生物課后訓練：專題課題　土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)

學必求其心得，業(yè)必貴于專精學必求其心得，業(yè)必貴于專精學必求其心得，業(yè)必貴于專精課后訓練1．可以鑒定出分解尿素的細菌的方法是（）。A．以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑B．以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加二苯胺試劑C．以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入蘇丹Ⅲ試劑D．以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入雙縮脲試劑2．關于微生物的培養(yǎng)，下列敘述錯誤的是(）.A．細菌一般在30～37℃的溫度下培養(yǎng)1~2dB．放線菌一般在25～28℃的溫度下培養(yǎng)5~7dC．霉菌一般在25～28℃的溫度下培養(yǎng)3～4dD．不同種類的微生物，一般需要相同的培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時間3．在尋找目的菌株時，要根據(jù)它對生存環(huán)境的要求,到相應的環(huán)境中去尋找,下列不屬于厭氧細菌生存環(huán)境的是（）。A．土壤深層B．人或動物體內(nèi)C．真空D．池塘淤泥4．需要在火焰旁操作的有(）.①土壤取樣②稱取土壤③稀釋土壤溶液④涂布平板⑤微生物的培養(yǎng)A．①②③④⑤B．②③④⑤C．③④⑤D．②③④5．分離土壤中分解尿素的細菌，對培養(yǎng)基的要求是(）.①加尿素②不加尿素③加瓊脂④不加瓊脂⑤加葡萄糖⑥不加葡萄糖⑦加硝酸鹽⑧不加硝酸鹽A．①③⑤⑦B．②④⑥⑧C．①③⑤⑧D．①④⑥⑦6．以下關于分解尿素的細菌的說法正確的是（）.A．能分解尿素的原因是能合成分泌蛋白酶B．以尿素作為唯一的碳源C．環(huán)境中含有大量的尿素誘導該細菌產(chǎn)生了分解尿素的特性D．以尿素為唯一氮源且添加了酸堿緩沖劑的培養(yǎng)基培養(yǎng)該菌后不會使酚紅指示劑變紅7．稀釋涂布平板法分離分解尿素的細菌時使用的涂布器應保存在體積分數(shù)為70%的酒精中，取出后又要放在酒精燈火焰上引燃,這兩步分別屬于什么技術(shù)？（）A．滅菌、滅菌B．消毒、消毒C．滅菌、消毒D．消毒、滅菌8．下列有關土壤中微生物的分離與計數(shù)的說法中，錯誤的是（）。A．因為土壤中各類微生物的數(shù)量不同,所以，為獲得不同類型的微生物要按不同的稀釋倍數(shù)進行分離B．測定土壤中細菌的總量和測定土壤中能分解尿素的細菌的數(shù)量,選用的稀釋范圍不同C．如果得到了2個或2個以上菌落數(shù)目在30～300的平板,則說明稀釋操作比較成功，并能夠進行菌落的計數(shù)D．牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的菌落數(shù)目明顯小于選擇培養(yǎng)基的數(shù)目，說明選擇培養(yǎng)基已篩選出一些細菌菌落9．馬丁培養(yǎng)基是實驗室常用的培養(yǎng)基之一。下列為馬丁培養(yǎng)基的化學成分，據(jù)此回答下列問題。成分含量成分含量KH2PO4·3H2O0。1g葡萄糖1gMgSO4·7H2O0。05g蛋白胨0.5g0。1%孟加拉紅溶液0.33mL瓊脂1.5～2g2%去氧膽酸鈉溶液2mLH2O100mL鏈霉素溶液（1×104μ/mL）0.33mL—（1）該培養(yǎng)基中加入了鏈霉素，能抑制細菌和放線菌，但真菌可以在上面生長，因此培養(yǎng)基是一種________培養(yǎng)基。(2）葡萄糖能給微生物生長提供______和______。(3）蛋白胨能給微生物生長提供______和______.（4）培養(yǎng)基中KH2PO4·3H2O可給微生物提供含________的無機鹽。(5）瓊脂的作用是作為________.10．探究如何從土壤中分離自生固氮菌并計數(shù)。實驗原理：農(nóng)田的表層土壤中，自生固氮菌的含量比較多.將用表層土制成的稀泥漿，接種到無氮培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)。在這種情況下，只有自生固氮菌才能生長繁殖。材料用具:農(nóng)田的表層土壤、無氮培養(yǎng)基、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、盛9mL無菌水的大試管若干、無菌移液管、無菌涂布器、無菌培養(yǎng)皿、盛90mL無菌水的錐形瓶、酒精燈、恒溫箱.方法步驟:(1）倒平板。分別將無氮培養(yǎng)基、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基倒平板,應在__________操作。（2)制備土壤稀釋液。取土樣10g加入盛有90mL無菌水的錐形瓶中,充分搖勻。用無菌移液管吸取上清液1mL,轉(zhuǎn)至9mL無菌水的大試管中，依次稀釋到107倍稀釋度。為實現(xiàn)無菌操作，試管口和移液管應在離火焰__________cm處。(3）涂布。按照由107~103稀釋度的順序分別吸取0。1mL進行平板涂布，每個稀釋度下，無氮培養(yǎng)基應至少涂布______個平板,牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基涂布______個平板.（4）培養(yǎng).放入恒溫箱內(nèi),在適宜溫度條件下培養(yǎng)3～4d.一般每隔______小時統(tǒng)計一次，選取______時的記錄作為結(jié)果，這樣可以防止________________________________________________________________________。(5)細菌的計數(shù)。當菌落數(shù)目穩(wěn)定時,選取菌落數(shù)在__________的平板進行計數(shù)。如果測試的平均值為50,則每克樣品中的菌株數(shù)是__________。（稀釋度是105）（6)預期結(jié)果。相同稀釋度下，牛肉膏蛋白胨平板上的菌落數(shù)__________（填“多于”或“少于”）無氮培養(yǎng)基上的數(shù)目。理由是________________________________________________________________________________________________________________________________________________.

參考答案1答案：A解析：細菌合成的脲酶可以催化尿素分解形成氨。氨會使培養(yǎng)基的堿性增強，pH升高。在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，培養(yǎng)某種細菌后,如果pH升高,指示劑若變紅,則說明該細菌能產(chǎn)生脲酶分解尿素。2答案：D解析：不同種類的微生物，往往需要不同的培養(yǎng)溫度和時間.3答案：C解析：厭氧型微生物的生長繁殖不僅需要厭氧環(huán)境，同時還需要生存所必需的各種營養(yǎng)物質(zhì)，如碳源、氮源、水、無機鹽等。真空環(huán)境只能提供無氧環(huán)境，卻不能提供其他營養(yǎng)物質(zhì)。4答案:D解析:除了土壤取樣和微生物的培養(yǎng)不便于在火焰旁進行外，其他均要在火焰旁進行,以防止雜菌污染。5答案:C解析：分離分解尿素的細菌，應該以尿素為唯一氮源,不用加硝酸鹽來提供氮源.另外還要加葡萄糖提供碳源，加瓊脂作為凝固劑,制成固體培養(yǎng)基，利于細菌的分離、鑒定、計數(shù)等。6答案：D解析：A項：酶有專一性，分解尿素的細菌之所以能分解尿素是因為能合成分泌脲酶.B項:該菌能以葡萄糖作為碳源。C項：環(huán)境中含有大量的尿素對分解尿素的性狀起了選擇作用而非誘導作用。D項:該菌產(chǎn)生脲酶把尿素分解為氨后，使pH升高,進一步使酚紅指示劑變紅，但添加酸堿緩沖劑后，阻止了pH的升高，因此培養(yǎng)基不再使酚紅指示劑變紅。7答案：D解析：消毒和滅菌是不同的。往往消毒比較溫和，僅僅消滅危害健康的致病菌；而滅菌就比較強烈，如高壓蒸汽、灼燒等,它是殺死一切菌。因此本題前者屬消毒，后者屬滅菌。8答案：D解析:樣品的稀釋度直接影響平板上生長的菌落的數(shù)目。實際操作中,通常選用一定稀釋范圍的樣品液進行培養(yǎng),以保證獲得菌落在30~300之間適于計數(shù)的平板。測定土壤中細菌的數(shù)量，一般選用104、105和106倍的稀釋液；測定放線菌的數(shù)量一般選用103、104和105倍的稀釋液;測定真菌的數(shù)量，一般選用102、103和104倍的稀釋液。將菌液稀釋相同的倍數(shù)，在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上生長的菌落數(shù)目應明顯多于選擇培養(yǎng)基上的數(shù)目,從而說明選擇培養(yǎng)基的篩選作用。9答案：選擇答案：碳源能源答案：氮源維生素答案：K、P答案：凝固劑解析：鏈霉素能抑制細菌和放線菌生長，真菌可以在上面生長.因此該培養(yǎng)基是一種選擇培養(yǎng)基.葡萄糖是一種含碳的有機物，既可給微生物提供碳源，又可給微生物提供能源.該培養(yǎng)基蛋白胨可以給微生物提供氮源和維生素。10答案：酒精燈火焰旁答案:1～2答案：31答案：24菌落數(shù)目穩(wěn)定因培養(yǎng)時間不足而導致遺漏菌落的數(shù)目答案：30～3005×107答案：多