第十七章 腫瘤標(biāo)志物檢驗(yàn)課件

第十七章

腫瘤標(biāo)志物檢驗(yàn)

第一節(jié)概述

第二節(jié)腫瘤標(biāo)志物測(cè)定第十七章腫瘤標(biāo)志物檢驗(yàn)

腫瘤是一類嚴(yán)重危害人類健康的疾病。

為了提高對(duì)腫瘤的早期檢測(cè)、鑒別診斷、療效觀察以及預(yù)后判斷，人們從腫瘤細(xì)胞的化學(xué)特性、細(xì)胞病理、免疫反應(yīng)和基因表達(dá)產(chǎn)物等諸多方面尋找各種特異性強(qiáng)、靈敏度高的腫瘤標(biāo)志物。腫瘤標(biāo)志物的研究對(duì)腫瘤的診斷有極其重要的意義。第十七章腫瘤標(biāo)志物檢驗(yàn)第一節(jié)概述一、腫瘤標(biāo)志物的概念

所謂腫瘤標(biāo)志物，指在腫瘤發(fā)生和增殖過(guò)程中，由腫瘤細(xì)胞合成、釋放，存在于組織、細(xì)胞或體液中，反映腫瘤存在和生長(zhǎng)的一類物質(zhì)。通過(guò)對(duì)這類物質(zhì)的分析，能幫助人們從正常組織中區(qū)別腫瘤或測(cè)定腫瘤細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)以及對(duì)細(xì)胞膜上的特性進(jìn)行分析，以此作為辨認(rèn)腫瘤細(xì)胞的標(biāo)志。第十七章腫瘤標(biāo)志物檢驗(yàn)

理想的腫瘤標(biāo)志物應(yīng)該具有下列條件：1.標(biāo)志物的含量變化應(yīng)與腫瘤的生長(zhǎng)、消退、轉(zhuǎn)移有直接的定性或定量的比例關(guān)系。2.標(biāo)志物應(yīng)具有較高的特異性，能比較明顯地區(qū)別于正常人群和良性腫瘤。3.能在臨床上尚未確定腫瘤前檢測(cè)出來(lái)。4.檢測(cè)這類標(biāo)志物的方法簡(jiǎn)便，易推廣，而且成本較低。第十七章腫瘤標(biāo)志物檢驗(yàn)二、腫瘤標(biāo)志物的分類

腫瘤標(biāo)志物的分類常用的有兩種：其一按腫瘤標(biāo)志物的來(lái)源以及它的特異性，可分為兩大類。

1.腫瘤特異性標(biāo)志物是一種腫瘤所產(chǎn)生的特異性物質(zhì)。例如前列腺特異性抗原（PSA）就是前列腺腫瘤所產(chǎn)生的特異性標(biāo)志物質(zhì)，只有患前列腺癌時(shí)，PSA才會(huì)顯著性升高。

2.腫瘤輔助標(biāo)志物由一類組織類型相似而性質(zhì)不同的腫瘤產(chǎn)生，其含量有較大的變化。這類標(biāo)志物往往易同良性腫瘤或正常組織發(fā)生混淆。第十七章腫瘤標(biāo)志物檢驗(yàn)

第二是按腫瘤標(biāo)志物本身的化學(xué)特性，可分為以下幾類：

1.腫瘤胚胎性抗原標(biāo)志物

AFP

2.糖類標(biāo)志物CA19-9

3.酶類標(biāo)志物PAP

4.激素類標(biāo)志物HCG

5.蛋白質(zhì)類標(biāo)志物β2m

6.基因類標(biāo)志物ras第十七章腫瘤標(biāo)志物檢驗(yàn)三、腫瘤標(biāo)志物的臨床應(yīng)用

近年來(lái)，腫瘤標(biāo)志物在臨床上已得到較廣泛的應(yīng)用，目前主要應(yīng)用于：

1.腫瘤的普查；2.腫瘤高危人群的篩選；3.腫瘤的診斷和鑒別診斷；4.腫瘤監(jiān)測(cè)；5.腫瘤分類、分期、定位；6.腫瘤治療。第十七章腫瘤標(biāo)志物檢驗(yàn)第二節(jié)腫瘤標(biāo)志物的測(cè)定一、胚胎性抗原標(biāo)志物的測(cè)定

在人類發(fā)育過(guò)程中，許多原本只在胚胎期才具有蛋白類物質(zhì)，應(yīng)隨胎兒的出生而逐漸停止合成和分泌，但因某種因素的影響，特別是腫瘤狀態(tài)時(shí)，會(huì)使得機(jī)體一些“關(guān)閉”的基因激活，出現(xiàn)了返祖現(xiàn)象，而重新開啟并重新生成和分泌這些胚胎、胎兒期的蛋白。第十七章腫瘤標(biāo)志物檢驗(yàn)胚胎類腫瘤標(biāo)志物

名

稱

性

質(zhì)

相

關(guān)

腫

瘤

甲胎蛋白

糖蛋白70ku肝細(xì)胞、胚細(xì)胞（非精原細(xì)胞瘤）

β-癌胚抗原

80ku結(jié)腸

癌胚鐵蛋白

糖蛋白600ku肝

癌胚抗原

糖蛋白22ku結(jié)腸、直腸、胰腺、肺、乳腺

胰癌胚抗原

糖蛋白40ku胰腺

鱗狀細(xì)胞抗原

糖蛋白44-48ku肺、皮膚、頭和頸部

組織多肽抗原

細(xì)胞角蛋白8.18.19

乳腺、結(jié)腸

這類蛋白雖然與腫瘤組織不一定都具有特定的相關(guān)性，但與腫瘤的發(fā)生存在著內(nèi)在的聯(lián)系，故被作為一種較為常見的腫瘤標(biāo)志物。

第十七章腫瘤標(biāo)志物檢驗(yàn)（一）甲胎蛋白（AFP）

AFP主要是由胎肝細(xì)胞和卵黃囊合成的單一多聚體肽鏈的糖蛋白。其分子量平均為70ku，含糖4％。AFP在電場(chǎng)中泳動(dòng)于α-球蛋白區(qū)，是胎兒血清中的主要蛋白質(zhì)。1964年Tatarinov發(fā)現(xiàn)肝癌患者血清中檢測(cè)到AFP?！緟⒖挤秶砍扇搜獫{AFP濃度低于25μg/L。第十七章腫瘤標(biāo)志物檢驗(yàn)

【臨床意義】AFP是原發(fā)性肝癌的最靈敏、最特異的腫瘤標(biāo)志物，80%以上的原發(fā)性肝癌患者血清AFP明顯增高，AFP檢測(cè)診斷肝癌的標(biāo)準(zhǔn)為：①血清AFP測(cè)定結(jié)果大于500μg/L持續(xù)4周；②AFP含量有不斷增高者；③血清AFP測(cè)定結(jié)果大于200μg/L持續(xù)8周。第十七章腫瘤標(biāo)志物檢驗(yàn)

肝癌患者血清AFP含量變化的速率和程度與腫瘤組織分化程度高低有一定相關(guān)性，分化程度較高的腫瘤AFP含量常大于200μg/L。

血清AFP含量的檢測(cè)對(duì)其它腫瘤的監(jiān)測(cè)亦有重要臨床價(jià)值。如睪丸癌、畸胎瘤、胃癌、胰腺癌等患者血清AFP含量可以升高。第十七章腫瘤標(biāo)志物檢驗(yàn)（二）癌胚抗原（CEA）

癌胚抗原是1965年Gold和Freedman首先從胎兒及結(jié)腸癌組織中發(fā)現(xiàn)的，CEA是一種分子量為22ku的多糖蛋白復(fù)合物，45％為蛋白質(zhì)。一般情況下，CEA是由胎兒胃腸道上皮組織、胰和肝的細(xì)胞所合成，通常在妊娠前6個(gè)月內(nèi)CEA含量增高，出生后血清中含量很低?！緟⒖挤秶砍扇搜澹?.5μg/L。

第十七章腫瘤標(biāo)志物檢驗(yàn)【臨床意義】當(dāng)CEA大于60μg/L時(shí)，可見于結(jié)腸癌、直腸癌、胃癌和肺癌。CEA值升高，表明有病變殘存或進(jìn)展。如肺癌、乳腺癌、膀胱癌和卵巢癌患者血清CEA量會(huì)明顯升高，大多顯示為腫瘤浸潤(rùn)，其中約70％為轉(zhuǎn)移性癌。一般來(lái)說(shuō)，手術(shù)切除后6周，CEA水平恢復(fù)正常，否則提示有殘存腫瘤，若CEA濃度持續(xù)不斷升高，或其數(shù)值超過(guò)正常5-6倍者均提示預(yù)后不良。第十七章腫瘤標(biāo)志物檢驗(yàn)二、糖類抗原標(biāo)志物的測(cè)定

腫瘤標(biāo)志物相關(guān)物質(zhì)是指由腫瘤細(xì)胞表面的抗原物質(zhì)或者是腫瘤細(xì)胞所分泌的物質(zhì)，這類物質(zhì)含糖量高，故又稱為糖類抗原（carbohydrateantigen，CA）。這類標(biāo)志物出現(xiàn)為臨床腫瘤的診斷帶來(lái)方便，糖類抗原標(biāo)志物產(chǎn)生可分為兩大類，即高分子粘蛋白類和血型類抗原。第十七章腫瘤標(biāo)志物檢驗(yàn)糖類高分子粘蛋白抗原腫瘤標(biāo)志物

名稱性質(zhì)癌腫常用單克隆抗體CA125糖蛋白＞200ku卵巢、子宮內(nèi)膜OC125CA15-3糖蛋白400ku乳腺、卵巢DF3和115D3CA549高分子量糖蛋白乳腺、卵巢

BC4E549BC4n154CA27.29高分子量糖蛋白

乳腺B27.29DU-PAN-2粘蛋白100-500ku胰腺、卵巢、胃DU-PAN-2第十七章腫瘤標(biāo)志物檢驗(yàn)血型類抗原腫瘤標(biāo)志物名稱性質(zhì)癌腫常用單克隆抗體CA19-9唾液酸化Lexa

胰腺、胃腸、肝116NS19-9CA19-5唾液酸化Lea和Leag

胃腸、卵巢116NS19-5CA50唾液酸化Lea

胰腺、胃腸、結(jié)腸Colo-50CA72-4唾液酸化Tn卵巢、乳腺、胃腸、結(jié)腸B27.3.cc49CA242唾液酸化CHO結(jié)腸、直腸、胰腺C242第十七章腫瘤標(biāo)志物檢驗(yàn)

這類抗原標(biāo)志物的命名是沒(méi)有規(guī)律的，有些是腫瘤細(xì)胞株的編號(hào)，有些是抗體的物質(zhì)編號(hào)，常用檢測(cè)方法是單克隆抗體法。（一）CA19-9CA19-9是1979年Koprowski等用結(jié)腸癌細(xì)胞免疫小鼠，并與骨髓瘤雜交所得116NS19-9單克隆抗體，它是一種分子量為5000ku的低聚糖類腫瘤相關(guān)糖類抗原，其結(jié)構(gòu)為L(zhǎng)ea血型抗原物質(zhì)與唾液酸Lexa的結(jié)合物。

【參考范圍】血清CA19-9含量為2～16U/ml（RIA法）。第十七章腫瘤標(biāo)志物檢驗(yàn)【臨床意義】CA19-9是胰腺癌和結(jié)、直腸癌的標(biāo)志物。血清CA19-9陽(yáng)性臨界值為37U/ml。胰腺癌患者85以上為陽(yáng)性。腫瘤切除后CA19-9濃度會(huì)下降，如再上升，則可表示復(fù)發(fā)。結(jié)直腸癌、膽囊癌、膽管癌、肝癌和胃癌的陽(yáng)性率也會(huì)很高，若同時(shí)檢測(cè)CEA和AFP可進(jìn)一步提高陽(yáng)性檢測(cè)率。良性疾患時(shí)如胰腺炎和黃疸，CA19-9濃度也可增高，但往往呈“一過(guò)性”，而且其濃度多低于120U/ml，必須加以鑒別。第十七章腫瘤標(biāo)志物檢驗(yàn)

（二）CA125

CA125是一種大分子多聚糖蛋白，是重要的卵巢癌相關(guān)抗原。分子量為200ku，加熱至100℃時(shí)CA125的活性破壞。【參考范圍】血清CA125＜35.0U/ml（RIA法）。

【臨床意義】

CA125是上皮性卵巢癌和子宮內(nèi)膜癌的標(biāo)志物。當(dāng)卵巢癌復(fù)發(fā)時(shí)，在臨床確診前幾個(gè)月便可呈現(xiàn)CA125增高，尤其卵巢癌轉(zhuǎn)移患者的血清CA125更明顯高于參考值。動(dòng)態(tài)觀察血清CA125濃度有助于卵巢癌的預(yù)后評(píng)價(jià)和治療控制，經(jīng)治療后，CA125含量可明顯下降，若不能恢復(fù)至正常范圍，應(yīng)考慮有殘存腫瘤的可能。第十七章腫瘤標(biāo)志物檢驗(yàn)（三）CA15-3

CA15-3是一種乳腺癌相關(guān)抗原，于1984年由Kufu和Hilkens等人發(fā)現(xiàn)，CA15-3分子量為400ku，分子結(jié)構(gòu)尚未清楚?！緟⒖挤秶垦錍A15-3＜28U/ml（RIA法）。

【臨床意義】乳腺癌患者CA15-3明顯升高，也是監(jiān)測(cè)乳腺癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)的最佳指標(biāo)，當(dāng)CA15-3大于100U/ml時(shí)，可認(rèn)為有轉(zhuǎn)移性病變，其含量的變化與治療結(jié)果密切相關(guān)。肺癌、胃腸癌、卵巢癌及宮頸癌患者的血清CA15-3也可升高，應(yīng)予以鑒別，特別要排除部分妊娠引起的含量升高。第十七章腫瘤標(biāo)志物檢驗(yàn)（四）CA50

CA50是1983年Lindholm等從抗人結(jié)、直腸癌Colo-205細(xì)胞株的一系列單克隆抗體中篩選出來(lái)的，對(duì)結(jié)、直腸癌有強(qiáng)烈反應(yīng)。所能識(shí)別的抗原稱CA50。CA50存在于細(xì)胞膜內(nèi)，其抗原決定簇為唾液酸Lea血型物質(zhì)與唾液酸-N-四氧神經(jīng)酰胺?！緟⒖挤秶垦錍A50＜20U/ml（RIA法）。第十七章腫瘤標(biāo)志物檢驗(yàn)【臨床意義】

CA50是胰腺和結(jié)、直腸癌的標(biāo)志物，因CA50廣泛存在胰腺、膽囊、肝、胃、結(jié)直腸、膀胱、子宮，當(dāng)細(xì)胞惡變時(shí)，由于糖基轉(zhuǎn)化酶的失活或胚胎期才能活躍的某些轉(zhuǎn)化酶被激活，造成細(xì)胞表面糖類結(jié)構(gòu)性質(zhì)改變而形成CA50，因此，它又是一種普遍的腫瘤標(biāo)志相關(guān)抗原。所以在多種惡性腫瘤中可檢出不同的陽(yáng)性率。第十七章腫瘤標(biāo)志物檢驗(yàn)三、酶類抗原標(biāo)志物的測(cè)定

酶及同工酶是最早出現(xiàn)和使用的腫瘤標(biāo)志物之一。在腫瘤標(biāo)志酶中根據(jù)來(lái)源可將其分為兩類：1.組織特異性酶：因組織損傷或變化而使儲(chǔ)存在細(xì)胞中的酶釋放，如前列腺特異性抗原等；

2.非組織特異性酶：主要是腫瘤細(xì)胞代謝加強(qiáng)。特別是無(wú)氧酵解增強(qiáng)。第十七章腫瘤標(biāo)志物檢驗(yàn)酶類腫瘤標(biāo)志物

名稱分子量及同工酶相關(guān)腫瘤醛縮酶160ku3個(gè)肝堿性磷酸酶95ku7個(gè)骨、肝、白血病、肉瘤、卵巢等淀粉酶45ku胰腺等谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶

80ku多種肝、胃、結(jié)腸肌酸激酶83ku4個(gè)前列腺、肺、結(jié)腸、卵巢等γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶90ku12個(gè)肝乳酸脫氫酶135ku5個(gè)肝、淋巴瘤、白血病神經(jīng)原特異性烯醇化酶73ku2個(gè)肺（小細(xì)胞）、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、類癌、黑色素瘤、嗜鉻細(xì)胞瘤5-核苷酸酶6區(qū)帶肝α-L巖藻糖苷酶230ku8個(gè)肝核糖核酸酶2個(gè)卵巢、肺、大腸等第十七章腫瘤標(biāo)志物檢驗(yàn)

在酶標(biāo)志物分析中，腫瘤標(biāo)志同工酶可分為三大類型：①異位型同工酶：指某種瘤組織改變了自己的分泌特性，而去分泌表達(dá)了其它成年組織的同工酶的類型；②胚胎型同工酶：某些組織在腫瘤狀態(tài)時(shí)，使酶的同工酶譜退化到胚胎時(shí)未分化狀態(tài)，而分泌出大量的胚胎期的同工酶，這種變化往往與腫瘤的惡性程度成正比；③胎盤型同工酶：有些腫瘤組織會(huì)分泌出某些原屬胎盤階段的同工酶譜。第十七章腫瘤標(biāo)志物檢驗(yàn)

（一）前列腺特異性抗原（PSA）

PSA是1979由Wang等從前列腺組織中分離出來(lái)的絲氨酸蛋白酶，分子量34ku，PSA僅存在于前列腺上皮組織和精液內(nèi)，具有糜蛋白酶樣和胰蛋白酶的活性，PSA具有高度的組織特異性。【參考范圍】男性：＜2.5μg/L（RIA法、ElA法）。第十七章腫瘤標(biāo)志物檢驗(yàn)

【臨床意義】PSA是前列腺癌的特異性標(biāo)志物，也是目前少數(shù)器官特異性腫瘤標(biāo)志物之一。前列腺癌是男性泌尿系統(tǒng)的主要囊性腫瘤，前列腺癌患者血清PSA明顯增高，放療后療效顯著者，50%以上2個(gè)月內(nèi)血清PSA降至正常。故PSA測(cè)定可作為監(jiān)測(cè)前列腺癌病情變化和療效的重要指標(biāo)。第十七章腫瘤標(biāo)志物檢驗(yàn)

（二）前列腺酸性磷酸酶（PAP）

PAP是前列腺分泌的一種含有兩條肽鏈的糖蛋白酶，分子量102ku，含糖量13%。在pH5.0的酸性環(huán)境中活性最強(qiáng)，能水解各種有機(jī)磷酸酯?！緟⒖挤秶浚?U/L（RIA、ELISA法）【臨床意義】測(cè)定PAP診斷前列腺癌的特異性比PSA高，可達(dá)96%。但靈敏度較PSA低，PAP和PSA聯(lián)合使用可提高診斷的陽(yáng)性率。第十七章腫瘤標(biāo)志物檢驗(yàn)

（三）神經(jīng)原特異性烯醇化酶（NSE）

烯醇化酶是催化糖原酵解途徑的酶。由3個(gè)不同的亞基α、β、γ，組成5種二聚體形式的同工酶αα、ββ、γγ、αβ、αγ。γγ亞基同工酶存在于神經(jīng)原和神經(jīng)內(nèi)分泌組織，稱為NSE。NSE的分子量為78ku。細(xì)胞癌變時(shí)，細(xì)胞增殖周期加快，細(xì)胞內(nèi)的NSE釋放入血增多?！緟⒖挤秶?.6-5.4μg/L。第十七章腫瘤標(biāo)志物檢驗(yàn)

【臨床意義】NSE是神經(jīng)母細(xì)胞瘤和小細(xì)胞肺癌的標(biāo)記物。NSE作為神經(jīng)母細(xì)胞瘤的標(biāo)志物，對(duì)該病的早期診斷具有較高的臨床應(yīng)用價(jià)值。小細(xì)胞肺癌（SCLC）是一種惡性程度高的神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)腫瘤，約占肺癌的25%～30%，它可表現(xiàn)神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞的特性，有過(guò)量的NSE表達(dá)，比其它肺癌和正常對(duì)照高5-10倍以上。SCLC患者血清NSE檢出的陽(yáng)性率可高達(dá)65%-100%，目前已公認(rèn)為NSE可作為SCLC高特異性、高靈敏性的腫瘤標(biāo)志物。第十七章腫瘤標(biāo)志物檢驗(yàn)（四）α-L巖藻糖苷酶（AFU）

AFU是存在于血清中的一種溶酶體酸性水解酶，分子量230ku，廣泛分布于人體組織細(xì)胞、血液和體液中?！緟⒖挤秶?24±90μmol/L（化學(xué)法）。【臨床意義】AFU是原發(fā)性肝癌的一種新的診斷標(biāo)志物，廣泛分布于人體組織細(xì)胞、血液和體液中，原發(fā)性肝癌患者血清AFU活力顯著高于其它各類疾患。第十七章腫瘤標(biāo)志物檢驗(yàn)

目前，AFU升高的機(jī)制不甚明了，可能有以下幾種原因：1.肝細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞的壞死使溶酶體大量釋放入血；2.正常肝細(xì)胞的變性壞死可使攝取和清除糖苷酶的功能下降；3.腫瘤細(xì)胞合成糖苷酶的功能亢進(jìn)；4.腫瘤細(xì)胞可能分泌某種抑制因子，抑制肝細(xì)胞對(duì)糖苷酶的清除能力或釋放某些刺激因子，促進(jìn)肝細(xì)胞或腫瘤細(xì)胞本身合成糖苷酶。第十七章腫瘤標(biāo)志物檢驗(yàn)四、激素類抗原標(biāo)志物的測(cè)定

當(dāng)具有分泌激素功能的細(xì)胞癌變時(shí)，就會(huì)使所分泌的激素量發(fā)生異常。這稱為正位激素異常。而在正常情況下不能生成激素的那些細(xì)胞，轉(zhuǎn)化為腫瘤細(xì)胞后所產(chǎn)生的激素，或者是那些能產(chǎn)出激素的細(xì)胞癌變后，分泌出其它分泌細(xì)胞所產(chǎn)生的激素。稱為異位激素。第十七章腫瘤標(biāo)志物檢驗(yàn)激素類腫瘤標(biāo)志物激

素

性

質(zhì)

相

關(guān)

腫

瘤

兒茶酚胺類

嗜鉻細(xì)胞

促腎上腺皮質(zhì)激素

4.5ku庫(kù)欣綜合征、肺（小細(xì)胞）

抗利尿激素

肺（小細(xì)胞）、原發(fā)性類癌等

降鈣素

3.5ku甲狀腺髓質(zhì)

生長(zhǎng)激素

21ku垂體腺瘤、腎、肺

HGG45ku胚胎絨毛膜、睪丸（非精原細(xì)胞癌）

人胎盤催乳素

22ku滋養(yǎng)層、性腺、肺、乳腺

甲狀旁腺素

肝、腎、乳腺、肺等

催乳素

22ku垂體腺瘤、腎、肺

胰高糖素

3ku胰高糖素瘤、嗜鉻細(xì)胞瘤

第十七章腫瘤標(biāo)志物檢驗(yàn)

（一）人絨毛膜促性腺激素（HCG）

HCG是由胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞所分泌的一類糖蛋白類激素，在正常妊娠婦女血中可以測(cè)出HCG。HCG有α、β兩個(gè)亞基，α-亞基的分子量約為13000，α-亞基的生物特性與卵泡刺激素（FSH）和黃體生成激素（LH）的α-亞基相同。β-亞基的分子量約15000，β-亞基為特異性鏈，可被單克隆抗體檢測(cè)，也是一個(gè)較好的標(biāo)志物。第十七章腫瘤標(biāo)志物檢驗(yàn)（二）降鈣素（CT）

CT是由甲狀腺濾泡C細(xì)胞分泌的一種多肽激素，分子量3.5ku。【參考范圍】＜100ng/L【臨床意義】CT是甲狀腺髓樣癌的腫瘤標(biāo)志物。肺癌、乳腺癌、胃腸道癌及嗜鉻細(xì)胞瘤病人可因高血鈣或異位分泌使血清CT增高。第十七章腫瘤標(biāo)志物檢驗(yàn)

（三）兒茶酚胺類及其衍生物

兒茶酚胺類激素是由腎上腺髓質(zhì)中的一些交感神經(jīng)節(jié)纖維末梢終止髓質(zhì)細(xì)胞（又稱嗜鉻細(xì)胞）產(chǎn)生和分泌，包括腎上腺素（E）、去甲腎上腺素（NE）和多巴胺（DA）等，它們既是激素又是神經(jīng)遞質(zhì)。第十七章腫瘤標(biāo)志物檢驗(yàn)

1.變腎上腺素

變腎上腺素是兒茶酚胺的甲基化代謝產(chǎn)物，甲基化是在肝細(xì)胞微粒體中進(jìn)行，而兒茶酚胺的形成是在腎上腺髓質(zhì)的嗜鉻細(xì)胞及交感神經(jīng)末梢處形成?！緟⒖挤秶?.30-1.50μmol/24h尿。變腎上腺素濃度增高是分泌型嗜鉻細(xì)胞瘤的主要標(biāo)志物。第十七章腫瘤標(biāo)志物檢驗(yàn)

2.香草扁桃酸（3-甲氧-4羥苦杏仁酸，VMA）

是腎上腺素和去甲腎上腺素經(jīng)單胺氧化酶（MAO）和兒茶酚胺-O-甲基轉(zhuǎn)移酶（COMT）的作用下，甲基化和脫氨基的降解產(chǎn)物。VMA主要是從尿中排出。

【參考范圍】成人5.0-35.0μmol/24h尿。第十七章腫瘤標(biāo)志物檢驗(yàn)

【臨床意義】常被認(rèn)為是神經(jīng)母細(xì)胞瘤、神經(jīng)節(jié)瘤和嗜鉻細(xì)胞瘤的標(biāo)志物。約有70％神經(jīng)母細(xì)胞瘤患者均有VMA增高，在兒童的神經(jīng)母細(xì)胞瘤患者中，VMA也是一項(xiàng)重要指標(biāo)。

VMA又可作為嗜鉻細(xì)胞瘤的診斷首選標(biāo)志物，但有時(shí)增高程度不穩(wěn)定，宜同時(shí)測(cè)定尿中兒茶酚胺和變腎上腺素。第十七章腫瘤標(biāo)志物檢驗(yàn)五、基因類標(biāo)志物的測(cè)定

隨著分子生物學(xué)的理論和技術(shù)的發(fā)展，癌基因和抑癌基因的檢測(cè)已成為腫瘤臨床診斷新一代的標(biāo)志物。

（一）癌基因類腫瘤標(biāo)志物

癌基因或腫瘤基因是指在自然或?qū)嶒?yàn)條件下，具有潛在的誘導(dǎo)細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的基因。從目前的資料分析，引起細(xì)胞惡變功能的基因已達(dá)30余種。第十七章腫瘤標(biāo)志物檢驗(yàn)常見癌基因類腫瘤標(biāo)志物

癌基因

細(xì)胞株或原發(fā)腫瘤

相

關(guān)

腫

瘤

N-myc細(xì)胞株

神經(jīng)母細(xì)胞瘤、視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤、肺癌（小細(xì)胞）

原發(fā)腫瘤

神經(jīng)母細(xì)胞瘤、視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤、橫紋肌肉瘤

C-erb-2原發(fā)腫瘤

胃腺癌、腎腺癌、乳腺癌

N-ras細(xì)胞株

胃腺癌

C-myc細(xì)胞株

乳腺癌、胃腺癌、肺癌（巨細(xì)胞）

原發(fā)腫瘤

急性粒細(xì)胞白血病、結(jié)腸腺癌

H-ras細(xì)胞株

黑色瘤

原發(fā)腫瘤

膀胱癌、皮膚鱗癌

K-ras細(xì)胞株

結(jié)腸癌、骨肉瘤

原發(fā)腫瘤

膀胱癌、胰腺癌、卵巢癌

第十七章腫瘤標(biāo)志物檢驗(yàn)

1.ras基因家族及其表達(dá)產(chǎn)物

ras基因表達(dá)產(chǎn)物是由188個(gè)或189個(gè)氨基酸組成的21ku蛋白質(zhì)，故ras基因編碼產(chǎn)物為p21ras蛋白。其本質(zhì)為G蛋白，具有GTP酶活性，可水解GTP生成GDP。

當(dāng)機(jī)體發(fā)生腫瘤時(shí)，編碼p21ras蛋白的第12、13及61位氨基酸的核苷酸可以發(fā)生點(diǎn)突變，突變型的p21ras蛋白不具有GTP酶活化，無(wú)法使GTP水解為GDP。另外尚可在腫瘤中發(fā)現(xiàn)p21ras蛋白表達(dá)過(guò)度。第十七章腫瘤標(biāo)志物檢驗(yàn)ras基因檢測(cè)的方法

（1）PCR-SSCP（單鏈構(gòu)象多態(tài)性）、DGGE（變性梯度凝膠電泳，）、PCR-ASO（等位基因特異性寡核苷酸雜交，）和測(cè)序技術(shù)：探測(cè)點(diǎn)突變。（2）免疫組織化學(xué)：用RAP-5單抗。（3）Southern印跡法及Northern印跡法。（4）ELISA法及Western印跡法。第十七章腫瘤標(biāo)志物檢驗(yàn)ras基因家族與腫瘤的關(guān)系

腫瘤類型

臨

床

意

義

乳腺癌

c-Ha-ras基因mRNA水平升高與惡性腫瘤進(jìn)展期中p21ras水平相關(guān)

結(jié)直腸癌

50％的腫瘤出現(xiàn)c-Ki-ras基因點(diǎn)突變

肺癌

20％-30％腫瘤出現(xiàn)ras基因家族成員點(diǎn)突變，其中c-Ki-rad基因點(diǎn)突變與預(yù)后不良相關(guān)

胰腺癌

90％左右的腫瘤出現(xiàn)c-Ki-ras基因點(diǎn)突變

胃癌

在惡性腫瘤中p21表達(dá)水平明顯升高，c-Ha-ras基因編碼第12位氨基酸突變與腫瘤轉(zhuǎn)移及預(yù)后不良相關(guān)

髓性白血病

10％-50％的腫瘤中出現(xiàn)c-N-ras基因突變

膀胱癌

部分病例可出現(xiàn)c-Ha-ras基因點(diǎn)突變及p21ras表達(dá)過(guò)度

第十七章腫瘤標(biāo)志物檢驗(yàn)

2.myc基因家族及其表達(dá)產(chǎn)物

1997年Duesbery等發(fā)現(xiàn)myc癌基因與禽類MC29病毒具有相似性。Myc基因家族共有6成員：C-myc、N-myc、L-myc、P-myc、R-myc及B-myc。其中C-myc、N-myc及L-myc與一些人類腫瘤相關(guān)。當(dāng)機(jī)體發(fā)生腫瘤時(shí)，myc基因家族成員可以發(fā)生染色體基因易位、基因擴(kuò)增以及表達(dá)過(guò)度。第十七章腫瘤標(biāo)志物檢驗(yàn)myc基因檢測(cè)的方法（1）標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞核型分析：基因易位。（2）原位雜交：ELISA法。（3）Southern印跡法及Northern印跡法。（4）RT-PCR方法。第十七章腫瘤標(biāo)志物檢驗(yàn)myc基因家族成員與腫瘤的關(guān)系

腫瘤種類

臨

床

意

義

神經(jīng)母細(xì)胞瘤在20％的腫瘤中有N-myc基因擴(kuò)增

乳腺癌

6％-57％的腫瘤中可見c-myc基因擴(kuò)增。c-myc基因mRNA水平升高與預(yù)后不良相關(guān)

結(jié)直腸癌

10％-20％的腫瘤中可見c-myc基因擴(kuò)增

小細(xì)胞肺癌

30％腫瘤可見L-myc基因過(guò)度表達(dá)

宮頸癌

c-myc過(guò)度表達(dá)與預(yù)后不良相關(guān)

第十七章腫瘤標(biāo)志物檢驗(yàn)

（二）抑癌基因

機(jī)體中有一類對(duì)正常細(xì)胞增殖起負(fù)調(diào)節(jié)作用的基因稱為抑癌基因。當(dāng)這類基因丟失、失活或變異時(shí)，往往會(huì)促使細(xì)胞失控而呈惡性生長(zhǎng)。

常見抑癌基因類腫瘤標(biāo)志物抑癌基因

染

色

體

相

關(guān)

腫

瘤

RB13q14視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤、骨肉瘤、乳腺癌、肺癌

WT111p13Wilms腫瘤

NF-117q11.1q神經(jīng)纖維瘤

DCC13q21.3結(jié)腸癌

P53

17p21-1q肺癌、結(jié)腸癌、胃癌

Erb-B-27p乳腺癌

第十七章腫瘤標(biāo)志物檢驗(yàn)

1.RB基因及其表達(dá)產(chǎn)物

1986年Friend等成功地克隆了RB基因。RB基因定位于第13號(hào)染色體的13q14區(qū)，共有27個(gè)外顯子，26個(gè)內(nèi)含子，DNA長(zhǎng)度約200kb。其編碼的蛋白質(zhì)產(chǎn)物為p110。

當(dāng)機(jī)體發(fā)生腫瘤時(shí)，RB基因的主要變化形式有：缺失、突變、甲基化、表達(dá)失活及與病毒和細(xì)胞癌蛋白結(jié)合引起功能性失活。第十七章腫瘤標(biāo)志物檢驗(yàn)

RB基因檢測(cè)的方法

（1）PCR-SSCP、DGGE、PCR-ASO及測(cè)序技術(shù)：檢測(cè)點(diǎn)突變。（2）PR-PCR、PCR。（3）PCR-RFLP限制片段長(zhǎng)度多態(tài)性。

RB基因與腫瘤的關(guān)系

（1）RB基因突變約見于40％的視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤。（2）RB基因還與成骨細(xì)胞肉瘤、軟組織肉瘤、小細(xì)胞肺癌、乳腺癌、前列腺癌、食管癌、卵巢癌及膀胱癌有關(guān)

第十七章腫瘤標(biāo)志物檢驗(yàn)

2.p53基因及其產(chǎn)物

1981年Crawford等發(fā)現(xiàn)了p53基因，并認(rèn)為其為癌基因。以后Hinds、Finlay等通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)傳染了myc或ras癌基因的細(xì)胞中，若存在野生型p53基因，則出現(xiàn)生長(zhǎng)抑制。因此提出p53基因?qū)儆谝职┗颉５谑哒履[瘤標(biāo)志物檢驗(yàn)

P53基因定位于第17號(hào)染色體17p13區(qū)，由11個(gè)外顯子和10個(gè)內(nèi)含子組成，編碼393個(gè)氨基酸殘基的蛋白質(zhì)即p53蛋白。p53的功能為轉(zhuǎn)錄因子，生物學(xué)功能為G1期DNA損壞的檢查點(diǎn)。人類腫瘤中P53基因突變主要在高度保守區(qū)內(nèi)，以175、248、249、273、282位點(diǎn)突變率最高，不同種類腫瘤其突變類型不同。

p53基因檢測(cè)的方法：同RB基因檢測(cè)方法。第十七章腫瘤標(biāo)志物檢驗(yàn)p53基因與腫瘤的關(guān)系

腫瘤類型

臨

床

意

義

乳腺癌

40％有p53突變，9％病人血清有p53蛋白

結(jié)腸癌

50％-86％表現(xiàn)p53突變

肺癌

45％-70％p53水平升高，57％的小細(xì)胞肺癌過(guò)度表達(dá)p53肝癌

50％有p53點(diǎn)突變

膀胱癌

61％有p53基因突變

非霍奇金淋巴瘤

61％病例有p53蛋白增加

第十七章腫瘤標(biāo)志物檢驗(yàn)六、其它

其他腫瘤標(biāo)志物，如蛋白質(zhì)腫瘤標(biāo)志是最早發(fā)現(xiàn)的標(biāo)志物。一般來(lái)講這類標(biāo)志物特異性稍差，但檢測(cè)方法相對(duì)比較容易，常作常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目。

蛋白質(zhì)類腫瘤標(biāo)志物

名稱

性質(zhì)

相

關(guān)

腫

瘤

β2-微球蛋白

12ku多發(fā)性骨髓瘤、B細(xì)胞淋巴瘤、慢性淋巴細(xì)胞白血病、Waldenstrom’s巨球蛋白血癥

C多肽

3.6ku胰島素