《糧油檢驗(yàn) 苦杏仁苷含量的測(cè)定 高效液相色譜法》

1LS/T6151—2024糧油檢驗(yàn)苦杏仁苷含量的測(cè)定高效液相色譜法本文件描述了高效液相色譜法測(cè)定苦杏仁苷含量的扦樣、試樣制備、操作步驟、結(jié)果表示和精密度。本文件適用于植物油料、餅粕及植物油中苦杏仁苷含量的測(cè)定。本方法在油料中苦杏仁苷的檢出限分別為40mg/kg,定量限80mg/kg;在植物油中苦杏仁苷的檢出限80mg/kg,定量限160mg/kg;在餅粕中苦杏仁苷的檢出限為2mg/kg,定量限4mg/kg。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T5491糧食、油料檢驗(yàn)扦樣、分樣法GB/T5524動(dòng)植物油脂扦樣GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB/T15687動(dòng)植物油脂試樣的制備3術(shù)語(yǔ)和定義本文件沒(méi)有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。4原理樣品經(jīng)甲醇提取后，采用高效液相色譜分離，在波長(zhǎng)210nm條件下測(cè)定苦杏仁苷含量，外標(biāo)法定量。5試劑除非另有說(shuō)明，所用試劑均為分析純(AR),水應(yīng)符合GB/T6682中一級(jí)水的規(guī)定。5.2甲醇-水混合液(20+80,體積比):取20mL甲醇加入80mL水，混勻。5.3石油醚：沸程30℃~60℃。5.4苦杏仁苷標(biāo)準(zhǔn)品：純度≥98%。5.5苦杏仁苷標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(500μg/mL):準(zhǔn)確稱取25.0mg(精確至0.0001g)苦杏仁苷標(biāo)準(zhǔn)品(5.4)置于50mL容量瓶中，用甲醇(5.1)溶解并定容，搖勻，保存于4℃,根據(jù)每次用量分裝備用，有效期1個(gè)月。2LS/T6151—20246儀器和設(shè)備7.2植物油扦樣按GB/T5524執(zhí)行。8試樣制備9操作步驟心管置于超聲波發(fā)生器(6.5)中，底部樣品重懸后，開(kāi)始計(jì)時(shí)30min(期間每隔10min水平振蕩1次)3LS/T6151—20249.2餅粕樣品：準(zhǔn)確稱取0.1g～0.4g(精確至0.0001g)粉碎的樣品于50mL離心管(6.4)中，用移液管準(zhǔn)確加入20.0mL甲醇(5.1),蓋塞，按8.1“將離心管置于超聲波發(fā)生器(6.5)中，底部樣品重懸后，……待上機(jī)分析”操作。9.3植物油樣品：準(zhǔn)確稱取植物油樣品1.0g(精確至0.0001g)于10mL離心管(6.9)中，加入3mL甲醇(5.1),渦旋1min后，放入超聲波發(fā)生器(6.5)中超聲20min(隔10min上下振蕩1次),4000r/min離心10min后，將提取上清液轉(zhuǎn)移至5mL容量瓶中，再在樣品中加入1mL甲醇(5.1),猛烈振搖30s后，放入超聲波發(fā)生器(6.5)中超聲10min,4000r/min離心10min,將上清液并入之前的提取液中，再加入1mL甲醇(5.1),猛烈振搖30s后，再重復(fù)提取1次。將3次甲醇提取液合并于5mL容量瓶中，并定容至刻線后，混勻。準(zhǔn)確吸取提取液1.0mL于5mL離心管(6.9)中，再準(zhǔn)確加入1.0mL甲醇-水混合液(5.2)稀釋混勻(如出現(xiàn)乳濁，屬正?，F(xiàn)象),用微孔濾頭(6.10)過(guò)濾至澄清后，轉(zhuǎn)移至進(jìn)樣瓶中，待上機(jī)分析。9.4色譜參考條件色譜參考條件如下。a)色譜柱：C18柱(250mm×4.6mm,5μm)或性能相當(dāng)者。b)流動(dòng)相：甲醇-水混合液(5.2)。d)柱溫：30℃。e)檢測(cè)器：檢測(cè)波長(zhǎng)210nm。苦杏仁苷標(biāo)準(zhǔn)色譜圖見(jiàn)附錄A。9.5測(cè)定9.5.1標(biāo)準(zhǔn)曲線將苦杏仁苷標(biāo)準(zhǔn)工作溶液(5.6)依次由低質(zhì)量濃度至高質(zhì)量濃度注入高效液相色譜儀中進(jìn)行分析，記錄峰面積，以苦杏仁苷峰面積為縱坐標(biāo)，以苦杏仁苷質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。9.5.2樣品測(cè)定將樣品待測(cè)溶液注入高效液相色譜儀中進(jìn)行分析，記錄峰面積，根據(jù)樣品測(cè)試溶液的峰面積與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較，計(jì)算出樣品測(cè)試溶液中苦杏仁苷的質(zhì)量濃度。如果樣品測(cè)試溶液的峰面積超出標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍，應(yīng)適當(dāng)稀釋濾液，重新進(jìn)行測(cè)定。9.5.3空白試驗(yàn)除不加試樣外，根據(jù)樣品類型采用相同的操作步驟做空白試驗(yàn)。10結(jié)果表示試樣中苦杏仁苷含量(X)>0.1%時(shí)，以質(zhì)量分?jǐn)?shù)表示，按式(1)計(jì)算：…………(1)4LS/T6151—式中：XpPoNm——樣品中苦杏仁苷含量，%; ——試樣提取液的體積，單位為毫升(mL);——濾液(提取液)的稀釋倍數(shù)；——試樣質(zhì)量，單位為克(g);100、1000000——單位換算常數(shù)。計(jì)算結(jié)果保留小數(shù)點(diǎn)后兩位。試樣中苦杏仁苷含量(X)≤0.1%時(shí)，以mg/kg表示，按式(2)計(jì)算：式中：…………X——樣品中苦杏仁苷含量，單位為毫克每千克(mg/kg);p——從標(biāo)準(zhǔn)工作曲線得到的待測(cè)液中苦杏仁苷的質(zhì)量濃度，單位為微克每毫升(μg/mL);po——從標(biāo)準(zhǔn)工作曲線得到的空白液中苦杏仁苷的質(zhì)量濃度，單位為微克每毫升(μg/mL);V——試樣提取液的體積，單位為毫升(mL);N——濾液(提取液)的稀釋倍數(shù)；m——試樣質(zhì)量，單位為克(g);1000——單位換算常數(shù)。計(jì)算結(jié)果保留小數(shù)點(diǎn)后一位。11精密度11.1重復(fù)性在重復(fù)條件下獲得的兩個(gè)獨(dú)立測(cè)試結(jié)果的絕對(duì)差值大于重復(fù)性限(r)的情況不超過(guò)5%?？嘈尤受蘸康闹貜?fù)性限(r)見(jiàn)附錄B。11.2再現(xiàn)性在再現(xiàn)性條件下獲得的兩個(gè)獨(dú)立測(cè)試結(jié)果的絕對(duì)差值大于再現(xiàn)性限(R)的情況不超過(guò)5%?？嘈尤受蘸康脑佻F(xiàn)性限(R)見(jiàn)附錄B。5LS/T6151—2024(資料性)苦杏仁苷標(biāo)準(zhǔn)色譜圖苦杏仁苷標(biāo)準(zhǔn)色譜圖見(jiàn)圖A.1。圖A.1苦杏仁苷標(biāo)準(zhǔn)色譜圖6LS/T6151—2024(資料性)實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)結(jié)果組織10家實(shí)驗(yàn)室對(duì)8個(gè)不同樣品進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)試驗(yàn)，建立了本方法的精密度。結(jié)果按GB/T6379.1和GB/T6379.2統(tǒng)計(jì)分析，統(tǒng)計(jì)結(jié)果見(jiàn)表B.1。表B.1實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)結(jié)果樣品編號(hào)12345678實(shí)驗(yàn)室數(shù)目參加統(tǒng)計(jì)實(shí)驗(yàn)室數(shù)目8離群實(shí)驗(yàn)室數(shù)目00200000平均值4.56%2.71%0.12%6.18%3.28%<檢出限72.7mg/kg143.6mg/kg重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)偏差S,0.150.080.0040.170.10 重復(fù)性限r(nóng)0.430.230.010.460.29重復(fù)性變異系數(shù)/%2.68 再現(xiàn)性標(biāo)準(zhǔn)偏差SR0.250.130.020.310.35再現(xiàn)性限R0.710.360.050