DB32T 3628-2019 木霉固態(tài)菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程　

備案號：DB32TechnicalregulationforproductionofsolidTrichodermaspp.spawn江蘇省市場監(jiān)督管理局發(fā)布I本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：沈其榮、劉東陽、黃啟為、李1木霉固態(tài)菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）4生產(chǎn)場地要求24.1生產(chǎn)基地選擇4.2生產(chǎn)環(huán)境4.3生產(chǎn)車間4.3.1原料庫4.3.2接種室4.3.3培養(yǎng)室4.3.4檢驗室5.1技術(shù)環(huán)節(jié)5.2菌種要求5.2.1原種——原種應(yīng)有菌種鑒定報告。3者退化情況，該菌種不能作為生產(chǎn)用菌種，應(yīng)該按照標(biāo)準(zhǔn)NY/T85.3液體發(fā)酵增殖木霉菌種的液體發(fā)酵增殖，按照NY/T883執(zhí)行。具體的培養(yǎng)蓋玻片，盡量不留氣泡，從一側(cè)滴加少量的棉蘭染色液染色5min，染色結(jié)束后用無菌水污染，可以作為菌種繼續(xù)使用；如果菌絲細小并呈不規(guī)則分布或者有雜菌污染，應(yīng)按標(biāo)準(zhǔn)NY/T883處原料要求來源充足、價格合理、營養(yǎng)成分充足5.4.2.1秸稈前處理5.4.2.2氨基酸添加的氨基酸稀釋液（氨基酸原液總氨基酸含量≥10%），調(diào)節(jié)起始pH為3.0～4.0，物料的含水率應(yīng)該嚴(yán)格5.4.3滅菌5.4.3.1高壓蒸汽滅菌要求固體發(fā)酵培養(yǎng)基物料滅菌溫度為121℃~130℃,滅菌時間為1.0h～2.0h；或者采用100℃滅菌2h~5.4.3.2滅菌效果檢測將1g固體發(fā)酵產(chǎn)物加入到9mL無菌水中，充分混勻后制成懸液，吸取1mL懸液加入到裝有已滅菌的9mL營養(yǎng)肉湯的試管中，并做至少三個生物學(xué)重復(fù)，將試管置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中避光培養(yǎng)，24h內(nèi)無渾濁、鏡檢無菌體后即可判定徹底滅菌，反之5.5接種4分裝到不同的淺盤當(dāng)中，并將塑料淺盤轉(zhuǎn)移到固體發(fā)酵的溫度應(yīng)該嚴(yán)格控制在（28±2）℃,根據(jù)不同木霉發(fā)酵特性和生長代謝特征，適當(dāng)調(diào)整5.7發(fā)酵終點判斷采用感觀法評價固體發(fā)酵物料的顏色、形態(tài)5.7.2.1稀釋涂布稀釋法進行樣品稀釋，吸取最后的稀釋液0.1mL于木霉選擇性培養(yǎng)基上（見附錄B），并用涂布棒將菌5.7.2.2培養(yǎng)在28℃恒溫培養(yǎng)箱中避光培養(yǎng)2d～3d，注意觀察菌落的生長情況。5.7.2.3計數(shù)——固體發(fā)酵產(chǎn)物中有效活菌數(shù)含量≥4.0×雜菌率的檢測按照GB20287執(zhí)行，木霉固體發(fā)酵產(chǎn)物的雜菌數(shù)應(yīng)≤1.0×104個/克。56 菌種純度檢測及其功能分析發(fā)酵原種原種純化原種復(fù)壯退化污染原種純化原種復(fù)壯發(fā)酵過程的優(yōu)化與控制液體菌種按規(guī)定處理檢測不合格按規(guī)定處理檢測不合格檢測合格固體發(fā)酵過程中發(fā)酵參數(shù)的優(yōu)化與控制主要包括pH、含水率、發(fā)酵時間等固體菌種包裝質(zhì)量檢驗檢測不合格檢測不合格檢測合格按規(guī)定處理按規(guī)定處理74)2SO45kg/T4·7H2O干后用粉碎機將其粉碎成0.3cm～0.4cm長的片段；往上述秸稈），初始含水率嚴(yán)格控制在50%～