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文檔簡(jiǎn)介
家兔小腸平滑肌實(shí)驗(yàn)
小腸運(yùn)動(dòng)形式的觀察離體組織灌流方法(了解)保證離體器官存活的條件:
1.溫度2.營(yíng)養(yǎng)3.PH4.酸堿度5.滲透壓…..目前的離體灌流組織應(yīng)用:
1.家兔離體小腸
2.大鼠、小鼠離體子宮
3.大鼠離體動(dòng)脈條
4.豚鼠離體氣管條
5.蟾蜍、蛙、大鼠離體心臟
………...消化道平滑肌的一般生理特性:收縮遲緩:舒縮運(yùn)動(dòng)≥20S/次。富有伸展性:伸長(zhǎng)可達(dá)原來(lái)長(zhǎng)度2—3倍。緊張性:常保持一種微弱的持續(xù)收縮狀態(tài)。節(jié)律性收縮:離體后于合適環(huán)境中仍能節(jié)律性收縮。對(duì)電刺激不敏感,對(duì)化學(xué)、機(jī)械等刺激敏感。1小腸平滑肌也具有上述生理特性。2實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理和背景知識(shí)小腸運(yùn)動(dòng)受到神經(jīng)和體液的調(diào)節(jié)小腸的運(yùn)動(dòng)形式緊張性收縮分節(jié)運(yùn)動(dòng)蠕動(dòng)移行性復(fù)合運(yùn)動(dòng)(MMC)體液調(diào)節(jié):胃腸激素如胃泌素、縮膽囊素、促胰液素等神經(jīng)調(diào)節(jié):掌握消化道平滑肌的一般生理特性。觀察某些因素(溫度、pH值、藥物)對(duì)小腸平滑肌舒縮活動(dòng)的影響。觀察哺乳動(dòng)物小腸的運(yùn)動(dòng)形式以及神經(jīng)和某些藥物對(duì)其運(yùn)動(dòng)的影響。學(xué)習(xí)哺乳動(dòng)物類離體小腸平滑肌的制備方法。實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)材料動(dòng)物:家兔藥品:25%氨基甲酸乙酯、臺(tái)氏液、1mol/L鹽酸溶液、1mol/LNaOH溶液、0.001%乙酰膽堿溶液、001%去甲腎上腺素溶液、1%氯化鈣溶液器材:恒溫平滑肌實(shí)驗(yàn)裝置、生物信號(hào)采集系統(tǒng)、張力換能器、計(jì)算機(jī)、兔臺(tái)及手術(shù)器械在體實(shí)驗(yàn)01麻醉和固定:稱重,計(jì)算麻藥計(jì)量(4ml/kg的25%氨基甲酸乙酯),耳緣靜脈麻醉,鑒別后固定于兔臺(tái)上。02腹部手術(shù):腹部剪毛、自劍突下沿腹部正中線切開(kāi)腹壁(10cm)。打開(kāi)腹腔,暴露胃腸道并尋找小腸。用皮鉗夾住兩側(cè)腹壁并提起形成皮兜。03觀察:①正常小腸的運(yùn)動(dòng)形式;②局部滴加乙酰膽堿后小腸的運(yùn)動(dòng)形式;③局部滴加去甲腎上腺素后小腸的運(yùn)動(dòng)形式。04實(shí)驗(yàn)步驟取出腸段置于室溫臺(tái)氏液中輕輕漂洗,去除當(dāng)腸內(nèi)容物,將腸管分成數(shù)段,每段長(zhǎng)2-3cm,兩端各用系好線的蛙心夾夾住。離體實(shí)驗(yàn)找出胃幽門與十二指腸交界處,由此取長(zhǎng)20—30cm的腸管,不留腸系膜。家兔一只,處死后迅速行腹部手術(shù)。將離體平滑肌連接于設(shè)定溫度好溫度(38℃)恒溫平滑肌槽、張立換能器(書圖7-1,p121)上。打開(kāi)電腦和生物信號(hào)采集系統(tǒng)。實(shí)驗(yàn)方法張力換能器蛙心夾浴槽小腸段收縮曲線:---上升支舒張曲線:---下降支基線上移:緊張性升高基線下降:緊張性下降幅度增加:收縮力增強(qiáng)幅度減低:收縮力減弱波峰間距:代表收縮頻率離體小腸收縮曲線代表意義離體實(shí)驗(yàn):1觀察離體小腸平滑肌的正常波形2觀察pH值對(duì)小腸平滑肌的作用:3浴槽內(nèi)加1mol/LHCI溶液2-4滴,觀察平滑肌的反應(yīng)(觀察后立即沖洗和更換臺(tái)氏液)。4實(shí)驗(yàn)步驟231乙酰膽堿的作用:浴槽內(nèi)加入0.001%的乙酰膽堿溶液2-4滴,觀察平滑肌的反應(yīng)(觀察后立即沖洗和更換臺(tái)氏液)。去甲腎上腺素的作用:浴槽內(nèi)加入0.001%的去甲腎上腺素溶液2-4滴,觀察平滑肌的反應(yīng)(觀察后立即沖洗和更換臺(tái)氏液)。觀察溫度的影響:分別加入室溫臺(tái)式液、25℃臺(tái)式液,觀察平滑肌的反應(yīng)。離體實(shí)驗(yàn):觀察項(xiàng)目實(shí)驗(yàn)過(guò)程中必須保證標(biāo)本的供氧(通氣)及浴槽內(nèi)臺(tái)氏液的恒溫(38℃)。1灌流浴槽內(nèi)的液面高度應(yīng)保持恒定。2放大器零點(diǎn)調(diào)好后不要再移動(dòng)旋鈕,以免影響基線。上述各藥液加入的量系參考數(shù)據(jù),效果不明顯者可以添加。3每次實(shí)驗(yàn)效果明顯后立即放掉含藥液的臺(tái)氏液,并沖洗多次,以免平滑肌出現(xiàn)不可逆反應(yīng)。4每項(xiàng)處理必須有處理標(biāo)記。5注意事項(xiàng)23145制備小腸平滑肌標(biāo)本時(shí),為什么要取小腸上段,尤其是十二指腸段的平滑?。恳3中∧c平滑肌較好的活性,實(shí)驗(yàn)過(guò)程中要注意什么?本實(shí)驗(yàn)藥品對(duì)小腸平滑肌的作用效果及其機(jī)制。取腸時(shí)為什么采用擊昏家兔而不用在麻醉下進(jìn)行?胃腸平滑肌有哪些運(yùn)動(dòng)形式以及生理特性思考題實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析正常NaOHHClAchNA氯化鈣25℃No.1加入乙酰膽堿,可見(jiàn)收縮的幅度上升,基線抬高,頻率加快。No.2消化道平滑肌細(xì)胞產(chǎn)生動(dòng)作電位的離子基礎(chǔ)是鈣內(nèi)流,ACh--M受體結(jié)合,使鈣通道開(kāi)放,使肌漿中的鈣升高,進(jìn)而激活肌纖蛋白-肌凝蛋白-ATP系統(tǒng),使平滑肌收縮,肌張力增加。故乙酰膽堿對(duì)小腸運(yùn)動(dòng)有加強(qiáng)作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析加入去甲腎上腺素可見(jiàn)收縮的幅度小,基線下移,頻率較慢。01消化道平滑肌細(xì)胞上有αβ兩種受體,NA可作用于α受體,使肌膜及肌質(zhì)網(wǎng)上的鉀離子通道開(kāi)放,鉀的外流增加,使膜發(fā)生超極化,腸肌興奮性下降,肌張力下降。同時(shí),NA還作用于β受體,使腸肌膜細(xì)胞中的cAMP合成增加,肌膜及肌質(zhì)網(wǎng)上鈣外流增加,也使肌張力下降。02實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析加入HCl溶液可見(jiàn)小腸平滑肌收縮的幅度減小,基線下移,頻率較慢??赡苁菤潆x子與鈣有競(jìng)爭(zhēng)作用,氫離子增加,使鈣與腸肌細(xì)胞的鈣調(diào)素(Ca-M)結(jié)合少,而使腸肌細(xì)胞的收縮力下降。氫氧離子中和氫離子,從而削弱了氫離子與鈣離子的競(jìng)爭(zhēng)作用,使鈣調(diào)素與鈣離子結(jié)合數(shù)量增多所至。加入氫氧化鈉:小腸平滑肌收縮的幅度增大,基線上移。03010204實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析加入氯化鈣溶液可見(jiàn)小腸平滑肌收縮的幅度增加,基線抬高,頻率加快。1細(xì)胞外液中存在較多的鈣離子,而鈣離子則是肌肉收縮的必要條件。平滑肌細(xì)胞興奮→肌膜被激活→細(xì)胞外鈣離子進(jìn)入膜內(nèi),而且肌漿網(wǎng)釋放鈣離子→鈣離子濃度升高→鈣離子與鈣調(diào)蛋白結(jié)合→肌球蛋白激酶活化→
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