第二十二-二十三章 免疫學(xué)的臨床應(yīng)用課件

免疫學(xué)的臨床應(yīng)用陳水親生化與分子生物學(xué)教研室第二十二-二十三章免疫學(xué)的臨床應(yīng)用第二十二章免疫學(xué)檢測技術(shù)第一節(jié)體外抗原抗體結(jié)合反應(yīng)的特點及影響因素一、抗原抗體反應(yīng)特點1．高度特異性

由抗原表位與抗體分子中的超變區(qū)互補結(jié)合所決定的。

2．表面化學(xué)基團(tuán)之間的可逆結(jié)合

3．適宜的抗原抗體濃度和比例抗原抗體結(jié)合后能否出現(xiàn)肉眼可見的反應(yīng)取決于兩者適當(dāng)?shù)臐舛群捅壤?．抗原抗體反應(yīng)的兩個階段第二十二-二十三章免疫學(xué)的臨床應(yīng)用二、抗原抗體反應(yīng)的影響因素

1．電解質(zhì)

抗原、抗體通常為蛋白質(zhì)分子，等電點分別為pH3~5和5~6不等。實驗中常用0.85%的NaCl溶液，以提供適當(dāng)濃度的電解質(zhì)。2．溫度適當(dāng)提高反應(yīng)的溫度可增加抗原與抗體分子的碰撞機(jī)會，加速抗原抗體復(fù)合物的形成。通常37℃是抗原抗體反應(yīng)的最適溫度。3．酸堿度抗原抗體反應(yīng)的最適pH在6~8之間，pH過高或過低，均可直接影響抗原、抗體的理化性質(zhì)。

第二十二章免疫學(xué)檢測技術(shù)第二十二-二十三章免疫學(xué)的臨床應(yīng)用第二節(jié)檢測抗原或抗體的體外試驗一、凝集反應(yīng)（agglutinationreactions）

細(xì)菌、細(xì)胞等顆粒性抗原或表面包被抗原的顆粒狀物質(zhì)（如聚苯乙稀乳膠等）與相應(yīng)的抗體在電解質(zhì)存在的條件下結(jié)合，出現(xiàn)肉眼可見的凝集團(tuán)現(xiàn)象。1.直接凝集反應(yīng)：顆粒性抗原本身直接與相應(yīng)的抗體反應(yīng)出現(xiàn)的凝集現(xiàn)象，如紅細(xì)胞凝集或細(xì)菌凝集。2.間接凝集反應(yīng)：將可溶性抗原或抗體先吸附在某些顆粒載體上，形成致敏顆粒，然后再與相應(yīng)抗體或抗原進(jìn)行反應(yīng)產(chǎn)生的凝集現(xiàn)象。

直接凝集反應(yīng)和間接凝集反應(yīng)亦常用于溶血性疾病的診斷，如Rh血型不符的新生兒溶血癥及藥物相關(guān)的溶血性疾病。第二十二章免疫學(xué)檢測技術(shù)第二十二-二十三章免疫學(xué)的臨床應(yīng)用二、沉淀反應(yīng)（precipitationreactions）

毒素、組織浸液及血清中的蛋白等可溶性抗原與相應(yīng)抗體反應(yīng)后，出現(xiàn)肉眼可見的沉淀物。1.免疫比濁法利用抗原抗體復(fù)合物在液相中形成濁度來測定抗原含量的方法。2.單向瓊脂擴(kuò)散常用于血清中免疫球蛋白（IgG、IgA、IgM）、C3、AFP等定量測定。第二十二章免疫學(xué)檢測技術(shù)第二十二-二十三章免疫學(xué)的臨床應(yīng)用3.雙向瓊脂擴(kuò)散①檢測可溶性抗原或抗體②對復(fù)雜的抗原或抗體成分進(jìn)行純度鑒定③免疫血清效價測定第二十二章免疫學(xué)檢測技術(shù)第二十二-二十三章免疫學(xué)的臨床應(yīng)用4.免疫電泳常用于血清蛋白的組分分析第二十二章免疫學(xué)檢測技術(shù)第二十二-二十三章免疫學(xué)的臨床應(yīng)用三、免疫標(biāo)記技術(shù)（immunolabelingtechnique）將抗原抗體反應(yīng)與標(biāo)記技術(shù)相結(jié)合，以檢測抗原或抗體的一類試驗方法。

常用的標(biāo)記物有酶、熒光素、放射性核素、膠體金及化學(xué)發(fā)光物質(zhì)等。

1.免疫酶測定法（EIA）

這是一種用酶標(biāo)記一抗或二抗檢測特異性抗原或抗體的方法。①雙抗體夾心法

②間接EILSA第二十二章免疫學(xué)檢測技術(shù)血清檢測中：肝癌、骨肉瘤-----血清堿性磷酸酶（ALP）升高。

前列癌-------血清酸性磷酸酶升高。第二十二-二十三章免疫學(xué)的臨床應(yīng)用2.免疫熒光技術(shù)是用熒光素標(biāo)記一抗或二抗，檢測特異性抗原或抗體的方法。123.放射免疫測定法

是用放射性核素標(biāo)記抗原或抗體進(jìn)行的免疫測定。敏感性可達(dá)到pg/ml水平，常用的放射性核素有131I和125I等。

第二十二章免疫學(xué)檢測技術(shù)于1977年因創(chuàng)建放射免疫測定法而獲得醫(yī)學(xué)諾貝爾獎。最敏感第二十二-二十三章免疫學(xué)的臨床應(yīng)用4.化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)是將化學(xué)發(fā)光分析和免疫反應(yīng)相結(jié)合而建立的一種新的免疫分析技術(shù)。

5.免疫膠體金技術(shù)用膠體金顆粒標(biāo)記抗體或抗原，以檢測未知抗原或抗體的方法稱免疫膠體金技術(shù)。四、蛋白質(zhì)芯片技術(shù)

是指固定于支持介質(zhì)上的大量蛋白質(zhì)構(gòu)成的微陣列。

6.免疫印跡技術(shù)又稱Westernblotting第二十二章免疫學(xué)檢測技術(shù)蛋白定性定量應(yīng)用最廣泛第二十二-二十三章免疫學(xué)的臨床應(yīng)用第三節(jié)免疫細(xì)胞功能的檢測一、免疫細(xì)胞的分離1.外周血單個核細(xì)胞的分離

第二十二章免疫學(xué)檢測技術(shù)第二十二-二十三章免疫學(xué)的臨床應(yīng)用2.淋巴細(xì)胞及其亞群的分離和分析有：免疫吸附分離法、磁珠分離法、熒光激活細(xì)胞分離儀分離法、抗原肽-MHC分子四聚體技術(shù)

第二十二章免疫學(xué)檢測技術(shù)流式細(xì)胞術(shù)可用于分離混合的T、B細(xì)胞。用于細(xì)胞分離鑒定的最好方法。第二十二-二十三章免疫學(xué)的臨床應(yīng)用二、免疫細(xì)胞功能的測定1.T細(xì)胞功能測定①T淋巴細(xì)胞增殖試驗：T細(xì)胞受到特異性抗原或有絲分裂原（PHA、ConA）刺激后可發(fā)生增殖，可通過以下三種方法檢測。

形態(tài)計數(shù)法3H-TdR或125Ｉ-UdR摻入法

MTT比色法

第二十二章免疫學(xué)檢測技術(shù)第二十二-二十三章免疫學(xué)的臨床應(yīng)用②遲發(fā)型超敏反應(yīng)（DTH）的檢測此方法為體內(nèi)檢測細(xì)胞免疫功能的簡便易行的皮試方法。2.B細(xì)胞功能測定抗體形成細(xì)胞測定：常用溶血空斑試驗。3.細(xì)胞毒試驗培養(yǎng)4-6小時51Cr釋放法乳酸脫氫酶釋放法

細(xì)胞染色法凋亡細(xì)胞檢測法

第二十二章免疫學(xué)檢測技術(shù)第二十二-二十三章免疫學(xué)的臨床應(yīng)用4.吞噬功能測定①硝基藍(lán)四氮唑試驗

②巨噬細(xì)胞吞噬試驗5.細(xì)胞因子的檢測

①生物活性檢測法②免疫學(xué)檢測法酶聯(lián)免疫斑點試驗

第二十二章免疫學(xué)檢測技術(shù)用于功能性細(xì)胞的定量檢測第二十二-二十三章免疫學(xué)的臨床應(yīng)用第二十三章免疫學(xué)防治第一節(jié)免疫預(yù)防特異性免疫的獲得方式有自然免疫和人工免疫兩種。

自然免疫主要指機(jī)體感染病原體后建立的特異性免疫，也包括胎兒或新生兒經(jīng)胎盤或乳汁從母體獲得抗體。

人工免疫則是人為地使機(jī)體獲得特異性免疫，是免疫預(yù)防的重要手段，包括人工主動免疫和人工被動免疫。

一、疫苗的基本要求

習(xí)慣上將細(xì)菌性制劑、病毒性制劑以及類毒素等人工主動免疫制劑統(tǒng)稱為疫苗。

1．安全2．有效

3．實用第二十二-二十三章免疫學(xué)的臨床應(yīng)用第二十三章免疫學(xué)防治二、人工主動免疫用疫苗接種機(jī)體，使之產(chǎn)生特異性免疫，從而預(yù)防感染的措施。1.滅活疫苗

又稱死疫苗，是選用免疫原性強的病原體，經(jīng)人工大量培養(yǎng)后，用理化方法滅活制成。2.減毒活疫苗

用減毒或無毒力的活病原微生物制成。3.類毒素用細(xì)菌的外毒素經(jīng)0.3%~0.4%甲醛處理制成。因其已失去外毒素的毒性，但保留免疫原性，接種后能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生抗毒素。第二十二-二十三章免疫學(xué)的臨床應(yīng)用第二十三章免疫學(xué)防治第二十二-二十三章免疫學(xué)的臨床應(yīng)用第二十三章免疫學(xué)防治三、人工被動免疫

給人體注射含特異性抗體或細(xì)胞因子的制劑，以治療或緊急預(yù)防感染的措施。

1.抗毒素用細(xì)菌外毒素或類毒素免疫動物制備的免疫血清，具有中和外毒素毒性的作用。2.人免疫球蛋白制劑從大量混合血漿或胎盤血中分離制成的免疫球蛋白濃縮劑。

3.細(xì)胞因子與單克隆抗體細(xì)胞因子制劑與單抗制劑是近年來研制的新型免疫治療劑，可望成為腫瘤、艾滋病等的有效治療手段。第二十二-二十三章免疫學(xué)的臨床應(yīng)用第二十三章免疫學(xué)防治第二十二-二十三章免疫學(xué)的臨床應(yīng)用第二十三章免疫學(xué)防治四、佐劑是一類與抗原合用時能增強抗原免疫效應(yīng)的物質(zhì)。

可能的作用機(jī)制1.在淋巴細(xì)胞接觸抗原的局部可濃縮抗原，即儲存效應(yīng)；2.通過誘導(dǎo)細(xì)胞因子的產(chǎn)生，調(diào)節(jié)淋巴細(xì)胞的功能。種類氫氧化鋁、磷酸鋁、磷酸鈣等無機(jī)鹽以及結(jié)合細(xì)菌類毒素的百日咳桿菌。

1.ISCOMs

是一種緩釋的復(fù)合物。含磷脂、皂素、膽固醇及蛋白質(zhì)，為30~40nm直徑的二十面體對稱結(jié)構(gòu)，能捕獲大量抗原分子并釋放給抗原提呈細(xì)胞。ISCOMs可上調(diào)MHC分子的表達(dá)，促進(jìn)細(xì)胞免疫尤其是CTL活性。2.CpG寡核苷酸指人工合成的一段含非甲基化胞嘧啶-鳥嘌呤的寡核苷酸鏈，其受體是TLR9，能誘導(dǎo)細(xì)胞因子的產(chǎn)生，活化B細(xì)胞、NK細(xì)胞及樹突狀細(xì)胞，對蛋白疫苗和核酸疫苗均有明顯佐劑活性。

第二十二-二十三章免疫學(xué)的臨床應(yīng)用第二十三章免疫學(xué)防治五、計劃免疫

根據(jù)某些特定傳染病的疫情監(jiān)測和人群免疫狀況分析，有計劃地用疫苗進(jìn)行免疫接種，預(yù)防相應(yīng)傳染病，確保兒童健康成長的重要手段，最終達(dá)到控制以至消滅相應(yīng)傳染病的目的而采取的重要措施。第二十二-二十三章免疫學(xué)的臨床應(yīng)用第二十三章免疫學(xué)防治六、新型疫苗及其發(fā)展

1.亞單位疫苗去除病原體中與激發(fā)保護(hù)性免疫無關(guān)的甚至有害的成分，保留有效免疫原成分制作的疫苗。

2.結(jié)合疫苗能引起T、B細(xì)胞的聯(lián)合識別，B細(xì)胞可產(chǎn)生IgG類抗體，明顯提高了免疫效果。3.合成肽疫苗根據(jù)有效免疫原的氨基酸序列，設(shè)計和合成的免疫原性多肽，以期用最小的免疫原性肽來激發(fā)有效的特異性免疫應(yīng)答。4.基因工程疫苗①重組抗原疫苗：是利用DNA重組技術(shù)制備的只含保護(hù)性抗原的純化疫苗。

②重組載體疫苗：是將編碼病原體有效免疫原的基因插入載體（減毒的病毒或細(xì)菌）基因組中，接種后，隨疫苗株在體內(nèi)的增殖，大量所需的抗原得以表達(dá)。

第二十二-二十三章免疫學(xué)的臨床應(yīng)用第二十三章免疫學(xué)防治③DNA疫苗：用編碼病原體有效免疫原的基因與細(xì)菌質(zhì)粒構(gòu)建成重組體，經(jīng)注射等途徑進(jìn)入機(jī)體，重組質(zhì)?？赊D(zhuǎn)染宿主細(xì)胞，使其表達(dá)保護(hù)性蛋白抗原，從而誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫。

④轉(zhuǎn)基因植物疫苗：用轉(zhuǎn)基因方法，將編碼有效免疫原的基因?qū)肟墒秤弥参锛?xì)胞的基因組中，免疫原即可在植物的可食用部分穩(wěn)定的表達(dá)和積累，人類和動物通過攝食達(dá)到免疫接種的目的。七、疫苗的應(yīng)用1.抗感染抗感染仍是未來應(yīng)用疫苗的首要任務(wù)。

2.抗腫瘤一些病毒的感染與腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)，這些病毒的疫苗可被看作是腫瘤疫苗。3.計劃生育避孕疫苗也是近年來活躍的研究領(lǐng)域。4.防止免疫病理損傷第二十二-二十三章免疫學(xué)的臨床應(yīng)用第二十三章免疫學(xué)防治第二節(jié)免疫治療

免疫治療是指利用免疫學(xué)原理，針對疾病的發(fā)生機(jī)制，人為地調(diào)整機(jī)體的免疫功能，達(dá)到治療目的所采取的措施。

第二十二-二十三章免疫學(xué)的臨床應(yīng)用第二十三章免疫學(xué)防治一、分子治療

分子治療指給機(jī)體輸入分子制劑，以調(diào)節(jié)機(jī)體的特異性免疫應(yīng)答，例如使用抗體、細(xì)胞因子以及微生物制劑等。1.分子疫苗

2.抗體

3.細(xì)胞因子4.微生物抗原疫苗

二、細(xì)胞治療

細(xì)胞治療指給機(jī)體輸入細(xì)胞制劑，以激活或增強機(jī)體的特異性免疫應(yīng)答，例如使用細(xì)胞疫苗、干細(xì)胞移植、過繼免疫治療等。1.細(xì)胞疫苗腫瘤細(xì)胞疫苗、基因修飾的瘤苗、樹突狀細(xì)胞疫苗。2.過繼免疫治療取自體淋巴細(xì)胞經(jīng)體外激活、增殖后回輸患者，直接殺傷腫瘤或激發(fā)機(jī)體抗腫瘤免疫效應(yīng)。如TIL。3.造血干細(xì)胞移植干細(xì)胞是具有多種分化潛能，自我更新能力很強的細(xì)胞，在適當(dāng)條件下可被誘導(dǎo)分化為多種細(xì)胞組織。骨髓、外周血、臍血

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