第一節(jié) 紅細(xì)胞檢驗課件

第一節(jié)紅細(xì)胞檢驗骨髓造血干細(xì)胞---------紅系祖細(xì)胞--------原紅細(xì)胞----早幼----中幼----晚幼------網(wǎng)織紅細(xì)胞--------成熟紅細(xì)胞造血微環(huán)境Epo第一節(jié)紅細(xì)胞檢驗

紅細(xì)胞在正常情況下幾乎占血容量的1/2，平均壽命是120天，每天約有8%的衰老和退化變性的紅細(xì)胞經(jīng)脾破壞，血紅蛋白降解，可參與鐵、膽色素、蛋白質(zhì)代謝和血紅蛋白的重新合成。紅細(xì)胞外形：雙凹圓盤形，平均直徑7.2um，厚約2um，無核主要成分（除水外）：血紅蛋白占34%----能結(jié)合多重氣體，主要是O2和CO2，并協(xié)同維持酸堿平衡。第一節(jié)紅細(xì)胞檢驗紅細(xì)胞計數(shù)一、顯微鏡計數(shù)法

1.試劑Hayem稀釋液：氯化鈉---調(diào)節(jié)滲透濃度硫酸鈉---調(diào)節(jié)滲透濃度，防止紅細(xì)胞聚集氯化高汞---防腐劑，有毒缺點：如遇高球蛋白血癥或自身凝集素增高患者，紅細(xì)胞易凝集或形成串錢狀，影響計數(shù)。第一節(jié)紅細(xì)胞檢驗操作

a.取小試管一支，準(zhǔn)確加入紅細(xì)胞稀釋液2.0ml。

b.毛細(xì)血管采血，取血10ul，稀釋200倍。

c.混勻，充池，靜置2min后以低倍鏡計數(shù)中間大方格的四角和中央5個中方格內(nèi)的紅細(xì)胞計算紅細(xì)胞數(shù)/L=5個中方格內(nèi)紅細(xì)胞×5×10×200×106/L

或×1012/L5個中方格內(nèi)紅細(xì)胞數(shù)100第一節(jié)紅細(xì)胞檢驗報告方式

RBC（/L）=.×1012/L注意事項

a.紅細(xì)胞數(shù)量較多，在計數(shù)時應(yīng)按計數(shù)原則計數(shù)

b.防止血液凝固，并要充分混勻正常參考值男性:（4.00-5.50）×1012/L女性:（3.50-5.00）×1012/L新生兒:（6.00-7.00）×1012/L第一節(jié)紅細(xì)胞檢驗血紅蛋白測定血紅蛋白結(jié)構(gòu)：由珠蛋白和亞鐵血紅素結(jié)合組成?？臻g結(jié)構(gòu)：每個血紅蛋白有4條珠蛋白肽鏈每條肽鏈包裹1個亞鐵血紅素，形成具有四級空間結(jié)構(gòu)的四聚體。第一節(jié)紅細(xì)胞檢驗分類：（每個珠蛋白分子含兩條α鏈和兩條非α

鏈）正常人：HbA（α

2β2）占90%成人主要血紅蛋白

HbA2（α

2δ2

）占2%-3%成人次要血紅蛋白

HbF（α

2γ2

）占2%以下胎兒主要血紅蛋白注意事項：1.如α-鏈或β-鏈合成障礙，使三種正常血紅蛋白比例異常，即各型地中海貧血；如多肽鏈發(fā)生氨基酸置換、丟失、加長，稱為血紅蛋白病。

2.病理情況下可出現(xiàn)硫化血紅蛋白SHb第一節(jié)紅細(xì)胞檢驗一、氧化高鐵血紅蛋白法

由國際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會（ICSH）推薦，并經(jīng)WHO確認(rèn)為血紅蛋白測定的參考方法。

主要優(yōu)點：操作簡單，結(jié)果穩(wěn)定可靠，試劑容易保存，能測定除SHb以外的所有血紅蛋白，并易于建立質(zhì)控。第一節(jié)紅細(xì)胞檢驗原理除SHb外，Hb被高鐵氰化鉀氧化成高鐵血紅蛋白，再與CN-結(jié)合，生成穩(wěn)定的棕紅色氰化高鐵血紅蛋白

HiCN，吸收峰為λ540nm毫摩爾消光系數(shù)為

44L·mmol-1·cm-1

。因此根據(jù)標(biāo)本的吸光度，即可求得血紅蛋白總量（不含SHb）。第一節(jié)紅細(xì)胞檢驗器材和試劑

a.分光光度計、移液管、微量吸管、試管等

b.血紅蛋白轉(zhuǎn)化液操作

a.取指血20ul，加到5ml血紅蛋白轉(zhuǎn)化液中，混勻，靜置5分鐘。

b.用分光光度計比色。波長540nm，以空白轉(zhuǎn)化液調(diào)零，測定吸光度“A”。第一節(jié)紅細(xì)胞檢驗計算

Hb（g/L）=A××251＝A×367.76445844×1000注意事項：

a.KCN為劇毒藥品，要小心對待，實驗完后要用次氯酸鈉溶液處理后才能棄倒。

b.血紅蛋白轉(zhuǎn)化液不能貯存在塑料瓶中，否則CN-下降使結(jié)果偏低。

c.沒有符合標(biāo)準(zhǔn)的分光光度計，應(yīng)用HiCN參考液，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求出K值=∑A（理論值）/∑A（測定值）。第一節(jié)紅細(xì)胞檢驗正常參考值成年男性：120-160g/L

成年女性：110-150g/L

新生兒：170-200g/L70歲以上老年男性：94.2-122.2g/L70歲以上老年女性：86.5-111.8g/L第一節(jié)紅細(xì)胞檢驗紅細(xì)胞計數(shù)和血紅蛋

白測定的臨床意義

紅細(xì)胞與血紅蛋白的增減不一定成比例，如大細(xì)胞性貧血患者的RBC往往較Hb減少顯著；而小細(xì)胞性貧血患者則相反。一、紅細(xì)胞和血紅蛋白增高標(biāo)準(zhǔn)：成年男性RBC＞6.0×1012/L,Hb＞170g/L

成年女性RBC＞5.5×1012/L,Hb＞160g/L第一節(jié)紅細(xì)胞檢驗相對增高因脫水血液濃縮所致。如嚴(yán)重腹瀉、大面積燒傷等絕對增高組織缺氧骨髓幼紅細(xì)胞有絲分裂

RBCEpo刺激腎第一節(jié)紅細(xì)胞檢驗生理性升高高原生活和劇烈運動，新生兒病理性升高嚴(yán)重的慢性心肺疾病繼發(fā)性紅細(xì)胞增多癥真性紅細(xì)胞增多癥為原發(fā)性紅細(xì)胞增多癥，屬造血干細(xì)胞疾病長期組織缺氧第一節(jié)紅細(xì)胞檢驗二、紅細(xì)胞和血紅蛋白減低生理性貧血妊娠中晚期：血容量增加，血液稀釋

6個月至2歲：血容量增加速度大于RBC與Hb的生成有些老年人：攝取、利用營養(yǎng)和造血功能減退病理性貧血紅細(xì)胞的丟失、破壞，造血原料不足，骨髓造血功能障礙等原因分級：輕度貧血：成年男性＜120g/L成年女性＜100g/L

中度貧血：Hb＜90g/L重度貧血：Hb＜60g/L

極度貧血：Hb＜30g/L第一節(jié)紅細(xì)胞檢驗紅細(xì)胞比積測定定義：紅細(xì)胞比積（Hct、PCV）：又叫紅細(xì)胞體積分?jǐn)?shù)，指在一定條件下經(jīng)離心沉淀壓緊的紅細(xì)胞在全血標(biāo)本中所占體積的比值。第一節(jié)紅細(xì)胞檢驗溫氏（Wintrobe）法材料和試劑

Wintrobe管：長110mm，內(nèi)徑3mm，自下到上有0-100mm刻度

Pasteur吸管：吸管下端細(xì)長，上部膨大，頂端配有橡皮乳頭帽?？捎脦чL穿刺針的注射器代替。離心機(jī)

EDTA鹽干燥抗凝管第一節(jié)紅細(xì)胞檢驗操作

a.采靜脈血標(biāo)本2ml，立即放入抗凝管中，混勻。盡量用空腹血。

b.充分混合血標(biāo)本2分鐘以上，使RBC分布均勻，Hb安全氧合。

c.將吸管尖端深入Wintrobe管管底，自下而上慢慢將血放入管內(nèi)到100mm刻度處。要避免充入氣泡。

d.以3000r/min的速度離心半小時。離心后血液分為五層（從上至下）：最上層為血漿；白色乳糜層主要使血小板；灰紅色層為白細(xì)胞和有核紅細(xì)胞；呈黑色一薄層為被白細(xì)胞代謝還原成的還原血紅蛋白層；最下層為含氧血紅蛋白層。

e.讀取以黑色紅細(xì)胞層為準(zhǔn)的紅細(xì)胞柱高，除以100。第一節(jié)紅細(xì)胞檢驗正常參考值成年男性：0.40-0.50成年女性：0.37-0.48臨床意義

a.紅細(xì)胞比積增高生理性增高：高原生活、劇烈運動、新生兒病理性增高：原發(fā)性和繼發(fā)性紅細(xì)胞增多癥、脫水、燒傷

b.紅細(xì)胞比積減低各種貧血

c.根據(jù)Hct了解血液濃縮程度

d.Hct是計算MCV、MCHC的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)之一

e.Hct是影響全血粘度的決定性因素之一第一節(jié)紅細(xì)胞檢驗紅細(xì)胞的其它參數(shù)

通過紅細(xì)胞比積、計數(shù)紅細(xì)胞、測定血紅蛋白量這三個數(shù)據(jù)，間接計算出平均紅細(xì)胞容積（MCV）、平均紅細(xì)胞血紅蛋白量（MCH）、平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度（MCHC），以便分析病人紅細(xì)胞形態(tài)特征，有助于貧血的分類與鑒定。第一節(jié)紅細(xì)胞檢驗一、平均紅細(xì)胞容積（MCV）指紅細(xì)胞群體中各個紅細(xì)胞體積的平均值單位：fl（10-15L）

MCV=×1015flHctRBC二、平均紅細(xì)胞血紅蛋白量（MCH）指紅細(xì)胞群體中各個紅細(xì)胞血紅蛋白含量的平均值單位：pg（10-12g）

MCH=×1012pgHb(g/L)RBC（L-1）第一節(jié)紅細(xì)胞檢驗三、平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度（MCHC）指測Hct時被壓緊的RBC的血紅蛋白濃度（g/L）

Hb(g/L)MCHC=Hct三種平均值的正常參考值見書66頁三種平均值的臨床應(yīng)用見書66頁第一節(jié)紅細(xì)胞檢驗四、紅細(xì)胞體積分布寬度（RDW）定義：是反映周圍血紅細(xì)胞間體積差異的參數(shù)，通過變異系數(shù)定量的表示紅細(xì)胞體積分布的離散程度。原理：血細(xì)胞自動分析儀通過電阻的改變，產(chǎn)生脈沖信號的強(qiáng)弱。正常參考值：成人：≤15.0%

新生兒：男≤15.9%女≤16.2%第一節(jié)紅細(xì)胞檢驗臨床意義：

a.與MCV聯(lián)合應(yīng)用于貧血的形態(tài)學(xué)分類

b.用于缺鐵性貧血的篩選診斷

c.用于缺鐵性貧血與輕型珠蛋白生成障礙性貧血鑒別診斷。第一節(jié)紅細(xì)胞檢驗紅細(xì)胞形態(tài)檢驗一、正常形態(tài)在良好的血涂片上，正常紅細(xì)胞的大小、形態(tài)較為一致，平均直徑7.2um，呈桔紅色圓盤狀。向心性淺染。二、大小異常

1.紅細(xì)胞大小不均紅細(xì)胞直徑相差一倍以上，常見于各種重癥增生性貧血，尤其見于重癥巨幼細(xì)胞貧血。第一節(jié)紅細(xì)胞檢驗小紅細(xì)胞直徑小于6um者稱為小紅細(xì)胞，正常人偶見。提示血紅蛋白合成障礙，可能由于缺鐵和珠蛋白代謝異常所致。見于缺鐵性貧血和珠蛋白生成障礙性貧血。常伴有中心淺染區(qū)擴(kuò)大。大紅細(xì)胞直徑大于10um，見于溶血性貧血（由于不全成熟的紅細(xì)胞增多）及巨幼紅細(xì)胞性貧血（是由于葉酸或維生素B12缺乏，DNA合成障礙，血紅蛋白合成過剩，脫核后形成大紅細(xì)胞或巨紅細(xì)胞）。第一節(jié)紅細(xì)胞檢驗巨紅細(xì)胞直徑大于15um，見于巨幼細(xì)胞貧血。細(xì)胞中心淺染區(qū)消失。三、形態(tài)異常

1.球形紅細(xì)胞球形紅細(xì)胞直徑小于正常，厚度增加常大于2um，無中心淺染區(qū)，似球形。常見于遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥、自身免疫性溶血性貧血、新生兒溶血病及紅細(xì)胞酶缺陷所致溶血性貧血等。第一節(jié)紅細(xì)胞檢驗橢圓形紅細(xì)胞橢圓形紅細(xì)胞呈卵圓形、桿形，長度可大于寬度3-4倍，是細(xì)胞膜缺陷所致，在遺傳形橢圓形紅細(xì)胞增多癥病人血涂片中此細(xì)胞可在25%以上。靶形紅細(xì)胞中心區(qū)和細(xì)胞周緣染色深，其間為不染色的蒼白環(huán)。是由于Hb含量不足而且分布不均。見于低色素性貧血，尤其是珠蛋白生成障礙性貧血。第一節(jié)紅細(xì)胞檢驗棘狀紅細(xì)胞紅細(xì)胞表面有刺狀突起，大小不一、形態(tài)各異。常見于遺傳性β脂蛋白缺乏癥及脾切除、酒精中毒性肝病、尿毒癥。5.其它異形紅細(xì)胞第一節(jié)紅細(xì)胞檢驗四、染色異常

1.低色素性紅細(xì)胞：血紅蛋白含量低，中心淺染區(qū)擴(kuò)大。常見于缺鐵性貧血、珠蛋白生成障礙性貧血、鐵粒幼細(xì)胞貧血。

2.高色素性紅細(xì)胞：血紅蛋白含量高，染色深，中心淺染區(qū)縮小或消失。見于巨幼細(xì)胞貧血。

3.嗜多色性細(xì)胞：屬于尚未完全成熟的紅細(xì)胞，細(xì)胞較大，由于胞漿中含有多少不等的嗜堿性物質(zhì)RNA而被染成灰藍(lán)色。見于白血病、溶血性貧血。

第一節(jié)紅細(xì)胞檢驗五、結(jié)構(gòu)異常

1.嗜堿性點彩紅細(xì)胞：指在瑞氏染色下，胞漿內(nèi)存在嗜堿性黑藍(lán)色顆粒的紅細(xì)胞，屬于未完全成熟紅細(xì)胞，顆粒大小不一、多少不均。常作為鉛中毒診斷篩選指標(biāo)。

2.染色質(zhì)小體：位于成熟或幼紅細(xì)胞的胞漿中圓形，1-2um，紫色，為核殘余物，常見于巨幼細(xì)胞貧血、溶血性貧血等。

第一節(jié)紅細(xì)胞檢驗3.卡波氏環(huán)：在成熟或幼稚紅細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)，呈紫紅色線圈狀或8字形，可能是胞漿中脂蛋白變性，見于巨幼細(xì)胞性貧血和鉛中毒。

4.有核紅細(xì)胞：即幼稚紅細(xì)胞，出現(xiàn)在外周血為病理現(xiàn)象，見于各種溶血性貧血、白血病。

第一節(jié)紅細(xì)胞檢驗網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)一、定義：是未完全成熟的紅細(xì)胞，是晚幼紅細(xì)胞脫核后到完全成熟紅細(xì)胞之間的過渡型細(xì)胞。其胞漿內(nèi)還殘存多少不等的嗜堿性物質(zhì)（RNA），經(jīng)燦爛甲酚藍(lán)、新亞甲藍(lán)等活體染色法染色，嗜堿物質(zhì)凝成顆粒，其顆粒又聯(lián)綴成線，而構(gòu)成淺藍(lán)或深藍(lán)的網(wǎng)織狀結(jié)構(gòu)，稱網(wǎng)織紅細(xì)胞。第一節(jié)紅細(xì)胞檢驗二、染色原理網(wǎng)織紅細(xì)胞內(nèi)RNA的磷酸基（帶負(fù)電荷）能與燦爛甲酚藍(lán)、新亞甲藍(lán)等堿性染料的有色反應(yīng)基（帶正點荷）結(jié)合，形成核酸與堿性染料復(fù)合物的多聚體，凝成顆粒，其顆粒又聯(lián)綴成線，而構(gòu)成淺藍(lán)或深藍(lán)的網(wǎng)織狀結(jié)構(gòu)，凡含有兩個以上深染顆粒（后具有線網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)）的無核紅細(xì)胞，即為網(wǎng)織紅細(xì)胞。第一節(jié)紅細(xì)胞檢驗三、器材和試劑

1.標(biāo)準(zhǔn)生物顯微鏡、試管、Miller窺盤（直徑19