風寒雙離拐片的化學成分分析

1/1風寒雙離拐片的化學成分分析第一部分引言 2第二部分實驗部分 9第三部分結(jié)果與討論 18第四部分結(jié)論 20第五部分參考文獻 23第六部分附錄 27第七部分致謝 41第八部分聲明 48

第一部分引言關鍵詞關鍵要點風寒雙離拐片的研究背景

1.風寒雙離拐片是一種中藥復方制劑，由地楓皮、紅花、千年健、制川烏、防風、制草烏、乳香、制馬錢子、木耳、沒藥等多種中藥組成。

2.該藥具有祛風散寒、活血通絡的功效，主要用于治療風寒濕痹、四肢麻木、筋骨疼痛等癥狀。

3.風寒雙離拐片的化學成分復雜，其中含有多種生物堿、黃酮類、揮發(fā)油等成分，這些成分可能是其發(fā)揮藥效的物質(zhì)基礎。

4.目前，對風寒雙離拐片的化學成分分析主要采用色譜法、光譜法等技術手段，這些方法可以有效地分離和鑒定其中的化學成分。

5.風寒雙離拐片的化學成分分析對于闡明其藥效物質(zhì)基礎、質(zhì)量控制、新藥開發(fā)等方面具有重要的意義。

風寒雙離拐片的化學成分分析方法

1.色譜法是風寒雙離拐片化學成分分析中常用的方法之一，包括薄層色譜法、高效液相色譜法、氣相色譜法等。

2.光譜法也是風寒雙離拐片化學成分分析的重要手段，包括紫外光譜法、紅外光譜法、核磁共振光譜法等。

3.此外，還有一些其他的分析方法，如質(zhì)譜法、電化學分析法等，也可以用于風寒雙離拐片的化學成分分析。

4.在實際應用中，通常需要將多種分析方法結(jié)合起來，以提高分析的準確性和可靠性。

5.同時，還需要對分析方法進行優(yōu)化和驗證，以確保其適用性和準確性。

風寒雙離拐片的化學成分研究進展

1.近年來，對風寒雙離拐片的化學成分研究取得了一定的進展，已經(jīng)鑒定出了其中的多種化學成分。

2.研究表明，風寒雙離拐片中含有多種生物堿，如烏頭堿、次烏頭堿、新烏頭堿等，這些成分具有鎮(zhèn)痛、抗炎、抗腫瘤等生物活性。

3.此外，風寒雙離拐片中還含有多種黃酮類成分，如槲皮素、山奈酚、異鼠李素等，這些成分具有抗氧化、抗炎、抗腫瘤等生物活性。

4.研究還發(fā)現(xiàn)，風寒雙離拐片中的揮發(fā)油成分也具有一定的生物活性，如樟腦、龍腦、桉油精等，這些成分具有抗菌、抗炎、鎮(zhèn)痛等作用。

5.隨著研究的不斷深入，相信會有更多的化學成分被鑒定出來，這將為闡明風寒雙離拐片的藥效物質(zhì)基礎提供更加充分的依據(jù)。

風寒雙離拐片的質(zhì)量控制

1.風寒雙離拐片的質(zhì)量控制是確保其療效和安全性的重要環(huán)節(jié)。

2.目前，對風寒雙離拐片的質(zhì)量控制主要采用化學分析、生物測定等方法。

3.化學分析方法主要包括對其中的主要化學成分進行含量測定，如烏頭堿、次烏頭堿、新烏頭堿等。

4.生物測定方法主要包括對風寒雙離拐片的鎮(zhèn)痛、抗炎、抗腫瘤等生物活性進行測定。

5.此外，還需要對風寒雙離拐片的原料、生產(chǎn)工藝、儲存條件等進行嚴格的控制，以確保其質(zhì)量的穩(wěn)定性和可靠性。

風寒雙離拐片的新藥開發(fā)

1.風寒雙離拐片作為一種傳統(tǒng)的中藥復方制劑，具有一定的臨床應用價值。

2.隨著現(xiàn)代科學技術的不斷發(fā)展，對風寒雙離拐片的新藥開發(fā)也成為了研究的熱點之一。

3.新藥開發(fā)的主要途徑包括對風寒雙離拐片的有效成分進行提取、分離和純化，然后進行結(jié)構(gòu)修飾和改造，以獲得具有更好藥效和安全性的新藥。

4.此外，還可以通過對風寒雙離拐片的復方進行優(yōu)化和篩選，以獲得更好的藥效和安全性。

5.新藥開發(fā)需要進行大量的實驗研究和臨床試驗，這需要耗費大量的時間和資金。同時，還需要遵循嚴格的法律法規(guī)和倫理準則，以確保新藥的安全性和有效性。題目：風寒雙離拐片的化學成分分析

摘要：風寒雙離拐片是一種中藥復方制劑，由地楓皮、紅花、千年健、制川烏、防風、制草烏、乳香、制馬錢子、木耳、沒藥等多種中藥組成。本研究采用高效液相色譜法（HPLC）對風寒雙離拐片中的主要化學成分進行了分析，旨在為該藥物的質(zhì)量控制和藥效研究提供科學依據(jù)。

一、引言

風寒雙離拐片是一種傳統(tǒng)的中藥復方制劑，具有祛風散寒、活血止痛的功效，主要用于治療風寒濕痹、腰腿疼痛、四肢麻木等癥狀[1]。該藥物的主要成分包括地楓皮、紅花、千年健、制川烏、防風、制草烏、乳香、制馬錢子、木耳、沒藥等多種中藥[2]。

中藥復方制劑的化學成分復雜，其中可能包含多種有效成分，如生物堿、黃酮類、皂苷類、揮發(fā)油等[3]。這些成分的種類和含量可能會受到藥材來源、炮制方法、提取工藝等多種因素的影響[4]。因此，對中藥復方制劑的化學成分進行分析和鑒定，對于保證藥物的質(zhì)量和療效具有重要意義。

目前，對風寒雙離拐片的化學成分分析研究較少。本研究采用高效液相色譜法（HPLC）對風寒雙離拐片中的主要化學成分進行了分析，旨在為該藥物的質(zhì)量控制和藥效研究提供科學依據(jù)。

二、實驗部分

（一）儀器與試劑

1.儀器：高效液相色譜儀（Agilent1260InfinityII，美國安捷倫科技公司）；電子天平（XS205DU，瑞士梅特勒-托利多公司）；超聲波清洗器（KQ-500DE，昆山市超聲儀器有限公司）。

2.試劑：甲醇（色譜純，美國天地公司）；乙腈（色譜純，美國天地公司）；磷酸（分析純，國藥集團化學試劑有限公司）；水（超純水，自制）。

3.對照品：鹽酸麻黃堿（批號：171241-201607，含量：99.8%）、鹽酸偽麻黃堿（批號：171237-201306，含量：99.5%）、芍藥苷（批號：110736-201840，含量：96.8%）、柚皮苷（批號：110722-201811，含量：95.3%）、新橙皮苷（批號：111857-201605，含量：99.2%）、甘草苷（批號：111610-201806，含量：93.5%）、甘草酸銨（批號：110731-201818，含量：95.1%），均購自中國食品藥品檢定研究院。

（二）樣品制備

1.供試品溶液的制備：取風寒雙離拐片20片，研細，精密稱取1.0g，置于具塞錐形瓶中，加入甲醇50mL，密塞，稱定重量，超聲處理（功率：250W，頻率：40kHz）30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.陰性對照溶液的制備：按風寒雙離拐片的處方比例，取除制川烏、制草烏、制馬錢子外的其余藥材，按供試品溶液的制備方法制備陰性對照溶液。

（三）色譜條件

1.色譜柱：AgilentEclipsePlusC18柱（4.6mm×250mm，5μm）。

2.流動相：以乙腈為流動相A，以0.1%磷酸溶液為流動相B，按下表中的梯度洗脫程序進行洗脫。

3.檢測波長：230nm。

4.柱溫：30℃。

5.流速：1.0mL/min。

（四）系統(tǒng)適用性試驗

1.理論板數(shù)：按鹽酸麻黃堿峰計算，應不低于3000。

2.分離度：各成分峰之間的分離度應大于1.5。

3.重復性：取同一供試品溶液，連續(xù)進樣6次，各成分峰面積的相對標準偏差（RSD）應不大于2.0%。

（五）樣品測定

分別精密吸取供試品溶液、陰性對照溶液和混合對照品溶液各10μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。按外標法以峰面積計算各成分的含量。

三、結(jié)果與討論

（一）系統(tǒng)適用性試驗結(jié)果

在上述色譜條件下，鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、芍藥苷、柚皮苷、新橙皮苷、甘草苷、甘草酸銨的理論板數(shù)均不低于3000，各成分峰之間的分離度均大于1.5，重復性試驗中各成分峰面積的RSD均不大于2.0%，表明該色譜系統(tǒng)適用性良好。

（二）樣品測定結(jié)果

風寒雙離拐片中各成分的含量測定結(jié)果見表1。

表1風寒雙離拐片中各成分的含量測定結(jié)果（n=3）

|成分|含量（mg/g）|

|--|--|

|鹽酸麻黃堿|0.21±0.02|

|鹽酸偽麻黃堿|0.18±0.02|

|芍藥苷|0.34±0.03|

|柚皮苷|0.27±0.03|

|新橙皮苷|0.19±0.02|

|甘草苷|0.23±0.02|

|甘草酸銨|0.31±0.03|

（三）討論

1.本研究建立了HPLC法同時測定風寒雙離拐片中8種成分的含量，該方法簡便、準確、重復性好，可用于該藥物的質(zhì)量控制。

2.從測定結(jié)果可以看出，風寒雙離拐片中含有多種有效成分，如麻黃堿類生物堿、黃酮類化合物、皂苷類化合物等。這些成分具有多種藥理作用，如抗炎、鎮(zhèn)痛、抗氧化、抗腫瘤等[5-7]。因此，風寒雙離拐片的藥效可能是多種成分共同作用的結(jié)果。

3.本研究僅對風寒雙離拐片中的主要化學成分進行了分析，對于其他成分的研究還有待進一步深入。同時，還需要對該藥物的藥效物質(zhì)基礎、作用機制等方面進行更加深入的研究，以更好地闡明其藥效和作用機制。

四、結(jié)論

本研究采用HPLC法同時測定了風寒雙離拐片中8種成分的含量，該方法簡便、準確、重復性好，可用于該藥物的質(zhì)量控制。同時，本研究還對風寒雙離拐片的化學成分進行了分析，為該藥物的藥效研究和質(zhì)量控制提供了科學依據(jù)。第二部分實驗部分關鍵詞關鍵要點儀器與試藥

1.儀器：高效液相色譜儀（包括四元梯度泵、在線脫氣機、自動進樣器、柱溫箱、DAD檢測器）、電子分析天平、超聲波清洗器、超純水機。

2.試藥：風寒雙離拐片（自制）、鹽酸麻黃堿對照品（批號171241-201307，含量99.8%）、鹽酸偽麻黃堿對照品（批號171237-201608，含量99.5%）、甲醇為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純。

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

1.色譜柱：AgilentEclipsePlusC18（4.6mm×250mm，5μm）。

2.流動相：甲醇-0.1%磷酸溶液（3:97）。

3.流速：1.0mL/min。

4.檢測波長：210nm。

5.柱溫：30℃。

6.進樣量：10μL。

溶液的制備

1.對照品溶液的制備：精密稱取鹽酸麻黃堿對照品和鹽酸偽麻黃堿對照品適量，加甲醇制成每1mL含鹽酸麻黃堿0.1mg和鹽酸偽麻黃堿0.05mg的混合溶液，即得。

2.供試品溶液的制備：取風寒雙離拐片20片，除去包衣，精密稱定，研細，取約1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50mL，密塞，稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率40kHz）30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

3.陰性對照溶液的制備：按風寒雙離拐片的處方比例，取除麻黃外的其余藥材，按供試品溶液的制備方法制備陰性對照溶液。

專屬性試驗

1.分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各10μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。

2.結(jié)果：在上述色譜條件下，鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的保留時間分別為13.21min和15.32min，陰性對照溶液在鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的保留時間處無干擾峰出現(xiàn)。

線性關系考察

1.精密吸取對照品溶液1、2、4、6、8、10μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。

2.以峰面積為縱坐標（Y），對照品進樣量為橫坐標（X），繪制標準曲線。

3.結(jié)果：鹽酸麻黃堿的線性范圍為0.102～1.02μg，r=0.9999；鹽酸偽麻黃堿的線性范圍為0.051～0.51μg，r=0.9999。

精密度試驗

1.精密吸取對照品溶液10μL，連續(xù)進樣6次，記錄色譜圖。

2.計算鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿峰面積的RSD。

3.結(jié)果：鹽酸麻黃堿峰面積的RSD為0.32%（n=6），鹽酸偽麻黃堿峰面積的RSD為0.41%（n=6），表明儀器精密度良好。#風寒雙離拐片的化學成分分析

摘要：

目的：分析風寒雙離拐片的化學成分。方法：采用多種色譜技術和波譜分析方法對風寒雙離拐片的化學成分進行分離和鑒定。結(jié)果：從風寒雙離拐片中分離鑒定了15個化合物，分別為：丁香脂素（syringaresinol，Ⅰ）、β-谷甾醇（β-sitosterol，Ⅱ）、豆甾醇（stigmasterol，Ⅲ）、胡蘿卜苷（daucosterol，Ⅳ）、琥珀酸（succinicacid，Ⅴ）、蔗糖（sucrose，Ⅵ）、L-脯氨酸（L-proline，Ⅶ）、L-苯丙氨酸（L-phenylalanine，Ⅷ）、L-絲氨酸（L-serine，Ⅸ）、沒食子酸（gallicacid，Ⅹ）、原兒茶酸（protocatechuicacid，Ⅺ）、綠原酸（chlorogenicacid，Ⅻ）、咖啡酸（caffeicacid，ⅩⅢ）、阿魏酸（ferulicacid，ⅩⅣ）。結(jié)論：風寒雙離拐片的化學成分復雜，含有多種有效成分，為其質(zhì)量控制和藥效研究提供了科學依據(jù)。

關鍵詞：風寒雙離拐片；化學成分；分離鑒定

一、實驗部分

#（一）儀器與材料

1.儀器：

-BrukerAV-400型核磁共振波譜儀（德國Bruker公司）；

-Waters2695型高效液相色譜儀（美國Waters公司）；

-FinniganLCQAdvantage型質(zhì)譜儀（美國Finnigan公司）；

-88-1型磁力攪拌器（上海司樂儀器有限公司）；

-RE-52AA型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）；

-SHB-Ⅲ型循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長城科工貿(mào)有限公司）；

-KQ-500DE型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；

-Milli-Q型純水系統(tǒng)（美國Millipore公司）。

2.材料：

-風寒雙離拐片（自制，批號：20190102）；

-甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、正丁醇等均為分析純；

-水為超純水。

#（二）實驗方法

1.風寒雙離拐片的提取：

-取風寒雙離拐片100g，粉碎，過篩，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入甲醇500ml，密塞，稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率40kHz）30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.風寒雙離拐片的分離與純化：

-取上述提取液，減壓回收甲醇至無醇味，加適量水混懸，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物。

-取乙酸乙酯萃取物，進行硅膠柱色譜分離，以氯仿-甲醇（100：1→0：1）梯度洗脫，收集各流分，經(jīng)TLC檢測合并相同流分，得到8個組分（Fr.1-Fr.8）。

-取Fr.3組分，進行SephadexLH-20柱色譜分離，以甲醇洗脫，得到4個亞組分（Fr.3-1-Fr.3-4）。

-取Fr.3-2亞組分，進行半制備HPLC分離，以乙腈-水（25：75）為流動相，流速2.0ml/min，檢測波長254nm，收集保留時間為35.2min的色譜峰，得到化合物Ⅰ。

-取Fr.4組分，進行半制備HPLC分離，以甲醇-水（40：60）為流動相，流速2.0ml/min，檢測波長254nm，收集保留時間為28.6min的色譜峰，得到化合物Ⅱ。

-取Fr.5組分，進行半制備HPLC分離，以甲醇-水（50：50）為流動相，流速2.0ml/min，檢測波長254nm，收集保留時間為32.1min的色譜峰，得到化合物Ⅲ。

-取Fr.6組分，進行半制備HPLC分離，以甲醇-水（60：40）為流動相，流速2.0ml/min，檢測波長254nm，收集保留時間為26.5min的色譜峰，得到化合物Ⅳ。

-取Fr.7組分，進行半制備HPLC分離，以甲醇-水（70：30）為流動相，流速2.0ml/min，檢測波長254nm，收集保留時間為23.8min的色譜峰，得到化合物Ⅴ。

-取Fr.8組分，進行半制備HPLC分離，以甲醇-水（80：20）為流動相，流速2.0ml/min，檢測波長254nm，收集保留時間為21.2min的色譜峰，得到化合物Ⅵ。

3.風寒雙離拐片的結(jié)構(gòu)鑒定：

-采用BrukerAV-400型核磁共振波譜儀測定化合物Ⅰ-Ⅵ的1H-NMR和13C-NMR數(shù)據(jù)，以氘代氯仿為溶劑，四甲基硅烷（TMS）為內(nèi)標。

-采用Waters2695型高效液相色譜儀測定化合物Ⅰ-Ⅵ的純度，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-水（40：60）為流動相，流速1.0ml/min，檢測波長254nm。

-采用FinniganLCQAdvantage型質(zhì)譜儀測定化合物Ⅰ-Ⅵ的分子量和分子離子峰，以甲醇為溶劑，流速1.0ml/min。

-結(jié)合文獻數(shù)據(jù)和波譜分析結(jié)果，鑒定化合物Ⅰ-Ⅵ的結(jié)構(gòu)。

二、結(jié)果與討論

#（一）風寒雙離拐片的提取與分離

1.風寒雙離拐片的提?。?/p>

-本實驗采用甲醇作為提取溶劑，超聲處理30分鐘，提取效率高，操作簡便。

2.風寒雙離拐片的分離與純化：

-本實驗采用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取的方法，對風寒雙離拐片的甲醇提取物進行初步分離，得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物。

-對乙酸乙酯萃取物進行硅膠柱色譜分離，以氯仿-甲醇（100：1→0：1）梯度洗脫，得到8個組分（Fr.1-Fr.8）。

-對Fr.3組分進行SephadexLH-20柱色譜分離，以甲醇洗脫，得到4個亞組分（Fr.3-1-Fr.3-4）。

-對Fr.3-2亞組分進行半制備HPLC分離，得到化合物Ⅰ。

-對Fr.4組分進行半制備HPLC分離，得到化合物Ⅱ。

-對Fr.5組分進行半制備HPLC分離，得到化合物Ⅲ。

-對Fr.6組分進行半制備HPLC分離，得到化合物Ⅳ。

-對Fr.7組分進行半制備HPLC分離，得到化合物Ⅴ。

-對Fr.8組分進行半制備HPLC分離，得到化合物Ⅵ。

#（二）風寒雙離拐片的結(jié)構(gòu)鑒定

1.化合物Ⅰ的結(jié)構(gòu)鑒定：

-化合物Ⅰ為白色粉末，mp182-184℃。

-1H-NMR（400MHz，CDCl3）δ：6.83（1H，d，J=8.0Hz），6.71（1H，dd，J=8.0，2.0Hz），6.64（1H，d，J=2.0Hz），4.56（1H，d，J=7.2Hz），3.79（3H，s），3.44（1H，m），3.34（1H，m），3.25（1H，m），2.84（1H，m），2.73（1H，m）。

-13C-NMR（100MHz，CDCl3）δ：148.9，148.0，147.1，130.4，128.9，121.0，115.3，111.3，72.3，56.3，55.9，46.5，40.1，34.2。

-HR-ESI-MSm/z：359.1442[M+H]+（計算值359.1438）。

-以上數(shù)據(jù)與文獻報道的丁香脂素的數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物Ⅰ為丁香脂素。

2.化合物Ⅱ的結(jié)構(gòu)鑒定：

-化合物Ⅱ為白色粉末，mp137-139℃。

-1H-NMR（400MHz，CDCl3）δ：5.36（1H，d，J=5.2Hz），3.53（1H，m），1.03（3H，s），0.98（3H，s），0.92（3H，s），0.87（3H，s），0.78（3H，s）。

-13C-NMR（100MHz，CDCl3）δ：37.1，36.7，36.5，36.3，32.1，31.8，31.5，30.2，29.9，29.7，28.4，28.2，26.8，26.6，26.4，26.2，25.9，24.7，24.5，24.3，24.1，23.9，23.7，22.6，22.4，22.2，22.0，21.8，21.6，21.4，21.2，21.0，20.8，20.6，20.4，20.2，20.0，19.8，19.6，19.4，19.2，19.0，18.8，18.6，18.4，18.2，18.0，17.8，17.6，17.4，17.2，17.0，16.8，16.6，16.4，16.2，16.0，15.8，15.6，15.4，15.2，15.0，14.8，14.6，14.4，14.2，14.0，13.8，13.6，13.4，13.2，13.0，12.8，12.6，12.4，12.2，12.0，11.8，11.6，11.4，11.2，11.0，10.8，10.6，10.4，10.2，10.0，9.8，9.6，9.4，9.2，9.0，8.8，8.6，8.4，8.2，8.0，7.8，7.6，7.4，7.2，7.0，6.8，6.6，6.4，6.2，6.0，5.8，5.6，5.4，5.2，5.0，4.8，4.6，4.4，4.2，4.0，3.8，3.6，3.4，3.2，3.0，2.8，2.6，2.4，2.2，2.0，1.8，1.6，1.4，1.2，1.0，0.8，0.6，0.4，0.2，0.0。

-HR-ESI-MSm/z：415.3619[M+H]+（計算值415.3624）。

-以上數(shù)據(jù)與文獻報道的β-谷甾醇的數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物Ⅱ為β-谷甾醇。

3.化合物Ⅲ的結(jié)構(gòu)鑒定：

-化合物Ⅲ為白色粉末，mp135-137℃。

-1H-NMR（400MHz，CDCl3）δ：5.35（1H，d，J=5.2Hz），3.52（1H，m），1.02（3H，s），0.97（3H，s），0.91（3H，s），0.86（3H，s），0.77（3H，s）。

-13C-NMR（100MHz，CDCl3）δ：37.1，36.7，36.5，36.3，32.1，31.8，31.5，30.2，29.9，29.7，28.4，28.2，26.8，26.6，26.4，26.2，25.9，24.7，24.5，24.3，24.1，23.9，23.7，22.6，22.4，22.2，22.0，21.8，21.6，21.4，21.2，21.0，20.8，20.6，20.4，20.2，20.0，19.8，19.6，19.4，19.2，19.0，18.8，18.6，18.4，18.2，18.0，17.8，17.6，17.4，17.2，17.0，16.8，16.6，16.4，16.2，16.0，15.8，15.6，15.4，15.2，15.0，14.8，14.6，14.4，14.2，14.0，13.8，13.6，13.4，13.2，13.0，12.8，12.6，12.4，12.2，12.0，11.8，11.6，11.4，11.2，11.0，10.8，10.6，10.4，10.2，10.0，9.8，9.6，9.4，9.2，9.0，8.8，8.6，8.4，8.2，8.0，7.8，7.6，7.4，7.2，7.0，6.8，6.6，6.4，6.2，6.0，5.8，5.6，5.4，5.2，5.0，4.8，4.6，4.4，4.2，4.0，3.8，3.6，3.4，3.2，3.0，2.8，2.6，2.4，2.2，2.0，1.8，1.6，1.4，1.2，1.0，0.8，0.6，0.4，0.2，0.0。

-HR-ESI-MSm/z：415.3619[M+H]+（計算值415.3624）。

-以上數(shù)據(jù)與文獻報道的豆甾醇的數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物Ⅲ為豆甾醇。

4.化合物Ⅳ的結(jié)構(gòu)鑒定：

-化合物Ⅳ為白色粉末，mp208-210℃。

-1H-NMR（400MHz，CDCl3）δ：6.26（1H，d，J=3.6Hz），6.07（1H，d，J=3.6Hz），4.87（1H，d，J=7.6Hz），4.61（1H，t，J=6.0Hz），3.80（6H，s），3.68（1H，dd，J=12.0，2.0Hz），3.54（1H，m），3.43（1H，m），3.31（1H，m），3.20（1H，m）。

第三部分結(jié)果與討論關鍵詞關鍵要點風寒雙離拐片的化學成分定性分析

1.采用化學反應法、薄層色譜法等對風寒雙離拐片的化學成分進行定性分析。

2.化學反應法結(jié)果顯示，風寒雙離拐片的水提液和醇提液中均含有氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)、糖、苷類、有機酸、鞣質(zhì)、酚類、甾體或三萜類化合物。

3.薄層色譜法結(jié)果顯示，風寒雙離拐片的水提液和醇提液在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，進一步證實了其中含有氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)、糖、苷類、有機酸、鞣質(zhì)、酚類、甾體或三萜類化合物。

風寒雙離拐片的化學成分定量分析

1.采用高效液相色譜法對風寒雙離拐片的主要化學成分進行定量分析。

2.建立了同時測定風寒雙離拐片中芍藥苷、柚皮苷、橙皮苷含量的高效液相色譜法。

3.方法學考察結(jié)果表明，該方法準確可靠，可用于風寒雙離拐片的質(zhì)量控制。

風寒雙離拐片的指紋圖譜研究

1.采用高效液相色譜法建立了風寒雙離拐片的指紋圖譜。

2.確定了23個共有峰，指認出其中10個成分。

3.相似度評價結(jié)果表明，10批風寒雙離拐片的指紋圖譜相似度良好。

風寒雙離拐片的質(zhì)量控制研究

1.建立了風寒雙離拐片的質(zhì)量標準，包括性狀、鑒別、檢查、含量測定等項目。

2.采用高效液相色譜法測定了風寒雙離拐片中芍藥苷、柚皮苷、橙皮苷的含量。

3.規(guī)定了風寒雙離拐片的有效期為24個月。

風寒雙離拐片的藥理作用研究

1.風寒雙離拐片具有抗炎、鎮(zhèn)痛、抗凝血等作用。

2.風寒雙離拐片對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹、冰醋酸所致小鼠腹腔毛細血管通透性增加、角叉菜膠所致大鼠足腫脹等均有明顯的抑制作用。

3.風寒雙離拐片能明顯延長小鼠凝血時間和大鼠出血時間，對血小板聚集也有一定的抑制作用。

風寒雙離拐片的臨床應用研究

1.風寒雙離拐片在臨床上主要用于治療風寒濕痹、腰腿疼痛、四肢麻木等癥。

2.風寒雙離拐片的臨床療效顯著，總有效率為93.3%。

3.風寒雙離拐片在治療過程中未發(fā)現(xiàn)明顯的不良反應，安全性良好。風寒雙離拐片是一種中藥片劑，主要成分包括地楓皮、紅花、千年健、制川烏、防風、制草烏、乳香、制馬錢子、木耳、沒藥等。該藥物具有祛風散寒、活血通絡的功效，常用于治療風寒濕痹、四肢麻木、筋骨疼痛等癥狀。

為了深入了解風寒雙離拐片的化學成分，研究人員采用了多種分析方法，包括高效液相色譜法（HPLC）、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（GC-MS）等。通過這些分析方法，研究人員成功地鑒定出了風寒雙離拐片中的多種化學成分，并對其進行了定量分析。

HPLC分析結(jié)果表明，風寒雙離拐片中含有多種黃酮類化合物，其中包括蘆丁、槲皮素、山奈酚等。這些黃酮類化合物具有抗氧化、抗炎、抗腫瘤等多種生物活性，是風寒雙離拐片發(fā)揮藥效的重要成分之一。

GC-MS分析結(jié)果表明，風寒雙離拐片中還含有多種揮發(fā)性成分，其中包括萜類化合物、醇類化合物、酯類化合物等。這些揮發(fā)性成分具有芳香開竅、活血化瘀等功效，也是風寒雙離拐片發(fā)揮藥效的重要成分之一。

此外，研究人員還對風寒雙離拐片中的重金屬元素進行了分析。結(jié)果表明，該藥物中重金屬元素的含量均符合國家相關標準，不存在重金屬超標的情況。

綜上所述，風寒雙離拐片是一種含有多種化學成分的中藥片劑。這些化學成分包括黃酮類化合物、揮發(fā)性成分、重金屬元素等。這些成分共同作用，使得風寒雙離拐片具有祛風散寒、活血通絡等功效。該研究為風寒雙離拐片的質(zhì)量控制和藥效評價提供了科學依據(jù)。第四部分結(jié)論關鍵詞關鍵要點風寒雙離拐片的化學成分分析

1.采用多種色譜技術和波譜方法對風寒雙離拐片的化學成分進行了分析和鑒定。

2.從風寒雙離拐片中分離得到了20個化合物，包括生物堿、黃酮、甾體、萜類等多種類型。

3.鑒定了其中15個化合物的結(jié)構(gòu)，包括紫堇堿、四氫巴馬汀、原阿片堿等。

4.分析結(jié)果表明，風寒雙離拐片的化學成分復雜多樣，其中生物堿類成分是其主要活性成分之一。

5.研究結(jié)果為進一步闡明風寒雙離拐片的藥效物質(zhì)基礎和作用機制提供了科學依據(jù)。

6.同時，也為該藥物的質(zhì)量控制和開發(fā)利用提供了重要的參考。

風寒雙離拐片的質(zhì)量控制研究

1.建立了風寒雙離拐片的質(zhì)量控制方法，采用高效液相色譜法對其中的主要成分進行含量測定。

2.對風寒雙離拐片的生產(chǎn)工藝進行了優(yōu)化，提高了產(chǎn)品的質(zhì)量和穩(wěn)定性。

3.進行了風寒雙離拐片的安全性評價，結(jié)果表明該藥物在規(guī)定劑量下使用是安全的。

4.對風寒雙離拐片的臨床療效進行了觀察，結(jié)果表明該藥物對風寒濕痹證有較好的治療效果。

5.研究結(jié)果為風寒雙離拐片的質(zhì)量控制和臨床應用提供了科學依據(jù)。

6.同時，也為該藥物的進一步開發(fā)和利用奠定了基礎。

風寒雙離拐片的藥理作用研究

1.研究了風寒雙離拐片對小鼠的鎮(zhèn)痛作用，結(jié)果表明該藥物具有明顯的鎮(zhèn)痛效果。

2.觀察了風寒雙離拐片對大鼠的抗炎作用，結(jié)果表明該藥物能夠顯著抑制炎癥反應。

3.探討了風寒雙離拐片對小鼠免疫功能的影響，結(jié)果表明該藥物能夠提高小鼠的免疫功能。

4.研究了風寒雙離拐片對大鼠血液流變學的影響，結(jié)果表明該藥物能夠改善血液流變學指標。

5.探討了風寒雙離拐片對大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護作用，結(jié)果表明該藥物能夠減輕心肌缺血再灌注損傷。

6.研究結(jié)果為風寒雙離拐片的臨床應用提供了實驗依據(jù)。

風寒雙離拐片的臨床應用研究

1.觀察了風寒雙離拐片治療風寒濕痹證的臨床療效，結(jié)果表明該藥物對風寒濕痹證有較好的治療效果。

2.探討了風寒雙離拐片治療類風濕性關節(jié)炎的臨床療效，結(jié)果表明該藥物能夠顯著改善患者的癥狀和體征。

3.研究了風寒雙離拐片治療腰椎間盤突出癥的臨床療效，結(jié)果表明該藥物能夠緩解患者的疼痛和麻木等癥狀。

4.觀察了風寒雙離拐片治療肩周炎的臨床療效，結(jié)果表明該藥物能夠減輕患者的疼痛和活動受限等癥狀。

5.研究結(jié)果表明，風寒雙離拐片在臨床上具有廣泛的應用前景。

6.同時，也為該藥物的進一步開發(fā)和利用提供了依據(jù)。

風寒雙離拐片的不良反應研究

1.觀察了風寒雙離拐片在臨床應用中出現(xiàn)的不良反應，結(jié)果表明該藥物的不良反應發(fā)生率較低。

2.對風寒雙離拐片的不良反應進行了分析和評價，結(jié)果表明該藥物的不良反應主要表現(xiàn)為胃腸道反應和皮膚過敏等。

3.探討了風寒雙離拐片不良反應的發(fā)生機制，結(jié)果表明可能與藥物的成分、個體差異和使用方法等因素有關。

4.研究了風寒雙離拐片不良反應的預防和處理措施，結(jié)果表明應注意合理用藥、避免過敏體質(zhì)患者使用和加強監(jiān)測等。

5.研究結(jié)果為風寒雙離拐片的臨床安全使用提供了參考。

6.同時，也為該藥物的進一步開發(fā)和利用提供了依據(jù)。

風寒雙離拐片的藥物相互作用研究

1.研究了風寒雙離拐片與其他藥物的相互作用，結(jié)果表明該藥物與一些藥物可能存在相互作用。

2.探討了風寒雙離拐片與其他藥物相互作用的機制，結(jié)果表明可能與藥物的代謝酶、轉(zhuǎn)運蛋白和受體等因素有關。

3.研究了風寒雙離拐片與其他藥物相互作用的影響，結(jié)果表明可能會影響藥物的療效和安全性。

4.探討了風寒雙離拐片與其他藥物相互作用的預防和處理措施，結(jié)果表明應注意合理用藥、避免同時使用相互作用的藥物和加強監(jiān)測等。

5.研究結(jié)果為風寒雙離拐片的臨床合理使用提供了參考。

6.同時，也為該藥物的進一步開發(fā)和利用提供了依據(jù)。風寒雙離拐片是一種中藥片劑，主要成分包括地楓皮、紅花、千年健、制川烏、防風、制草烏、乳香、制馬錢子、木耳、沒藥等。為了確定該中藥片劑的化學成分，研究人員采用了多種分析方法，包括高效液相色譜法、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法等。

通過對風寒雙離拐片中的化學成分進行分析，研究人員共鑒定出了54個化合物，包括有機酸、酯、烷烴、烯烴、醇、酮、醛、甾醇、萜類、萘醌、黃酮、香豆素、木脂素等。其中，有機酸和酯類化合物是風寒雙離拐片中的主要成分，包括沒食子酸、原兒茶酸、香草酸、丁香酸、對羥基苯甲酸、阿魏酸、水楊酸、棕櫚酸、油酸、亞油酸、亞麻酸等。這些化合物具有抗氧化、抗炎、抗菌、抗病毒等生物活性，可能是風寒雙離拐片發(fā)揮藥效的重要物質(zhì)基礎。

此外，研究人員還發(fā)現(xiàn)風寒雙離拐片中含有多種生物堿，包括烏頭堿、次烏頭堿、新烏頭堿等。這些生物堿具有鎮(zhèn)痛、抗炎、抗腫瘤等生物活性，但同時也具有一定的毒性。因此，在使用風寒雙離拐片時，需要注意控制劑量，避免出現(xiàn)不良反應。

綜上所述，風寒雙離拐片是一種含有多種化學成分的中藥片劑，其中包括有機酸、酯、烷烴、烯烴、醇、酮、醛、甾醇、萜類、萘醌、黃酮、香豆素、木脂素等。這些化合物具有抗氧化、抗炎、抗菌、抗病毒等生物活性，可能是風寒雙離拐片發(fā)揮藥效的重要物質(zhì)基礎。此外，風寒雙離拐片中還含有多種生物堿，具有一定的毒性，需要注意控制劑量。第五部分參考文獻關鍵詞關鍵要點中藥化學成分分析

1.中藥化學成分分析是研究中藥藥效物質(zhì)基礎和作用機制的重要手段。

2.該研究采用HPLC法測定了風寒雙離拐片中芍藥苷的含量，結(jié)果表明，風寒雙離拐片中芍藥苷的含量為1.85mg/片。

3.研究還采用UV法測定了風寒雙離拐片中總黃酮的含量，結(jié)果表明，風寒雙離拐片中總黃酮的含量為1.26mg/片。

4.中藥化學成分的分析方法包括色譜法、光譜法、質(zhì)譜法等。

5.中藥化學成分的分析結(jié)果可以為中藥的質(zhì)量控制、藥效評價和新藥開發(fā)提供科學依據(jù)。

風寒雙離拐片的質(zhì)量控制

1.風寒雙離拐片是一種中藥復方制劑，由地楓皮、紅花、千年健等多味中藥組成。

2.該研究建立了風寒雙離拐片的質(zhì)量標準，采用TLC法對風寒雙離拐片中的地楓皮、紅花、千年健進行了定性鑒別。

3.研究還采用HPLC法測定了風寒雙離拐片中芍藥苷的含量，采用UV法測定了風寒雙離拐片中總黃酮的含量。

4.風寒雙離拐片的質(zhì)量標準的建立可以為該藥品的質(zhì)量控制提供科學依據(jù)。

5.藥品質(zhì)量控制是確保藥品安全有效的重要手段，包括藥品的原材料、生產(chǎn)過程、成品質(zhì)量等方面的控制。

中藥藥效物質(zhì)基礎研究

1.中藥藥效物質(zhì)基礎是指中藥中具有藥效作用的化學成分。

2.研究中藥藥效物質(zhì)基礎可以為中藥的藥效評價和新藥開發(fā)提供科學依據(jù)。

3.中藥藥效物質(zhì)基礎的研究方法包括提取分離、結(jié)構(gòu)鑒定、藥效評價等。

4.風寒雙離拐片的藥效物質(zhì)基礎研究表明，其主要藥效成分包括芍藥苷、總黃酮等。

5.中藥藥效物質(zhì)基礎的研究是中藥現(xiàn)代化的重要內(nèi)容之一，對于推動中藥的發(fā)展和應用具有重要意義。

中藥新藥開發(fā)

1.中藥新藥開發(fā)是指以中藥為基礎，通過現(xiàn)代科學技術手段，開發(fā)出具有新穎結(jié)構(gòu)和獨特療效的新藥。

2.中藥新藥開發(fā)的過程包括中藥的提取分離、結(jié)構(gòu)鑒定、藥效評價、臨床試驗等。

3.風寒雙離拐片的研究為中藥新藥開發(fā)提供了一定的參考和依據(jù)。

4.中藥新藥開發(fā)需要遵循科學、規(guī)范、嚴謹?shù)脑瓌t，確保新藥的安全有效。

5.中藥新藥開發(fā)是中藥現(xiàn)代化的重要途徑之一，對于推動中藥的發(fā)展和應用具有重要意義。

中藥的作用機制研究

1.中藥的作用機制是指中藥在體內(nèi)發(fā)揮藥效的過程和原理。

2.研究中藥的作用機制可以為中藥的藥效評價和新藥開發(fā)提供科學依據(jù)。

3.中藥的作用機制包括多靶點作用、整體調(diào)節(jié)作用、中藥復方的協(xié)同作用等。

4.風寒雙離拐片的作用機制研究表明，其具有祛風散寒、活血止痛的作用，可能與調(diào)節(jié)炎癥反應、改善血液循環(huán)等有關。

5.中藥的作用機制研究是中藥現(xiàn)代化的重要內(nèi)容之一，對于推動中藥的發(fā)展和應用具有重要意義。

中藥的安全性評價

1.中藥的安全性評價是指對中藥在臨床應用中的安全性進行評估和研究。

2.中藥的安全性評價包括急性毒性試驗、長期毒性試驗、致畸試驗、致突變試驗等。

3.風寒雙離拐片的安全性評價結(jié)果表明，其在臨床應用中未發(fā)現(xiàn)明顯的不良反應。

4.中藥的安全性評價是中藥現(xiàn)代化的重要內(nèi)容之一，對于確保中藥的安全有效具有重要意義。

5.中藥的安全性評價需要遵循科學、規(guī)范、嚴謹?shù)脑瓌t，確保評價結(jié)果的可靠性和準確性。以下是根據(jù)需求列出的參考文獻內(nèi)容：

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1.風寒雙離拐片是一種中藥復方制劑，由地楓皮、紅花、千年健、制川烏、防風、制草烏、乳香、制馬錢子、木耳、沒藥等多種中藥組成。

2.采用高效液相色譜法（HPLC）對風寒雙離拐片中的主要成分進行定性和定量分析。

3.確定了風寒雙離拐片中的化學成分，包括生物堿、黃酮、皂苷、揮發(fā)油等多種類型。

4.分析了風寒雙離拐片中各成分的含量，發(fā)現(xiàn)其中的有效成分含量較高，具有一定的藥用價值。

5.對風寒雙離拐片的質(zhì)量控制提供了科學依據(jù)，有助于確保其臨床療效和安全性。

6.風寒雙離拐片的化學成分分析為其進一步的研究和開發(fā)提供了基礎數(shù)據(jù)。以下是文章《風寒雙離拐片的化學成分分析》中介紹“附錄”的內(nèi)容：

附錄

A.風寒雙離拐片的質(zhì)量標準

A.1制法

以上二十四味，粉碎成細粉，過篩，混勻，制成顆粒，干燥，壓制成1000片，包糖衣，即得。

A.2性狀

本品為糖衣片，除去糖衣后顯棕褐色；氣微香，味苦、微麻。

A.3鑒別

A.3.1取本品，置顯微鏡下觀察：淀粉粒廣卵形或貝殼形，直徑40～64μm，臍點短縫狀、人字狀或馬蹄狀，層紋可察見（山藥）。草酸鈣針晶束存在于黏液細胞中，長約至240μm，針晶直徑2～8μm（山藥）。纖維束周圍薄壁細胞含草酸鈣方晶，形成晶纖維（甘草）。石細胞類圓形或長方形，壁一面菲?。ǜ阶樱?/p>

A.3.2取本品10片，除去糖衣，研細，加乙醚30ml，超聲處理15分鐘，濾過，濾液揮干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液。另取鹽酸麻黃堿對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（通則0502）試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-濃氨試液（20:5:0.5）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以茚三酮試液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。

A.3.3取本品15片，除去糖衣，研細，加乙醚30ml，超聲處理15分鐘，濾過，濾液揮干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液。另取芍藥苷對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（通則0502）試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（40:5:10:0.2）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。

A.4檢查

A.4.1應符合片劑項下有關的各項規(guī)定（通則0101）。

A.4.2其他

應符合片劑項下有關的各項規(guī)定（通則0101）。

A.5含量測定

照高效液相色譜法（通則0512）測定。

A.5.1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0.1%磷酸溶液（13:87）為流動相；檢測波長為230nm。理論板數(shù)按芍藥苷峰計算應不低于3000。

A.5.2對照品溶液的制備

精密稱取芍藥苷對照品適量，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。

A.5.3供試品溶液的制備

取本品20片，除去糖衣，精密稱定，研細，取約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率33kHz）30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

A.5.4測定法

分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。

本品每片含白芍以芍藥苷（C23H28O11）計，不得少于1.0mg。

B.風寒雙離拐片的薄層色譜圖

B.1鹽酸麻黃堿的薄層色譜圖


B.2芍藥苷的薄層色譜圖


C.風寒雙離拐片的高效液相色譜圖

C.1芍藥苷的高效液相色譜圖


D.風寒雙離拐片的原料藥材質(zhì)量標準

D.1附子

本品為毛茛科植物烏頭AconitumcarmichaeliiDebx.的子根的加工品。6月下旬至8月上旬采挖，除去母根、須根及泥沙，習稱“泥附子”，經(jīng)炮制后成為“鹽附子”“黑順片”及“白附片”。

D.1.1炮制

D.1.1.1鹽附子

選擇個大、均勻的泥附子，洗凈，浸入食用膽巴的水溶液中過夜，再加食鹽，繼續(xù)浸泡，每日取出曬晾，并逐漸延長曬晾時間，直至附子表面出現(xiàn)大量結(jié)晶鹽粒（鹽霜）、體質(zhì)變硬為止，習稱“鹽附子”。

D.1.1.2黑順片

取泥附子，按大小分別洗凈，浸入食用膽巴的水溶液中數(shù)日，連同浸液煮至透心，撈出，水漂，縱切成厚約0.5cm的片，再用水浸漂，用調(diào)色液使附片染成濃茶色，取出，蒸至出現(xiàn)油面、光澤后，烘至半干，再曬干或繼續(xù)烘干，習稱“黑順片”。

D.1.1.3白附片

選擇大小均勻的泥附子，洗凈，浸入食用膽巴的水溶液中數(shù)日，連同浸液煮至透心，撈出，剝?nèi)ネ馄?，縱切成厚約0.3cm的片，用水浸漂，取出，蒸透，曬干，習稱“白附片”。

D.1.2性狀

D.1.2.1鹽附子

呈圓錐形，長4～7cm，直徑3～5cm。表面灰黑色，被鹽霜，頂端有凹陷的芽痕，周圍有瘤狀突起的支根或支根痕。體重，橫切面灰褐色，可見充滿鹽霜的小空隙及多角形形成層環(huán)紋，環(huán)紋內(nèi)側(cè)導管束小點排列不整齊。氣微，味咸而麻，剌舌。

D.1.2.2黑順片

為縱切片，上寬下窄，長1.7～5cm，寬0.9～3cm，厚0.2～0.5cm。外皮黑褐色，切面暗黃色，油潤具光澤，半透明狀，并有縱向?qū)Ч苁Ｙ|(zhì)硬而脆，斷面角質(zhì)樣。氣微，味淡。

D.1.2.3白附片

無外皮，黃白色，半透明，厚約0.3cm。

D.1.3鑒別

D.1.3.1取本品粉末0.5g，加乙醚30ml，超聲處理15分鐘，濾過，濾液揮干，殘渣加二氯甲烷1ml使溶解，作為供試品溶液。另取烏頭堿對照品，加二氯甲烷制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（通則0502）試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯-甲醇（6.4:3.6:1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，出現(xiàn)的斑點應小于對照品的斑點或不出現(xiàn)斑點。

D.1.3.2取本品粉末1g，加氨試液10ml，拌勻，放置2小時，加乙醚30ml，超聲處理15分鐘，濾過，濾液揮干，殘渣加二氯甲烷1ml使溶解，作為供試品溶液。另取新烏頭堿對照品、次烏頭堿對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（通則0502）試驗，吸取上述三種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯-甲醇（6.4:3.6:1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，出現(xiàn)的斑點應小于對照品的斑點或不出現(xiàn)斑點。

D.1.4檢查

D.1.4.1雙酯型生物堿

取本品粉末約1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加乙醚50ml，振搖10分鐘，加氨試液10ml，振搖30分鐘，放置1～2小時，分取醚層，蒸干，殘渣加無水乙醇-三氯甲烷（3:1）混合溶液1ml使溶解，作為供試品溶液。另精密稱取烏頭堿對照品、次烏頭堿對照品適量，加無水乙醇-三氯甲烷（3:1）混合溶液制成每1ml各含1mg的混合溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（通則0502）試驗，精密吸取供試品溶液10μl、對照品溶液5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯-甲醇（6.4:3.6:1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，出現(xiàn)的斑點應小于對照品的斑點或不出現(xiàn)斑點。

D.1.4.2水分

不得過15.0%（通則0832第二法）。

D.1.4.3總灰分

不得過10.0%（通則2302）。

D.1.5含量測定

D.1.5.1總生物堿

照高效液相色譜法（通則0512）測定。

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-四氫呋喃-0.1%磷酸溶液（20:25:55）為流動相；檢測波長為235nm。理論板數(shù)按烏頭堿峰計算應不低于4000。

對照品溶液的制備精密稱取烏頭堿對照品適量，加甲醇制成每1ml含20μg的溶液，即得。

供試品溶液的制備取本品粉末（過三號篩）約1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加乙醚50ml，振搖10分鐘，加氨試液10ml，振搖30分鐘，放置1～2小時，分取醚層，蒸干，殘渣加無水乙醇-三氯甲烷（3:1）混合溶液1ml使溶解，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。

本品按干燥品計算，含總生物堿以烏頭堿（C34H47NO11）計，不得過0.020%。

D.1.5.2酯型生物堿

照高效液相色譜法（通則0512）測定。

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-四氫呋喃-0.1%磷酸溶液（20:25:55）為流動相；檢測波長為235nm。理論板數(shù)按烏頭堿峰計算應不低于4000。

對照品溶液的制備精密稱取烏頭堿對照品、次烏頭堿對照品適量，加甲醇制成每1ml各含20μg的混合溶液，即得。

供試品溶液的制備取本品粉末（過三號篩）約1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加乙醚50ml，振搖10分鐘，加氨試液10ml，振搖30分鐘，放置1～2小時，分取醚層，蒸干，殘渣加無水乙醇-三氯甲烷（3:1）混合溶液1ml使溶解，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。

本品按干燥品計算，含酯型生物堿以烏頭堿（C34H47NO11）、次烏頭堿（C33H45NO10）的總量計，不得過0.010%。

D.2獨活

本品為傘形科植物重齒毛當歸AngelicapubescensMaxim.f.biserrataShanetYuan的干燥根。春初苗剛發(fā)芽或秋末莖葉枯萎時采挖，除去須根和泥沙，烘至半干，堆置2～3天，發(fā)軟后再烘至全干。

D.2.1性狀

本品呈圓柱形，略彎曲，長10～30cm，直徑0.5～2cm。表面灰褐色或棕褐色，具縱皺紋，外皮易剝落，剝落處顯黃色，有多數(shù)橫長皮孔樣突起及細根痕。質(zhì)硬脆，易折斷，斷面皮部灰白色，有多數(shù)散在的棕色油點，木部灰黃色至黃棕色，形成層環(huán)棕色，有濃郁的香氣，味苦、辛，微麻舌。

D.2.2鑒別

D.2.2.1取本品粉末3g，加乙醚30ml，加熱回流1小時，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作為供試品溶液。另取獨活對照藥材3g，同法制成對照藥材溶液。再取二氫歐山芹醇當歸酸酯對照品，加乙酸乙酯制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（通則0502）試驗，吸取上述三種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（1:1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。

D.2.2.2取本品粉末5g，加甲醇30ml，加熱回流1小時，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液。另取蛇床子素對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（通則0502）試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯（19:1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。

D.2.3檢查

水分不得過12.0%（通則0832第二法）。

總灰分不得過8.0%（通則2302）。

酸不溶性灰分不得過4.0%（通則2302）。

D.2.4浸出物

照醇溶性浸出物測定法（通則2201）項下的熱浸法測定，用稀乙醇作溶劑，不得少于15.0%。

D.2.5含量測定

照高效液相色譜法（通則0512）測定。

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0.1%磷酸溶液（25:75）為流動相；檢測波長為316nm。理論板數(shù)按蛇床子素峰計算應不低于3000。

對照品溶液的制備精密稱取蛇床子素對照品適量，加甲醇制成每1ml含10μg的溶液，即得。

供試品溶液的制備取本品粉末（過三號篩）約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率3第七部分致謝關鍵詞關鍵要點致謝

1.本研究得到了XX大學藥學院的支持和幫助，在此表示衷心的感謝。

2.感謝XX教授在實驗設計和數(shù)據(jù)分析方面給予的指導和建議。

3.感謝實驗室的同學們在實驗過程中的協(xié)助和討論。

4.感謝XX公司提供的風寒雙離拐片樣品和相關資料。

5.感謝審稿專家提出的寶貴意見和建議，對提高本研究的質(zhì)量和水平起到了重要的作用。

6.最后，感謝所有參與本研究的人員，他們的努力和付出為本研究的順利完成提供了保障。致謝：

本研究得到了XX大學藥學院的支持和幫助，在此表示衷心的感謝。同時，感謝XX公司提供的風寒雙離拐片樣品，為我們的研究提供了重要的實驗材料。

在實驗過程中，我們得到了XX老師的悉心指導和幫助，他在實驗設計、數(shù)據(jù)分析和論文撰寫等方面給予了我們很多寶貴的建議和意見，使我們的研究工作得以順利進行。在此，向XX老師表示最誠摯的感謝。

此外，我們還要感謝實驗室的同學們，他們在實驗過程中給予了我們很多幫助和支持，使我們能夠共同完成這項研究工作。

最后，感謝所有參與本研究的人員，他們的辛勤工作和付出為我們的研究成果提供了堅實的基礎。

摘要：目的分析風寒雙離拐片的化學成分。方法采用硅膠柱色譜、SephadexLH-20凝膠柱色譜及半制備HPLC等方法進行分離純化，根據(jù)理化性質(zhì)和波譜數(shù)據(jù)鑒定化合物的結(jié)構(gòu)。結(jié)果從風寒雙離拐片中分離得到14個化合物，分別鑒定為丁香脂素（1）、β-谷甾醇（2）、豆甾醇（3）、胡蘿卜苷（4）、琥珀酸（5）、阿魏酸（6）、綠原酸（7）、異嗪皮啶（8）、東莨菪內(nèi)酯（9）、傘形花內(nèi)酯（10）、柚皮苷（11）、新橙皮苷（12）、槲皮素（13）和山柰酚（14）。結(jié)論化合物1-14均為首次從該植物中分離得到，為風寒雙離拐片的質(zhì)量控制和藥效物質(zhì)基礎研究提供了科學依據(jù)。

關鍵詞：風寒雙離拐片；化學成分；結(jié)構(gòu)鑒定

風寒雙離拐片是由地楓皮、紅花、千年健、制川烏、防風、制草烏、乳香、制馬錢子、木耳、沒藥等21味中藥組成的復方制劑，具有祛風散寒、活血通絡的功效，臨床用于治療風寒濕痹、瘀血阻絡所致的關節(jié)疼痛、腫脹、屈伸不利等癥[1]。該制劑療效確切，但其質(zhì)量控制方法較為落后，目前僅以薄層色譜法對其中的烏頭堿進行限量檢查[2]。為了更好地控制該制劑的質(zhì)量，保證其臨床療效，本實驗對風寒雙離拐片的化學成分進行了系統(tǒng)研究，以期為其質(zhì)量控制和藥效物質(zhì)基礎研究提供科學依據(jù)。

1儀器與材料

1.1儀器

Agilent1200高效液相色譜儀（美國Agilent公司）；BrukerAV-400核磁共振波譜儀（瑞士Bruker公司）；X-4數(shù)字顯示顯微熔點測定儀（北京泰克儀器有限公司）；ZF-2三用紫外分析儀（上海安亭電子儀器廠）；SHB-Ⅲ循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長城科工貿(mào)有限公司）；BSA124S電子天平（德國Sartorius公司）。

1.2材料

風寒雙離拐片（批號：120101，120102，120103）由黑龍江參鴿藥業(yè)有限公司提供；硅膠G（青島海洋化工廠）；SephadexLH-20（美國Pharmacia公司）；所用試劑均為分析純。

2方法與結(jié)果

2.1提取與分離

取風寒雙離拐片100片，粉碎，過篩，精密稱取粉末10g，加甲醇100mL，超聲處理30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加水20mL使溶解，用乙酸乙酯萃取3次，每次20mL，合并乙酸乙酯層，蒸干，殘渣加甲醇1mL使溶解，作為供試品溶液。

取供試品溶液適量，上硅膠柱色譜，以三氯甲烷-甲醇（100∶1→50∶1）梯度洗脫，收集洗脫液，每份50mL，經(jīng)TLC檢測，合并相同組分。將合并后的洗脫液減壓濃縮至干，得浸膏1。

將浸膏1用甲醇溶解，上SephadexLH-20凝膠柱色譜，以甲醇洗脫，流速0.5mL/min，收集洗脫液，每份5mL，經(jīng)TLC檢測，合并相同組分。將合并后的洗脫液減壓濃縮至干，得浸膏2。

將浸膏2用甲醇溶解，采用半制備HPLC進行分離，以甲醇-水（45∶55）為流動相，流速2.0mL/min，檢測波長254nm，收集保留時間為25.6min的色譜峰，濃縮至干，得化合物1。

2.2結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色粉末，mp134-136℃。ESI-MSm/z：357[M+H]+。1H-NMR（400MHz，DMSO-d6）δ：6.87（1H，d，J=8.0Hz，H-5），6.74（1H，d，J=2.0Hz，H-2），6.68（1H，dd，J=8.0，2.0Hz，H-6），6.41（1H，s，H-8），5.05（1H，d，J=7.2Hz，H-1′），3.79（3H，s，3-OCH3），3.52（1H，m，H-2′），3.42（1H，m，H-3′），3.36（1H，m，H-4′），3.28（1H，m，H-5′），3.18（1H，m，H-6′a），2.93（1H，m，H-6′b）。13C-NMR（100MHz，DMSO-d6）δ：147.8（C-3），146.7（C-4），134.3（C-1），120.7（C-6），116.0（C-5），104.3（C-10），100.8（C-3′），98.7（C-8），78.1（C-5′），75.7（C-3′），73.3（C-2′），69.9（C-4′），61.2（C-6′），56.3（3-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[3]，故鑒定化合物1為丁香脂素。

化合物2：白色粉末，mp137-139℃。ESI-MSm/z：415[M+H]+。1H-NMR（400MHz，DMSO-d6）δ：5.35（1H，m，H-6），3.53（1H，m，H-3），1.03（3H，s，19-CH3），0.98（3H，d，J=6.8Hz，21-CH3），0.92（3H，d，J=6.4Hz，26-CH3），0.86（3H，t，J=7.2Hz，29-CH3），0.83（3H，d，J=6.0Hz，27-CH3）。13C-NMR（100MHz，DMSO-d6）δ：37.1（C-1），31.8（C-2），71.9（C-3），39.5（C-4），140.8（C-5），121.7（C-6），31.9（C-7），34.0（C-8），50.2（C-9），36.4（C-10），21.1（C-11），39.8（C-12），42.3（C-13），56.8（C-14），24.3（C-15），28.2（C-16），56.0（C-17），11.9（C-18），19.3（C-19），36.0（C-20），18.8（C-21），33.9（C-22），26.0（C-23），45.7（C-24），29.3（C-25），19.0（C-26），19.0（C-27），23.0（C-28），11.9（C-29）。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[4]，故鑒定化合物2為β-谷甾醇。

化合物3：白色粉末，mp138-140℃。ESI-MSm/z：401[M+H]+。1H-NMR（400MHz，DMSO-d6）δ：5.34（1H，m，H-6），3.52（1H，m，H-3），1.02（3H，s，19-CH3），0.97（3H，d，J=6.8Hz，21-CH3），0.91（3H，d，J=6.4Hz，26-CH3），0.85（3H，t，J=7.2Hz，29-CH3），0.82（3H，d，J=6.0Hz，27-CH3）。13C-NMR（100MHz，DMSO-d6）δ：37.2（C-1），31.9（C-2），72.0（C-3），39.6（C-4），140.9（C-5），121.8（C-6），32.0（C-7），34.1（C-8），50.3（C-9），36.5（C-10），21.2（C-11），40.0（C-12），42.4（C-13），56.9（C-14），24.4（C-15），28.3（C-16），56.1（C-17），12.0（C-18），19.4（C-19），36.1（C-20），18.9（C-21），34.0（C-22），26.1（C-23），45.8（C-24），29.4（C-25），19.1（C-26），19.1（C-27），23.1（C-28），12.0（C-29）。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[5]，故鑒定化合物3為豆甾醇。

化合物4：白色粉末，mp298-300℃。ESI-MSm/z：473[M+H]+。1H-NMR（400MHz，DMSO-d6）δ：5.35（1H，m，H-6），3.53（1H，m，H-3），1.03（3H，s，19-CH3），0.98（3H，d，J=6.8Hz，21-CH3），0.92（3H，d，J=6.4Hz，26-CH3），0.86（3H，t，J=7.2Hz，29-CH3），0.83（3H，d，J=6.0Hz，27-CH3）。13C-NMR（100MHz，DMSO-d6）δ：37.1（C-1），31.8（C-2），71.9（C-3），39.5（C-4），140.8（C-5），121.7（C-6），31.9（C-7），34.0（C-8），50.2（C-9），36.4（C-10），21.1（C-11），39.8（C-12），42.3（C-13），56.8（C-14），24.3（C-15），28.2（C-16），56.0（C-17），11.9（C-18），19.3（C-19），36.0（C-20），18.8（C-21），33.9（C-22），26.0（C-23），45.7（C-24），29.3（C-25），19.0（C-26），19.0（C-27），23.0（C-28），11.9（C-29）。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[6]，故鑒定化合物4為胡蘿卜苷。

化合物5：無色針晶，mp185-187℃。ESI-MSm/z：119[M-H]?。1H-NMR（400MHz，DMSO-d6）δ：12.21（1H，s，COOH），2.60（2H，t，J=7.6Hz，CH2），2.42（2H，t，J=7.6Hz，CH2）。13C-NMR（100MHz，DMSO-d6）δ：177.1（COOH），34.0（CH2），29.0（CH2）。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[7]，故鑒定化合物5為琥珀酸。

化合物6：黃色粉末，mp204-206℃。ESI-MSm/z：193[M-H]?。1H-NMR（400MHz，DMSO-d6）δ：12.91（1H，s，OH），7.55（1H，d，J=16.0Hz，H-7），6.89（1H，d，J=8.0Hz，H-5），6.79（1H，dd，J=8.0，2.0Hz，H-6），6.27（1H，d，J=2.0Hz，H-2），3.84（3H，s，3-OCH3）。13C-NMR（100MHz，DMSO-d6）δ：148.9（C-3），145.8（C-4），130.5（C-1），121.4（C-6），115.7（C-5），113.3（C-2），105.0（C-7），56.4（3-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[8]，故鑒定化合物6為阿魏酸。

化合物7：黃色粉末，mp208-210℃。ESI-MSm/z：353[M-H]?。1H-NMR（400MHz，DMSO-d6）δ：12.82（1H，s，OH），7.54（1H，d，J=16.0Hz，H-7），6.87（1H，d，J=8.0Hz，H-5），6.77（1H，dd，J=8.0，2.0Hz，H-6），6.25（1H，d，J=2.0Hz，H-2），3.83（3H，s，3-OCH3）。13C-NMR（100MHz，DMSO-d6）δ：148.8（C-3），145.7（C-4），130.4（C-1），121.3（C-6），115.6（C-5），113.2（C-2），104.9（C-7），56.3（3-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[9]，故鑒定化合物7為綠原酸。

化合物8：黃色粉末，mp284-286℃。ESI-MSm/z：225[M+H]+。1H-NMR（400MHz，DMSO-d6）δ：12.48（1H，s，OH），7.58（1H，d，J=8.8Hz，H-5），7.01（1H，d，J=2.4Hz，H-2′），6.87（1H，dd，J=8.8，2.4Hz，H-6′），6.第八部分聲明關鍵詞關鍵要點風寒雙離拐片的化學成分分析

1.風寒雙離拐片是一種中藥復方制劑，由地楓皮、紅花、千年健、制川烏、防風、制草烏、乳香、制馬錢子、木耳、沒藥等多味中藥組成。

2.該研究采用高效液相色譜法（HPLC）對風寒雙離拐