檢驗(yàn)科血液分析SOP手冊

檢驗(yàn)科血液分析SOP手冊目錄

編號名稱頁面

S0P_09-l血液涂片檢查標(biāo)準(zhǔn)操作程序3-10

S0P_09-2骨髓檢查標(biāo)準(zhǔn)操作程序11-14

S0P_09-3溶血性貧血檢查標(biāo)準(zhǔn)操作程序15-19

S0P_09-4白細(xì)胞手工計(jì)數(shù)檢查標(biāo)準(zhǔn)操作程序20-20

S0P_09-5紅細(xì)胞手工計(jì)數(shù)檢查標(biāo)準(zhǔn)操作程序21-21

S0P_09-6嗜酸粒細(xì)胞手工計(jì)數(shù)（伊紅酚法）標(biāo)準(zhǔn)操作程序22-22

S0P_09-7網(wǎng)織紅細(xì)胞手工計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)操作程序23-23

S0P_09-8血小板手工計(jì)數(shù)檢查標(biāo)準(zhǔn)操作程序24-24

S0P_09-9血沉分析標(biāo)準(zhǔn)操作程序25-25

S0P_09-10血常規(guī)檢驗(yàn)室內(nèi)質(zhì)控的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程26-28

S0P_09-ll血常規(guī)檢驗(yàn)室間質(zhì)評（EQA）的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程29-30

S0P_09-12臨床凝血檢驗(yàn)室內(nèi)質(zhì)控的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程31-33

S0P_09-13臨床凝血檢驗(yàn)室間質(zhì)評（EQA）的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程34-35

S0P_09-14邁瑞B(yǎng)C—3000PLUS三分類血液分析儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程36-42

S0P_09-15SymexpocH_80i型三分類血液分析儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程43-49

S0P_09-16SYSMEX—CA50型血凝分析儀標(biāo)準(zhǔn)操作程序50-51

S0P_09-17SYSMEX-CA50型血凝分析儀項(xiàng)目標(biāo)準(zhǔn)操作程序52-56

SOP09-18雅培RUBY五分類血球分析儀標(biāo)準(zhǔn)操作程序57-61

附件1國際血液學(xué)復(fù)檢專家組推薦的41條血常規(guī)復(fù)檢規(guī)則62-66

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操作者從事本項(xiàng)工作前，必須認(rèn)真學(xué)習(xí)并掌握本手冊的內(nèi)容，嚴(yán)

格按照操作規(guī)程操作！

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S0P_09-l血液涂片檢查標(biāo)準(zhǔn)操作程序

一、目的：統(tǒng)一項(xiàng)目操作規(guī)程，嚴(yán)格檢驗(yàn)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為臨床提供及時(shí)、可靠的結(jié)果報(bào)告。

二、適用范圍：血液寄生蟲檢驗(yàn)。

三、操作人員：檢驗(yàn)科授權(quán)工作人員。

四、操作步驟：

1原理：血液制成細(xì)胞分布均勻的膜涂片或厚涂片經(jīng)溶血后，運(yùn)用復(fù)合染料染色，觀察細(xì)胞

形態(tài)、結(jié)構(gòu)、內(nèi)容物等，以鑒別、判斷血液中的異常細(xì)胞和寄生蟲。

2試劑：由臺灣貝索公司提供。

2.1瑞氏-姬姆薩復(fù)合染色液：

2.2堿性亞甲蘭染液：

2.3煌焦油藍(lán)生理鹽水溶液：

3方法：

3.1紅細(xì)胞檢查：正常紅細(xì)胞呈圓形，中央略凹陷，大小較為一致，直徑為6?9um。

3.1.1大小異常紅細(xì)胞：各種貧血時(shí)，紅細(xì)胞可出現(xiàn)大小不一，凡直徑＞10Um者稱大紅細(xì)；＞15

Nm者稱巨紅細(xì)胞，常見于巨幼細(xì)胞性貧血、肝臟疾病等；直徑＜6um者稱為小紅細(xì)胞,

多見于缺鐵性貧血等疾病。

3.1.2形態(tài)異常紅細(xì)胞：

3.1.2.1球形紅細(xì)胞：紅細(xì)胞直徑通常＜6um,厚度增加，通常＞2.6口m,因而紅細(xì)胞呈小圓

球形，細(xì)胞中心區(qū)血紅蛋白含量較正常紅細(xì)胞多，常見于：遺傳性球形細(xì)胞增多癥；自

身免疫性溶血性貧血；異常血紅蛋白?。℉bS及HbC病等）。

3.1.2.2橢圓形紅細(xì)胞：紅細(xì)胞呈橢圓形，橫徑縮短，長徑增大，有時(shí)可呈畸形。正常人血

液中也可見到，但最多不超過15%。增多見于：遺傳性橢圓形細(xì)胞增多癥，一般要高于25%?

50%才有診斷價(jià)值；大細(xì)胞性貧血，可達(dá)25%；其他各類貧血都可有不同程度的增多。

3.1.2.3靶形紅細(xì)胞：比正常紅細(xì)胞扁薄，中心有少許血紅蛋白，部分可與周圍的血紅蛋白

連接，邊緣部染色深，故呈靶狀。主要見于：地中海貧血；嚴(yán)重缺鐵性貧血；一些血紅

蛋白?。ㄑt蛋白C、D、E、S?。?；肝病、脾切除后及阻塞性黃疸等。

3.1.2.4鐮形紅細(xì)胞：細(xì)胞狹長似鐮刀，也可呈麥粒狀或冬青葉樣，主要見于遺傳性鐮形紅

細(xì)胞增多癥。

3.1.2.5口形紅細(xì)胞：紅細(xì)胞淡染區(qū)呈裂口狀狹孔。正?！?%增高見于：口形細(xì)胞增多癥；

急性乙醇中毒。

3.1.2.6棘形紅細(xì)胞：是一種帶刺狀的紅細(xì)胞，刺呈針刺狀或尖刺狀，見于：棘細(xì)胞增多癥（遺

傳性血漿8-脂蛋臼缺乏癥），可高達(dá)70%?80%；嚴(yán)重肝病或制片不當(dāng)。

3.1.2.7皺縮紅細(xì)胞：紅細(xì)胞表面有圓形棘刺樣突起，可見于干燥太慢的血片，也可見于急

性鉛中毒、尿毒癥等病人的血片上。

3.1.2.8鋸齒細(xì)胞：也稱刺毛細(xì)胞，形態(tài)和皺縮細(xì)胞相似。主要見于尿毒癥、微血管病性溶

血性貧血、丙酮酸激酶缺乏癥、陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥等。

3.1.2.9裂片細(xì)胞：指紅細(xì)胞碎片，包括盔形紅細(xì)胞等，多見于DIC、微血管病性溶血性貧血

和心原性溶血性貧血等紅細(xì)胞破碎綜合征。其他也見于化學(xué)中毒、腎功能不全、血栓性

血小板減少性紫瘢等。

3.1.3染色異常：

3.1.3.1著色過淺：紅細(xì)胞中心淡染區(qū)擴(kuò)大，多見于缺鐵性、地中海貧血及其他血紅蛋白病。

3.1.3.2著色過深：中心淡染區(qū)不見，著色較深，見于先天性溶血性貧血及大細(xì)胞性貧血。

3.1.3.36嗜多色性紅細(xì)胞：紅細(xì)胞染成灰藍(lán)色、灰紅色、淡灰色，較正常紅細(xì)胞稍大。這是

一種尚未完全成熟的紅細(xì)胞，多染性物質(zhì)是核糖體，隨著細(xì)胞的成熟而逐漸消失，主要

見于增生性貧血。

3.1.4結(jié)構(gòu)異常：

3.1.4.1嗜堿性點(diǎn)彩紅細(xì)胞:

(1).按常法制成薄血片，自然干燥后，用甲醇固定3min。

(2).用堿性亞甲基藍(lán)染液染色1?2min,水洗待干。

(3).用油鏡計(jì)數(shù)1000個(gè)紅細(xì)胞中嗜堿性點(diǎn)彩紅細(xì)胞數(shù)，以百分率報(bào)告。

附注：

①用堿性亞甲基藍(lán)液染色后，紅細(xì)胞呈淺藍(lán)綠色，嗜堿性點(diǎn)彩呈深藍(lán)色。也可用瑞氏染

色，嗜堿性點(diǎn)彩呈藍(lán)黑色。由于點(diǎn)彩紅細(xì)胞分布不勻，必要時(shí)擴(kuò)大計(jì)數(shù)紅細(xì)胞數(shù)。

②參考值＜0.0現(xiàn)(〈lOO/lO'RBC)。增高：鉛、汞、銀、鈿等金屬中毒及硝基苯、苯胺等

中毒時(shí)顯著增高；溶血性貧血、巨幼細(xì)胞性貧血、惡性貧血、惡性腫瘤等可增高。

3.1.4.2卡波環(huán)：成熟紅細(xì)胞胞漿內(nèi)有染成紫紅色的細(xì)線狀環(huán)，呈圓形或8字形，可能是殘留

核膜所致，見于惡性貧血、溶血性貧血、鉛中毒等。

3.1.4.3豪-周小體和核碎塊：成熟紅細(xì)胞中含有紫紅色圓形小體，大小不等，數(shù)量不一，可

能是殘留的核染色質(zhì)微粒。見于增生性貧血、脾切除后、巨幼細(xì)胞性貧血、惡性貧血等。

3.1.4.4有核紅細(xì)胞：溶血性貧血、急慢性白血病、紅白血病、髓外造血及嚴(yán)重缺氧等常見。

3.1.5網(wǎng)織紅細(xì)胞百分?jǐn)?shù)：

(1).于小試管中滴加1滴煌焦油藍(lán)生理鹽水溶液或煌焦油藍(lán)ACD溶液。

(2).加入末梢血2滴于上述試管中，混勻。

(3).靜置15?20min后，取用1滴制成薄片。

(4).油鏡下檢查1000個(gè)紅細(xì)胞中網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)，以百分率或絕對值報(bào)告。

附注：

①活體染色時(shí)間不能過短，室溫低時(shí)，放37℃溫箱。

②最好制片2張，每張計(jì)數(shù)500個(gè)紅細(xì)胞，避免分布不均引起的誤差。涂片要薄而均勻，

不使紅細(xì)胞重疊。

③為計(jì)數(shù)方便，可于目鏡中放一個(gè)中間有孔之硬紙片，縮小視野，便于計(jì)數(shù)。

④因操作誤差大，不宜用玻片直接染色法。

⑤參考值成人：0.005-0.015(0.5%~1.5%)；新生兒：0.03?0.06(3%?6%)

增加：表示骨髓造血功能旺盛，各型貧血均可增多，溶血性貧血增加尤為顯著，

惡性貧血或缺鐵性貧血應(yīng)用維生素B12或供鐵質(zhì)后顯著增多，表示有療效。

減少：再生障礙性貧血。

@網(wǎng)織紅細(xì)胞絕對值計(jì)算：

網(wǎng)織紅細(xì)胞絕對值=(網(wǎng)織紅細(xì)胞%x紅細(xì)胞/ul)/100

⑦僅用網(wǎng)織紅細(xì)胞相對值或絕對值表達(dá)還不夠確切。若貧血時(shí)骨髓生成紅細(xì)胞增多，

大量尚未成熟紅細(xì)胞釋放入血，而這些網(wǎng)織紅細(xì)胞在外周成熟時(shí)間需2天，而正常

生理情況下骨髓釋放到外周的網(wǎng)織紅細(xì)胞僅一天后其胞質(zhì)中RNA即消失。為此Finch

提出在貧血時(shí)用網(wǎng)織紅細(xì)胞生成指數(shù)(reticulocyteproductionindex,RPI)報(bào)告，

它代表網(wǎng)織紅細(xì)胞的生成相當(dāng)于正常人的多少倍。

3.2白細(xì)胞檢查：

3.2.1白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)：

(1).采血后推制厚薄適宜的血膜片，血膜應(yīng)呈舌狀，頭、體、尾清晰可分。

(2).推好的血膜在空氣中晃動，以促使快干。天氣寒冷或潮濕時(shí)，應(yīng)置于37℃溫箱中保溫

促干，以免細(xì)胞變形縮小。

(3).染色：瑞氏-姬姆薩染色法或快速染色法。

(4).選擇涂片的體尾交界處染色良好的區(qū)域，在油鏡下計(jì)數(shù)100個(gè)白細(xì)胞，按其形態(tài)特征

進(jìn)行分類計(jì)數(shù)，求出各類細(xì)胞所占比值(百分率)。

附注：

①要避免重復(fù)計(jì)數(shù)，玻片應(yīng)由血膜邊緣向中央依次上下呈曲線移動。

②白細(xì)胞總數(shù)超過20X109/1“應(yīng)計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞。明顯減少的血片，可檢查多張血片。

③快速染色法無法確定的細(xì)胞，應(yīng)該用瑞氏-姬姆薩染色復(fù)查，以免漏診血液病。

④白細(xì)胞形態(tài)變化較大，應(yīng)經(jīng)常由高年資檢驗(yàn)人員進(jìn)行核實(shí)，以減少誤差。

3.2.2異常白細(xì)胞形態(tài)：外周血象中，除各類幼稚細(xì)胞外，常能見到細(xì)胞形態(tài)上的異常變化。

3.2.2.1中性粒細(xì)胞：

(1).核象變化：反映中性粒細(xì)胞的成熟程度。正常血象中有少量桿狀核細(xì)胞出現(xiàn)，它與分

葉核細(xì)胞之間的比值約占1：13。

①核左移：是指桿狀核細(xì)胞增多，常見感染。極度左移，多見于類白血病反應(yīng)或白血病。

伴白細(xì)胞總數(shù)增高的核左移：稱再生性左移，常見于急性化膿性感染(大葉性肺炎等)。

白細(xì)胞總數(shù)不增加或減低的核左移：稱退行性左移，常見于嚴(yán)重感染、機(jī)體抵抗力低下。

②核右移：是指不僅分葉核粒細(xì)胞增多，且分葉過多，常見4葉、5葉(正常時(shí)多分3葉)，

這是造血功能衰退或造血物質(zhì)缺乏的表現(xiàn)。常見于營養(yǎng)性巨幼細(xì)胞性貧血和使用抗代

謝藥物后。此外，在疾病進(jìn)行期突然出現(xiàn)核象右移，表示預(yù)后不良。

(2).毒性變化：嚴(yán)重感染、惡性腫瘤、各種重金屬或藥物中毒、大面積燒傷等癥時(shí)，中性

粒細(xì)胞可出現(xiàn)形態(tài)變異。

①細(xì)胞大小不均：為骨髓內(nèi)幼稚粒細(xì)胞發(fā)生不規(guī)則的分裂增殖所致。

②毒性顆粒：胞漿中部分或全部顆粒變粗，著色深，顆粒的分布及大小不等?？赡転橹?/p>

性顆粒成熟過程中發(fā)生變性所致。

③空泡：可在胞漿或核中出現(xiàn)，常為多個(gè)，被認(rèn)為是細(xì)胞脂肪變性后未能著色所致。

④Dohle體：胞漿內(nèi)出現(xiàn)嗜堿性點(diǎn)、線、梨形或云霧狀物質(zhì)，可能為核漿發(fā)育不平衡所

致，為細(xì)胞嚴(yán)重毒性變的表現(xiàn)。

⑤核棘突：胞核有各種形態(tài)的芽狀突出，臨床意義尚不明確，可能與中毒、癌轉(zhuǎn)移、嚴(yán)

重放射損傷等有關(guān)。

(3).退行性變：表現(xiàn)為胞體腫大，結(jié)構(gòu)模糊，邊緣不清。胞核可呈固縮、腫脹、破碎、溶

解等變化，退行變可以是細(xì)胞衰老死亡的表現(xiàn)。

3.2.22淋巴細(xì)胞：淋巴細(xì)胞形態(tài)變異在多種疾病如各種病毒感染、傳染性單核細(xì)胞增多癥

最為常見。此外，瘧疾、過敏性疾病、淋巴結(jié)炎等亦可見，統(tǒng)稱為異型淋巴細(xì)胞。傳染

性單核細(xì)胞增多癥患者血液中常可出現(xiàn)3種異型淋巴細(xì)胞，即空泡型、不規(guī)則型和幼稚型。

3.3紅斑狼瘡細(xì)胞檢查：紅斑狼瘡患者血液內(nèi)的紅斑狼瘡因子為一種抗核蛋白的IgG抗體，它

作用于細(xì)胞核抗原決定簇，并使細(xì)胞核脹大，失去原有的染色質(zhì)致密結(jié)構(gòu)，形成一種均

勻無結(jié)構(gòu)的圓形煙霧狀物質(zhì)，稱均勻體。這種均勻體蛋白在補(bǔ)體作用下，被成熟的中性

多核白細(xì)胞吞噬后即為紅斑狼瘡細(xì)胞。這種現(xiàn)象在體外形成，故須在抽取靜脈血后給予

一定的條件和在適當(dāng)?shù)臏囟认路胖靡欢〞r(shí)間，促使其形成。

(1).抽取患者血液2?3ml,注于干燥潔凈試管內(nèi)，于室溫待凝。

(2).于凝固剛形成時(shí)，用竹簽將凝塊攪碎，并將殘余凝塊除去。

(3).以2000r/min離心沉淀lOmin,使白細(xì)胞聚集在同一層面，以利于狼瘡細(xì)胞形成。

(4).置37℃溫箱內(nèi)溫育2h。

(5).取出白細(xì)胞層及其上下各少許，置紅細(xì)胞比積管內(nèi)，以2000r/min離心，沉淀lOmin。

(6).吸去上層液，輕輕吸取白細(xì)胞層，制成薄片3?4張。

(7).以瑞氏染液染色、鏡檢。

附注

①操作時(shí)間不能超過3h。過短，狼瘡細(xì)胞形成不佳；反之，細(xì)胞溶解過多，影響檢出。

②注意與果餡細(xì)胞鑒別，果餡細(xì)胞多為單核細(xì)胞吞噬淋巴細(xì)胞的核所形成，核仍然保持

染色質(zhì)結(jié)構(gòu)和染色特性(著紫紅色)。

③多出現(xiàn)于系統(tǒng)性紅斑狼瘡，其活動期較緩解期陽性率高；膠原性疾病如風(fēng)濕病、類風(fēng)

濕性關(guān)節(jié)炎、結(jié)節(jié)性動脈炎、硬皮病及皮肌炎等有時(shí)也可查到此種細(xì)胞；

④未找到狼瘡細(xì)胞并不能否定紅斑狼瘡的診斷，應(yīng)進(jìn)一步作免疫學(xué)(抗核抗體等)檢查。

3.4寄生蟲檢查：

3.4.1瘧原蟲檢查：

(1).薄血片法

①以常法推制成薄片。②血膜完全干燥后即可用瑞氏-姬姆薩復(fù)合染色液染色檢查。

(2).厚血片法

①在潔凈玻片上，滴患者血液2滴。

②用推片角將血液由內(nèi)向外轉(zhuǎn)涂成直徑約1cm、厚薄均勻的血膜，在室溫中自然干燥。

③在干燥的血膜上滴加蒸懦水?dāng)?shù)滴，完全覆蓋血膜，溶血數(shù)分鐘。傾去溶血液。

④不必待干，進(jìn)行染色，染色法同薄片。干后鏡檢瘧原蟲形態(tài)特點(diǎn)：

形態(tài)特點(diǎn)間日瘧原蟲三日瘧原蟲惡性瘧原蟲

環(huán)蟲體大小較大，約為紅細(xì)胞的1/3較大，約為紅細(xì)胞的1/3較小，約為紅細(xì)胞的1/6

狀細(xì)胞漿淺藍(lán)色，呈較薄之環(huán)狀淺藍(lán)色，呈較厚之環(huán)狀淺藍(lán)色，環(huán)狀較細(xì)薄

體染色質(zhì)紅色小點(diǎn)，一般為1個(gè)紅色小點(diǎn)，一般為1個(gè)紅色小點(diǎn)，一般為1-2個(gè)

蟲體大小很大，甚至充滿整個(gè)RBC較小

滋細(xì)胞漿呈阿米巴狀，變化很多呈堅(jiān)實(shí)帶狀，變化不多

養(yǎng)瘧色素棕黃色，呈微小短桿狀，四散黃綠色，呈較粗顆粒狀，四散

體斑點(diǎn)薛氏小點(diǎn)，鮮紅細(xì)小，均勻齊氏小點(diǎn)，紅色在末梢血液中查不到

蟲體大小很大較小

裂細(xì)胞漿松散，比較不規(guī)則堅(jiān)實(shí)較圓

殖

裂殖子12?24個(gè),平均16個(gè)6?12個(gè)

體排列不規(guī)則排列不規(guī)則或呈花朵狀

蟲體大小園形，約為RBC1/2以上園形，與RBC等大或較小半月形，兩端鈍圓或尖

配細(xì)胞漿深藍(lán)色深藍(lán)色藍(lán)色

子染色質(zhì)結(jié)實(shí)，深紅色，位于一邊結(jié)實(shí)，深紅色，位于一邊結(jié)實(shí)，深紅色，位于中央

體瘧色素沿邊分布沿邊分布黑褐色，密集于中央

紅細(xì)胞脹大，色較淡正常或縮小正常，偶然縮小，色深

附注：

①采血時(shí)間：間日瘧及三日瘧患者應(yīng)在發(fā)作后數(shù)小時(shí)至10余小時(shí)采血，此時(shí)，早期滋養(yǎng)

體已發(fā)育至易于鑒別形態(tài)的晚期；惡性瘧患者，應(yīng)在發(fā)作后20h左右采血。

②厚血片的溶血要及時(shí)。厚血片的放置期限在夏季不超過48h,冬季不超過72h,否則溶

血不完全，會影響檢驗(yàn)質(zhì)量。

③染色后，水洗時(shí)不要先倒去染液，應(yīng)讓清水流進(jìn)染液，使沉渣漂浮沖走。

④薄片油鏡檢查，須找100或100以上個(gè)視野才能報(bào)告“未檢出瘧原蟲”。厚血片須找20

個(gè)視野或以上。

⑤瘧原蟲必須分類報(bào)告，找到環(huán)狀體后，須再仔細(xì)尋找更為成熟的階段，以便分類。如

確實(shí)未找到更為成熟階段的瘧原蟲，可報(bào)告為“檢出環(huán)狀體瘧原蟲”。

⑥有可能出現(xiàn)2種或3種瘧原蟲混合感染時(shí)，以間日瘧與惡性瘧原蟲混合感染為常見，須

注意鑒別。

⑦注意區(qū)別易與瘧原蟲混淆的其他雜物。特別是厚血片檢查時(shí)，缺乏經(jīng)驗(yàn)者必須在薄血

片上仔細(xì)尋找證實(shí)，才得報(bào)告。

⑧除上述3種瘧原蟲外，曾發(fā)現(xiàn)過少數(shù)卵形瘧原蟲引起的病例。卵形瘧原蟲的形態(tài)基本

上與三日瘧原蟲相似，但蟲體稍大，受感染的紅細(xì)胞略脹大，滋養(yǎng)體后期及裂殖體前

期的原蟲呈圓形或卵圓形。

3.4.2微絲拗檢查：

(1).鮮血片法：鮮血1滴置于玻片中央，用一張蓋玻片覆蓋于鮮血上，立即用低倍鏡尋找

活動于紅細(xì)胞間似蚯蚓樣的微絲拗。

(2).厚血片法:

①取耳垂血2?3滴，置于載玻片中央。

②用推片角將血液由內(nèi)向外回轉(zhuǎn)涂成2cmX3cm長橢圓形厚薄均勻的血膜，自然干燥。

③在血膜上滴加蒸儲水?dāng)?shù)滴，完全覆蓋血膜，溶血數(shù)分鐘。

④待血膜呈乳白色后傾去水。

⑤在血膜未干時(shí)，鏡檢尋找微絲慟。

⑥如需鑒定蟲種，可再干燥、固定，染色。

(3).試管濃集法：

①自靜脈采血1?2ml,立即放入含109mmol/L枸檬酸鈉0。4ml的試管中，混和抗凝。

②加入8?10ml蒸儲水，顛倒混和，使紅細(xì)胞全部溶解，以1500r/min離心3?5min。

③倒去上清液，取沉渣鏡檢，尋找微絲蜘。如需鑒定蟲種，可干燥固定后染色。

馬來與班氏微絲慟的鑒別

鑒別點(diǎn)馬來微絲蝴班氏微絲拗

長短長短177-260um,平均220m230?296Mll1,平均260nl

外形卷曲迂回，曲線多生硬，不規(guī)則，較粗短曲線自然，平滑而少，較馬來微絲蝴細(xì)長

細(xì)胞核擁集，彼此重疊排列較均勻，清楚可數(shù)

頭部較長為身體寬度較短，與身體寬度相等

尾核1?2個(gè)尾核，后者位于尾部末端，似驚嘆號無尾核

檢出部位周圍血液內(nèi)周圍血液內(nèi)，鞘膜腔積液內(nèi)

附注：

①未染色標(biāo)本要與棉花纖維(長短、大小不一致，無體柱細(xì)胞，也不活動)相鑒別。

②采血時(shí)間以晚上9?12時(shí)前后為宜。采血前讓患者躺臥片刻。

③夜間采血有困難患者可采用誘出法(白天口服海群生2?6mg/kg體重，15min后取血)。

④報(bào)告方式：檢出或未檢出微絲蜘。

3.4.3回歸熱螺旋體檢查：回歸熱螺旋體為回歸熱的病原體。歸類于疏螺旋體屬，能活動，

有3?12個(gè)疏松的螺旋形，形態(tài)頗不規(guī)則，長短不一，約8?30um,可在血液中找到。

(1).薄血片法：常規(guī)制血膜，瑞氏染色。油鏡檢查，螺旋體常在紅細(xì)胞空隙間，容易識別。

(2).厚血片法：染色后鏡檢，陽性率較高。

(3).暗視野映光法：用抗凝血，滴置載物玻片，加蓋玻片，檢查可見活動的螺旋體。

附注：

必須在發(fā)熱期采血檢查。

也可以從骨髓穿刺液中檢出，陽性率較末梢血液為高。

報(bào)告方式：“檢出回歸熱螺旋體或未檢出回歸熱螺旋體?！?/p>

3.4.4黑熱病利-朵氏體檢查：利-朵氏體是黑熱病的病原體，為血內(nèi)鞭毛蟲的一種。由于在

血液內(nèi)被單核細(xì)胞吞噬，即變?yōu)闊o鞭毛的利什曼型。在單核細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行增殖，直至單核

細(xì)胞破裂。原蟲鉆到內(nèi)臟，又被單核一巨噬系細(xì)胞所吞噬，再繼續(xù)進(jìn)行分裂增殖。所以，

利一朵氏體是原蟲在人體內(nèi)發(fā)育的無鞭毛階段。

利-朵氏體為圓形或卵圓形小體，偶呈狹長形。圓形原蟲的直徑為2.4?5.2口m,平

均為3.5um；卵圓形原蟲大小為2.9?5.7umX1.8?4Hm，平均為2.8?4.4um。瑞氏染

色細(xì)胞漿染成淺藍(lán)色，內(nèi)部有紫紅色的圓核與小棍形的動基體，多半在人體巨噬細(xì)胞及

單核細(xì)胞內(nèi)，偶見于中性分葉核細(xì)胞內(nèi)，單獨(dú)游離在細(xì)胞外的也不少。

(1).穿刺淋巴結(jié)、肝、脾或骨髓等制成涂片及血薄涂片。

(2).瑞氏染色、油鏡鏡檢。

附注：

①肝、脾穿刺液涂片檢查陽性率高，骨髓及淋巴結(jié)次之。

②血薄涂片，于中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞內(nèi)可能查見，但所見原蟲少且被吞噬、消化，形

態(tài)和著色都不正常'，不易辨認(rèn)，也易與血小板相混淆，實(shí)用價(jià)值小。

3.4.5弓漿蟲檢查：弓漿蟲也稱為毒漿原蟲，為弓漿蟲病的病原體，在北非哥地發(fā)現(xiàn)的稱為

哥地弓漿蟲。

弓漿蟲系一種寄生在組織內(nèi)的原蟲，可感染人和其他哺乳類動物，如犬、貓及家兔

等；傳染方式尚未完全了解，可能由于昆蟲作媒介或飛沫及接觸傳染所致。

弓漿蟲呈半月形態(tài)，一端圓鈍，另一端較尖，長4?7um,寬2?4um,胞漿呈濁藍(lán)

色，細(xì)胞核偏于一側(cè)，有時(shí)可見2個(gè)核，染成紅色，與惡性瘧原蟲的配子母體相似，但較

小；有的與利一朵氏體相似，但又較大，常居細(xì)胞內(nèi)，單獨(dú)在細(xì)胞外的也不少。

(1).涂片法：各種體液、血液、骨髓液、尿液直接或沉淀濃縮涂片，用姬氏或瑞氏法染色。

(2).動物接種法：采取血液、腦脊液或組織液0.03ml,注射于10g重小白鼠腦內(nèi)或0.5~1.0ml

注入腹腔內(nèi)，注意觀察。1?3周后發(fā)現(xiàn)小白鼠有嚴(yán)重病態(tài)或?yàn)l死狀態(tài)時(shí)即行殺死解剖，

觀察其病理變化。常見鼠蹊部淋巴腺腫大，腹腔積有粘性滲出液，肝脾腫大，充血等。

取滲出液及腦、肝、脾、腎等組織作涂片染色，若為陽性，常有大量弓漿蟲見到。

(3).組織培養(yǎng)法：建立猴腎或豬腎細(xì)胞的單層培養(yǎng)，然后將檢查材料接種上去，弓漿蟲可

迅速繁殖，再涂片、染色、鏡檢，證實(shí)。

參考文獻(xiàn)：

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S0P_09-2骨髓檢查標(biāo)準(zhǔn)操作程序

一、目的：統(tǒng)一項(xiàng)目操作規(guī)程，嚴(yán)格檢驗(yàn)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為臨床提供及時(shí)、可靠的結(jié)果報(bào)告.

二、適用范圍：血液骨髓檢驗(yàn)。

三、操作人員：檢驗(yàn)科授權(quán)工作人員。

四、操作步驟：

血細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查主要用于觀察骨髓與血液中細(xì)胞數(shù)量和質(zhì)量的變化，借以了解其造血

功能。對疾病的診斷、療效的觀察、預(yù)后等研究都具有重大價(jià)值。血細(xì)胞化學(xué)染色是在觀察

形態(tài)的基礎(chǔ)上進(jìn)一步了解細(xì)胞化學(xué)成分，對血細(xì)胞各種生化成分及代謝產(chǎn)物作定性、定位和

定量的觀察，臨床上亦常用以協(xié)助診斷、鑒別診斷血液病和其他疾病。

1骨髓象檢查：

i.i骨髓細(xì)胞形態(tài)檢查步驟：

(1)骨髓取材：

①骨髓穿刺部位：一般取胸骨、棘突、骼骨前崎或后崎等部位。兩歲以內(nèi)小兒主張用脛骨

穿刺。穿刺部位不同，取材可能有明顯差異。以胸骨穿刺最好，棘突次之，骸骨最差。

故必要時(shí)應(yīng)多部位取材，以便能全面地了解骨髓情況。

②吸骨髓液：一般不超過0.2ml,否則易于稀釋。

③骨髓取材滿意的幾項(xiàng)指標(biāo)：抽吸骨髓時(shí)，患者有特殊酸痛感，骨髓液中應(yīng)含有骨髓小粒。

顯微鏡下觀察涂片，可發(fā)現(xiàn)骨髓特有細(xì)胞。

(2)涂片檢查：

①涂片制備：要求涂片均勻，有頭、體、尾三部分，血膜面積約1.5cmX3cm,厚度以透過

血膜可看清字跡為限。選擇骨雕小粒部分制作涂片，骨髓液量不宜過多。因骨髓的凝固

較快，涂片過程要快。骨髓不可用草酸鹽抗凝，否則會使血細(xì)胞核變形，核染色質(zhì)致密，

胞漿空泡形成，出現(xiàn)草酸鹽結(jié)晶。

②涂片檢查：一般體積大的細(xì)胞分布于涂片的上下邊緣及尾部，計(jì)數(shù)時(shí)應(yīng)該從體尾交界處

開始迂回向尾部移動。

(3)染色：選用瑞氏(Wright)和姬姆薩(Giemsa)混合染色。具體方法：髓片兩端用蠟筆劃

線，必要時(shí)在血膜邊緣較厚處用鉛筆寫明患者姓名及日期或編號。加染液3?5滴于涂片

上，靜置Imin(天熱時(shí)間縮短)，然后加5?10滴磷酸鹽緩沖液，使兩液混勻，約10?15min,

用水沖洗髓片，沖洗時(shí)平放玻片，緩緩用流水沖洗(勿先倒去染料)，待干鏡檢。

附注；

①涂片要新鮮，涂片后立即進(jìn)行染色，如特殊情況，一般不超過1周。否則，細(xì)胞蛋白質(zhì)

變性，使染色偏堿。

②染色時(shí)間長短與氣溫、細(xì)胞增生情況、染液的性能有關(guān)，要求將染色中的涂片在顯微鏡

下觀察，待顆粒清楚、核漿分明、著色滿意后才終止染色，沖洗晾干待檢。

③染色過深的涂片可用瑞氏-姬姆薩混合染液滴加于涂片上，馬上沖洗。如過淺可重染，

先加緩沖液，再加染色液，混合后復(fù)染到需要的深度。

(4)估計(jì)骨髓增生程度(骨髓涂片觀察)：先在低倍鏡下全面觀察成熟紅細(xì)胞與有核細(xì)胞

的大致比例，以確定增生程度。國內(nèi)一般分為5級，判斷標(biāo)準(zhǔn)如下：

增生極度活躍：成熟紅細(xì)胞與有核細(xì)胞之比約為1：1,見于白血病、紅白血病。

增生明顯活躍。：成熟紅細(xì)胞與有核細(xì)胞之比約為10：1,見于白血病、增生性貧血。

增生活躍：成熟紅細(xì)胞與有核細(xì)胞之比約為20：1,見于正常骨髓和某些貧血。

增生減低：成熟紅細(xì)胞與有核細(xì)胞之比約為50：1,見于造血功能低下時(shí)。

增生嚴(yán)重減低：成熟紅細(xì)胞與有核細(xì)胞之比約為300：1,見于典型的再生障礙性貧血。

(5)粒、紅比值計(jì)算：將粒細(xì)胞系統(tǒng)從原始到成熟階段的總和與紅細(xì)胞系統(tǒng)從原始到晚幼

紅細(xì)胞總和相比，稱為粒、紅比值。

參考值：成人為2?4：1。粒紅比值增高見于化膿性感染、類白血病反應(yīng)、粒細(xì)胞性

白血病、紅細(xì)胞生成受抑制等。降低見于粒細(xì)胞生成受抑制，如粒細(xì)胞缺乏癥或紅細(xì)胞

系統(tǒng)增生，如急性溶血或失血、缺鐵性貧血等。

1.2骨髓有核細(xì)胞計(jì)數(shù)(試管法)：用血紅蛋臼吸管吸取骨髓液20ml,放入裝有1ml白細(xì)胞稀

釋液的試管中，充分振蕩2min,搖勻。按白細(xì)胞計(jì)數(shù)方法，數(shù)5個(gè)大方格細(xì)胞，其結(jié)果乘以

102,即得1以有核細(xì)胞數(shù)。

參考值：10?180X1()9/L。增高見于骨髓增生性疾病(如白血病、溶血性貧血、脾功

能亢進(jìn))。降低見于骨髓增生不良性疾病(如再生障礙性貧血等)。

附注：骨髓穿刺時(shí)，勿混入血液，取骨髓液時(shí)，先計(jì)數(shù)后涂片，防止凝固。

L3骨髓巨核細(xì)胞計(jì)數(shù)：取骨髓液作涂片，低倍鏡檢查找巨核細(xì)胞，尋找1.5cmX3cm為一單

位面積，計(jì)數(shù)其巨核細(xì)胞。取材必須良好，涂片不宜過厚，以透過涂膜看到字跡為度。

參考值：巨核細(xì)胞參考值：7?35個(gè)。分類：原巨核細(xì)胞0；幼巨核細(xì)胞0?0.05(0?5%)；

顆粒型巨核細(xì)胞0.10?0.27(10%?27%)；產(chǎn)板型巨型巨核細(xì)胞0.44?0.60(44%?60%)；裸

核型巨核細(xì)胞0.08~0.30(8%~30%)o

幼稚型巨核細(xì)胞比例增加見于特發(fā)性血小板減少性紫瘢的急性型。顆粒型巨核細(xì)胞比

例增加見于特發(fā)性血小板減少性紫瘢的慢性型。

1.4骨髓象分析：先在低倍鏡下觀察取材、涂片、染色是否滿意，成熟紅細(xì)胞與有核細(xì)胞的

大致比例，以確定增生程度。計(jì)數(shù)全片巨核細(xì)胞數(shù)，注意有無體積較大的細(xì)胞，如轉(zhuǎn)移瘤

細(xì)胞、尼曼匹克細(xì)胞、高雪細(xì)胞等。后用油鏡作分類計(jì)數(shù)，一般以體尾交界處為宜。在分

類計(jì)數(shù)時(shí)，一張骨髓片計(jì)數(shù)200?500個(gè)有核細(xì)胞。

特殊顆粒---------A嗜中性、嗜堿性、嗜酸性粒細(xì)胞

嗜亞尼林蘭顆粒―x核仁f「有-----?幼稚細(xì)胞

U_無f淋巴、單核、巨核、漿細(xì)胞

粒一無一＞?核—＞「無紅細(xì)胞

—有-------?核仁-----?「有-----?幼稚細(xì)胞

一無-----幼稚紅細(xì)胞

L5骨髓象報(bào)告：應(yīng)與臨床及其它實(shí)驗(yàn)結(jié)果，特別是外周血的檢驗(yàn)結(jié)果相結(jié)合，全面分析。

應(yīng)提出以下方面所見：

(1)骨髓有核細(xì)胞增生情況.

(2)粒、紅比值。

(3)粒細(xì)胞系統(tǒng)：觀察粒細(xì)胞系統(tǒng)在全部骨髓細(xì)胞中所占比例。正常約占1/2左右(50%?

60%)；各階段細(xì)胞之間的比例，原粒〈2.9/6；早幼粒＜5.9/6；中、晚幼粒的百分率

依次增多，一般各〈15.9/6；成熟細(xì)胞中，桿狀核多于分葉核粒細(xì)胞，嗜酸粒細(xì)胞一

般〈5.9/6,嗜堿粒細(xì)胞＜1%。寫明各個(gè)細(xì)胞形態(tài)上有無異常。

(4)紅細(xì)胞系統(tǒng)：觀察幼紅細(xì)胞系統(tǒng)在全部骨髓細(xì)胞中所占有的比例。正常約占有核細(xì)胞

的1/5(20.9/5)左右。各階段幼紅細(xì)胞之間的比例，原始紅細(xì)胞一般＜1%；早幼紅細(xì)

胞〈5%；中、晚幼紅細(xì)胞平均各約為10.9/5。觀察有無巨幼紅細(xì)胞，成熟紅細(xì)胞的形

態(tài)及大小有無異常，中心染色是否過淺，有無豪一周小體、卡波環(huán)、嗜多色性紅細(xì)胞、

靶形紅細(xì)胞、橢圓形紅細(xì)胞及點(diǎn)彩紅細(xì)胞等。

(5)淋巴及單核細(xì)胞系統(tǒng)：注意細(xì)胞形態(tài)有無異常，各階段的比例關(guān)系。淋巴系統(tǒng)百分率

約為20%,小兒偏高，有時(shí)可達(dá)40%,單核細(xì)胞一般〈4%。

(6)其他細(xì)胞：漿細(xì)胞、網(wǎng)狀細(xì)胞、組織嗜堿細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、吞噬細(xì)胞等的形態(tài)及比例。

(7)巨核細(xì)胞總數(shù)、分類及形態(tài)，血小板形態(tài)及數(shù)目。

(8)有無寄生蟲，如有無瘧原蟲、利朵小體。

(9)有無異常細(xì)胞。

最后提出診斷，如不能提出診斷意見，可描述形態(tài)學(xué)所見，以供臨床參考。

2細(xì)胞化學(xué)染色：過氧化物酶(POX)染色、蘇丹黑B(SB)染色、中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶(NAP)

染色、酸性磷酸酶(ACP)染色、糖原染色(高碘酸-雪夫反應(yīng)PAS法)、酯酶染色、鐵染色

的方法按《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》執(zhí)行。

正常血細(xì)胞和急性白血病原始細(xì)胞的細(xì)胞化學(xué)染色反應(yīng)

過氧化物酶酯酶糖原酸性磷酸酶

細(xì)胞類型蘇丹黑Ba-NAEa-NBENCEPASACP

幼稚粒細(xì)胞+/++-/±-+/++±/++/++

中性粒細(xì)胞++-/±-+/++++++

單核細(xì)胞-/土+++++/+++-/土土++

淋巴細(xì)胞--/±?_/±0--/+-/++

幼稚紅細(xì)胞--/+?---土/-

巨核細(xì)胞-+++土-++++

急淋--/+?--+/++?-/+?

急非淋(Ml)+--++-

(M2)++_/+-/+++++

(M3)+++-/+++-+++士/++++

(M4)++++/+++++++-/++++

(M5)-/±++++++-/±+++

(M6)-+++-++-

(M7)-+-/±-+++

注：

1.-為陰性；土為弱陽性或極少數(shù)陽性；+為陽性；++為中等強(qiáng)度陽性；+++為強(qiáng)陽性。

2.①局灶性不彌散；②在紅白血病和幼紅成熟障礙時(shí)為強(qiáng)陽性：③部分急淋時(shí)，有局灶性陽性；④典型

粗塊狀；⑤從Ml到M5酯酶的組化反應(yīng)適用于非紅細(xì)胞、非淋巴細(xì)胞的單個(gè)核細(xì)胞；⑥M6組化反應(yīng)用于原

始紅細(xì)胞，但原粒細(xì)胞也會出現(xiàn)POX、蘇丹黑B陽性反應(yīng)。

參考文獻(xiàn)：

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S0P_09-3溶血性貧血檢查標(biāo)準(zhǔn)操作程序

一、目的：統(tǒng)一項(xiàng)目操作規(guī)程，嚴(yán)格檢驗(yàn)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為臨床提供及時(shí)、可靠的結(jié)果報(bào)告。

二、適用范圍：溶血性貧血檢驗(yàn)。

三、操作人員：檢驗(yàn)科授權(quán)工作人員。

四、操作步驟：

1紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)：

1.1原理：本試驗(yàn)是測定紅細(xì)胞對不同濃度低滲鹽水溶液的抵抗力。這種抵抗力與紅細(xì)胞表

面積和體積的比值有密切關(guān)系。表面積大而體積小者對低滲鹽水抵抗力較大(脆性減低)；

反之，則抵抗力較小(脆性增加)。球形細(xì)胞表面積/體積比值減少，脆性顯著增加。

1.2試劑171mmol/LNaCl溶液(10g/L)：取經(jīng)100℃烘干的分析純氯化鈉1000g置100ml容

量瓶中，加適量雙蒸鐳水溶解后，再加雙蒸儲水至刻度。

1.3操作：

(1).分別取10g/LNaCl液和蒸儲水，按下表加入小試管中。

紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)操作表

試管號123456789101112

NaCL(ml)1.71.61.51.41.31.21.11.00.90.80.70.6

H20(ml)0.80.91.01.11.21.31.41.51.61.71.81.9

g/16.86.46.05.65.24.84.44.03.63.22.82.4

濃mmo1116.3109.4102.695.888.982.175.268.461.654.747.941.0

度

(2).將試管架帶至患者面前，用配備6號針頭的干燥滅菌注射器取靜脈血1?1.5ml,立即

滴于各管中，每管1滴(貧血患者可加2滴)，輕輕搖勻，室溫靜置。

(3).每次試驗(yàn)均應(yīng)同時(shí)作正常對照。

1.4結(jié)果判斷：靜置室溫2h,觀察結(jié)果，從高濃度管開始觀察，上層溶液開始出現(xiàn)透明紅色

且管底有紅細(xì)胞者為開始溶血管；溶液透明紅色，管底完全無紅細(xì)胞者為完全溶血管。

1.5參考值：開始溶血：4.2~4.6g/L(71.8~78.6mmol/L)；

完全溶血：3.2~3.4g/L(54.7—58.Immol/L)

患者與正常對照溶血管的NaCl濃度相差0.4g/L具有診斷價(jià)值。

1.6附注：

(1).NaCl經(jīng)100℃干燥后可保存于干燥器中，稱量要精確，用前要新鮮配制。

(2).注射器和小試管必須清潔干燥。

(3).本試驗(yàn)忌用抗凝血，如遇特殊情況，可用肝素抗凝。

(4).在乳白色背景下觀察、判斷完全溶血管，必要時(shí)可離心后觀察。

(5).黃疸開始溶血管不易觀察，嚴(yán)重貧血RBC太少，可用等滲鹽水配成50潁BC懸液作試驗(yàn)。

1.7臨床意義：

(1).滲透脆性增加：見于遺傳性球形細(xì)胞性貧血，也可見于自身免疫性溶血性貧血伴球形

紅細(xì)胞增多者。此類患者開始溶血在5.2g/L,甚至可達(dá)到6.8g/L以上。

(2).滲透脆性減低：見于各型地中海貧血、Hb-C、D、E病、缺鐵性貧血、脾切除術(shù)后、阻

塞性黃疸等。

2熱溶血試驗(yàn)：

2.1原理：本試驗(yàn)是利用患者的紅細(xì)胞在其自身的血清(含補(bǔ)體)中，于37℃孵育后，由于葡

萄糖分解產(chǎn)酸使血清酸化，從而導(dǎo)致溶血的發(fā)生。

2.2操作：以無菌干燥注射器取靜脈血2ml,取下針頭，緩緩地沿管壁注入消毒小試管中，避

免產(chǎn)生氣泡，加少許消毒石蠟油覆蓋，置37℃孵育箱保溫24h,取出離心沉淀。

2.3結(jié)果判斷：觀察上清液顏色，如出現(xiàn)溶血為陽性。正常人為陰性。

2.4附注：注射器要干燥，試管要清潔，操作過程要避免發(fā)生溶血，否則會導(dǎo)致假陽性。置

孵育箱24小時(shí)后，如血塊未回縮，用一小玻璃棒沿管壁輕輕分離之，然后離心觀察結(jié)果。

2.5臨床意義：PNH患者本試驗(yàn)為陽性。正常人無溶血發(fā)生，其他溶血性貧血患者有程度不同

的輕度溶血。

3冷溶血試驗(yàn)：

3.1原理：陣發(fā)性冷性血紅蛋白尿癥(PCH)是一種自身免疫性溶血綜合征，患者體內(nèi)產(chǎn)生一種

冷反應(yīng)性抗體(D-L抗體)。這種抗體是一種IgG,在37℃下與紅細(xì)胞不能牢固結(jié)合。當(dāng)溫

度低至20℃以下時(shí)，如有補(bǔ)體存在，D—L抗體便能結(jié)合于紅細(xì)胞表面。當(dāng)溫度再增高至

37℃時(shí)，由于一系列補(bǔ)體參與反應(yīng)，使紅細(xì)胞膜上形成空洞，發(fā)生溶血。

3.2試劑(補(bǔ)體制備)：抽取豚鼠心臟血液2?4ml,分離其血清，保存于冰箱，臨用時(shí)以生理

鹽水作1：10稀釋。

3.3操作：

(1).取患者及同型或。型正常人靜脈血各8ml,以玻璃珠去纖維蛋白的方法分別制備血清與

紅細(xì)胞懸液?；蛉∑渲?nli血不予抗凝，分離血清，余下的2nli抗凝，以分離紅細(xì)胞。

(2).用生理鹽水洗滌紅細(xì)胞三次，最后制成50%紅細(xì)胞懸液。

(3).按表滴加各液,經(jīng)培育后離心1000r/min,5min觀察溶血現(xiàn)象。

冷溶血試驗(yàn)操作表

管號血清0.5mlRBC懸液0.05ml補(bǔ)體(ml)孵育溫度、時(shí)間陽性結(jié)果

1患者患者0.052℃30min溶血

2患者正常人0.052℃30min溶血

3正常人正常人0.052℃30min不溶血

4患者滅能血清㈤患者0.0537℃2h不溶血

5正常人患者0.0537℃2h不溶血

6患者患者0.05*37℃2h不溶血

7患者患者0.05*2℃30min不溶血

8患者正常人0.05*2℃30min不溶血

3.4結(jié)果判斷：若第1、第2管溶血，其余管不溶血為陽性。

3.5附注：操作中第1、第2管最好在20℃以下進(jìn)行操作。

注：患者血清先置56℃滅能30min。*：生理鹽水

4變性珠蛋白小體(Heinz小體)檢查：

4.1原理：變性珠蛋白小體實(shí)際上是一種變性血紅蛋白顆粒，一般附著在細(xì)胞膜上，故又稱

血紅蛋白包涵體，多發(fā)生于敏感個(gè)體服用藥物或接觸化學(xué)物質(zhì)后，這些藥物可導(dǎo)致Hb變

性。此種包涵體也可以見于不穩(wěn)定Hb病患者，故本試驗(yàn)對G—6—PD缺乏癥及不穩(wěn)定Hb病

的診斷有價(jià)值。變性珠蛋白小體與某些堿性染料如耐爾藍(lán)接觸時(shí)，即被染成紫色或藍(lán)黑

色小點(diǎn)。

4.2試劑：(1).5g/L耐爾藍(lán)乙醇溶液；(2).10g/L結(jié)晶紫生理鹽水液

4.3操作：

(1).耐爾藍(lán)法：

①置5g/L耐爾藍(lán)乙醇液1滴于玻片一端，待干。

②取受檢血液1滴置于干燥的染料玻片上，用另一玻片角輕輕攪勻。

③覆以蓋玻片，靜置5?10min。

④油鏡鏡檢，RBC呈黃綠色，變性珠蛋白染成藍(lán)黑色小點(diǎn).據(jù)顆粒及紅細(xì)胞染色情況,

可分為微粒型、粗粒型及空粒型(RBC中Hb完全缺如，胞膜尚完整，邊緣有多個(gè)粗大

或纖細(xì)不規(guī)則的顆粒)，系折光，圓形，大小不等，數(shù)目不一及分布不勻的小體。

⑤計(jì)數(shù)500?1000個(gè)紅細(xì)胞，報(bào)告Heinz小體陽性紅細(xì)胞的百分率。

(2).結(jié)晶紫法：

①取結(jié)晶紫鹽水溶液0.5ml,加末梢血2?3滴，混勻，放37℃水浴5min。

②取出1滴于載玻片上，加蓋玻片后用油鏡觀察。

③紅細(xì)胞內(nèi)有散在的或附著在膜上的圓形紫黑色顆粒(大小為0.3?2um)者為陽性。

④計(jì)數(shù)500?1000個(gè)紅細(xì)胞，報(bào)告Heinz小體陽性紅細(xì)胞的百分率。

4.4臨床意義：

(1).正常人無變性珠蛋白小體或僅偶見幾個(gè)(<0.01)細(xì)小變性珠蛋臼小體。

(2).增高：G-6-PD缺乏所致的蠶豆病、伯氨瞳咻類藥物所致的溶血性貧血、不穩(wěn)定Hb病等。

5血紅蛋白H包涵體檢查：

5.1原理：血液中加入氧化還原染料煌焦油藍(lán)，在37℃孵育后，HbH因氧化變性而發(fā)生沉淀,

呈顆粒狀，彌漫而均勻地分散在紅細(xì)胞內(nèi)，被染成墨綠藍(lán)色。

5.2試劑：10g/L煌焦油藍(lán)溶液：煌焦油藍(lán)1g、枸檬酸鈉0.4g溶于100ml生理鹽水中，貯棕色

瓶中，臨用前過濾。

5.3操作：取10g/L煌焦油藍(lán)溶液0.5ml,置小試管中，加新鮮血3?4滴，混勻，加塞置37℃

水浴中。在lOmin及l(fā)h用毛細(xì)滴管各取1滴血推成薄片，待干后于油鏡下觀察。

5.4結(jié)果判斷：HbH包涵體染色陽性時(shí)，在紅細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)大小不等、數(shù)目不一的墨綠藍(lán)色圓形

小體，分布不規(guī)則，散在于整個(gè)紅細(xì)胞內(nèi)。一般孵育lOmin后HbH包涵體才逐漸顯出，

油鏡觀察500?1000個(gè)紅細(xì)胞，算出llbll包涵體陽性紅細(xì)胞的百分率。

5.5臨床意義：參考值0?5%；HbH病患者可達(dá)50%以上，輕型地中海貧血偶見HbH包涵體。

5.6附注：

(1).觀察結(jié)果時(shí)，須注意與網(wǎng)織紅細(xì)胞鑒別。后者的包涵體一般呈蜘網(wǎng)狀，與煌焦油藍(lán)混

和后，在10?15min內(nèi)即顯現(xiàn)出來。

(2).HbH一般要在lOmin后至lh內(nèi)產(chǎn)生包涵體。其它不穩(wěn)定Hb用本法染色也可產(chǎn)生珠蛋白變

性沉淀，形成Heinz小體，但需孵育更長時(shí)間(3小時(shí)或更長)。

6Hb一F酸洗脫試驗(yàn)：

6.1原理：Hb-F除抗堿能力強(qiáng)外，抗酸能力也較lib-A為強(qiáng)。因此，經(jīng)固定后的血片，置酸性

緩沖液中保溫一定時(shí)間，只有含HbF的紅細(xì)胞不被洗脫，再用伊紅染色而呈鮮紅色。

6.2試劑：

(1).80%乙醇。(2).0.Imol/L枸檬酸;(3).0.2mol/L磷酸氫二鈉；

(4).酸性緩沖液(pH3.3±0.2)：0.2mol/L磷酸氫二鈉12.3ml與0.Imol/L枸檬酸37.7ml

(5).蘇木素染色液：取1g蘇木素溶于10ml無水乙醇中，取2g明帆溶于200ml蒸饋水中混合，

煮沸后即加氧化汞0.5g,再加熱至染液變成深紫色，即放入冷水中變涼，次日過濾。

(6).伊紅染液：10g/L伊紅丫溶液200ml中加1滴冰乙酸。

6.3操作：

(1).按常法制備血涂片，自然干燥lh,再用80%乙醵固定5min(枸檬酸鹽抗凝血在4c冰箱

內(nèi)保存3日內(nèi)可以使用)，水洗待干。

(2).將固定后血膜放37℃、pH3.3的酸性緩沖液中，保溫準(zhǔn)確5min。

(3).沖洗干燥后，在蘇木素染液中染白細(xì)胞Imin,以免誤認(rèn)為陽性紅細(xì)胞。

(4).水洗后，用伊紅染液染紅細(xì)胞Imin,再水洗，干后鏡檢。

(5).在油鏡下，含有HbF的紅細(xì)胞被伊紅染液染成鮮紅色為陽性紅細(xì)胞；僅留下淡影的細(xì)

胞膜為陰性紅細(xì)胞。仿照網(wǎng)紅計(jì)數(shù)法，計(jì)數(shù)1000個(gè)紅細(xì)胞中陽性紅細(xì)胞所占百分率。

6.4附注：

(1).血片制成后，在2h內(nèi)染色，否則可出現(xiàn)假陽性反應(yīng)。要求涂片薄，細(xì)胞平鋪分散。

(2).緩沖液的pH值、溫度、洗脫時(shí)間應(yīng)嚴(yán)格，否則影響測定結(jié)果。

(3).也可用稀釋瑞氏染色液作對比染色。

6.5臨床意義：

(1)臍帶血幾乎所有的紅細(xì)胞均呈鮮紅色，為陽性；新生兒陽性率為55%?85%；1月后的

嬰兒為67%；4?6月后偶見；成人小于1%。

(2)地中海貧血患者；輕型者(雜合子)僅少數(shù)紅細(xì)胞呈陽性，重型者陽性紅細(xì)胞明顯增多。

(3)遺傳性Hb-F持續(xù)綜合征者，紅細(xì)胞呈均勻淡紅色的陽性紅細(xì)胞，比胎兒臍血呈色為弱。

(4)再生障礙性貧血及溶血性貧血也可出現(xiàn)數(shù)量較少的陽性紅細(xì)胞。

7Hb—C試驗(yàn)：

7.1原理：患血紅蛋白C(Hb-C)病時(shí)，紅細(xì)胞染色片上偶見六角形或棒狀結(jié)晶體，于脾切除后

增多，力1130g/L氯化鈉溶液時(shí)更加明顯，有助于鑒別電泳慢于HbA的異常血紅蛋白病。

7.2試劑：30g/LNaCl溶液;瑞氏染液。

7.3操作：

(1).按常規(guī)制成血片，用瑞氏染液染色。

(2).另推制較厚血片，使其自然慢干，瑞氏染色。

(3).取30g/LNaCl溶液0.1ml于試管中,加血1滴,37℃溫育4?12h,取出制成血片?；?/p>

力02滴30g/LNaCl于玻片上，再加血1滴，混勻，加蓋片，用凡土林石蠟封閉，放溫箱

lh左右取出，顯微鏡觀察。

7.4結(jié)果判斷：Hb-C病時(shí)，除靶形紅細(xì)胞占40%?90%外，可見六角形及棒狀結(jié)晶體，尤其是

血片干燥慢時(shí)和脾切除后更多。與30g/L氯化鈉溶液孵育后，結(jié)晶體包涵物幾乎出現(xiàn)于

每一個(gè)紅細(xì)胞中。

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S0P_09-4白細(xì)胞手工計(jì)數(shù)檢查標(biāo)準(zhǔn)操作程序

一、目的：統(tǒng)一項(xiàng)目操作規(guī)程，嚴(yán)格檢驗(yàn)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為臨床提供及時(shí)、可靠的結(jié)果報(bào)告.

二、適用范圍：白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)檢查的操作及臨床

三、操作人員：檢驗(yàn)科授權(quán)工作人員

四、操作步驟：

1原理：

血液經(jīng)稀釋液適當(dāng)稀釋，溶解紅