DB32T 3205-2017 飼料中雪腐鐮刀菌烯醇(NIV)的測定 免疫親和柱凈化-高效液相色譜法　　

江DB32Determinationofnivalenol(NIV)infeed--Highperformanceliquidchromatographymethodwithimmunoaffinitycolumn江蘇省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：張海彬、吳文達(dá)、施志玉、鄭亞婷、賈惠、李榮佳、張杰、趙飼料中雪腐鐮刀菌烯醇（NIV）的測定免疫親和柱凈化-高效液相色譜法本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了飼料中雪腐鐮刀菌烯醇檢測的制樣、免疫親和柱凈化和高效液相色譜檢測本標(biāo)準(zhǔn)的檢測限為2μg/kg，定量限為10是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)單個組份，再通過檢測器進(jìn)行檢測，通過對比與分析即可定性定量地鑒定樣品中的各個未知本檢測方法所用試劑，凡未指明規(guī)格者，均為4.6雪腐鐮刀菌烯醇標(biāo)準(zhǔn)溶液:準(zhǔn)確稱儲備液，避光儲存于4℃冰箱中，用于制備標(biāo)準(zhǔn)5.3旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。26.3毒素提取稱取試樣10.0g置于150mL具塞錐形瓶中，加入30mL乙腈-水(84:16,V/V)振蕩30min,過濾。再加入30mL乙腈-水(84:16,V/V)振蕩提取30min,收集濾液至干凈的容器中。6.4樣品提取液的凈化移取上述濾液8mL,過Mycosep@227免疫親和柱進(jìn)行凈化。收集凈化液4mL于圓底燒瓶中，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上60℃蒸發(fā)至干。加入400μL乙醇于燒瓶中，超聲溶解，將溶液轉(zhuǎn)移至干凈的進(jìn)樣瓶中。進(jìn)孔濾膜后待測。6.4.1色譜條件a)色譜柱：ODS色譜柱(4.6mm×250mm,粒度5μm);b)流動相：甲醇-0.1%乙酸銨水溶液(20:80,VV);6.4.2色譜測定根據(jù)樣液中雪腐鐮刀菌烯醇的含量，選定濃度相近的標(biāo)準(zhǔn)工作液。標(biāo)準(zhǔn)工作液和樣液中雪腐鐮刀菌烯醇響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測線性范圍內(nèi)，色譜圖見附錄A。對標(biāo)準(zhǔn)工作液和樣液等體積參差進(jìn)樣進(jìn)行測定，確定保留時間，計算出標(biāo)準(zhǔn)工作液與樣液的峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)溶液所測得的峰面積和對應(yīng)的量，以峰面積為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線和樣液的峰面積，得到樣液中雪腐鐮刀菌烯醇的含量(計算結(jié)果保留到小數(shù)點后一位有效數(shù)字)。6.4.3空白試驗除不加試樣外，空白試驗應(yīng)與測定平行進(jìn)行，并采用上述相同的分析步驟。6.4.4平行試驗按以上步驟，對同一試樣進(jìn)行平行試驗測定。6.4.5計算所得實驗數(shù)據(jù)按式(1)計算：(1)式中：X——試樣中雪腐鐮刀菌烯醇的含量，單位為微克每克(μgC——標(biāo)準(zhǔn)工作液中雪腐鐮刀菌烯醇的濃度，單位為微克每毫升(μg/mV——樣液最終定容體積，單位為毫升(mL);m——最終樣液所代表的試樣量，單位為克(g);6.5重復(fù)