儀器分析培訓(xùn)教學(xué)課件：紫外可見分光光度計

一、光度分析的幾種方法二、光電比色法三.分光光度計的組成四、分光光度計的類型紫外可見分光光度計第二單元：紫外可見分光光度計學(xué)習(xí)要求了解光度分析方法的發(fā)展了解和掌握分光光度計的主要部件了解和掌握分光光度計的主要類型及其分析特點方便、靈敏，準(zhǔn)確度差。1.目視比色法c4c3c2c1c1c2c3c4一、光度分析的幾種方法二、光電比色法(colorimetry)

通過濾光片得一束窄范圍的光(>10nm)光電比色計結(jié)構(gòu)示意圖靈敏度和準(zhǔn)確度較差三.分光光度計的組成美國PE紫外--可見分光光度計光源單色器樣品室檢測器顯示分光光度計的基本部件光源碘鎢燈氘燈單色器測量池參比池樣品池光電倍增管數(shù)據(jù)處理和儀器控制光路示意圖三.分光光度計的組成三、分光光度計的主要部件1.光源：發(fā)出所需波長范圍內(nèi)的連續(xù)光譜，有足夠的光強度,穩(wěn)定?？梢姽鈪^(qū)：鎢燈，碘鎢燈(320～2500nm)紫外區(qū)：氫燈，氘燈(180～375nm)三、分光光度計的主要部件2.單色器：將光源發(fā)出的連續(xù)光譜分解為單色光的裝置。棱鏡:玻璃350～3200nm,石英185～4000nm光柵:波長范圍寬,色散均勻,分辨性能好,使用方便三、分光光度計的主要部件棱鏡:玻璃350～3200nm,石英185～4000nm三、分光光度計的結(jié)構(gòu)之——單色器3.1棱鏡：依據(jù)不同波長光通過棱鏡時折射率不同入射狹縫準(zhǔn)直透鏡棱鏡聚焦透鏡出射狹縫白光紅紫λ1λ2800600500400棱鏡單色器的缺點是色散率隨波長變化，得到的光譜呈非均勻排列，而且傳遞光的效率較低。3.2光柵在鍍鋁的玻璃表面刻有數(shù)量很大的等寬度等間距條痕(600、1200、2400條/mm)。原理：利用光通過光柵時發(fā)生衍射和干涉現(xiàn)象而分光.M1M2出射狹縫光屏透鏡平面透射光柵光柵衍射示意圖三、分光光度計的結(jié)構(gòu)之——單色器三、分光光度計的主要部件光柵:由大量等寬等間距的平行狹縫構(gòu)成的光學(xué)器件稱為光柵（grating）。精制的光柵，在1cm寬度內(nèi)刻有幾千條乃至上萬條刻痕。透射光柵，反射光柵。三、分光光度計的主要部件光柵:波長范圍寬,色散均勻,分辨性能好,使用方便。3.2光柵光柵單色器在整個光學(xué)光譜區(qū)具有良好的幾乎相同的色散能力。因此，現(xiàn)代紫外-可見分光光度計上多采用光柵單色器。四.吸收池(cell）用于盛待測及參比溶液。玻璃（Glass）—能吸收UV光，僅適用于可見光區(qū)石英（

Quartz）—不吸收紫外光，適用于紫外和可見光區(qū)要求：匹配性（對光的吸收和反射應(yīng)一致）玻璃吸收池360nm2.25mm石英吸收池200nm2.5mm吸收池的形狀可拆卸圓形測量池兩面透光圓形測量池兩面透光1cm長方形測量池兩面透光氣體測量池兩面透光微量測量池兩面透光流動測量池兩面透光吸收池的尺寸4.吸收池(cell）使用注意事項：1、選2、拿3、擦4、裝5、洗6、存5.檢測器(detector)檢測光信號，即將光信號轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘枴，F(xiàn)在使用的分光光度計大多采用光電管和光電倍增信號管以及光電二極管陣列作為檢測器光電池，光電管，光電倍增管，光二極管陣列5、檢測器之——硒光電池硒光電池5、檢測器之——光電倍增管1個光電子可產(chǎn)生106～107個電子5、檢測器之——CCD光二極管陣列檢測器光源碘鎢燈氘燈單色器測量池CCD檢測器數(shù)據(jù)處理和儀器控制5.指示器（顯示器）

低檔儀器：刻度顯示或液晶面板顯示中高檔儀器：數(shù)字顯示，自動掃描記錄；可由計算機反控四、分光光度計的類型chopper四、分光光度計的類型——單光束優(yōu)點：簡單，價廉，適于在給定波長處測量吸光度或透光度。缺點：一般不能作全波段光譜掃描，要求光源和檢測器具有很高的穩(wěn)定性。單光束分光光度計應(yīng)用在非掃描型（單光束）的紫外-可見分光光度計上，人工繪制吸光物質(zhì)的UV-VIS吸收光譜過程中需要注意的事項：

改變波長都要用參比溶液調(diào)節(jié)T=100%；固定光譜通帶與儀器參數(shù)；選擇合適的溶液濃度與參比。四、分光光度計的類型——雙光束四、分光光度計的類型——雙光束2.雙光束優(yōu)點：自動記錄，快速全波段掃描?？上庠床环€(wěn)定、檢測器靈敏度變化等因素的影響，特別適合于結(jié)構(gòu)分析。缺點：儀器復(fù)雜，價格較高。

將不同波長的兩束單色光(λ1、λ2)快束交替通過同一吸收池而后到達(dá)檢測器。產(chǎn)生交替信號。無需參比池。△

=1～2nm。兩波長同時掃描即可獲得導(dǎo)數(shù)光譜。光源檢測器單色器單色器切光器吸收池雙波長分光光度計示意圖四、分光光度計的類型——雙波長雙波長分光光度計

優(yōu)點：可以測定較高濃度的樣品溶液；利用吸光度差值定量可以扣除背景吸收（樣品池、渾濁等）；比切光器的頻率慢的光源、檢測器的波動不影響；導(dǎo)數(shù)吸收光譜曲線（

=1～2nm)。優(yōu)點：⑴利用吸光度差值定量：△A＝（ελ1－ελ2）cb；⑵消除干擾和吸收池不匹配引起的誤差（即可以扣除背景吸收）；

⑶可以測定較高濃度的樣品溶液。四、分光光度計的類型——雙波長雙波長分紫外-可見吸收光譜紫外可見分光光度計（單光束）上海精科UV759紫外-可見分光光度計