微生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù) 課件 19項目十九：病原性球菌鑒定

項目十九病原性球菌鑒定學(xué)習(xí)目標(biāo)1.掌握葡萄球菌屬、鏈球菌屬、奈瑟菌屬的主要生物學(xué)特性、微生物學(xué)檢驗(yàn)方法及鑒定依據(jù)。2.熟悉腸球菌屬主要生物學(xué)特性、微生物學(xué)檢驗(yàn)方法及鑒定依據(jù)。3.了解常見病原性球菌的臨床意義。4.具有正確采集和處理常見病原性球菌檢驗(yàn)標(biāo)本及進(jìn)行相關(guān)檢測的能力。5.能正確選擇試驗(yàn)項目對常見病原性球菌進(jìn)行檢驗(yàn)，能正確判斷和分析試驗(yàn)結(jié)果并發(fā)出檢驗(yàn)報告。項目十九病原性球菌鑒定思維導(dǎo)圖項目十九病原性球菌鑒定項目十九病原性球菌鑒定概述又稱化膿性球菌革蘭陽性球菌：葡萄球菌屬、鏈球菌屬、腸球菌屬

革蘭陰性球菌：腦膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌球形，無鞭毛，無芽胞一、葡萄球菌屬項目十九病原性球菌鑒定1.形態(tài)與染色：革蘭染色陽性球菌，葡萄串狀排列。一、葡萄球菌屬（一）生物學(xué)特性葡萄球菌顯微鏡下形態(tài)特征葡萄球菌電鏡下形態(tài)特征2.培養(yǎng)特性：(1)營養(yǎng)要求不高。(2)可產(chǎn)生脂溶性色素，如金黃色、白色、檸檬色色素等。(3)金葡菌在血平板上形成β-溶血的菌落。(4)某些菌株耐鹽性強(qiáng)，能在含10%～15%NaCl的培養(yǎng)基中生長。一、葡萄球菌屬（一）生物學(xué)特性金葡在普瓊上菌落形態(tài)特征金葡在血平板上菌落形態(tài)特征金葡在血平板上產(chǎn)生β-溶血一、葡萄球菌屬（一）生物學(xué)特性表葡在普瓊上產(chǎn)生白色色素表葡在血平板上產(chǎn)生白色色素3.生化反應(yīng)：觸酶陽性，能分解多種糖類如葡萄糖、麥芽糖和蔗糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。致病菌株可分解甘露醇產(chǎn)酸，產(chǎn)生血漿凝固酶，耐熱DNA酶陽性。一、葡萄球菌屬（一）生物學(xué)特性一、葡萄球菌屬（一）生物學(xué)特性甘露醇分解試驗(yàn)新生霉素敏感試驗(yàn)血漿凝固酶試驗(yàn)DNA酶試驗(yàn)4.抗原構(gòu)造

（1）蛋白質(zhì)抗原：主要為葡萄球菌A蛋白（staphylococcalproteinA，SPA），SPA可與人類IgG的Fc段非特異性結(jié)合，而不影響Fab段與特異性抗原結(jié)合，故可作為載體，結(jié)合特異性抗體后，通過協(xié)同凝集試驗(yàn)檢測多種微生物抗原。（2）多糖類抗原：屬于半抗原，具有型特異性，存在于細(xì)胞壁中，是金黃色葡萄球菌的一種重要抗原。一、葡萄球菌屬（一）生物學(xué)特性5.分類：色素、生化反應(yīng)一、葡萄球菌屬（一）生物學(xué)特性

性狀金黃色葡萄球菌表皮葡萄球菌腐生葡萄球菌色素金黃色白色白色或檸檬色發(fā)酵甘露醇+--凝固酶+--耐熱核酸酶+--致病性+--α溶素+--6.抵抗力：無芽胞細(xì)菌中抵抗力最強(qiáng)的一種，耐熱、耐干燥，耐鹽性強(qiáng)，能在含10%～15%NaCl瓊脂中生長。5％石炭酸、0.1％升汞中10～15min死亡。對青霉素、金霉素、紅霉素等敏感，該菌易產(chǎn)生耐藥性。耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)已成為醫(yī)院感染最常見的致病菌。一、葡萄球菌屬（一）生物學(xué)特性1.主要致病物質(zhì)：（1）酶類：凝固酶、耐熱核酸酶、透明質(zhì)酸酶、磷脂酶等。（2）毒素：葡萄球菌溶素、腸毒素、殺白細(xì)胞素、毒性休克綜合征毒素、表皮剝脫毒素2.所致疾病：（1）侵襲性疾?。?）毒素性疾病（3）醫(yī)院感染一、葡萄球菌屬（二）臨床意義1.標(biāo)本采集：根據(jù)葡萄球菌感染所致的疾病不同，可采集膿液、滲出液、傷口分泌物、血液、糞便、痰液以及腦脊液等。食物中毒采集糞便、嘔吐物或剩余的食物。一、葡萄球菌屬（三）微生物學(xué)檢驗(yàn)2.檢驗(yàn)程序一、葡萄球菌屬（三）微生物學(xué)檢驗(yàn)3.檢驗(yàn)方法（1）直接鏡檢：找到革蘭陽性球菌，呈葡萄串狀排列，疑為葡萄球菌

（2）分離培養(yǎng)：血液標(biāo)本增菌培養(yǎng)，有菌生長轉(zhuǎn)種血平板進(jìn)一步鑒定；膿液、分泌物、尿液等標(biāo)本直接接種血平板；糞便、嘔吐物，接種高鹽甘露醇平板。

（3）鑒定：1）觸酶試驗(yàn)：葡萄球菌屬陽性，鏈球菌屬為陰性。2）血漿凝固酶試驗(yàn)：金黃色葡萄球菌陽性。3）甘露醇發(fā)酵試驗(yàn)：金黃色葡萄球菌為陽性。4）新生霉素敏感試驗(yàn)：腐生葡萄球菌（R），表皮葡萄球菌（S）。5）腸毒素檢測一、葡萄球菌屬（三）微生物學(xué)檢驗(yàn)一、葡萄球菌屬（三）微生物學(xué)檢驗(yàn)金黃色葡萄球菌（S）

表皮葡萄球菌（S）

腐生葡萄球菌（R）

新生霉素敏感試驗(yàn)一、葡萄球菌屬（三）微生物學(xué)檢驗(yàn)表19-1葡萄球菌屬與微球菌屬的鑒別要點(diǎn)鑒定項目葡萄球菌屬微球菌屬形態(tài)、排列球菌以葡萄狀排列為主球菌以四聯(lián)排列為主發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸＋－桿菌肽（0.04u/片）+－呋喃唑酮（100ug/片）－+一、葡萄球菌屬（三）微生物學(xué)檢驗(yàn)表19-2葡萄球菌屬與鏈球菌屬、奈瑟菌屬的鑒別要點(diǎn)鑒定項目葡萄球菌屬鏈球菌屬奈瑟菌屬革蘭染色G＋球菌G＋球菌G－球菌觸酶＋－＋氧化酶－－＋一、葡萄球菌屬（三）微生物學(xué)檢驗(yàn)表19-3常見有臨床意義的4種葡萄球菌的鑒別要點(diǎn)菌名血漿凝固酶耐熱DNA酶脲酶甘露糖發(fā)酵新生霉素耐藥多粘菌素B耐藥金黃色葡萄球菌＋＋d＋－＋表皮葡萄球菌－－＋－－＋溶血葡萄球菌－－－－－－腐生葡萄球菌－－＋－＋－注：d：不定二、鏈球菌屬項目十九病原性球菌鑒定1.形態(tài)與染色：革蘭陽性球菌，鏈狀排列；肺炎鏈球菌呈矛尖狀，寬端相對，尖端向外，成雙排列。二、鏈球菌屬（一）生物學(xué)特性鏈球菌顯微鏡下形態(tài)特征鏈球菌電鏡下形態(tài)特征二、鏈球菌屬（一）生物學(xué)特性肺炎鏈球菌莢膜肺炎鏈球菌顯微鏡下形態(tài)特征2.培養(yǎng)特性(1)營養(yǎng)要求高，加入血液、血清或腹水等。(2)不同菌種在菌落周圍出現(xiàn)不同溶血現(xiàn)象。(3)肺鏈在血平板上臍窩狀菌落，周圍形成草綠色溶血環(huán)。二、鏈球菌屬（一）生物學(xué)特性肺鏈血平板上菌落形態(tài)肺鏈臍窩狀菌落3.生化反應(yīng)：（1）觸酶陰性（區(qū)別于葡萄球菌屬）（2）分解葡萄糖，不分解菊糖（3）A群：桿菌肽（S），PYR（+）（4）B群：CAMP（+），馬尿酸鈉（+）（5）D群：PYR（+），七葉苷（+）（6）甲鏈不分解菊糖，對Optochin耐藥；肺鏈分解菊糖，對Optochin敏感，膽鹽溶菌試驗(yàn)陽性，莢膜腫脹試驗(yàn)陽性。二、鏈球菌屬（一）生物學(xué)特性觸酶陰性（右）二、鏈球菌屬（一）生物學(xué)特性D群：七葉苷+（上）A群：桿菌肽（S）二、鏈球菌屬（一）生物學(xué)特性肺鏈：Optochin

（S）B群：CAMP+4.抗原構(gòu)造

（1）多糖抗原：具有群特異性，是細(xì)胞壁上的多糖成分。根據(jù)多糖抗原的不同，將鏈球菌分為20群，對人致病的90%為A群。（2）蛋白質(zhì)抗原：具有型特異性，位于C抗原表面，是細(xì)胞壁上的蛋白質(zhì)成分。與人類致病性有關(guān)的是M抗原，它是A群鏈球菌的主要致病物質(zhì)，還是引起超敏反應(yīng)性疾病的異嗜性抗原。（3）核蛋白抗原：無特異性，為各種鏈球菌所共有，并與葡萄球菌有交叉。二、鏈球菌屬（一）生物學(xué)特性5.分類：（1）根據(jù)溶血現(xiàn)象不同分為3類1）甲型溶血性鏈球菌2）乙型溶血性鏈球菌3）丙型鏈球菌（2）根據(jù)多糖抗原分類：Lancefield將乙型溶血型鏈球菌分成A～H、K～V等20群。二、鏈球菌屬（一）生物學(xué)特性6.抵抗力：本菌對外界抵抗力不強(qiáng)，60℃30min即可將其殺死，對常用消毒劑敏感。乙型溶血性鏈球菌對青霉素、紅霉素、四環(huán)素及磺胺類藥物敏感。二、鏈球菌屬（一）生物學(xué)特性1.主要致病物質(zhì)：（1）A群鏈球菌有較強(qiáng)的侵襲力，可產(chǎn)生多種外毒素和胞外酶。1）鏈球菌溶血素2）致熱外毒素3）M蛋白4）侵襲性酶（2）肺炎鏈球菌的致病物質(zhì)：主要依靠其莢膜的抗吞噬作用。2.所致疾病：（1）β-溶血鏈球菌：A群鏈球菌引起的疾病約占人類鏈球菌感染的90％。（2）α-溶血鏈球菌：主要包括肺炎鏈球菌、草綠色鏈球菌和D群鏈球菌部分菌株。二、鏈球菌屬（二）臨床意義1.標(biāo)本采集：根據(jù)不同病癥和體征采集不同標(biāo)本。膿汁、咽拭子、血液和痰液等標(biāo)本采集后2h內(nèi)運(yùn)到實(shí)驗(yàn)室，立即檢查和接種。對B群溶血性鏈球菌的檢查，用無菌棉簽采集第35～37w妊娠婦女的陰道分泌物，置于選擇性培養(yǎng)肉湯中孵育18～24h，再作分離培養(yǎng)。鏈球菌所致的超敏反應(yīng)性疾病，如風(fēng)濕熱、急性腎小球腎炎等，應(yīng)采集血清標(biāo)本進(jìn)行抗鏈球菌溶血毒素O抗體檢測。二、鏈球菌屬（三）微生物學(xué)檢驗(yàn)2.檢驗(yàn)方法（1）顯微鏡檢查：“查見革蘭陽性球菌，鏈狀排列，疑為鏈球菌”；或“查見革蘭陽性矛頭狀球菌，成雙排列，疑為肺炎鏈球菌”（2）分離培養(yǎng)1）血液等標(biāo)本增菌培養(yǎng)，有菌生長轉(zhuǎn)種血平板進(jìn)行分離培養(yǎng)。2）采用血平板培養(yǎng)有助于識別溶血特性和進(jìn)一步鑒定。（3）初步鑒定：取平板上菌落周圍呈現(xiàn)溶血或不溶血的單個菌落作涂片，如果為革蘭陽性球菌，鏈狀或短鏈狀排列，進(jìn)一步作觸酶試驗(yàn)陰性，6.5％NaCl不生長者，可確定為鏈球菌屬細(xì)菌。二、鏈球菌屬（三）微生物學(xué)檢驗(yàn)二、鏈球菌屬（三）微生物學(xué)檢驗(yàn)表19-5β溶血性鏈球菌鑒定表19-5β溶血性鏈球菌鑒定表19-5β溶血性鏈球菌鑒定Lancefield抗原群PYR桿菌肽敏感CAMPA群++－B群－－+C群－－－二、鏈球菌屬（三）微生物學(xué)檢驗(yàn)表19-5β溶血性鏈球菌鑒定表19-5β溶血性鏈球菌鑒定表19-6非β溶血鏈球菌鑒別

菌種α-溶血Optochin敏感膽汁溶菌試驗(yàn)?zāi)懼呷~苷試驗(yàn)肺炎鏈球菌＋S＋－草綠色鏈球菌＋R－－D群鏈球菌＋/－R－+二、鏈球菌屬（三）微生物學(xué)檢驗(yàn)表19-5β溶血性鏈球菌鑒定表19-5β溶血性鏈球菌鑒定表19-7草綠色鏈球菌群間鑒別菌群甘露醇山梨醇七葉苷VP精氨酸脲酶緩癥鏈球菌群------米勒鏈球菌群+/--+/-++-變異鏈球菌群++++--唾液鏈球菌群--＋+/--+/-三、腸球菌屬項目十九病原性球菌鑒定1.形態(tài)與染色：革蘭陽性球菌，呈單個、成雙或短鏈狀排列；無芽胞，無莢膜，大多數(shù)無鞭毛（某些菌種有稀疏鞭毛）。三、腸球菌屬（一）生物學(xué)特性2.培養(yǎng)特性：大多數(shù)菌株在10℃和45℃均能生長，營養(yǎng)要求高，在高鹽（6.5%NaCl）、高堿（pH9.6）、高膽汁（40%）培養(yǎng)基上能生長，此點(diǎn)可與鏈球菌鑒別。腸球菌鏡下形態(tài)2.培養(yǎng)特性：在血平板上可形成灰白色、不透明、表面光滑、直徑0.5～1.0mm大小的圓形菌落，不溶血或α-溶血，少數(shù)β-溶血。三、腸球菌屬（一）生物學(xué)特性

腸球菌在血平板上不溶血

腸球菌在血平板上α-溶血3.生化反應(yīng)：觸酶陰性，能分解多種糖類產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，多數(shù)腸球菌PYR試驗(yàn)陽性，膽汁七葉苷試驗(yàn)陽性。4.分類：腸球菌屬歸類鏈球菌科，在Lancefield血清分類上屬D群。臨床標(biāo)本分離的腸球菌多屬于腸球菌屬Ⅱ群，分離率最高的是糞腸球菌，其次是屎腸球菌。5.抵抗力：腸球菌抵抗力較弱，但對大多數(shù)常用的抗菌藥物呈天然耐藥，第三代頭孢菌素類對其無效。三、腸球菌屬（一）生物學(xué)特性1.主要致病物質(zhì)：（1）表面黏附素：主要包括聚集物質(zhì)、腸球菌表面蛋白、糞腸球菌膠原黏附素、糞腸球菌心內(nèi)膜炎抗原等。（2）炎癥調(diào)節(jié)因子：引起組織損傷。（3）毒素：60％的糞腸球菌可分泌溶細(xì)胞素。2.所致疾?。海?）泌尿系感染：最常見的是尿路感染。（2）心內(nèi)膜炎：腸球菌是引起心內(nèi)膜炎的第3位病原菌。（3）腹膜炎：腹膜感染中腸球菌檢出率位居第3位。（4）牙髓疾?。郝愿庋乐苎谆颊叻忾]的牙根管中可分離出糞腸球菌。三、腸球菌屬（二）臨床意義1.標(biāo)本采集：根據(jù)不同病癥和體征采集不同標(biāo)本。采集血液、尿液、創(chuàng)傷標(biāo)本、膿性分泌物等。2.檢驗(yàn)方法：（1）顯微鏡檢查：查見革蘭陽性球菌（2）分離培養(yǎng)1）血液等標(biāo)本增菌培養(yǎng)，發(fā)生混濁生長進(jìn)一步轉(zhuǎn)種血平板分離培養(yǎng)。2）膿汁、創(chuàng)傷標(biāo)本、尿液標(biāo)本直接接種血平板，如送檢標(biāo)本中含革蘭陰性桿菌，可用選擇性培養(yǎng)基。（3）生化反應(yīng)：觸酶試驗(yàn)陰性，氧化酶試驗(yàn)陰性，分解甘露醇、蔗糖、精氨酸，PYR試驗(yàn)陽性，膽汁七葉苷試驗(yàn)陽性，6.5%NaCl培養(yǎng)基上可生長，在10℃和45℃均能生長。三、腸球菌屬（三）微生物學(xué)檢驗(yàn)3.鑒別要點(diǎn)三、腸球菌屬（三）微生物學(xué)檢驗(yàn)表19-8臨床標(biāo)本常見腸球菌屬種間鑒別試驗(yàn)山梨醇阿拉伯糖丙酮酸鹽糞腸球菌＋－＋屎腸球菌－＋－四、奈瑟菌屬項目十九病原性球菌鑒定1.生物學(xué)性狀（1）形態(tài)與染色：革蘭陰性球菌，呈腎形或咖啡豆形，凹面相對，成雙排列，無芽胞、無鞭毛，有菌毛，有莢膜。四、奈瑟菌屬（一）腦膜炎奈瑟菌1.生物學(xué)性狀（2）培養(yǎng)特性：專性需氧，營養(yǎng)要求高。在血瓊脂平板、巧克力平板上可見半透明菌落。四、奈瑟菌屬（一）腦膜炎奈瑟菌（3）生化反應(yīng)：絕大多數(shù)菌株能分解葡萄糖和麥芽糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，不分解乳糖、甘露醇、半乳糖和果糖。氧化酶試驗(yàn)陽性，觸酶試驗(yàn)陽性。（4）抗原構(gòu)造和分類：主要有莢膜多糖抗原、外膜蛋白抗原、脂多糖抗原和核蛋白抗原4種抗原。（5）抵抗力：對外界環(huán)境和理化因素的抵抗力很弱，尤其對寒冷、干燥和熱抵抗力弱。腦膜炎奈瑟菌巧克力平板上菌落2.臨床意義（1）主要致病物質(zhì)：莢膜、菌毛和內(nèi)毒素。內(nèi)毒素作用于小血管或毛細(xì)血管，引起血栓、出血，表現(xiàn)為皮膚出血性瘀斑，大量內(nèi)毒素可引起DIC，導(dǎo)致休克；作用于腎上腺，導(dǎo)致腎上腺出血。（2）所致疾?。褐饕鹆餍行阅X脊髓膜炎（1）傳染源：攜帶者、病人（2）傳播途徑：呼吸道（3）流行季節(jié)：冬末春初四、奈瑟菌屬（一）腦膜炎奈瑟菌四、奈瑟菌屬（一）腦膜炎奈瑟菌檢驗(yàn)程序3.微生物學(xué)檢驗(yàn)（1）標(biāo)本采集：根據(jù)臨床癥狀和體征不同采集不同標(biāo)本，標(biāo)本采集后注意保溫、保濕并及時送檢，標(biāo)本不宜置冰箱中保存。（2）檢驗(yàn)方法1）顯微鏡檢查：檢出革蘭陰性雙球菌，疑似腦膜炎奈瑟菌2）分離培養(yǎng)：血液或腦脊液先增菌。如發(fā)生混濁生長，轉(zhuǎn)種巧克力平板分離培養(yǎng)。其他標(biāo)本直接分離于血平板、巧克力平板或EPV平板。3）生化反應(yīng)：氧化酶陽性，觸酶陽性，分解葡萄糖、麥芽糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。4）血清學(xué)試驗(yàn)：莢膜多糖抗原直接凝集試驗(yàn)陽性。5）快速診斷方法：對流免疫電泳、SPA協(xié)同凝集試驗(yàn)和ELISA等。四、奈瑟菌屬（一）腦膜炎奈瑟菌