DB22T 394.2-2017 保健用品微生物檢驗方法 第2部分：耐熱大腸菌群測定　　

備案號：58310-2018DB22DB22/T394.2—2017保健用品微生物檢驗方法第2部分：耐熱大腸菌群測定MicrobiologicalexaminemethodforhealthcarematerialPart2:Determinationofthermotolerantcoliformbacteria吉林省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布I本部分代替DB22/T394-2004《1警示——使用本標(biāo)準(zhǔn)的人員應(yīng)有正規(guī)實驗室工作的實踐經(jīng)驗。本標(biāo)準(zhǔn)并未指出所有可能的安全問耐熱大腸菌群thermotolerantcolif4.1滅菌生理鹽水:詳見附錄A.1。25.6無菌錐形瓶：100mL、26.2.1供檢驗樣品，應(yīng)嚴(yán)格保持原有的包裝狀態(tài)。容器不應(yīng)有破裂，在檢驗前不得6.2.2接到樣品后，應(yīng)立即登記，編寫檢驗序號，并按檢驗要求盡快檢驗。如不能6.2.3若只有一個樣品而同時需做多種分析，如微生物、毒理、化學(xué)等，則宜先取6.2.4在檢驗過程中，從打開包裝到全部檢驗操作結(jié)束，均須防止微生物的再污染水溶性液體樣品，用滅菌吸管吸取10mL加到90mL（5.4油性液體樣品，取樣品10g，先加5mL滅菌液體石蠟（4.2）混勻，再加10mL在40℃~44℃水浴中（5.5）振蕩混合10min，加入滅菌的生理鹽水75mL（在40℃~44℃水浴中預(yù)溫在40℃~44℃水浴中乳化，制成1:10的懸液。親水性的樣品，稱取10g，加到裝有玻璃珠及90mL滅菌生理鹽水的三角燒瓶（5.6）3疏水性樣品，稱取10g，放到滅菌的研缽（5.7）中，加10mL滅菌液體石蠟，研磨成粘稠狀再加入10mL滅菌吐溫-80，研磨待溶解后，加70mL滅菌生理鹽水，在40℃~44℃水浴中充分混合，制成稱取10g，加到90mL滅菌生理鹽水中，充分振蕩（5.8）混勻，使其分散混懸，靜置后，取上清養(yǎng)箱(5.9)中培養(yǎng)24h，如既不產(chǎn)酸也不產(chǎn)氣，繼續(xù)培養(yǎng)至48h，如仍既不產(chǎn)酸也不產(chǎn)氣，則報如產(chǎn)酸產(chǎn)氣，劃線(5.10)接種到伊紅美藍(lán)瓊脂平板(4.5)上取該培養(yǎng)液1滴～2滴(5.11)接種到蛋經(jīng)培養(yǎng)后,在上述平板上觀察有無典型菌落生長。耐熱大腸菌群在伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基上的典挑取上述可疑菌落，涂片作革蘭氏染色(4.745試劑或材料A.1.1成分A.1.2制法A.4乳糖膽鹽培養(yǎng)基A.4.1成分A.4.2制法將蛋白胨、膽鹽及乳糖溶解于蒸餾水中，調(diào)pH至7.4，加入指示劑，混勻，分裝試管（每支試管中6A.5.2制法先將瓊脂加到900mL蒸餾水中，加熱溶解，然后加入磷酸氫以蒸餾水補足至1000mL。校正pH為7.2～7.4，分裝于三角瓶內(nèi)，121℃高壓滅菌1A.6.1成分A.6.2制法將上述成分加熱融化，調(diào)pH為7.0～7.2，分裝小試管，121℃高壓滅碘A.7.1.4復(fù)染液:7