HIV病原學(xué)與實(shí)驗(yàn)室生物安全

教學(xué)ppt1獲得性免疫缺陷綜合征（Acquiredimmunodeficiencysyndrome,AIDS）人類(lèi)免疫缺陷病毒(Humanimmunodeficiencyvirus,HIV)2一、HIV病原學(xué)教學(xué)ppt3HIV的結(jié)構(gòu)病毒呈球形，直徑100～120nm，電鏡下可見(jiàn)一致密的圓錐狀核心核心：

2個(gè)逆轉(zhuǎn)錄酶-將RNA轉(zhuǎn)錄成DNA。蛋白酶(p11)-將大片斷蛋白切小。整和酶(p32)-將HIV原病毒DNA插入宿主細(xì)胞DNA中。核衣殼蛋白(p24,p17)包膜：

脂質(zhì)膜：“借用”宿主細(xì)胞的細(xì)胞膜。

gp120-病毒的膜蛋白，可與被感染細(xì)胞CD4相結(jié)合部分。

gp41-病毒的膜蛋白，跨脂質(zhì)膜的部分。HIV基因結(jié)構(gòu)HIV基因組由兩條單鏈RNA組成，每個(gè)RNA基因組約為9.7kb，編碼9個(gè)基因。3個(gè)結(jié)構(gòu)基因gag、env和pol，6種調(diào)控基因tat,vif,vpr,vpx(vpu),nef,rev。polgagenvvifLTRrevvprtatvpurevtatnefLTRP55gp160P17P24P7P6P10P66/51P15P32gp120gp414gag基因編碼病毒的核心蛋白；pol基因編碼病毒復(fù)制所需要的酶類(lèi)（逆轉(zhuǎn)錄酶、整合酶和蛋白酶）；env基因所編碼病毒包膜蛋白。調(diào)控基因編碼輔助蛋白，調(diào)節(jié)病毒蛋白合成和復(fù)制。polgagenvvifLTRrevvprtatvpurevtatnefLTRP55gp160P17P24P7P6P10P66/51P15P32gp120gp415HIV-1通過(guò)gp120與靶細(xì)胞表面CD4分子和趨化因子受體結(jié)合第二受體與HIV有關(guān)的輔助受體有2類(lèi)：

CC型輔助受體：CCR1,CCR2b,CCR3,CCR5

CXC型輔助受體：CXCR4CCR5是最主要的第二受體，第二受體基因在不同人種中遺傳的突變率有明顯差異。7現(xiàn)有兩型HIV：HIV-1和HIV-2種類(lèi)HIV-1 M（Major）組 A~D、F~H、J和K

O（Outlier）組 O

N（Non-Mnon-O）組 NHIV-2 A→H特點(diǎn)不同亞型傳播途徑和致病性不一,對(duì)抗-HIV藥物引起耐藥不同亞型重組意義流行規(guī)律、傳播途徑、診斷質(zhì)量、藥物與疫苗評(píng)估8BEAABBEECCB'B'B'B'B'B'B'B'B'B'B'B'B'EB'B'B'CB'B'EEELasaHaErbinShenYangChangChunHuhehaoteBeijingTianJingXiNingShiJiazhuangTaiYuanYinChuanLanZhouXianHeFeiZhengZhouJiNanB'NanJingShangHaiNanChangWuHanHangZhouChangShaFuZhouGuangZhouNanNingGuiYangHaiKouKunMingChengDuTaiBeiIndiaMyanmarThailandLaosVietNamUrumqi/CB'ECB'CC/B'CC/B'C/B'ABC9急性感染期無(wú)癥狀期艾滋病期10二、HIV感染史感染艾滋病病毒后1～2周左右。HIV大量復(fù)制,CD4細(xì)胞急劇下降，50～70%的感染者出現(xiàn)HIV病毒血癥和免疫系統(tǒng)急性損傷所產(chǎn)生的臨床癥狀。主要表現(xiàn)在全身性以及皮膚、神經(jīng)系統(tǒng)和腸道的癥狀。11WeeksCD4TCells/mm3PlasmaViremiaTiter036211110912100200300400500600700800900100011001100Years345678901:21:41:81:161:321:641:1281:2561:512PrimaryInfectionPossibleacuteHIVsyndromeWidedisseminationofvirusSeedingoflymphoidorgansClinicalLatencyConstitutionalsymptomsOpportunisticdiseaseDeath12急性HIV感染后，絕大多數(shù)有一個(gè)較長(zhǎng)的、存在個(gè)體差異的無(wú)癥狀期，8-10年左右。有5%左右的HIV-1感染者沒(méi)有任何臨床癥狀，而且能夠維持正常的免疫狀態(tài)達(dá)12年以上，稱(chēng)之為感染HIV-1的長(zhǎng)期不感染者。13WeeksCD4TCells/mm3PlasmaViremiaTiter036211110912100200300400500600700800900100011001100Years345678901:21:41:81:161:321:641:1281:2561:512PrimaryInfectionPossibleacuteHIVsyndromeWidedisseminationofvirusSeedingoflymphoidorgansClinicalLatencyConstitutionalsymptomsOpportunisticdiseaseDeath14在長(zhǎng)時(shí)間的無(wú)癥狀期或表現(xiàn)為ARC以后，病人可以出現(xiàn)不明原因的漸進(jìn)性消瘦、發(fā)熱、乏力，繼而發(fā)生“機(jī)會(huì)性”感染，如卡氏肺囊蟲(chóng)性肺炎或中樞神經(jīng)系統(tǒng)的感染，這是大多數(shù)AIDS病人死亡的直接原因。未經(jīng)治療者平均生存期為12～18個(gè)月。15WeeksCD4TCells/mm3PlasmaViremiaTiter036211110912100200300400500600700800900100011001100Years345678901:21:41:81:161:321:641:1281:2561:512PrimaryInfectionPossibleacuteHIVsyndromeWidedisseminationofvirusSeedingoflymphoidorgansClinicalLatencyConstitutionalsymptomsOpportunisticdiseaseDeath16教學(xué)ppt17HIV感染的三種臨床類(lèi)型教學(xué)ppt18典型進(jìn)展者

在感染早期，其免疫功能未受損害，但在8～10年內(nèi)免疫能力逐漸下降，最后發(fā)展成為艾滋病。教學(xué)ppt192-6weeksmeanof10yearsAsymptomaticphaseFlu-likeDiseaseSymptom-aticphaseAIDS10005002000CD4Tcells/mlInfectionSeroconversionDeathCD4TcelldepletionHAARTHIV感染的臨床過(guò)程(典型進(jìn)展)教學(xué)ppt20快速進(jìn)展者

CD4細(xì)胞計(jì)數(shù)在2～5年內(nèi)迅速下降。快速進(jìn)展者中最顯著的特征是HIV感染后一直維持較高的病毒載量，而且分離的HIV有均一性。教學(xué)ppt21HIV感染的臨床過(guò)程(快速進(jìn)展)2-6weeksmeanof5

yearsAsymptomaticphaseFlu-likeDiseaseSymptom-aticphaseAIDS10005002000CD4Tcells/mlInfectionSeroconversionDeathCD4TcelldepletionHAART教學(xué)ppt22

長(zhǎng)期存活者(長(zhǎng)期不進(jìn)展者)

維持健康狀態(tài)8-10年以上，CD4細(xì)胞計(jì)數(shù)維持正常。8～10%。目前最長(zhǎng)已達(dá)17年。這些無(wú)癥狀者可在血友病患者、靜脈吸毒者、異性接觸者和新生兒中發(fā)現(xiàn)。HIV感染的臨床過(guò)程(緩慢進(jìn)展)教學(xué)ppt23HIV感染的臨床過(guò)程(緩慢進(jìn)展)2-6weeksmeanof20yearsAsymptomaticphaseFlu-likeDiseaseS10005002000CD4Tcells/mlInfectionSeroconversionDeathCD4TcelldepletionAHAART三、實(shí)驗(yàn)室生物安全24教學(xué)ppt25保證實(shí)驗(yàn)室的生物安全條件和狀態(tài)不低于容許水平避免實(shí)驗(yàn)室人員、來(lái)訪(fǎng)人員、社區(qū)及環(huán)境受到不可接受的損害符合相關(guān)法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)等對(duì)實(shí)驗(yàn)室保證生物安全責(zé)任的要求實(shí)驗(yàn)室生物安全laboratorybiosafety教學(xué)ppt26實(shí)驗(yàn)室的生物安全管理三個(gè)寶典：《病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例》《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》GB19489—2008《人間傳染的病原微生物名錄》教學(xué)ppt27教學(xué)ppt28教學(xué)ppt2945Humanimmunodeficiencyvirus（HIV）typy1and2virus艾滋病毒（I型和II型）逆轉(zhuǎn)錄病毒科第二類(lèi)BSL-3ABSL-3BSL-2BSL-1BSL-1AUN2814僅病毒培養(yǎng)物為A類(lèi)46InhangapivirusInhangapi病毒彈狀病毒科第二類(lèi)BSL-3ABSL-3BSL-2BSL-1BSL-1AUN2814序號(hào)病毒名稱(chēng)危害程度分類(lèi)實(shí)驗(yàn)活動(dòng)所需生物安全實(shí)驗(yàn)室級(jí)別運(yùn)輸包裝分類(lèi)f備注病毒培養(yǎng)a動(dòng)物感染實(shí)驗(yàn)b未經(jīng)培養(yǎng)的感染材料的操作c滅活材料的操作d無(wú)感染性材料的操作eA/BUN編號(hào)英文名中文名分類(lèi)學(xué)地位1Alastrimvirus類(lèi)天花病毒痘病毒科第一類(lèi)BSL-4ABSL-4BSL-3BSL-2BSL-1AUN2814

人間傳染的病原微生物名錄教學(xué)ppt30《名錄》涉及的病原微生物種類(lèi)教學(xué)ppt31

應(yīng)依據(jù)國(guó)家相關(guān)主管部門(mén)發(fā)布的生物危害分類(lèi)名錄，在風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的基礎(chǔ)上，確定實(shí)驗(yàn)室的生物安全防護(hù)水平?！度碎g傳染的病原微生物名錄》生物安全防護(hù)水平的確定教學(xué)ppt32HIV在外界環(huán)境中的生存能力弱對(duì)消毒劑敏感對(duì)臭氧敏感對(duì)紫外線(xiàn)不敏感56℃,30min滅活干燥環(huán)境：數(shù)分鐘內(nèi)死亡教學(xué)ppt33實(shí)驗(yàn)室采用的消毒滅菌條件表面消毒：75%乙醇噴灑或擦拭浸泡消毒：0.5%次氯酸30min空氣消毒：30mg/m3臭氧30min24%甲醛熏蒸12h高壓蒸汽滅菌條件：121℃30min教學(xué)ppt34HIV傳播途徑不經(jīng)空氣傳播，血、性、母嬰垂直傳播。經(jīng)破損皮膚感染是HIV職業(yè)暴露的主要途徑。禁入：免疫力低下、感冒發(fā)燒者、皮膚破損者禁用：銳器：剪刀、針頭、刀片、玻璃器材穿個(gè)人防護(hù)裝備，戴雙層乳膠手套，“檢漏”教學(xué)ppt35生物安全實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)的良好工作行為建立并執(zhí)行準(zhǔn)入制度。實(shí)驗(yàn)室技術(shù)培訓(xùn)合格生物安全培訓(xùn)合格教學(xué)ppt36

對(duì)個(gè)人行為的要求，如在實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)不要飲食、抽煙、處理隱形眼鏡、使用化妝品、存放食物等教學(xué)ppt37個(gè)人防護(hù)裝備

1、眼鏡（安全鏡、護(hù)目鏡）

2、口罩、面罩、防毒面具

3、帽子

4、防護(hù)衣(實(shí)驗(yàn)服、隔離衣、連體衣、圍裙)5、手套

6、鞋套

7、聽(tīng)力保護(hù)器等

教學(xué)ppt38工作時(shí)穿防護(hù)服。在處理生物危險(xiǎn)材料時(shí)，穿著適用的指定防護(hù)服。離開(kāi)實(shí)驗(yàn)室前按程序脫下防護(hù)服。用完的防護(hù)服要消毒后再洗滌。工作用鞋要防水、防滑、耐扎、舒適。教學(xué)ppt39防護(hù)面罩一次性面罩

教學(xué)ppt40緊急洗眼（常用裝置）便攜式洗眼裝置固定式洗眼裝置教學(xué)ppt41清潔地面的時(shí)間視工作安排而定，不在日常工作時(shí)間做常規(guī)清潔工作。用浸有清潔劑的濕拖把清洗地板是最常用的方法；家用型吸塵器不適用于生物安全實(shí)驗(yàn)室使用；不要使用掃帚等掃地。GB19489—2008教學(xué)ppt42氣溶膠

離心、研磨、混合、劇烈振蕩或混勻、超聲破碎、動(dòng)物的鼻腔內(nèi)接種、從動(dòng)物或胚胎中收集感染性組織、吸管吹吸混勻、摔碎菌液瓶等均可產(chǎn)生。80%的實(shí)驗(yàn)室操作可產(chǎn)生氣溶膠。

正確使用生物安全柜可以有效減少由于氣溶膠暴露所造成的實(shí)驗(yàn)室感染以及培養(yǎng)物交叉污染。生物安全柜同時(shí)也能保護(hù)環(huán)境。教學(xué)ppt43職業(yè)暴露：指醫(yī)務(wù)人員從事診療、護(hù)理、檢驗(yàn)等工作過(guò)程中意外被艾滋病病毒感染者或者艾滋病病人的血液、體液污染了皮膚或者粘膜，或者被含有艾滋病病毒的血液、體液污染了的針頭及其他銳器刺破皮膚，有可能被艾滋病病毒感染的情況。摘自《全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范》（2009）教學(xué)ppt44影響針頭刺傷后的危險(xiǎn)性因素傷口的深度有可見(jiàn)的血液從傷口溢出針頭刺破了靜脈或動(dòng)脈污染源來(lái)自于晚期艾滋病病毒感染者(病毒載量高)教學(xué)ppt45暴露物是否是體液、含血體液、其他污染物或其沾染器械是否其它污染物血液或含血液體暴露的類(lèi)型粘膜或可能有損傷的皮膚不需PEP只沾染完整的皮膚刺、割傷皮膚暴露量不需PEP危險(xiǎn)度量小暴露時(shí)間短1級(jí)暴露低危：如表皮擦傷、針刺等量大暴露時(shí)間長(zhǎng)2級(jí)暴露高危：如傷口較深、儀器上可見(jiàn)血液等2級(jí)暴露3級(jí)暴露步驟1：確定暴露級(jí)別（ExposureCode）

教學(xué)ppt46步驟2：確定HIV暴露源嚴(yán)重程度

HIV暴露源級(jí)別不明HIV暴露源級(jí)別1（輕度）HIV陰性HIV陽(yáng)性暴露源的HIV情況如何？無(wú)需PEP暴露源不明暴露源的HIV滴度低（無(wú)癥狀、CD4計(jì)數(shù)高）暴露源的HIV滴度高（有癥狀、CD4計(jì)數(shù)低）HIV暴露源級(jí)別2（重度）教學(xué)ppt47步驟3：根據(jù)暴露級(jí)別和暴露源級(jí)別選擇預(yù)防性用藥的推薦處理方案暴露級(jí)別暴露源級(jí)別預(yù)防性用藥推薦處理方案11不一定使用ＰＥＰ，可由職業(yè)暴露者本人根據(jù)利害比較作出決定12使用基本用藥程序21使用基本用藥程序22使用強(qiáng)化用藥程序31或2使用強(qiáng)化用藥程序原因不明原因不明使用基本用藥程序教學(xué)ppt48基本用藥程序：兩種逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑，使用常規(guī)治療劑量，連續(xù)服用28天。如雙汰芝（AZT與3TC聯(lián)合制劑300mg/150mg）1片/次，每日2次，用藥時(shí)間為連續(xù)服用28天。或參考抗病毒治療指導(dǎo)方案。本程序適用于輕度低危暴露。強(qiáng)化用藥程序：基本用藥程序加一種蛋白酶抑制劑，如佳息患或利托那韋。均使用常規(guī)治療劑量(400mg/片，2片/次，Q8h)，連續(xù)服用28天。本程序適用于嚴(yán)重暴露。教學(xué)ppt49職業(yè)暴露后，存在感染艾滋病毒的危險(xiǎn)性，但實(shí)際感染艾滋病毒的機(jī)率是很低的。研究資料表明，醫(yī)務(wù)工作者被艾滋病病毒污染的針具刺傷后，發(fā)生艾滋病病毒感染的機(jī)率為0.33％（20/6135），粘膜表面暴露的感染艾滋病病毒的機(jī)率為0.09％（1/1143）教學(xué)ppt50最主要的職業(yè)是護(hù)士和實(shí)驗(yàn)