糞便標(biāo)本中腸道致病菌的的分離鑒定

實(shí)驗(yàn)十糞便標(biāo)本中腸道致病菌的的分離鑒定實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵?、掌握膿汁標(biāo)本中常見(jiàn)病原菌分離和鑒定方法2、掌握藥物敏感試驗(yàn)3、掌握腸道桿菌分離和鑒定的一般步驟4.熟悉腸道桿菌鑒定生化反應(yīng)和血清學(xué)反應(yīng)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容一、膿汁標(biāo)本中未知病原菌的分離和鑒定二、糞便標(biāo)本中腸道致病菌的分離和鑒定一、標(biāo)本中未知病原性球菌

的分離鑒定程序

直接涂片染色鏡檢:觀察細(xì)菌形態(tài)、排列、染色性觀察菌落性狀、溶血性、色素血瓊脂平板涂片、染色、鏡檢挑取可疑菌落生化反應(yīng)測(cè)定純培養(yǎng)致病性測(cè)定（甘露醇、凝固酶等）標(biāo)本血液腦脊液肉湯增菌培養(yǎng)涂片染色鏡檢二、標(biāo)本中未知腸道感染細(xì)菌

的分離鑒定程序

標(biāo)本膿血便、肛拭子選擇/鑒別培基生化反應(yīng)血清學(xué)鑒定克氏雙糖鐵培養(yǎng)基,動(dòng)力-靛基質(zhì)-尿素半固體瓊脂培養(yǎng)基玻片凝集試驗(yàn)SS平板,EMB平板設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)臨床標(biāo)本中病原菌的分離與鑒定設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)1.膿汁標(biāo)本：膿拭子培養(yǎng)基：血瓊脂平板其他：3%H2O2.（兔血漿）、生理鹽水、革蘭染液、玻片等2.痰標(biāo)本：咽拭子培養(yǎng)基：血瓊脂平板其他：生理鹽水、10%膽鹽、革蘭染液、玻片等3.尿標(biāo)本:尿液培養(yǎng)基:伊紅美蘭瓊脂平板、克氏雙糖鐵斜面培養(yǎng)基、動(dòng)力-靛基質(zhì)-尿素半固體瓊脂培養(yǎng)基其他:革蘭染液、靛基質(zhì)試劑、玻片等4.糞便標(biāo)本:肛門(mén)拭子培養(yǎng)基:伊紅美蘭瓊脂平板、克氏雙糖鐵斜面培養(yǎng)基、動(dòng)力-靛基質(zhì)-尿素半固體瓊脂培養(yǎng)基其他:生理鹽水、靛基質(zhì)試劑、沙門(mén)菌多價(jià)血清、志賀菌多價(jià)血清、玻片等膿拭子

分離培養(yǎng)（血平板）革蘭染色革蘭染色觸酶實(shí)驗(yàn)甘露醇實(shí)驗(yàn)方法:1、分離培養(yǎng)、觀察菌落特征：濃汁標(biāo)本，用分離劃線方法接種血平板，37℃培養(yǎng)18-24h以后觀察結(jié)果。重點(diǎn)：色素和溶血現(xiàn)象2.革蘭染色、觀察形態(tài)學(xué)特征：取可疑菌落少許涂片，革蘭染色、鏡檢。結(jié)果觀察1、菌落觀察2.形態(tài)學(xué)觀察（二）生化反應(yīng)

觸酶試驗(yàn):

(-)(+)H2o2H2oo2氧化氫酶+菌種:可疑菌落試劑:3%過(guò)氧化氫方法:見(jiàn)右圖結(jié)果:見(jiàn)右圖甘露醇實(shí)驗(yàn)甘露醇生化反應(yīng)管藥敏實(shí)驗(yàn)濃汁標(biāo)本可疑菌生長(zhǎng)現(xiàn)象及生化反應(yīng)結(jié)果觀察形態(tài)學(xué)特征血平板生長(zhǎng)現(xiàn)象觸酶試驗(yàn)甘露醇試驗(yàn)結(jié)論:現(xiàn)象與論點(diǎn)、論據(jù)濃汁標(biāo)本可疑菌藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果藥品名稱(chēng)抑菌圈直徑結(jié)論:咽拭子革蘭染色革蘭染色膽汁溶菌試驗(yàn)奧普托辛試驗(yàn)

莢膜染色（石炭酸復(fù)紅單染）

分離培養(yǎng)（血平板）？糞便標(biāo)本SS平板克氏雙糖鐵斜面培養(yǎng)基動(dòng)力-半固體培養(yǎng)基生化反應(yīng)管觀察結(jié)果糖發(fā)酵試驗(yàn)玻片凝集試驗(yàn)革蘭染色H2S試驗(yàn)?zāi)蛞弘x心沉淀1500轉(zhuǎn),10分鐘

分離培養(yǎng)（EMB平板）革蘭染色革蘭染色克氏雙糖鐵斜面培養(yǎng)基動(dòng)力-靛基質(zhì)-尿素半固體瓊脂培養(yǎng)基觀察結(jié)果觀察結(jié)果觀察結(jié)果完成靛基質(zhì)試驗(yàn)方法:1、分離培養(yǎng)、觀察菌落特征：糞便標(biāo)本，用分離劃線方法接種SS平板培養(yǎng)基37℃培養(yǎng)18-24h以后觀察結(jié)果。重點(diǎn)：菌落顏色2.革蘭染色、觀察形態(tài)學(xué)特征：取可疑菌少許涂片，革蘭染色、鏡檢。（一）SS瓊脂平板（1）營(yíng)養(yǎng)物質(zhì):牛肉膏、蛋白胨（2）抑制劑:膽鹽、枸椽酸鹽、煌綠等，抑制非致病菌的生長(zhǎng)；但膽鹽能同時(shí)促進(jìn)病原菌的生長(zhǎng)。（3）鑒別用糖:乳糖（4）指示劑:中性紅（5）原理:腸道桿菌均能分解葡萄糖產(chǎn)酸，但大多數(shù)非致病菌又能分解乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，而致病菌不分解乳糖。據(jù)此，在培養(yǎng)基中加入乳糖和指示劑，制成鑒別培養(yǎng)基。中性紅為指示劑，酸性時(shí)呈現(xiàn)紅色，堿性時(shí)呈淡黃色。

分離培養(yǎng)結(jié)果觀察1、菌落觀察2.形態(tài)學(xué)觀察SS平板生化反應(yīng)及動(dòng)力試驗(yàn)

可疑菌落單糖發(fā)酵試驗(yàn)（葡萄糖、乳糖生化反應(yīng)管）可疑菌落H2S試驗(yàn)藥敏實(shí)驗(yàn)?zāi)磻?yīng)為一種血清學(xué)反應(yīng)。顆粒性抗原（完整的病原微生物或紅細(xì)胞等）與相應(yīng)抗體結(jié)合,在有電介質(zhì)存在的條件下,經(jīng)過(guò)一定時(shí)間,出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的凝集小塊。參與凝集反應(yīng)的抗原稱(chēng)為凝集原,抗體稱(chēng)為凝集素?？煞譃橹苯幽磻?yīng)和間接凝集反應(yīng)兩類(lèi)。（一）實(shí)驗(yàn)原理1.直接凝集反應(yīng)（原理）顆粒狀抗原（如細(xì)菌、紅細(xì)胞等）與相應(yīng)抗體直接結(jié)合所出現(xiàn)的凝集現(xiàn)象。分為玻片法和試管法。（1）玻片法是一種定性試驗(yàn)方法?？捎靡阎贵w來(lái)檢測(cè)未知抗原。若鑒定新分離的菌種時(shí),可取已知抗體滴加在玻片上,將待檢菌液一滴與其混勻。數(shù)分種后,如出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的凝集現(xiàn)象,為陽(yáng)性反應(yīng)。該法簡(jiǎn)便快速,除鑒定菌種外,尚可用于菌種分型、測(cè)定人類(lèi)紅細(xì)胞的ABO血型等。腸道桿菌的血清學(xué)試驗(yàn)（玻片凝集試驗(yàn)）材料1.菌種:可疑菌落2.志賀菌標(biāo)準(zhǔn)診斷血清、載玻片、生理鹽水方法血清生理鹽水（三）方法（細(xì)菌菌型測(cè)定）1.取一塊清潔載玻片，用記號(hào)筆劃上記號(hào)，在一側(cè)滴加標(biāo)準(zhǔn)的診斷血清一滴,另一側(cè)滴加一滴生理鹽水。2.用接種環(huán)無(wú)菌操作取適量的待測(cè)細(xì)菌,分別與標(biāo)準(zhǔn)診斷血清和生理鹽水混均。3.靜置室溫下數(shù)分鐘后，在白色背景下肉眼觀察，也可顯微鏡觀察。注意事項(xiàng):（1）生理鹽水、診斷血清要適量；（2）待檢菌為腸道致病菌，注意無(wú)菌操作，玻片用后放入消毒缸內(nèi)；（3）用接種環(huán)取待檢菌時(shí)，不要挑取瓊脂；待檢菌與生理鹽水、診斷血清