儀器分析培訓(xùn)教學(xué)課件：紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)

一、光度分析的幾種方法二、光電比色法三.分光光度計(jì)的組成四、分光光度計(jì)的類型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)第二單元：紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)學(xué)習(xí)要求了解光度分析方法的發(fā)展了解和掌握分光光度計(jì)的主要部件了解和掌握分光光度計(jì)的主要類型及其分析特點(diǎn)方便、靈敏，準(zhǔn)確度差。1.目視比色法c4c3c2c1c1c2c3c4一、光度分析的幾種方法二、光電比色法(colorimetry)

通過(guò)濾光片得一束窄范圍的光(>10nm)光電比色計(jì)結(jié)構(gòu)示意圖靈敏度和準(zhǔn)確度較差三.分光光度計(jì)的組成美國(guó)PE紫外--可見(jiàn)分光光度計(jì)光源單色器樣品室檢測(cè)器顯示分光光度計(jì)的基本部件光源碘鎢燈氘燈單色器測(cè)量池參比池樣品池光電倍增管數(shù)據(jù)處理和儀器控制光路示意圖三.分光光度計(jì)的組成三、分光光度計(jì)的主要部件1.光源：發(fā)出所需波長(zhǎng)范圍內(nèi)的連續(xù)光譜，有足夠的光強(qiáng)度,穩(wěn)定。可見(jiàn)光區(qū)：鎢燈，碘鎢燈(320～2500nm)紫外區(qū)：氫燈，氘燈(180～375nm)三、分光光度計(jì)的主要部件2.單色器：將光源發(fā)出的連續(xù)光譜分解為單色光的裝置。棱鏡:玻璃350～3200nm,石英185～4000nm光柵:波長(zhǎng)范圍寬,色散均勻,分辨性能好,使用方便三、分光光度計(jì)的主要部件棱鏡:玻璃350～3200nm,石英185～4000nm三、分光光度計(jì)的結(jié)構(gòu)之——單色器3.1棱鏡：依據(jù)不同波長(zhǎng)光通過(guò)棱鏡時(shí)折射率不同入射狹縫準(zhǔn)直透鏡棱鏡聚焦透鏡出射狹縫白光紅紫λ1λ2800600500400棱鏡單色器的缺點(diǎn)是色散率隨波長(zhǎng)變化，得到的光譜呈非均勻排列，而且傳遞光的效率較低。3.2光柵在鍍鋁的玻璃表面刻有數(shù)量很大的等寬度等間距條痕(600、1200、2400條/mm)。原理：利用光通過(guò)光柵時(shí)發(fā)生衍射和干涉現(xiàn)象而分光.M1M2出射狹縫光屏透鏡平面透射光柵光柵衍射示意圖三、分光光度計(jì)的結(jié)構(gòu)之——單色器三、分光光度計(jì)的主要部件光柵:由大量等寬等間距的平行狹縫構(gòu)成的光學(xué)器件稱為光柵（grating）。精制的光柵，在1cm寬度內(nèi)刻有幾千條乃至上萬(wàn)條刻痕。透射光柵，反射光柵。三、分光光度計(jì)的主要部件光柵:波長(zhǎng)范圍寬,色散均勻,分辨性能好,使用方便。3.2光柵光柵單色器在整個(gè)光學(xué)光譜區(qū)具有良好的幾乎相同的色散能力。因此，現(xiàn)代紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)上多采用光柵單色器。四.吸收池(cell）用于盛待測(cè)及參比溶液。玻璃（Glass）—能吸收UV光，僅適用于可見(jiàn)光區(qū)石英（

Quartz）—不吸收紫外光，適用于紫外和可見(jiàn)光區(qū)要求：匹配性（對(duì)光的吸收和反射應(yīng)一致）玻璃吸收池360nm2.25mm石英吸收池200nm2.5mm吸收池的形狀可拆卸圓形測(cè)量池兩面透光圓形測(cè)量池兩面透光1cm長(zhǎng)方形測(cè)量池兩面透光氣體測(cè)量池兩面透光微量測(cè)量池兩面透光流動(dòng)測(cè)量池兩面透光吸收池的尺寸4.吸收池(cell）使用注意事項(xiàng)：1、選2、拿3、擦4、裝5、洗6、存5.檢測(cè)器(detector)檢測(cè)光信號(hào)，即將光信號(hào)轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?hào)?，F(xiàn)在使用的分光光度計(jì)大多采用光電管和光電倍增信號(hào)管以及光電二極管陣列作為檢測(cè)器光電池，光電管，光電倍增管，光二極管陣列5、檢測(cè)器之——硒光電池硒光電池5、檢測(cè)器之——光電倍增管1個(gè)光電子可產(chǎn)生106～107個(gè)電子5、檢測(cè)器之——CCD光二極管陣列檢測(cè)器光源碘鎢燈氘燈單色器測(cè)量池CCD檢測(cè)器數(shù)據(jù)處理和儀器控制5.指示器（顯示器）

低檔儀器：刻度顯示或液晶面板顯示中高檔儀器：數(shù)字顯示，自動(dòng)掃描記錄；可由計(jì)算機(jī)反控四、分光光度計(jì)的類型chopper四、分光光度計(jì)的類型——單光束優(yōu)點(diǎn)：簡(jiǎn)單，價(jià)廉，適于在給定波長(zhǎng)處測(cè)量吸光度或透光度。缺點(diǎn)：一般不能作全波段光譜掃描，要求光源和檢測(cè)器具有很高的穩(wěn)定性。單光束分光光度計(jì)應(yīng)用在非掃描型（單光束）的紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)上，人工繪制吸光物質(zhì)的UV-VIS吸收光譜過(guò)程中需要注意的事項(xiàng)：

改變波長(zhǎng)都要用參比溶液調(diào)節(jié)T=100%；固定光譜通帶與儀器參數(shù)；選擇合適的溶液濃度與參比。四、分光光度計(jì)的類型——雙光束四、分光光度計(jì)的類型——雙光束2.雙光束優(yōu)點(diǎn)：自動(dòng)記錄，快速全波段掃描?？上庠床环€(wěn)定、檢測(cè)器靈敏度變化等因素的影響，特別適合于結(jié)構(gòu)分析。缺點(diǎn)：儀器復(fù)雜，價(jià)格較高。

將不同波長(zhǎng)的兩束單色光(λ1、λ2)快束交替通過(guò)同一吸收池而后到達(dá)檢測(cè)器。產(chǎn)生交替信號(hào)。無(wú)需參比池?！?/p>

=1～2nm。兩波長(zhǎng)同時(shí)掃描即可獲得導(dǎo)數(shù)光譜。光源檢測(cè)器單色器單色器切光器吸收池雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)示意圖四、分光光度計(jì)的類型——雙波長(zhǎng)雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)

優(yōu)點(diǎn)：可以測(cè)定較高濃度的樣品溶液；利用吸光度差值定量可以扣除背景吸收（樣品池、渾濁等）；比切光器的頻率慢的光源、檢測(cè)器的波動(dòng)不影響；導(dǎo)數(shù)吸收光譜曲線（

=1～2nm)。優(yōu)點(diǎn)：⑴利用吸光度差值定量：△A＝（ελ1－ελ2）cb；⑵消除干擾和吸收池不匹配引起的誤差（即可以扣除背景吸收）；

⑶可以測(cè)定較高濃度的樣品溶液。四、分光光度計(jì)的類型——雙波長(zhǎng)雙波長(zhǎng)分紫外-可見(jiàn)吸收光譜紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（單光束）上海精科UV759紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)