇胺和β-羥酪胺，它們與兒茶酚胺遞質(zhì)結(jié)構(gòu)相似，但不能傳遞神經(jīng)沖動(dòng)，故稱為假神經(jīng)遞質(zhì)。

假神經(jīng)遞質(zhì)釋放后引起神經(jīng)系統(tǒng)某些部位（如腦干網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)上行激動(dòng)系統(tǒng)）功能發(fā)生障礙，使大腦發(fā)生深度抑制而昏迷。（三）氨基酸不平衡學(xué)說(shuō)嚴(yán)重肝功能損傷和門(mén)腔靜脈短路時(shí)，血漿支/芳比明顯降低（正常健康人為4.0，慢性肝功能不全為0.9，急性肝功能不全0.8）。由于芳香族氨基酸主要在肝內(nèi)分解，肝功能不全，芳香族氨基酸在肝內(nèi)代謝發(fā)生障礙，在血中濃度增高；支鏈氨基酸主要在肌肉組織中代謝，肝功能不全時(shí)對(duì)胰島素的滅活障礙，高水平的胰島素促進(jìn)支鏈氨基酸大量進(jìn)入肌肉組織被分解，血中濃度降低。芳香族氨基酸進(jìn)入腦組織，引起假神經(jīng)遞質(zhì)生成增多，5-羥色胺（抑制性神經(jīng)遞質(zhì)）增多，使中樞進(jìn)入抑制狀態(tài)。第三節(jié)肝功能試驗(yàn)一、血清（漿）蛋白測(cè)定清蛋白（Alb)是血漿中主要的蛋白質(zhì),合成清蛋白是肝的重要功能之一。同時(shí)測(cè)定血清中的總蛋白（TP）和清蛋白含量，計(jì)算球蛋白（G）量和A/G比值是判定肝功能的重要指標(biāo)。血清總蛋白測(cè)定方法有化學(xué)法、物理法、染料結(jié)合法、電泳法等臨床上常用的是雙縮脲法。清蛋白測(cè)定常用方法為染料結(jié)合法，常用的染料有溴甲酚綠和溴甲酚紫。血中蛋白質(zhì)主要由清蛋白和球蛋白組成而其他組分的蛋白含量低所以對(duì)同份血清測(cè)定的總蛋白、清蛋白結(jié)果可以求出可以求出球蛋白的含量，通過(guò)計(jì)算求出A/G。血清氨基轉(zhuǎn)移酶測(cè)定一、氨基轉(zhuǎn)移酶測(cè)定方法簡(jiǎn)介丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（alanineaminotransferase，ALT)天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（aspartateaminotransferase，AST)酶聯(lián)-紫外連續(xù)監(jiān)測(cè)法二硝基苯肼比色法方法:酶：（一）酶聯(lián)-紫外連續(xù)監(jiān)測(cè)法ALT和AST測(cè)定的參考方法

NADH在340nm處有特征吸收峰，連續(xù)監(jiān)測(cè)NADH消耗引起的340nm吸光度變化,根據(jù)340nm處吸光度下降速率（－△A/min）計(jì)算ALT活性原理：計(jì)算：注意事項(xiàng)：1.該ALT測(cè)定法中存在兩個(gè)消耗NADH的副反應(yīng)2.輔酶P-5′-P能使血清中的ALT顯示最大活性3.試劑空白測(cè)定值的處理4.樣本選擇和處理方法評(píng)價(jià)1.特異性高2.準(zhǔn)確性高3.精密度高參考范圍：5～40U/L或參考試劑盒提供的參考范圍（二）二硝基苯肼比色法原理：操作與計(jì)算1.ALT校準(zhǔn)曲線的繪制2.樣本的測(cè)定

測(cè)定管吸光度減去對(duì)照管吸光度的差值為樣本的吸光度，用該值在校準(zhǔn)曲線上查得的卡門(mén)單位3.計(jì)算4.參考范圍：5～25卡門(mén)單位注意事項(xiàng)：1.賴氏法單位定義：

卡門(mén)單位定義：血清1ml，反應(yīng)液總體積3ml，25℃，波長(zhǎng)340nm，比色杯光徑1.0cm，每分鐘吸光度下降0.001A為一個(gè)單位（相當(dāng)于每升反應(yīng)體系中0.1608μmolNADH被氧化）。2.底物α-酮戊二酸和2，4-二硝基苯肼濃度不足，以及產(chǎn)物丙酮酸的抑制作用：

賴氏法的校準(zhǔn)曲線不能延長(zhǎng)到200卡門(mén)單位。當(dāng)酶活性超過(guò)150卡門(mén)單位時(shí)，應(yīng)用生理鹽水作5～10倍稀釋樣本，測(cè)定結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)3.樣本存放時(shí)間

在室溫（25℃）可維持2d，在4℃冰箱可維持1周。在－25℃可維持1個(gè)月試劑空白自身血清的對(duì)照管樣本對(duì)照管4.血清對(duì)照5.丙酮酸鈉的純度對(duì)曲線的影響6.加入2，4-二硝基苯肼溶液后，應(yīng)充分混勻，使反應(yīng)完全。加入氫氧化鈉溶液的速度要一致，減少吸光度管間的差異。7.稱量必須準(zhǔn)確方法評(píng)價(jià)重復(fù)性差底物α-酮戊二酸用量不足2，4-二硝基苯肼在堿性條件下也能顯色產(chǎn)物旁路效應(yīng)2.準(zhǔn)確性差3.試劑穩(wěn)定性差4.操作簡(jiǎn)便二、氨基轉(zhuǎn)移酶測(cè)定的意義

肝細(xì)胞中含量最多，其次是腎臟和心臟，通常只有極少量釋放入血液，所以血清中此酶的活力很低，當(dāng)這些組織病變時(shí)，細(xì)胞壞死或通透性增加，細(xì)胞內(nèi)酶大量釋放入血，使血清中該酶活力顯著增高1.血清ALT活性增高肝膽疾病骨骼肌疾病一些藥物和毒物可引起ALT活性升高2．血清AST活性增高心血管疾病各種肝病均可引起血清AST的升高第四節(jié)血清γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶測(cè)定可能有助于診斷腎疾?。?）血氨的來(lái)源：①氨基酸的脫氨基作用及含氮化合物的分解，稱為內(nèi)源性氨。天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（aspartateaminotransferase，AST)可能有助于診斷腎疾病膽綠素＋O2淡紫色化合物（1）血清總膽紅素和結(jié)合膽紅素的測(cè)定門(mén)靜脈區(qū)間或門(mén)靜脈區(qū)間與中央靜脈之間結(jié)締組織相連時(shí)，80%患者血清MAO活性增高。（三）氨基酸不平衡學(xué)說(shuō)嚴(yán)重肝功能損傷和門(mén)腔靜脈短路時(shí)，血漿支/芳比明顯降低（正常健康人為4.一、血清（漿）蛋白測(cè)定確度和精密度都較低,受膽紅素和溶血的干擾小部分大部分血清總膽紅素和結(jié)合膽紅素的測(cè)定用于黃疸類型的鑒別，肝細(xì)胞損害程度和預(yù)后判斷。（四）肝細(xì)胞的再生膽素原膽素第三節(jié)血清堿性磷酸酶測(cè)定一、測(cè)定方法簡(jiǎn)介一組非特異性的在堿性條件下水解磷酸酯的酶類底物:β-甘油磷酸鈉磷酸苯二鈉對(duì)硝基酚磷酸鹽酸酚酞α-萘酚磷酸鹽4-甲基傘形花內(nèi)酯酰磷酸鹽堿性磷酸酶:測(cè)定方法:（一）測(cè)定水解釋放的無(wú)機(jī)磷鮑氏（Bodansky）法（二）測(cè)定底物水解后的羥基化合物1.羥基化合物需與顯色劑作用后比色測(cè)定金氏（King）法2.羥基化合物在堿性條件下直接顯色測(cè)定對(duì)硝基酚磷酸鹽（p-nitrophenylphosphate,4-NPP）法金氏法測(cè)定血清堿性磷酸酶

ALP在堿性條件催化磷酸苯二鈉水解，釋放出酚和磷酸，酚在堿性溶液中與4-氨基安替比林作用，經(jīng)鐵氰化鉀氧化形成紅色的醌類化合物，根據(jù)紅色的深淺與校準(zhǔn)酚比較，確定ALP的活性。原理:參考范圍：?jiǎn)挝欢x：

靈敏度較高，顯色穩(wěn)定，不需去蛋白，操作簡(jiǎn)單、快速準(zhǔn)確度和精密度都較低,受膽紅素和溶血的干擾方法評(píng)價(jià)：100ml血清在37℃與底物作用15min，產(chǎn)生1mg酚為1個(gè)金氏單位成人3～13金氏單位，兒童5～28金氏單位速率法測(cè)定血清堿性磷酸酶原理:

以對(duì)-硝基苯酚磷酸鈉（4-NPP）為底物，AMP或二乙醇胺（DEA）為磷酸?；氖荏w。在堿性條件下，ALP催化4-NPP水解釋放出磷酸基團(tuán)，生成游離對(duì)-硝基酚（p-nitrophenol,4-NP），4-NP在堿性溶液中轉(zhuǎn)變成醌式結(jié)構(gòu)，呈現(xiàn)較深的黃色。根據(jù)405nm處吸光度增加的速率（△A/min）推算出清ALP活性單位。計(jì)算：參考范圍：40～160U/L（37℃）靈敏度高、線性范圍寬（500U/L以上）和精密度高方法評(píng)價(jià)：二、堿性磷酸酶測(cè)定的意義分布：廣泛存在于各器官組織中，尤以肝臟、骨骼、小腸和腎臟含量較高，血清中ALP主要來(lái)自肝臟和骨骼病理性增高：

肝膽疾?。鹤枞渣S疸、急性或慢性黃疸型肝炎、肝癌

骨骼疾?。贺E病、骨軟化病、骨轉(zhuǎn)移癌和骨折修復(fù)愈合期生理性增高：妊娠期與兒童生長(zhǎng)發(fā)育期第四節(jié)血清γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶測(cè)定一、測(cè)定方法簡(jiǎn)介γ-谷氨?；D(zhuǎn)移酶（γ-glutamyltransferase，GGT)（一）重氮比色法（二）速率法測(cè)定方法:速率法測(cè)定血清γ-谷氨?；D(zhuǎn)移酶

GGT催化γ-谷氨?；茡Q反應(yīng)。以L-γ-谷氨酰-3-羧基-4-硝基苯胺為底物，雙甘肽為谷氨?；氖荏w，在GGT的催化下，谷氨?；D(zhuǎn)移到雙甘肽分子上，同時(shí)釋放出黃色的2-硝基-5-氨基苯甲酸，根據(jù)405nm處吸光度增加的速率（△A/min）推算出GGT活性單位原理：計(jì)算：參考范圍：男性11～50U/L（37℃），女性7～32U/L（37℃）`方法評(píng)價(jià):本法準(zhǔn)確度好；精密度好線性范圍寬（460U/L）；操作簡(jiǎn)便；但對(duì)試劑純度要求高重氮比色法測(cè)定血清γ-谷氨酰基轉(zhuǎn)移酶

以γ-谷氨酰α-萘胺作為γ-谷氨?；墓w，雙甘肽作為受體，在GGT作用下，產(chǎn)生α-萘胺，后者與重氮試劑反應(yīng)，產(chǎn)生紅色α-萘胺-對(duì)-偶氮苯磺酸，其色澤的深淺與GGT活力成正比。原理：參考范圍：方法評(píng)價(jià)：

不需去除蛋白質(zhì)，操作簡(jiǎn)便，顏色穩(wěn)定，線性關(guān)系好，但底物水溶性較差成年男性3～17U/L，成年女性2～13U/L二、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶測(cè)定的意義分布：腎最高，其次是前列腺、胰、肝等器官尿中GGT活性：

可能有助于診斷腎疾病

血清GGT用于診斷肝膽疾病1.原發(fā)性或轉(zhuǎn)移性肝癌2.阻塞性黃疸3.病毒性肝炎和肝硬化4.乙醇性肝炎血清膽紅素測(cè)定

未結(jié)合膽紅素間接膽紅素血清膽紅素結(jié)合膽紅素直接膽紅素加速劑常用的有甲醇、乙醇、苯甲酸鈉、尿素。最近在血清中還發(fā)現(xiàn)了第三種膽紅素，稱為δ-膽紅素，性質(zhì)與結(jié)合膽紅素相似，含量很低。（一）重氮法

對(duì)氨基苯磺酸＋亞硝酸鈉氯化重氮苯磺酸＋NaCl＋2H2O

膽紅素＋氯化重氮苯磺酸紫紅色的偶氮化合物λ=560nm

加速劑為甲醇。靈敏度較低，溶血標(biāo)本干擾大。重氮試劑在室溫中不穩(wěn)定，易分解，故一般在臨用前新鮮配制。HClpH1-2

（二）改良J-G法1938年由Jendrossik和Grof建立，幾經(jīng)改進(jìn)成為今天廣泛應(yīng)用的J-G法。加速劑為苯甲酸鈉-咖啡因。紫紅色的偶氮膽紅素在強(qiáng)堿性酒石酸鈉和咖啡因存在下，生成藍(lán)色的偶氮膽紅素。pH13，λ=660nm靈敏度高，ε7.4×104；線性范圍寬，0～2736μmol/L；顯色穩(wěn)定；精確度較好；干擾少。是我國(guó)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)學(xué)會(huì)推薦的方法。（三）膽紅素氧化酶法總膽紅素＋1/2O2

膽綠素＋H2O膽綠素＋O2

淡紫色化合物

膽紅素在460nm波長(zhǎng)處，吸光度的下降與濃度成正比。在pH8.2時(shí)，膽紅素氧化酶可催化結(jié)合膽紅素和未結(jié)合膽紅素氧化；在pH4.5時(shí)，膽紅素氧化酶僅催化結(jié)合膽紅素氧化。因此，調(diào)節(jié)溶液pH可分別測(cè)定總膽紅素和結(jié)合膽紅素。靈敏度高，干擾少，精確度好，線性范圍寬。膽紅素氧化酶

【參考范圍】血清總膽紅素5.1～17.1μmol/L血清結(jié)合膽紅素0～6μmol/L結(jié)合膽紅素/總膽紅素20%～35%

【臨床意義】

診斷黃疸和鑒別黃疸類型，血清總膽紅素17.1～34.2μmol/L為隱性黃疸，＞34.2μmol/L為臨床黃疸，根據(jù)結(jié)合膽紅素占總膽紅素的百分比可鑒別黃疸類型。溶血性黃疸結(jié)合膽紅素占總膽紅素的20%以下。肝細(xì)胞性黃疸結(jié)合膽紅素占總膽紅素的35%以上。阻塞性黃疸結(jié)合膽紅素占總膽紅素的50%以上。

二、血氨測(cè)定

血氨主要來(lái)自腸道的吸收及組織中氨基酸的脫氨基作用。主要的去路是在肝臟經(jīng)鳥(niǎo)氨酸循環(huán)合成尿素。血液中的游離氨以兩種形式存在，NH4+和NH3，在生理pH條件下，NH4+占98%以上。血氨測(cè)定的方法主要有三類：化學(xué)法（堿性酚次氯酸鹽直接顯色法）；酶法（谷氨酸脫氫酶速率法）；離子選擇電極法。

（一）堿性酚次氯酸鹽直接顯色法血清經(jīng)鎢酸沉淀蛋白質(zhì)后，濾液中的與堿性酚次氯酸鹽試劑反應(yīng)生成藍(lán)色化合物（靛藍(lán)），λ=625nm，此反應(yīng)又稱Berthlot反應(yīng)。顯色穩(wěn)定，但血液離體后，血液中的含氮化合物可分解產(chǎn)生氨，時(shí)血氨緩慢升高，此時(shí)應(yīng)迅速將血液標(biāo)本制成無(wú)蛋白濾液。

（二）谷氨酸脫氫酶速率法

血漿中的在NH4+足量的α-酮戊二酸和NADPH存在下，經(jīng)GLDH催化生成谷氨酸NADP+，對(duì)340nm紫外光吸光度下降。NH4+＋α-酮戊二酸＋NADPH