實驗六網(wǎng)織紅血小板計數(shù)

實驗六網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)血小板計數(shù)01熟悉網(wǎng)織紅細(xì)胞染色的原理及形態(tài)學(xué)特點(diǎn)，掌握計數(shù)方法，了解注意事項和臨床應(yīng)用。學(xué)會鏡下辨認(rèn)血小板的形態(tài)，掌握血小板計數(shù)的方法和參考值，了解注意事項及臨床應(yīng)用。02要求一、網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)紅系祖細(xì)胞原紅早幼紅中幼紅晚幼紅網(wǎng)織紅紅細(xì)胞骨髓外周血網(wǎng)織紅細(xì)胞（reticulocyte,Ret）是有核紅細(xì)胞轉(zhuǎn)向無核到完全成熟紅細(xì)胞的過度型細(xì)胞，其胞質(zhì)中尚殘留部分嗜堿性物質(zhì)(核糖體和核糖核酸)，能被煌焦油藍(lán)、燦爛甲酚藍(lán)、中性紅等活體染料染色。根據(jù)網(wǎng)織紅細(xì)胞的形態(tài)特征和成熟程度將其分為四型：

I型(絲球型)，沉淀顆粒呈致密結(jié)塊的網(wǎng)織紅細(xì)胞；Ⅱ型(網(wǎng)型)，沉淀顆粒呈疏松結(jié)構(gòu)；Ⅲ型(破網(wǎng)型)，沉淀顆粒呈散在結(jié)構(gòu)；在外周血中僅占0.15%Ⅳ型(點(diǎn)粒型)，沉淀顆粒呈少數(shù)散在分布。多見于外周血，60%以上染色原理網(wǎng)織紅細(xì)胞內(nèi)RNA的磷酸基（帶負(fù)電荷）能與溴甲酚藍(lán)、新亞甲藍(lán)等堿性染料的有色反應(yīng)基（帶正點(diǎn)荷）結(jié)合，形成核酸與堿性染料復(fù)合物的藍(lán)黑色多聚顆粒，其顆粒又聯(lián)綴成線狀甚至網(wǎng)狀。凡含有兩個以上深染顆粒（或具有線網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)）的無核紅細(xì)胞，即為網(wǎng)織紅細(xì)胞?；徒褂退{(lán)染液（1%）煌焦油藍(lán)1g枸櫞酸鈉0.4g氯化鈉0.85g蒸餾水加到100ml，充分溶解過濾備用。試劑操作顯微鏡計數(shù)法2d染料+2d全血（1：1）混勻后染15min，傾少許玻片上，制備薄膜片，晃動玻片使迅速干燥，低倍鏡瀏覽全片，選細(xì)胞分布均勻無重疊染色良好部位，油鏡下觀察1000個紅細(xì)胞中網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)目。參考范圍成人：0.008~0.02新生兒：0.02~0.06其它方法：網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)儀熒光激活細(xì)胞術(shù)流式細(xì)胞術(shù)紅細(xì)胞必須含兩個或兩個以上藍(lán)色顆粒，且無需微調(diào)顯微鏡即可見。顆粒必須遠(yuǎn)離細(xì)胞邊緣，以免與變性珠蛋白小體混淆。染料配制必須祛除沉渣。復(fù)染會使網(wǎng)織紅數(shù)值降低，因此不采用瑞氏染料復(fù)染，用二甲苯擦涂片也會使結(jié)果降低。制片應(yīng)厚薄適宜，否則會造成網(wǎng)織紅細(xì)胞分布不均。染色時間必須充分，當(dāng)室溫較低時，需適當(dāng)延長染色時間或置37℃水浴箱內(nèi)。網(wǎng)織紅細(xì)胞體積較大，常在血膜尾部和兩側(cè)較多，計數(shù)應(yīng)該兼顧。注意事項可直接觀察細(xì)胞形態(tài)，不需特殊儀器，其中試管法操作簡便，重復(fù)性較好，被列為手工網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)的參考方法但工作效率不高，實驗精密度低。受主觀因素影響較多，且耗時費(fèi)力。顯微鏡法01測定快速，重復(fù)性好，避免主觀因素，易于標(biāo)準(zhǔn)化，測量細(xì)胞多，精確性高。根據(jù)熒光強(qiáng)度可反映網(wǎng)織紅細(xì)胞幼稚程度，并計算出網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟指數(shù)但幼稚白細(xì)胞、晚幼紅細(xì)胞及巨大血小板等可干擾計數(shù)結(jié)果，儀器價格貴，試劑成本較高。儀器法02方法學(xué)評價臨床應(yīng)用網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)是反映骨髓紅細(xì)胞造血功能的重要指標(biāo)網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)增多

①溶血性貧血

②放療化療后，造血恢復(fù)

③貧血治療有效時

④脾功能亢進(jìn)

⑤紅細(xì)胞生成素治療后

⑥骨髓移植功能良好的指標(biāo)網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)降低

①再生障礙性貧血

②慢性病性貧血，如惡性腫瘤、慢性腎衰、內(nèi)分泌疾病等將血液用適當(dāng)?shù)南♂屢合♂尯?，充入計?shù)池中，計數(shù)一定體積內(nèi)血小板的數(shù)目，再換算成每升血液中的血小板數(shù)。原理分為破壞紅細(xì)胞稀釋液：如草酸銨溶液不破壞紅細(xì)胞稀釋液：如紅細(xì)胞稀釋液血細(xì)胞計數(shù)板試劑與器材二、血小板計數(shù)操作步驟2ml紅細(xì)胞稀釋液采集10ul末梢血，充分混勻混勻的血小板懸液充池，靜置10min，高倍鏡下計數(shù)中央大方格的血小板數(shù)。計算：N*10*200*106/L參考范圍（100-300）*109/L注意事項針刺應(yīng)稍深，保證采血順暢，忌擠壓，操作要迅速，無需擦掉第一滴血，若同時做其他實驗時，先做血小板計數(shù)。所用器材和稀釋液必須清潔，無菌無塵。器材應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)化血小板易聚集，充池前應(yīng)充分混勻但不能用力太大，會破壞血小板待血小板下沉后再計數(shù)，否則結(jié)果偏低應(yīng)在1h內(nèi)計數(shù)完畢，否則結(jié)果偏低注意血小板與雜質(zhì)、結(jié)晶等區(qū)別。檢查前，應(yīng)避免服用影響到血小板功能的藥物不需特殊儀器，操作簡便，成本低，但影響因素較多，耗時費(fèi)力。重復(fù)性好，測定速度快，適用于臨床應(yīng)用。目前血細(xì)胞分析儀逐步普及，一般均以全血作為標(biāo)本。但由于血細(xì)胞分析儀不能完全將血小板與其他類似大小的物質(zhì)(如紅細(xì)胞或白細(xì)胞碎片、灰塵等雜物)區(qū)別開來，因此計數(shù)結(jié)果有時仍需顯微鏡目視計數(shù)法來作校正。目視顯微鏡法血細(xì)胞分析儀法（五）方法學(xué)評價靜脈血比毛細(xì)血管血高10%。妊娠中晚期升高，分娩后即降低；平原較低，高原較高；早晨較低，午后較高；運(yùn)動后升高，休息后恢復(fù)；月經(jīng)前較低，月經(jīng)后較高；春季較低，冬季略高；生理性正常人血小板數(shù)1d內(nèi)可有6%～10%的變化，表現(xiàn)為（六）臨床意義血小板減少：血小板數(shù)量低于100×109/L，原因：01血小板破壞增加：如ITP、脾亢；03血小板分布異常：如脾腫大（肝硬化）、血液被稀釋（輸入大量庫存血或血漿）05血小板生成障礙：如再障、巨幼貧、急白、骨髓纖維化、放射線損傷；02血小板消耗增多：如DIC、TTP、SLE、輸血后血小板減少癥04病理性骨髓增生性疾?。喝缭l(fā)性血小板增多癥、真性紅細(xì)胞增多癥、慢性粒細(xì)胞白血病；01急性大出血、急性溶血；02