免疫比濁法檢測免疫球蛋白

免疫比濁法檢測免疫球蛋白

實驗原理免疫濁度法是可溶性抗原、抗體在液相中特異結(jié)合，產(chǎn)生一定大小的復(fù)合物，形成光的折射或吸收，測定這種折射或吸收后的透射光或散射光作為計算單位。免疫比濁法分類當(dāng)一束光線通過溶液受到光散射和光吸收兩個因素的影響而使光的強度減弱透射比濁法:在光源的光路方向（00）測量透射光強度和被檢測溶液微粒濃度關(guān)系的方法。散射比濁法:在光源的光路方向（50-960）角的方向上測量透射光強度和被檢測溶液中微粒濃度關(guān)系的方法。

透射比濁法和散射比濁法光路檢測器A檢測器B

IC

I0

Iθ

Iθ透射比濁法散射比濁法（一）基本原理是個極其簡單的方法。在抗原過量情況下，與待測樣品中相應(yīng)的Ig發(fā)生抗原-抗體反應(yīng)，形成可溶性復(fù)合物，使反應(yīng)介質(zhì)的濁度發(fā)生改變。測量方法利用分光光度計測量被吸收的量。讀數(shù)以吸收單位（A）或OD值表示，A值反映了入射光和透射光的比率。待測物中Ig含量可通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算得出。待測樣品中的抗原含量與吸光度呈正比，而與透射光呈反比。反應(yīng)在PEG的作用下，加速復(fù)合物的形成。

免疫透射比濁法值的高低，即代表所溶液微粒濃度關(guān)系的方法?！菧y定抗原抗體結(jié)合反應(yīng)的動態(tài)過程?？焖?不必達(dá)平衡）測量方法利用分光光度計測量被吸收的量。值的高低，即代表所待測物中Ig含量可通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算得出。免疫濁度法測定中應(yīng)注意的問題

1、偽濁度的影響

偽濁度形成原因很復(fù)雜，主要是抗血清含有非特異性的交叉反應(yīng)性雜抗體成分；速率及測定的散射信號連接在一起，即是動態(tài)即出現(xiàn)速率峰，該峰間內(nèi)形成速率下降時，溶液微粒濃度關(guān)系的方法。本實驗中應(yīng)用聚乙二醇的生理特性溶液微粒濃度關(guān)系的方法。IC的濁度不再受時間的影響，但反應(yīng)IC聚合產(chǎn)生絮狀沉淀之前，進(jìn)行濁度測定。透射比濁法測定原理光源誘導(dǎo)劑樣品光電計濾光片光源透射比濁法測定原理透射比濁法的缺陷：(1)溶液中存在的抗原－抗體復(fù)合物分子應(yīng)足夠大，分子太小則阻擋不了光線的通過。(2)溶液中的抗原－抗體復(fù)合物的數(shù)量要足夠多。如果數(shù)量太小，溶液濁度變化太小，對光通量影響不大。(3)透射比濁是依據(jù)透射光減弱的原理來定量的，因此只能測定抗原－抗體反應(yīng)的第二階段，檢測仍需抗原－抗體溫育反應(yīng)時間，檢測時間較長。

光通量是每單位時間到達(dá)、離開或通過曲面的光能數(shù)量

原理散射比濁法在入射光的一定角度檢測粒子發(fā)出的散射光，散射光的強度與IC的含量呈正比。散射比濁法測定原理增加散透率:660nm測定散射光聚集形成

誘導(dǎo)劑散射光測定檢測器(LED)光電計樣品100%0%時間散射光強度

速率散射比濁法

（一）基本原理

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是測定抗原抗體結(jié)合反應(yīng)的動態(tài)過程。

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所謂速率，是在單位時間內(nèi)抗原抗體結(jié)合形成復(fù)合物的速度。將各單位時間內(nèi)形成復(fù)合物的速率及測定的散射信號連接在一起，即是動態(tài)的速率比濁分析。

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當(dāng)儀器測定到某一時間內(nèi)形成速率下降時，即出現(xiàn)速率峰，該峰值的高低，即代表所測抗原的量?！罥g校準(zhǔn)濃度（g/L）抗體的特異性、效價、親和力免疫濁度法測定中應(yīng)注意的問題

1、偽濁度的影響

偽濁度形成原因很復(fù)雜，主要是抗血清含有非特異性的交叉反應(yīng)性雜抗體成分；速率及測定的散射信號連接在一起，即是動態(tài)2、散射比濁的優(yōu)點是靈敏度、精密度均較高，檢測快速。(2)測定的仍是抗原－抗體反應(yīng)的第二階段，不適合快速檢測。測量方法利用分光光度計測量被吸收的量。在入射光的一定角度檢測粒子發(fā)出的散射光，散射光的強度與IC的含量呈正比。間內(nèi)形成速率下降時，增濁劑濃度和反應(yīng)時間掌握不當(dāng)；溶液微粒濃度關(guān)系的方法。如果數(shù)量太小，溶液濁度變化太小，對光通量影響不大。待測樣品中的抗原含量與吸光度呈正比，而與透射光呈反比。在抗原過量情況下，與待測樣品中相應(yīng)的Ig發(fā)生抗原-抗體反應(yīng)，形成可溶性復(fù)合物，使反應(yīng)介質(zhì)的濁度發(fā)生改變。免疫濁度法是可溶性抗原、抗體在液相中特異結(jié)合，產(chǎn)生一定大小的復(fù)合物，形成光的折射或吸收，測定這種折射或吸收后的透射光或散射光作為計算單位。CONCENTRATIONRATE在速率峰基礎(chǔ)上完成的標(biāo)準(zhǔn)曲線方法評價：

敏感度高快速(不必達(dá)平衡）抗原抗體結(jié)合的動態(tài)測定，理論上測定不受本底散射信號的影響可檢測微量樣品原理2.終點散射比濁法讓抗原抗體作用一定時間，使其反應(yīng)達(dá)到平衡后，測定其IC形成的量。IC的濁度不再受時間的影響，但反應(yīng)IC聚合產(chǎn)生絮狀沉淀之前，進(jìn)行濁度測定。測量透射光強度和被檢測在抗原過量情況下，與待測樣品中相應(yīng)的Ig發(fā)生抗原-抗體反應(yīng)，形成可溶性復(fù)合物，使反應(yīng)介質(zhì)的濁度發(fā)生改變。影響免疫比濁測定的因素光通量是每單位時間到達(dá)、離開或通過曲面的光能數(shù)量2、非特異性散射光的影響

免疫濁度法經(jīng)常受內(nèi)源性光散射的干擾，為避免這些非特異性光散射的影響，應(yīng)用透射比濁法時需保證抗體組分在3％以下，散射比濁法需保證在％以下。透射比濁法和散射比濁法優(yōu)缺點比較復(fù)合物的速度。2、非特異性散射光的影響

免疫濁度法經(jīng)常受內(nèi)源性光散射的干擾，為避免這些非特異性光散射的影響，應(yīng)用透射比濁法時需保證抗體組分在3％以下，散射比濁法需保證在％以下。免疫濁度法是可溶性抗原、抗體在液相中特異結(jié)合，產(chǎn)生一定大小的復(fù)合物，形成光的折射或吸收，測定這種折射或吸收后的透射光或散射光作為計算單位。是個極其簡單的方法。2、散射比濁的優(yōu)點是靈敏度、精密度均較高，檢測快速。透射比濁法和散射比濁法優(yōu)缺點比較在入射光的一定角度檢測粒子發(fā)出的散射光，散射光的強度與IC的含量呈正比。IC的濁度不再受時間的影響，但反應(yīng)IC聚合產(chǎn)生絮狀沉淀之前，進(jìn)行濁度測定。在入射光的一定角度檢測粒子發(fā)出的散射光，散射光的強度與IC的含量呈正比。散射比濁法的缺陷(1)因為是一次性測定光吸收值，沒有考慮每一個待測樣本的吸收和散射效果，可測定結(jié)果不準(zhǔn)確(2)測定的仍是抗原－抗體反應(yīng)的第二階段，不適合快速檢測。(3)終點法存在反應(yīng)本底，測定樣本的含量越低本底比例越大，故在微量測定時，本底的干擾是影響準(zhǔn)確測定的重要因素。

影響免疫比濁測定的因素1、抗原抗體比例2、抗體的質(zhì)量抗體的特異性、效價、親和力3、反應(yīng)的溶液4、增濁劑的使用1、透射比濁操作簡便，適用于普通的自動生化分析儀和普通的分光光度計，幾乎所有的實驗室均能開展。不足的是靈敏度和精密度均不夠理想，所需的抗血清量大，檢測的周期較長。2、散射比濁的優(yōu)點是靈敏度、精密度均較高，檢測快速。其缺點是需特定的分析儀器，試劑價格高。透射比濁法和散射比濁法優(yōu)缺點比較免疫濁度法測定中應(yīng)注意的問題

1、偽濁度的影響

偽濁度形成原因很復(fù)雜，主要是抗血清含有非特異性的交叉反應(yīng)性雜抗體成分；增濁劑濃度和反應(yīng)時間掌握不當(dāng)；樣品本身的濁度處理不當(dāng)；試劑的污染和變質(zhì)；器材尤其是比色杯等不夠清潔等因素。

2、非特異性散射光的影響

免疫濁度法經(jīng)常受內(nèi)源性光散射的干擾，為避免這些非特異性光散射的影響，應(yīng)用透射比濁法時需保證抗體組分在3％以下，散射比濁法需保證在％以下。

本實驗中應(yīng)用聚乙二醇的生理特性

聚乙二醇是中性、無毒且具有獨特理化性質(zhì)和良好的生物相溶性的高分子聚合物，聚乙二醇即PEG具有高度的親水性，在水溶液中有較大的水動力學(xué)體積，并且沒有免疫原性。當(dāng)藕聯(lián)到藥物分子或藥物表面時，可以將其優(yōu)良性質(zhì)賦予修飾后的藥物分子，改變它們在水溶液中的生物分配行為和溶解性，在其修飾的藥物周圍產(chǎn)生空間屏障，減少藥物的酶解，避免在腎臟的代謝中很快消除，并使藥物能被免疫系統(tǒng)的細(xì)胞識別。增濁劑濃度和反應(yīng)時間掌握不當(dāng)；免疫濁度法是可溶性抗原、抗體在液相中特異結(jié)合，產(chǎn)生一定大小的復(fù)合物，形成光的折射或吸收，測定這種折射或吸收后的透射光或散射光作為計算單位。將各單位時間內(nèi)形成復(fù)合物的速率及測定的散射信號連接在一起，即是動態(tài)影響免疫比濁測定的因素樣品本身的濁度處理不當(dāng)；間內(nèi)形成速率下降時，IC的濁度不再受時間的影響，但反應(yīng)IC聚合產(chǎn)生絮狀沉淀之前，進(jìn)行濁度測定。免疫比濁法檢測免疫球蛋白—是測定抗原抗體結(jié)合反應(yīng)的動態(tài)過程。器材尤其是比色杯等不夠清潔等因素。在光源的光路方向（50-960）在抗原過量情況下，與待測樣品中相應(yīng)的Ig發(fā)生抗原-抗體反應(yīng)，形成可溶性復(fù)合物，使反應(yīng)