DB35T 1872-2019 鴨3型腺病毒病診斷技術(shù)

DB35Diagnostictechniqueforduckadenovirus3infect福建省市場監(jiān)督管理局發(fā)布I 1 1 1 1 1 3 4 6 7本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所、福建省動物疫病預(yù)防控1鴨3型腺病毒病診斷技術(shù)本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了鴨3型腺病毒病的臨床診斷、PC本標(biāo)準(zhǔn)適用于鴨3型腺病毒病的臨床診斷、實驗室診斷和DAdV-3：鴨3型腺病毒（DuckAdenoviruPBS：磷酸鹽緩沖液（PhosphateBufferSaTris：三羥甲基氨基甲烷（TrihydroxymethylAminometh腺病毒科（Adenoviridae）下設(shè)5個屬，分別為富AT腺病毒屬（Atadenovirus）、禽腺病毒屬（Aviadenovirus）、魚腺病毒屬（Ichtadenovirus）、哺乳動物腺病毒屬（Mastadenovirus）和唾液4.1剖檢病變4.2初步診斷5.1主要儀器設(shè)備2）；）；）；）；上游引物DAdV-3F：5’-ACACTAGACAACGGAGGCCT-3’。），），3可采用市售商品化的等效核酸DNA提取試劑盒，按照說明書完成5.5對照5.6.2也可采用市售商品化的等效PCR預(yù)混液檢測試劑盒，并按照市售商PCR擴(kuò)增反應(yīng)結(jié)束后，PCR反應(yīng)管在電泳鑒定前可置于2℃~8℃冰箱保存。分別取5μLPCR擴(kuò)增（配置方法按照附錄A中A.6的規(guī)定）板的加樣孔中，加上DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)5μL，以5V/cm的電壓進(jìn)行電泳，30min后在紫外凝膠成像系統(tǒng)觀察結(jié)果。當(dāng)陽性對照出現(xiàn)約548bp的特異性條帶（參見附錄B圖B.1中1號泳道）、陰性對），），當(dāng)待檢樣品出現(xiàn)約548bp條帶（參見附錄B圖B.1中4），性擴(kuò)增條帶（參見附錄B圖B.1中5號泳道）判為陰性。必要時，將目的條帶進(jìn)行膠回收后克隆測序，待測樣品的測序結(jié)果和參考序列（參見附錄C）進(jìn)行核苷酸同源性比較，同源性在98.0%以4試劑的配制A.110%十二烷基硫酸鈉將10g十二烷基硫酸鈉溶于80mL滅菌雙蒸水中，調(diào)節(jié)溶液的pA.2蛋白酶K（10mg/mL）將蛋白酶K（20mg/mL）和滅菌水按照體積比1:1配置，使A.375%乙醇取無水乙醇750mL加入滅菌雙蒸水250mL，定容至1000mL，KH2PO4將上述試劑溶于800mL滅菌雙蒸水中，定容至1000mL，1.034×105Pa高壓滅菌30min，4℃保置微波爐中加熱至完全融化，待冷至50℃~60℃時，加溴化乙錠溶液（配制方法按照A.8的規(guī)5A.8溴化乙錠溶液滅菌雙蒸水說明：也可采用市售商品化的更環(huán)保、更安全GoldviA.950×TAE電泳緩沖液6PCR檢測結(jié)果電泳圖bp1——陽性對照(鴨3型腺病毒);2——陰性對照(滅活的其他鴨源病毒); 待檢樣品(鴨3型腺病毒陽性)5——待檢樣品(陰性)。圖B.1PCR檢測結(jié)果電泳圖7 ACACTAGACAACGGAGGCCTCGACCTCAAGGTGGACCCAGGAAGCCTGGCCGTCACTGACAATACCCTACACCTCACAAGCTCACTCAACCTATGTCTTTACGAGTGGATCTGACACACTTCAGAAGACACAAGCCCAAGTGTGCTGCGGAGCAGGGTCTGTTACGTTTCTGCGCATACTATGCCAAGATCGTATGCTCAAACAATGTGTCTTCAGGATATATAACACTGAAGGTGAGCGCTGAGGATGCATCACATTGTAGATCAACGCTTCGCGACTATTCAACCAGTATTCACATTCTGGTTATGTCGAGACATAGGTAATGAAAACACCGTCAATTTTTCACTGTACCAACAACAGTTATAAGCCAGAGGAAACCGCAGTCGTTAAGGCATGCATCACACCAGCATACAAAAATTTTGATGTCAGCAGTTTCAGAACATGACTTTATTCTGTATAACTATAGTGGGGTAAACACATCAGGAGTTCCAATAGGCACAGGGAACC