DB32T 1737-2011 嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌檢驗

備案號：DB32ExaminationofStenotro江蘇省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布DB32/T1737-2011嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌是水產(chǎn)養(yǎng)殖中危害較嚴重的病原菌之一，目前沒有該菌的檢驗標準，特制定本地方標準。本標準按GB/T1.1–2009《標準化工作導則第1部分：標準的結(jié)構(gòu)和編寫》編制。本標準由江蘇省海洋與漁業(yè)局提出。本標準主要起草單位：江蘇省水生動物疫病預防控制中心。本標準起草單位：江蘇省水生動物疫病預防控制中心。本標準主要起草人：陳輝、黃春貴、鄒勇、方蘋、段翠蘭、郭闖、王習達、陳靜、郭立新、劉訓猛。1DB32/T1737-2011嗜麥芽寡養(yǎng)單細胞檢驗本標準規(guī)定了嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌檢驗的設備和材料、培養(yǎng)基和試劑、檢驗程序、操作步驟。本標準適用于魚類中嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌的檢驗。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T4789.28—2003食品衛(wèi)生微生物學檢驗、染色法、培養(yǎng)基和試劑GB/T6682—2008分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法GB/T18088—2000出入境動物檢疫采樣3儀器和材料3.1冰箱：0℃~4℃。3.2恒溫培養(yǎng)箱：37℃±1℃。3.3顯微鏡：10×~100×。3.4均質(zhì)器或滅菌乳缽。3.5電子天平：0.0g～500.0g,精度0.1g。3.6試管：16mm×160mm、15mm×100mm及相應的試管架。3.7刻度吸管：1mL（具0.01mL刻度）、5mL、10mL（具0.1mL刻度）。3.8錐形瓶：500mL、250mL。3.9培養(yǎng)皿：直徑90mm。3.10接種燈和接種環(huán)。3.11手術(shù)剪、鑷子等。4培養(yǎng)基和試劑4.1營養(yǎng)肉湯：按GB/T4789.28-2003中4.8規(guī)定。4.2營養(yǎng)瓊脂：按GB/T4789.28-2003中4.7規(guī)定。4.3血瓊脂：按GB/T4789.28-2003中4.6規(guī)定。4.4革蘭氏染色液：按GB/T4789.28-2003中2.2規(guī)定。4.5鞭毛染色法：按GB/T4789.28-2003中2.7規(guī)定。4.6實驗室用水要求：按GB/T6682—2008中三級水的規(guī)格。5樣品的采集與處理2DB32/T1737-20115.1采樣數(shù)量對有癥狀的水生動物，挑選3～5條，至少不低于2條瀕死的個體；對無癥狀的水生動物，按GB/T18088—2000的規(guī)定，隨機取一定數(shù)量的個體。5.2采樣要求活體或剛死不久的水生動物。5.3采集部位已知或懷疑有病原存在的組織或器官。對于特殊樣品如較大個體，無法采集水生動物整體時，在有條件的地方可作一定處理，但必須由具有資質(zhì)的上崗人員根據(jù)檢測項目的不同要求而對水生動物作適當?shù)奶幚?，按照檢測項目的檢測依據(jù)采取合適的水生動物組織。并作好樣品的封存。6檢驗程序嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌檢驗程序見圖1。待檢樣品25g（mL225mL滅菌營養(yǎng)肉湯營養(yǎng)瓊脂挑取典型菌落挑取典型菌落涂片鞭毛染色檢驗涂片革蘭氏染色涂片鞭毛染色檢驗涂片革蘭氏染色檢驗血瓊脂血瓊脂生化試驗生化試驗報告圖1嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌檢驗程序7操作步驟3DB32/T1737-20117.1增菌以無菌操作取檢樣25g（mL加225mL滅菌營養(yǎng)肉湯，用均質(zhì)器打碎或用乳缽磨碎，于37℃培養(yǎng)18h～24h后取出觀察。7.2分離取增菌液1環(huán)，劃線接種于營養(yǎng)瓊脂平板一個，于37℃培養(yǎng)18h～24h，嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌在營養(yǎng)瓊脂平板上容易生長，菌落呈針尖狀，淡黃或淺黃色菌落。7.3涂片鏡檢將營養(yǎng)瓊脂平板上典型的菌落進行革蘭氏染色和鞭毛染色，鏡檢細菌形態(tài)和鞭毛著生情況。嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌是革蘭氏陰性菌，鞭毛染色為極生多鞭毛。7.4純培養(yǎng)挑取平板上的典型菌落，接種血瓊脂平板，經(jīng)37℃培養(yǎng)18h～24h，觀察結(jié)果，嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌在血瓊脂平板上呈淡紫綠色溶血。7.5生化試驗分別接種各類生化培養(yǎng)基，置37℃培養(yǎng)24h后觀察（具體內(nèi)容見表1）。表1嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌的生化性狀+++-+++++---8結(jié)果判定嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌的檢出，可依據(jù)以下性狀報告：在營養(yǎng)瓊脂平板上37℃培養(yǎng)18h～24h后，菌落呈針尖狀，淡黃或