血液一般檢查見習(xí)

實驗室注意事項安靜有序，不要大聲喧嘩禁止在實驗室喝水吃東西時刻警惕生物污染生物污染垃圾放入黃色塑料袋實驗完畢將器材放入指定收集位置實驗結(jié)束將自己的實驗臺打掃干凈每組組長安排2人值日不得遲到早退，實習(xí)過程必須穿白大衣血液一般檢查

GeneralExaminationOfBlood

北醫(yī)三院檢驗科Departmentoflaboratorymedicine,PekingUniversityThirdHospital

Content血液標本采集、涂片、染色全血細胞計數(shù)（CBC）、三分類顯微鏡下白細胞分類

1.血液標本采集

Bloodspecimencollection熟悉毛細血管與靜脈穿刺采血方法掌握真空采血管的種類與正確使用正確分析檢驗結(jié)果與血液標本采集的關(guān)系01一次性采血針一次性微量吸管消毒棉簽安爾碘皮膚消毒劑毛細血管采血02一次性采血針持針器止血帶枕墊消毒棉簽安爾碘皮膚消毒劑真空采血管靜脈穿刺采血血標本采集器材真空采血管VacuumtubeCapcolorAdditiveSpecimentypeAnticoagulantfunctionUtilizationRedNoSerumChemistrySerologyYellowSeparationgelSerumAcceleratecoagulationChemistrySerologyLightblurSodiumcitratePlasmaCaeliminationCoagulationGreenLithiumheparinPlasmaEnhanceATⅢactivityChemistryGreySodiumfluoridePlasmaGlycolysisinhibitonGlucoseLavenderEDTAWholebloodIonseliminationCa,MgHematology毛細血管采血

Specimencollectionbycapillarypuncture1實質(zhì)是微動脈、微靜脈和毛細血管的混合血，含有細胞間質(zhì)和細胞內(nèi)液。2用血量少，適用于嬰兒、大面積燒傷、需頻繁采血進行檢查的病例。3多選擇手指或耳垂部位采血。4穿刺必須夠深，使血液自行流出或僅輕施壓力即可流出。5微量吸管的容量必須準確，內(nèi)腔一定要干燥，否則會影響吸血量和導(dǎo)致溶血。靜脈穿刺采血

Specimencollectionbyvenipuncture靜脈采血法適用于用血量較多的檢查項目。01靜脈血標本代表性大，各項成分相對穩(wěn)定，可反映病人整體狀態(tài)，可廣泛用于各項檢查。02如果發(fā)生暈針，立即拔針，平臥休息。03體表淺靜脈幾乎都可以作為采血部位，通常采用肘部靜脈。04注意受檢者采血的體位、情緒、運動狀態(tài)、使用某些藥物等因素。05真空采血過程無血液外溢和污染，運送方便。封閉狀態(tài)，無需容器間轉(zhuǎn)移，減少溶血，避免環(huán)境暴露的影響。06了解血液分析儀的各項參數(shù)、參考值、操作方法與結(jié)果分析。熟悉血細胞計數(shù)板的使用方法。掌握血涂片的制備和瑞特-吉姆薩染色。掌握顯微鏡法外周血分類計數(shù)的方法、各種WBC的正常形態(tài)。2.全血細胞計數(shù)（CBC）血液分析儀

HematologyAnalyer兩大功能1細胞計數(shù)功能2細胞分類功能原理3電阻抗法4光散射法SysmexKX-21：三分群BeckmanCoulterSTKS：五分類5電阻抗原理

PrincipleofelectricalimpedanceCoulterprinciple根據(jù)血細胞相對非導(dǎo)電的性質(zhì)，懸浮在電解質(zhì)溶液中的血細胞顆粒，在通過計數(shù)小孔時可引起電阻的變化為基礎(chǔ)，對血細胞進行計數(shù)和體積測定。電阻抗原理計數(shù)

Principleofelectricalimpedance將等滲電解質(zhì)溶液稀釋的細胞懸液置入不導(dǎo)電的容器中，將小孔管（transducer）插進細胞懸液中。小孔管內(nèi)充滿電解質(zhì)溶液，并有一個內(nèi)電極，小孔管的外側(cè)細胞懸液中有一個外電極。接通電源后，位于小孔兩側(cè)的電極產(chǎn)生穩(wěn)定的電流。當(dāng)細胞通過小孔時，瞬間引起了電壓變化而出現(xiàn)一個脈沖信號。脈沖大小反映細胞體積大小，脈沖數(shù)量代表細胞數(shù)量。SysmexKX-21電阻抗原理分類（三分群）不同體積的白細胞通過小孔時產(chǎn)生的脈沖大小有明顯差異，根據(jù)這些脈沖大小，可對白細胞進行分群。小細胞區(qū)：主要是淋巴細胞單個核細胞區(qū)(也稱作中間細胞):主要包括單核細胞、嗜酸性粒細胞、嗜堿性粒細胞大細胞區(qū)：主要是中性粒細胞容量、電導(dǎo)、光散射檢測原理（VCS）VolumeconductivitylightscantterVolume：應(yīng)用電阻抗原理測量細胞體積Conductivity：根據(jù)細胞壁能產(chǎn)生高頻電流的性能，采用高頻電磁探針，測量細胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)，即以細胞核和細胞質(zhì)的比例、細胞內(nèi)顆粒的大小和密度，來辨別體積相同，但性質(zhì)不同的兩個細胞群體。Lightscatter:來自激光的單色光直接掃描進入計數(shù)敏感區(qū)的每一個細胞，根據(jù)細胞產(chǎn)生的不同角度的散射光(10~70)，可提供細胞形態(tài)、核結(jié)構(gòu)等光散射信息，并能鑒別細胞顆粒的構(gòu)型和質(zhì)量（粗顆粒的光散射比細顆粒更強）；光散射可區(qū)別粒細胞的類型。BeckmanCoulterSTKS血涂片制備

PreparingbloodsmearWright-Giemsasolutioningredients0504020301酸性染料伊紅（鈉鹽）和堿性染料美藍（氯鹽）伊紅鈉鹽有色部分為陰離子，可與帶正電荷的物質(zhì)結(jié)合。氯化美藍有色部分為陽離子，可與帶負電荷的物質(zhì)結(jié)合。二者溶解在甲醇中形成可溶性的伊紅化美藍溶液，既可以固定細胞又利于細胞蛋白質(zhì)選擇性地吸附其中有色離子而著色。氯化美藍放置久后可氧化為天青，對細胞核染色加強，添上更多色彩，染色效果更好。Wright-Giemsastainingprinciple蛋白質(zhì)所帶電荷隨溶液的pH而定。故為使血片每次染色效果好且趨于一致，需配制pH6.4～6.8的緩沖液。04瑞氏染粉是由伊紅化美藍組成，對胞質(zhì)及中性顆粒的著色性極佳，面姬姆薩染粉由天青、伊紅組成，對細胞核著色較好，結(jié)構(gòu)顯示更清晰。05血紅蛋白、嗜酸性顆粒均為堿性物質(zhì)，故與酸性染料伊紅結(jié)合而染成紅色。01中性顆粒與美藍和伊紅同時結(jié)合而染為淡紫紅色。03細胞核的核蛋白與原、幼細胞的胞質(zhì)為酸性物質(zhì)，故與堿性染料美藍和天青相結(jié)合，染成深藍色或深紫紅色。02Wright-Giemsastainingprocedure滴加瑞-姬復(fù)合染液數(shù)滴于血涂片上（以蓋住血膜為度），靜置約半min，目的在于用染液的甲醇成分固定血細胞。加相當(dāng)于染液2倍量的緩沖液充分混勻。染色約l0min，用水沖去染液，干燥后鏡檢。白細胞分類計數(shù)

Whitebloodcelldifferentialcount,DC先用低倍鏡選好薄厚適宜、染色良好、細胞分布均勻處，再用油浸鏡觀察。通常計數(shù)100個白細胞。按圖所示方向移動血涂片，將所遇到的各類白細胞分別記錄，直到計數(shù)100個白細胞為止。計算每類白細胞的數(shù)目，即其百分數(shù)值。Neutrophils(band)1~5%Neutrophils(segmented)50~70%Eosinophils0.5~5%Basophils0-1%Lymphocytes20-40%Monocytes3~8%血細胞形態(tài)學(xué)識別規(guī)律原則：核漿兼顧，以核為主次序：胞體、胞漿、胞核、核仁紅細胞形態(tài)紅細胞大小不均(anisocytosis)紅細胞結(jié)構(gòu)異常Howell-Jollybody,Cabotring球形紅細胞橢圓形紅細胞口形紅細胞棘形紅細胞靶形紅細胞淚滴形紅細胞鐮形紅細胞鋸齒形紅細胞棘形紅細胞紅細胞緡錢狀形成Neutrophils胞體10~15μm

胞漿量多，淡紅色，含許多淡紫紅色小顆粒胞核

band凹陷的程度超過核直徑的一半，核最窄徑大于最寬徑的1/3，核彎曲成帶形、S形、U形、W形等。核染色質(zhì)粗糙，濃集成小塊狀，染色不均勻。Segmented通常分2~5葉，彼此間有較細的核絲或較粗的核橋，核最窄徑小于最寬徑的1/3。核染色質(zhì)粗糙。Lymphocyte胞體12~18μm，圓形。胞漿天藍色，透明，可有少數(shù)較大的嗜苯胺藍顆粒。胞核類圓形，核染色質(zhì)固縮成一團，染成紫紅色，著色比小淋巴細胞為淡。有時刻隱約可見核仁痕跡。Largelymphocyte胞體5~10μm，圓形或橢圓形。胞漿甚少，幾近無漿，或在核凹陷側(cè)可見少量藍色胞漿，顆?？捎锌蔁o，常因胞漿過少而看不到顆粒。胞核占細胞的極大部分，圓形或豆形，核染色質(zhì)凝縮，染成紫紅色，無核仁。SmalllymphocyteMonocytesSTEP4STEP3STEP2STEP1胞體圓形或不規(guī)則形，12~20μm胞漿較多，淡灰藍色，可見灰塵洋細微紅色或紅紫色顆粒（嗜苯胺藍顆粒）胞核呈腎形、馬蹄形或分葉狀等，有的扭曲折疊，偶見圓形核的。染色質(zhì)呈疏松網(wǎng)狀，染紫紅色。無核仁，偶見核仁遺跡。Eosinophils胞體10~18μm

充滿等大圓形桔紅色顆粒胞核

band呈彎曲桿狀、馬蹄形，核最窄徑大于最寬徑的1/3，核染色質(zhì)粗糙。Segmented多為2葉，呈雙逗點狀，也有3~5葉。葉間有核絲或較粗的核橋，核最窄徑小于最寬徑的1/3。核染色質(zhì)粗糙。Basophils胞體10~14μm，類圓形胞漿淡藍色，常被顆粒所掩蓋，顆粒大小不等，形態(tài)