1-生理活動 活體染色課件

CELLBIOLOGY細胞生物學(xué)1-生理活動活體染色實驗前確定實驗用具、藥品是否齊全檢查實驗用具是否清潔、無污染，這是實驗成功的首要條件實驗過程中盡量保持安靜多動手多動腦，不局限于要求的實驗內(nèi)容實驗結(jié)束后清理實驗臺、清洗實驗用具離開實驗室前檢查實驗用具是否齊全值日生清理實驗臺、水池、地面實驗注意事項實驗分組：自由組合，每組2-4人。值日分組：7組1-生理活動活體染色今天實驗內(nèi)容

細胞的滲透現(xiàn)象細胞生理活動巨噬細胞吞噬動、植物細胞的液泡系活體染色1-生理活動活體染色

1.1細胞的滲透現(xiàn)象1-生理活動活體染色細胞內(nèi)外存在滲透壓差時水分子總是從滲透壓低處擴散到滲透壓高處，這種現(xiàn)象稱為滲透。滲透作用是細胞膜的主要功能之一。細胞膜是細胞與環(huán)境進行物質(zhì)交換的選擇性屏障。細胞膜具有通透性,是半透膜。當(dāng)細胞處于低滲溶液中時，水分進入細胞,可使細胞脹破.當(dāng)細胞處于高滲溶液中時，細胞失水，原生質(zhì)濃縮，細胞皺縮。實驗原理1-生理活動活體染色細胞的滲透現(xiàn)象1-生理活動活體染色植物細胞與外界水溶液構(gòu)成的滲透系統(tǒng)細胞膜液泡質(zhì)液泡膜原生質(zhì)層質(zhì)壁分離:當(dāng)外界溶液濃度大于細胞液濃度時細胞失水發(fā)生收縮,由于細胞伸縮性小不能隨原生質(zhì)濃縮變形,細胞膜與細胞壁之間出現(xiàn)分離.質(zhì)壁分離的復(fù)原:當(dāng)外界溶液濃度小于細胞液濃度的時候，水可進入細胞,使細胞恢復(fù)原來狀態(tài).1-生理活動活體染色實驗準(zhǔn)備材料:

洋蔥、家兔紅細胞懸液、1%雞紅細胞懸液、小白鼠儀器和器材:

顯微鏡、眼科剪子、眼科鑷子、載玻片、蓋玻片、吸水紙試劑:500U/ml肝素、0.4%1.2%和4%的氯化鈉水溶液、含有臺酚藍6%淀粉肉湯

1-生理活動活體染色動物細胞的滲透現(xiàn)象1.2%NaCl蓋片、觀察蓋片、觀察0.4%NaCl一滴兔紅細胞懸液一滴兔紅細胞懸液一滴兔紅細胞懸液蓋片、觀察實驗操作1-生理活動活體染色植物細胞的滲透現(xiàn)象一小塊洋蔥表皮一滴清水蓋片、觀察蓋片、觀察一小塊洋蔥表皮4%NaCl取下蓋玻片，在一側(cè)滴清水，另一側(cè)吸出觀察質(zhì)壁分離復(fù)原1-生理活動活體染色1.2巨噬細胞的吞噬1-生理活動活體染色單核細胞：由骨髓生成，在血液內(nèi)僅生活3～4天，即進入肝、脾、肺和淋巴等組織轉(zhuǎn)變?yōu)榫奘杉毎?。變?yōu)榫奘杉毎螅w積加大，溶酶體增多，吞噬和消化能力也增強。巨噬細胞吞噬對象：病毒、瘧原蟲和細菌等。巨噬細胞還參與激活淋巴細胞的特異免疫功能。巨噬細胞能夠識別和殺傷腫瘤細胞，清除衰老與損傷細胞實驗原理白細胞機體的防御細胞粒細胞系單核細胞系淋巴細胞系1-生理活動活體染色巨噬細胞吞噬過程由于趨化作用向異物游走

伸出偽足包繞異物

內(nèi)吞作用將異物吞入細胞

吞噬泡與溶酶體融合

異物被消化1-生理活動活體染色實驗操作實驗前兩天每天向小白鼠腹腔注射淀粉肉湯（臺酚藍），實驗前30分鐘腹腔注入1ml雞紅細胞懸液處死、剖開腹腔1ml生理鹽水?dāng)嚢枞「骨灰旱纹^察1-生理活動活體染色1-生理活動活體染色1-生理活動活體染色液泡系的活體染色1-生理活動活體染色液泡系（vacuoles）細胞內(nèi)凡是由膜包裹的小泡和液泡，除線粒體和質(zhì)體外，都屬于液泡系，都由單層膜包圍。種類：動植物細胞都含有液泡，共有約13種，有些為植物細胞所特有。高爾基液泡、收縮泡、包被小泡：溶酶體、圓球體、糊粉粒：含各種水解酶，功能是消化，由內(nèi)膜系統(tǒng)生成；微體：過氧化物酶體、乙醛酸循環(huán)體，特殊代謝酶系；消化泡、吞噬泡、殘體：與胞吞作用相關(guān)；中央液泡：由起源于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的小泡合并而成。1-生理活動活體染色液泡系的一般性質(zhì)動物細胞高爾基區(qū)的液泡主要功能是蛋白質(zhì)的濃縮與凝結(jié)，軟骨細胞內(nèi)含有較多的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和發(fā)達的高爾基復(fù)合體，能合成與分泌軟骨粘蛋白及膠原纖維等，因而液泡系發(fā)達。植物細胞幼期，液泡很小，但隨著細胞生長，液泡長大。小液泡逐漸合并為大液泡，位于細胞中央，占有大部分的細胞體積。植物細胞的大液泡主要成分為水，起滲透調(diào)節(jié)作用。液泡中溶解的溶質(zhì)種類繁多，其來源與質(zhì)膜、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基器關(guān)系密切。1-生理活動活體染色活體染色是能使生活的細胞或組織特異性著色，但對活樣品又沒有毒害作用的一種染色方法，其目的是顯示生活細胞內(nèi)的某些結(jié)構(gòu)，而不影響細胞的生命活動，也不產(chǎn)生任何物理、化學(xué)變化，不會引起細胞死亡。并非任何染料均可用于活體染色，理論上應(yīng)選擇那些對細胞無毒性或毒性極小的染料，且使用時需要配成稀淡的溶液。詹納斯綠B(Janus

green

B)和中性紅(neutral

red)

是活體染色劑中最重要的染料，對于線粒體和液泡系的染色分別具有專一性。中性紅只將液泡系染成紅色，在細胞處于生活狀態(tài)時，細胞質(zhì)及核不被染色。細胞的活體染色1-生理活動活體染色一小塊胸骨劍突中性紅10min

吸去染液加一滴Ringer蓋片觀察一塊洋蔥內(nèi)表皮中性紅-詹納斯綠B30min蓋片觀察實驗內(nèi)容1-生理活動活體染色成熟植物細胞的中央大液泡1-生理活動活體染色植物細胞中央大液泡的演變過程1-生理活動活體染色一滴兔紅細胞懸液蓋片、觀察一滴兔紅細胞懸液+1.2%NaCl蓋片、觀察一滴兔紅細胞懸液+0.4%NaCl蓋片、觀察一小塊洋蔥表皮+一滴清水蓋片、觀察一小塊洋蔥表皮+4%NaCl蓋片、觀察取下，蓋玻片一側(cè)滴清水，另一側(cè)吸出

觀察質(zhì)壁分離復(fù)原小鼠處死、剖開腹腔1ml生理鹽水?dāng)嚢枞「骨灰旱纹^察蟾蜍處死一小塊胸骨劍突中性紅10min

吸去染液加一滴Ringer蓋片觀察一塊洋蔥內(nèi)表皮中性紅-詹納斯綠B30min蓋片觀察1-生理活動活體染色（1）A細胞處于____生理狀態(tài)，圖中①的液體是____。（2）圖中各細胞抵抗失水的能力，依次是____。（3）圖中各細胞所處的外界溶液濃度是_____。（4）三個細胞最有可能死亡的是_____。8、（1）質(zhì)壁分離；外界溶液

（2）B＞A＞C

（3）B＞A＞C

（4