化學(xué)品 生殖發(fā)育毒性篩選試驗(yàn)方法 征求意見稿

GB/Txxxxx—XXXX化學(xué)品生殖/發(fā)育毒性篩選試驗(yàn)方法本文件規(guī)定了化學(xué)品生殖/發(fā)育毒性篩選試驗(yàn)的范圍、術(shù)語和定義、試驗(yàn)基本原則、試驗(yàn)方法、試驗(yàn)數(shù)據(jù)和報(bào)告。本文件適用于檢測(cè)化學(xué)品的致畸性、繁殖及生長發(fā)育毒性篩選。2規(guī)范性引用文件本文件沒有規(guī)范性引用文件3術(shù)語、定義和縮略語下列術(shù)語、定義和縮略語適用于本文件。3.1術(shù)語和定義3.1.1雄激素活性androgenicity一種化學(xué)物質(zhì)在哺乳動(dòng)物體內(nèi)表現(xiàn)出類似天然雄激素（如睪酮）生理作用的能力。3.1.2抗雄激素活性antioestrogenicity一種化學(xué)物質(zhì)在哺乳動(dòng)物體內(nèi)抑制或干擾天然雄激素（如睪酮）作用的能力。通常通過阻斷雄激素受體或抑制雄激素的生成來實(shí)現(xiàn)其效果。3.1.3抗雌激素活性antioestrogenicity一種化學(xué)物質(zhì)在哺乳動(dòng)物體內(nèi)抑制天然雌激素激素（例如雌二醇17β)作用的能力。3.1.4抗甲狀腺素活性antithyroidactivity一種化學(xué)物質(zhì)抑制哺乳動(dòng)物體內(nèi)天然甲狀腺激素（如三碘甲腺原氨酸，T3）的作用的能力，影響新陳代謝及依賴甲狀腺激素的其他生理過程。3.1.5繁殖力損害impairmentoffertility雌性或雄性動(dòng)物生殖功能或能力發(fā)生異常。3.1.6生長發(fā)育毒性developmentaltoxicity屬生殖毒性，系指子代在出生前、圍產(chǎn)期和出生以后所表現(xiàn)出的結(jié)構(gòu)（機(jī)體缺陷）或功能異常。3.1.7劑量doseGB/Txxxxx—XXXX系指受試物用量，常以受試動(dòng)物每單位體重每日所給予的受試物的量（mg/kg/day）來表示；在飼料中摻入受試物進(jìn)行喂養(yǎng)染毒時(shí)，也可以用受試物在飼料中的恒定質(zhì)量分?jǐn)?shù)（mg/kg）來表示。3.1.8用量dosage包括染毒劑量、染毒次數(shù)及染毒期限在內(nèi)的一般性術(shù)語。3.1.9明顯毒性evidenttoxicity給予受試樣品后出現(xiàn)的明確的毒作用表現(xiàn)，可作為危險(xiǎn)度評(píng)價(jià)的充分證據(jù)，隨著染毒劑量增加，毒性表現(xiàn)可能加重，直至嚴(yán)重中毒或死亡。3.1.10未觀察到有害作用的劑量no-observed-adverse-effectlevel（NOAEL）未發(fā)現(xiàn)與染毒有關(guān)的有害作用的最高劑量。3.1.11雌激素活性O(shè)estrogenicity一種化學(xué)物質(zhì)在哺乳動(dòng)物體內(nèi)表現(xiàn)得類似于天然雌激素激素（例如雌二醇17β)的能力。3.1.12生殖毒性Reproductiontoxicity后代的有害影響和/或?qū)δ行院团陨彻δ芑蚰芰Φ膿p害。3.1.13甲狀腺素活性Thyroidactivity一種化學(xué)物質(zhì)在哺乳動(dòng)物體內(nèi)表現(xiàn)得類似于天然甲狀腺激素（如T3）的能力。3.2縮略語3.2.1AGDanogenitaldistance，從肛門到生殖器之間的距離3.2.2PNDPostnatalDay，通常在生物醫(yī)學(xué)和發(fā)育生物學(xué)中用于描述出生后經(jīng)過的天數(shù)。3.2.3UVCBsChemicalSubstancesofUnknownorVariableComposition,ComplexReactionProductsandBiologicalMaterials，未知成分或有多種組成成分的物質(zhì)、復(fù)雜的反應(yīng)產(chǎn)物或生物材料。4試驗(yàn)基本原則按照雌、雄兩個(gè)性別，設(shè)多個(gè)劑量組給予受試物。從試驗(yàn)開始至處死時(shí)，雄性動(dòng)物的染毒期至少為4周，即交配前期最少染毒2周，交配期和交配后期染毒2周。由于雄性動(dòng)物交配前期的染毒時(shí)間較短，僅以繁殖能力難以全面評(píng)估化學(xué)品對(duì)雄性生殖系統(tǒng)的影響，因此應(yīng)進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。交配前期至少染毒2周，和隨后交配/生育期至少染毒4周，觀察，并對(duì)雄性生殖腺進(jìn)行組織病理學(xué)檢查，以更全面評(píng)價(jià)化學(xué)品對(duì)雄性動(dòng)物繁殖力和精子形成的毒性作用。雌性動(dòng)物在整個(gè)試驗(yàn)周期內(nèi)都應(yīng)進(jìn)行染毒，交配前期至少染毒2周（相當(dāng)于兩個(gè)完整的發(fā)情期6GB/Txxxxx—XXXX交配期，妊娠期和分娩后至少13天都應(yīng)進(jìn)行染毒，直至處死的當(dāng)日。適應(yīng)期和染毒前發(fā)情周期評(píng)估過后，試驗(yàn)周期的長短取決于雌性動(dòng)物的狀態(tài)，通常約63天（交配前至少14天，交配期14天，妊娠期22天，哺乳期約13天）。染毒期間，每日需仔細(xì)觀察動(dòng)物的中毒癥狀。在試驗(yàn)過程中死亡或被處死的動(dòng)物都要進(jìn)行大體解剖。實(shí)驗(yàn)結(jié)束，存活動(dòng)物也要處死并進(jìn)行大體解剖。5試驗(yàn)方法5.1動(dòng)物種屬選擇本試驗(yàn)方法主要是針對(duì)大鼠設(shè)計(jì)的。如果使用其他種類的動(dòng)物，需要進(jìn)行相應(yīng)的修改。不能使用低生育力或者已知發(fā)育缺陷率高的動(dòng)物品系。要使用健康、未交配和未曾做過試驗(yàn)的動(dòng)物。應(yīng)當(dāng)明確實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的種屬、品系、性別、體重和年齡。試驗(yàn)初，動(dòng)物的體重差異應(yīng)當(dāng)控制在最小范圍，每只動(dòng)物的體重不能超過同性別平均體重的±20%。如果涉及長期研究或全生命周期研究的初步研究，建議在兩項(xiàng)研究中使用來自同一品系和來源的動(dòng)物。5.2飼養(yǎng)條件實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的房間溫度要保持在22℃±3℃。除了房間清洗時(shí)，房間濕度要至少控制在30%-70%，最好控制在50％-60％。要人工光照，按照12h白天／黑夜循環(huán)。動(dòng)物要用常規(guī)飼料飼養(yǎng)，自由飲水。有些受試物可能需要通過與飼料混合來染毒動(dòng)物，這樣就要考慮對(duì)動(dòng)物飼料的選擇問題。動(dòng)物可以單獨(dú)飼養(yǎng)或者同性別動(dòng)物分籠群養(yǎng)，每籠不能超過5只動(dòng)物，飼養(yǎng)籠要適合動(dòng)物交配。受孕雌鼠要單籠飼養(yǎng)，同時(shí)要放入筑巢材料。哺乳期雌鼠與其仔鼠分別單獨(dú)放置在籠中。飼料應(yīng)定期進(jìn)行污染物分析。飲食樣本應(yīng)保留至報(bào)告完成。5.3動(dòng)物準(zhǔn)備選擇健康、初成年動(dòng)物，將其隨機(jī)分為對(duì)照組和染毒組。飼養(yǎng)籠要放置有序，最大程度減少由于位置移動(dòng)可能導(dǎo)致的影響。要對(duì)動(dòng)物逐一標(biāo)記，在試驗(yàn)開始前至少要在飼養(yǎng)籠中至少適應(yīng)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境5天。5.4染毒途徑和受試物制備除非認(rèn)為其他染毒方式更合適，否則推薦的受試物染毒途徑為經(jīng)口。當(dāng)選擇經(jīng)口途徑時(shí)，通常采用灌胃方法染毒；當(dāng)然也可以通過飼料或者飲水方法給予受試物。如果需要，受試物需溶解或懸浮在適當(dāng)?shù)馁x形劑中。首先考慮要使用水性溶液／懸浮液，其次考慮油性溶液／乳狀液（比如玉米油然后再是其他溶劑的溶液。如果賦形劑不是水，那么就必須要知道其毒性特征。而且要測(cè)定受試物在賦形劑中的穩(wěn)定性。5.5試驗(yàn)程序5.5.1動(dòng)物的數(shù)量和性別各組在試驗(yàn)開始時(shí)至少有10只雄性和12-13只雌性。在研究開始之前，評(píng)估雌性動(dòng)物發(fā)情周期。如果動(dòng)物未表現(xiàn)出典型的4-5天發(fā)情周期，將不納入在研究中。因此，建議增加雌性動(dòng)物的數(shù)量，以確保每組有10只雌性。除非出現(xiàn)明顯的毒性效應(yīng)，每組至少應(yīng)有8只懷孕的雌鼠，這通常是可接受的最低懷孕數(shù)量。這樣做的目的是為了獲得足夠的數(shù)據(jù)，以便正確評(píng)估樣品對(duì)動(dòng)物的繁殖、妊娠、母鼠和仔鼠行為，以及對(duì)子代從受孕到出生后第13天的生長發(fā)育的影響。5.5.2劑量設(shè)計(jì)7GB/Txxxxx—XXXX5.5.2.1通常情況下，每次試驗(yàn)要有至少3個(gè)染毒組和1個(gè)對(duì)照組。染毒劑量水平可依據(jù)急性毒性試驗(yàn)或重復(fù)染毒試驗(yàn)的結(jié)果來設(shè)定。對(duì)照組動(dòng)物除了不給予受試物外，其他處理方法與染毒組相同。如果受試物染毒過程中使用了賦形劑，那么對(duì)照組就要給予使用的最大體積的賦形劑。5.5.2.2染毒劑量水平的選擇應(yīng)考慮受試樣品或相關(guān)物質(zhì)已知的毒性和毒代動(dòng)力學(xué)的數(shù)據(jù)。還應(yīng)注意懷孕和非懷孕動(dòng)物對(duì)受試樣品敏感性的差異。最高劑量組應(yīng)可以使親代動(dòng)物出現(xiàn)毒性反應(yīng)，但又不引起動(dòng)物死亡或明顯的損害；下一個(gè)劑量水平應(yīng)選擇可以出現(xiàn)與劑量有關(guān)的反應(yīng)，最低劑量組應(yīng)不引起親代及其子代動(dòng)物的任何毒性反應(yīng)。組間距通常為2-4倍。若設(shè)第四個(gè)劑量組，劑量組間的組距則可考慮大一些，例如10倍。5.5.2.3在觀察到一般毒性（如體重減輕，肝臟、心臟、肺或腎臟的影響等）或其他可能不是毒性反應(yīng)的變化（如食物攝入減少、肝臟增大）時(shí)，應(yīng)謹(jǐn)慎解讀對(duì)內(nèi)分泌敏感終點(diǎn)的觀察結(jié)果。5.5.3限量試驗(yàn)如果受試樣品每天以1000mg/kg的劑量經(jīng)口給予，或經(jīng)飼料/飲水給予相當(dāng)?shù)膭┝?，仍未觀察到任何毒副作用時(shí)，則可以采用限量試驗(yàn)，即不必做有多個(gè)劑量組的完整試驗(yàn)。若根據(jù)結(jié)構(gòu)相關(guān)化合物資料預(yù)期不會(huì)產(chǎn)生毒性，也可采用限量試驗(yàn)。但當(dāng)人的接觸情況表明需要采用較高劑量水平時(shí)，則不能進(jìn)行限量試驗(yàn)。若試驗(yàn)采用的是其他的染毒途徑：如吸入或經(jīng)皮染毒，染毒的最高濃度通常可由受試樣品的理化特性來決定。5.5.4染毒5.5.4.1動(dòng)物要連續(xù)染毒，每天1次。當(dāng)通過灌胃方式染毒時(shí)，用胃管或合適插管一次劑量完成。液體受試物一次性灌胃染毒的最大體積取決于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的大小。除了水溶液的灌胃體積可以為1mL/100g,其他性質(zhì)的溶液不能超過2mL/100g。除了刺激性或腐蝕性受試物需要較高濃度來給予外，一般受試物可通過調(diào)節(jié)受試物濃度來達(dá)到不同染毒劑量的灌胃體積保持一致。5.5.4.2如果受試物是通過飼料或飲水方法來染毒，要確保受試物的添加量不能破壞飼料或飲水中的營養(yǎng)平衡。當(dāng)受試物通過飼料染毒時(shí)，可以采用質(zhì)量分?jǐn)?shù)（mg/kg）或者根據(jù)動(dòng)物體重使用恒定劑量，使用其他方法必須進(jìn)行說明。采用灌胃染毒時(shí)，動(dòng)物每天染毒時(shí)間要一致，而且要根據(jù)動(dòng)物體重至少按周調(diào)節(jié)來維持受試物恒定的染毒劑量。5.5.5試驗(yàn)步驟5.5.5.1動(dòng)物在至少5天適應(yīng)期結(jié)束后，雌、雄動(dòng)物在開始交配前還要至少染毒2周。試驗(yàn)日程應(yīng)當(dāng)安排在動(dòng)物性成熟后。在不同實(shí)驗(yàn)室不同品系的大鼠的性成熟時(shí)間會(huì)略微不同，比如SD大鼠10周齡、Wistar大鼠12周齡。有后代的母鼠應(yīng)當(dāng)在產(chǎn)后第13天或之后不久處死。出生當(dāng)天（就是當(dāng)分娩完成時(shí)）被定義為出生后0天。沒有交配跡象的雌鼠要在交配期最后1天后再過24天～26天才處死。雌鼠和雄鼠在交配期間要持續(xù)染毒。雄鼠在交配期結(jié)束后要繼續(xù)染毒，直到完成總計(jì)最少28天染毒期。接著雄鼠被處死，如果認(rèn)為合適，也可以保留并繼續(xù)染毒用來二次交配。5.5.5.2母鼠在整個(gè)懷孕期、直至分娩后13天或處死的前一天都應(yīng)每天染毒。如吸入或經(jīng)皮染毒，染毒至少應(yīng)持續(xù)至懷孕的第19天，并且應(yīng)盡快重新開始給藥，不得遲于出生后第4天。試驗(yàn)日程圖見附錄A。5.5.6動(dòng)物交配5.5.6.1通常試驗(yàn)中要按照1:1(1雌鼠對(duì)1雄鼠）形式進(jìn)行動(dòng)物交配。在偶然發(fā)生雌鼠死亡情況下除外。一只雌鼠要與同一只雄鼠同籠一直到受孕或者2周時(shí)間。每天早上要檢查雌鼠陰道中是否有無精子或陰栓。將檢查到精子或陰栓的日期被定義為妊娠0天。若交配兩周后仍未受孕，可以將不孕雌鼠與同組的其他已證實(shí)有生殖能力雄鼠重新交配。8GB/Txxxxx—XXXX5.5.7窩產(chǎn)仔數(shù)在出生后的第4天，根據(jù)所用鼠品系的正常窩仔數(shù)量，通過隨機(jī)選擇淘汰多余幼仔，將每窩的幼仔數(shù)量調(diào)整為盡可能接近每性別4-5只。從多余的仔鼠中收集兩份血液樣本，合并后用于測(cè)定血清T4水平。根據(jù)體重或有肛門生殖距離（AGD）的選擇性不合適淘汰仔鼠。當(dāng)雄性或雌性仔鼠的數(shù)量不足以達(dá)到每性別有4-5只時(shí)，可進(jìn)行調(diào)整（如6只雄性和4只雌性）。當(dāng)窩產(chǎn)仔數(shù)低于淘汰目標(biāo)（8或10只幼仔/窩則不淘汰任何幼仔。如果只有一只幼仔達(dá)到淘汰目標(biāo)，則只淘汰一只幼仔用于采血以進(jìn)行T4評(píng)估。如果沒有調(diào)整窩產(chǎn)仔數(shù)，在出生后的第4天每窩處死兩只仔鼠，并采集血液樣本以測(cè)量血清甲狀腺激素濃度。處死的兩只仔鼠應(yīng)盡可能是雌性，保留雄性幼仔進(jìn)行乳頭評(píng)估。當(dāng)窩產(chǎn)仔數(shù)降至每窩8只或10只以下（取決于所用鼠品系的正常窩產(chǎn)仔數(shù)）時(shí)，將不會(huì)淘汰任何幼仔。如果在正常窩產(chǎn)仔數(shù)以上只有一個(gè)幼仔可用，則只淘汰一只幼仔用于采血以進(jìn)行T4評(píng)估。5.6觀察5.6.1臨床觀察試驗(yàn)期間，每天至少進(jìn)行一次一般臨床觀察，如果發(fā)現(xiàn)中毒癥狀，就要增加觀察次數(shù)。每天的觀察時(shí)點(diǎn)應(yīng)固定，并選擇在染毒后毒性體征可能出現(xiàn)的高峰期。記錄有關(guān)的行為改變、難產(chǎn)或滯產(chǎn)癥狀和所有的毒性反應(yīng)，包括死亡率。還要記錄這些毒性癥狀出現(xiàn)的時(shí)間、程度和持續(xù)時(shí)間。5.6.2體重和食物消耗量雌鼠和雄鼠在染毒第1天稱重，以后每周至少稱重1次，試驗(yàn)結(jié)束時(shí)再稱重1次。在妊娠期，雌鼠要分別在妊娠第0天、第7天、第14天和第20天、以及分娩的24h內(nèi)（產(chǎn)后第0天或第1天）和產(chǎn)后第4天和第13天稱重。報(bào)告中要有每個(gè)成年動(dòng)物的個(gè)體數(shù)據(jù)。在交配前、妊娠期和哺乳期，要至少按周來測(cè)量動(dòng)物的飼料消耗量。可選擇檢測(cè)動(dòng)物在交配期的飼料消耗量。當(dāng)受試物通過飲水方式染毒時(shí)，也要測(cè)量這些時(shí)期動(dòng)物的水消耗量。5.6.3發(fā)情周期為了篩選具有規(guī)律發(fā)情周期的雌性動(dòng)物，在開始染毒前監(jiān)測(cè)發(fā)情周期。從染毒開始直至出現(xiàn)交配現(xiàn)象，應(yīng)每天進(jìn)行陰道涂片。如果擔(dān)心開始染毒時(shí)急性應(yīng)激反應(yīng)會(huì)改變發(fā)情周期，可以讓動(dòng)物暴露兩周，每天收集陰道涂片，在交配前至少兩周內(nèi)監(jiān)測(cè)發(fā)情周期，并在交配期繼續(xù)監(jiān)測(cè)，直至出現(xiàn)交配現(xiàn)象。在獲取陰道/宮頸細(xì)胞時(shí)，注意避免粘膜干擾，以防誘導(dǎo)假孕[1][2]。5.6.4仔鼠特征應(yīng)記錄動(dòng)物的妊娠周期（從受孕0天開始計(jì)算）。動(dòng)物生產(chǎn)后要盡快確定每窩仔鼠中死胎、活胎、低體重鼠（明顯小于對(duì)照組的仔鼠）的數(shù)量和性別，以及是否存在嚴(yán)重畸形。應(yīng)在分娩后24小時(shí)內(nèi)（產(chǎn)后第0天或第1天）以及至少在產(chǎn)后第4天和第13天對(duì)活產(chǎn)仔鼠進(jìn)行計(jì)數(shù)和性別鑒定，并對(duì)仔鼠進(jìn)行稱重。除了觀察親代動(dòng)物的行為外，也應(yīng)記錄仔鼠的任何異常行為。應(yīng)在出生后第0天至4天之間的同一天測(cè)量每只仔鼠AGD。在測(cè)量AGD當(dāng)天，應(yīng)記錄仔鼠的體重，并將AGD標(biāo)準(zhǔn)化為衡量仔鼠大小的指標(biāo)，最好采用體重的立方根[3]。5.6.5臨床生物化學(xué)根據(jù)以下時(shí)間采集來自指定部位血液樣本：在仔鼠數(shù)量允許的情況下，在出生后第4天采集每窩至少兩只仔鼠的血樣；在第13天終止妊娠時(shí)采集所有母鼠以及每胎至少兩只仔鼠的血樣；9GB/Txxxxx—XXXX在終止妊娠時(shí)采集所有成年雄鼠的血樣。所有血液樣本均在適當(dāng)條件下儲(chǔ)存。對(duì)第13天的仔鼠和成年雄鼠的血樣進(jìn)行甲狀腺激素（T4）血清水平評(píng)估。如果相關(guān)，還將進(jìn)一步評(píng)估雌鼠和第4天仔鼠血液樣本中的T4含量。如果相關(guān)，也可選擇測(cè)量其他激素。仔鼠的血液可按窩集中起來進(jìn)行甲狀腺激素分析。甲狀腺激素（T4和TSH）最好合并收集進(jìn)行測(cè)量。以下因素可能影響激素測(cè)定的變異性和絕對(duì)濃度：因?yàn)榧に貪舛鹊臅円棺兓?，處死的時(shí)間可能影響激素測(cè)定的變異性和絕對(duì)濃度。為了避免過度給動(dòng)物壓力造成應(yīng)激，處死動(dòng)物的方法可能會(huì)影響激素濃度；用于測(cè)定激素的試劑盒可能因標(biāo)準(zhǔn)曲線而有所不同。專門用于測(cè)定激素的血漿樣本應(yīng)在一天中的相近時(shí)間采集。不同的商用檢測(cè)試劑盒在分析激素濃度時(shí)得出的數(shù)值不同。5.6.6病理5.6.6.1大體解剖檢查5.6.6.1.1對(duì)所有受試的成年動(dòng)物進(jìn)行全面系統(tǒng)的大體解剖檢查，仔細(xì)檢查體表、所有體腔開口處、顱腔、胸腔和腹腔及其內(nèi)部臟器。應(yīng)重點(diǎn)觀察生殖系統(tǒng)的組織和器官，同時(shí)記錄著床數(shù)和黃體數(shù)。解剖當(dāng)天應(yīng)進(jìn)行陰道涂片檢查，以確定發(fā)情周期的階段，并與雌性生殖器官的組織病理學(xué)進(jìn)行相關(guān)性分析。5.6.6.1.2所有成年雄性動(dòng)物的睪丸和附睪，以及前列腺和精囊腺應(yīng)適當(dāng)去除任何附著的組織，并在解剖后盡快測(cè)量其濕重，以避免干燥。所有成年動(dòng)物的卵巢、睪丸、附睪、附屬性器官，以及所有呈現(xiàn)肉眼異常的器官，都應(yīng)予以保存。5.6.6.1.3仔細(xì)檢查死胎和產(chǎn)后13天處死的仔鼠外觀有無畸形。應(yīng)特別注意外生殖生殖器官，檢查是否有發(fā)育改變的現(xiàn)象。第13天時(shí)，每窩應(yīng)保留1只雄性和1只雌性仔鼠的甲狀腺。應(yīng)保留所有成年動(dòng)物的卵巢、睪丸、附屬性器官（子宮和宮頸、附睪、前列腺、精囊和凝固腺）、甲狀腺和和有肉眼可見損害的器官標(biāo)本。常規(guī)檢查睪丸和附睪時(shí)避免使用福爾馬林固定，建議使用Bouin’s或改良的Davidson方法[4]?？捎冕樤谄鞴俚膬蓚?cè)輕輕刺入白膜，使固定劑快速滲透。5.6.6.2組織病理學(xué)檢查先對(duì)高劑量組和對(duì)照組動(dòng)物的卵巢、睪丸、附睪進(jìn)行詳細(xì)的組織學(xué)檢查（特別強(qiáng)調(diào)精子發(fā)生的階段和睪丸間質(zhì)的細(xì)胞結(jié)構(gòu)）。如果有必要，也可檢查保存的其他組織。在高劑量組發(fā)現(xiàn)組織病理學(xué)改變時(shí)，就要對(duì)其他劑量組的動(dòng)物進(jìn)行檢查[4]。6試驗(yàn)數(shù)據(jù)和報(bào)告6.1數(shù)據(jù)6.1.1對(duì)每只動(dòng)物的數(shù)據(jù)，分別進(jìn)行記錄，列表表示試驗(yàn)結(jié)果，表中應(yīng)顯示每組的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)、試驗(yàn)中死亡、到期處死的動(dòng)物數(shù)或出于人道原因處死的動(dòng)物數(shù)量、交配的動(dòng)物數(shù)、受孕動(dòng)物數(shù)、各種毒性反應(yīng)及其出現(xiàn)動(dòng)物百分?jǐn)?shù)。詳細(xì)描述觀察到的毒性癥狀，包括出現(xiàn)的時(shí)間、持續(xù)時(shí)間和程度，病理組織學(xué)改變和相關(guān)的仔鼠資料。附錄B中的總結(jié)報(bào)告表格可以用來記錄試驗(yàn)數(shù)據(jù)。6.1.2受到研究規(guī)模的限制，對(duì)試驗(yàn)中許多終點(diǎn)，尤其對(duì)生殖終點(diǎn)進(jìn)行的差異性統(tǒng)計(jì)分析很難保證其完全準(zhǔn)確。選擇的統(tǒng)計(jì)方法應(yīng)當(dāng)適合所研究變量的分布，而且要在試驗(yàn)前就確定統(tǒng)計(jì)方法。AGD和乳頭保留的統(tǒng)計(jì)分析應(yīng)以仔鼠個(gè)體數(shù)據(jù)為基礎(chǔ)。同時(shí)考慮窩居的影響。在適當(dāng)?shù)那闆r下，以窩為分析單位。仔鼠體重的統(tǒng)計(jì)分析也應(yīng)基于仔鼠的個(gè)體數(shù)據(jù)，并考慮到窩仔數(shù)。由于該試驗(yàn)的樣本量較小，如果有歷史對(duì)照數(shù)據(jù)（如窩產(chǎn)仔數(shù)則更有助于解釋研究結(jié)果。GB/Txxxxx—XXXX6.2結(jié)果評(píng)價(jià)6.2.1試驗(yàn)結(jié)果要根據(jù)觀察到的毒性作用、大體解剖和病理組織學(xué)檢查結(jié)果來評(píng)價(jià)。評(píng)價(jià)內(nèi)容包括研究受試物劑量與畸形出現(xiàn)與消失、發(fā)生率和嚴(yán)重程度之間的關(guān)系，以及一般損傷、確定靶器官、無生育力、臨床畸形、受影響的生殖和產(chǎn)仔功能、體重變化、死亡率和其他毒性效應(yīng)。6.2.2在評(píng)估雄鼠的生殖功能時(shí)，由于雄鼠的染毒時(shí)間短，因此對(duì)睪丸和附睪進(jìn)行組織病理學(xué)檢查時(shí)，必須結(jié)合其生育數(shù)據(jù)。在可能的情況下，利用生殖/發(fā)育的歷史對(duì)照數(shù)據(jù)（如產(chǎn)仔數(shù)、AGD、乳頭評(píng)估、血清T4水平）將有助于更好地解釋本研究結(jié)果。為了確保質(zhì)量控制，建議收集歷史控制數(shù)據(jù)，并計(jì)算數(shù)據(jù)的變異系數(shù)，特別是在與內(nèi)分泌干擾物檢測(cè)相關(guān)的參數(shù)中。6.3試驗(yàn)報(bào)告試驗(yàn)報(bào)告應(yīng)盡可能包含以下信息：a)受試物1)來源、批號(hào)、使用期限（如果有2)化學(xué)品的穩(wěn)定性（如已知3)單一組分物質(zhì)；-物理外觀、水溶性及其他相關(guān)理化性質(zhì)（例如，酸/堿屬性-化學(xué)鑒定信息，如IUPAC或CAS名稱、CAS號(hào)、SMILES或InChI編碼、結(jié)構(gòu)式、純度、雜質(zhì)的化學(xué)成分（如適用且可行）等。4)多組分物質(zhì)、未知或可變成分物質(zhì)（UVBC）和混合物：-盡可能通過化學(xué)成分（參考上述信息）、各成分的定量含量及相關(guān)理化性質(zhì)進(jìn)行表征。b)賦形劑（如適用）需要說明使用賦形劑的理由，選用的賦形劑不是水時(shí)也應(yīng)說明理由。c)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物1)種類、品系；2)數(shù)量調(diào)齡、性別（如使用雄性，需說明不選用雌性的理由3)來源、飼養(yǎng)條件、飲食等；4)測(cè)試開始時(shí)每只動(dòng)物的體重；5）若選擇的物種非嚙齒類，應(yīng)提供合理性說明。d)試驗(yàn)條件1）劑量選擇的依據(jù)；2）受試樣品配比/飼料制備以及應(yīng)用濃度和穩(wěn)定性、均勻性的詳細(xì)資料；3）說明受試物情況；4）按需要，將飼料/飲用水中受試物濃度（ppm）轉(zhuǎn)換成實(shí)際劑量[mg/（kg.d）];5）說明飼料和水質(zhì)量的詳細(xì)信息。6）詳細(xì)說明選擇仔鼠進(jìn)行剔除（如果被剔除）的隨機(jī)程序。e)結(jié)果：1）體重/體重變化；2）飼料消耗、水消耗；3）按照性別和劑量劃分的毒性反應(yīng)數(shù)據(jù)，包括繁殖力、妊娠和其他毒性癥狀；4）妊娠期長度；5）對(duì)生殖、子代、產(chǎn)后生長等的毒性或其他效應(yīng)；6）臨床觀察到的現(xiàn)象、嚴(yán)重程度和持續(xù)時(shí)間（是否可逆7）正?；虍惓０l(fā)情周期的成年雌鼠數(shù)量和周期持續(xù)時(shí)間;8）活產(chǎn)數(shù)和胚胎植入后丟失數(shù);GB/Txxxxx—XXXX9）仔鼠體重?cái)?shù)據(jù)；10）所有子代的AGD（以及AGD測(cè)量當(dāng)天的體重）11）雄性仔鼠的乳頭評(píng)估情況；12）第13天仔鼠及成年雄性（以及母鼠和第4天仔鼠若有測(cè)量）的甲狀腺激素水平13）有肉眼可見異常的仔鼠數(shù)量、外生殖器大體評(píng)估、矮鼠數(shù)量；14）試驗(yàn)中動(dòng)物死亡時(shí)間或存活至試驗(yàn)結(jié)束的動(dòng)物數(shù)；15）著床數(shù)、黃體數(shù)（推薦）、每窩仔鼠的多少及重量；16）親代動(dòng)物被處死時(shí)的體重和器官重量的數(shù)據(jù)；17）解剖結(jié)果；18）詳細(xì)的組織病理學(xué)結(jié)果；19）吸收胎數(shù)據(jù)（如可得20）統(tǒng)計(jì)學(xué)處理結(jié)果（如適用）。6.4結(jié)果討論和解釋6.5結(jié)論GB/Txxxxx—XXXX（規(guī)范性附錄）生殖/發(fā)育毒性篩選試驗(yàn)流程圖GB/Txxxxx—XXXX（規(guī)范性附錄）生殖/發(fā)育試驗(yàn)效應(yīng)匯總報(bào)告表觀察值用量（單位）對(duì)照組劑量1劑量2劑量3...起始配對(duì)數(shù)（N）發(fā)情周期（至少不規(guī)則周期的平均長度和頻率）有交配跡象的雌性（N）成功懷孕的雌性（N）懷孕第1-5天（N）懷孕第6天（N）懷孕第21天（N）懷孕第22天（N）妊娠第23天（N）有活產(chǎn)仔鼠的母鼠（N）第4天仔鼠存活的母鼠（N）著床/母鼠（均數(shù)）出生時(shí)活崽數(shù)（均數(shù)）第4天的活崽數(shù)（均數(shù))出生時(shí)性別比（m/f均數(shù)）第4天性別比（m/f均數(shù)）出生時(shí)窩重（均數(shù)）第4天產(chǎn)仔重（均數(shù)）出生體重（均數(shù)）測(cè)量AGD時(shí)體重（雄性平均值，雌性平均值）出生后第4天同日的平均年齡（雄性平均值，雌性平均值，注PND）第4天體重（均數(shù)）仔鼠乳頭保留第13天（均數(shù)）第13天體重（均數(shù)）異常的仔鼠一個(gè)仔鼠的母鼠數(shù)兩個(gè)仔鼠的母數(shù)數(shù)三個(gè)仔鼠的母鼠數(shù)仔鼠的丟失產(chǎn)前/著床后（著床減去