pcr技術(shù)課件簡短

pcr技術(shù)課件ppt簡短pcr技術(shù)簡介pcr技術(shù)的基本步驟pcr技術(shù)的實驗流程pcr技術(shù)的注意事項pcr技術(shù)的優(yōu)缺點contents目錄pcr技術(shù)簡介01CATALOGUE核酸變性引物與DNA的結(jié)合產(chǎn)物分析循環(huán)延伸核酸分離和純化pcr技術(shù)的基本原理1983年由KaryMullis發(fā)明，應(yīng)用熱循環(huán)技術(shù)實現(xiàn)DNA的指數(shù)級擴增?；A(chǔ)PCR1993年，DavidR.Higuchi在TaqMan的基礎(chǔ)上開發(fā)出實時PCR技術(shù)，能夠?qū)崟r監(jiān)測反應(yīng)進程。實時PCR1995年，LaryK可通過多重PCR同時檢測多個基因位點。多重PCR2001年，ABIPRISM3700DNAAnalyzer推出，實現(xiàn)了高通量PCR檢測。高通量PCRpcr技術(shù)的發(fā)展歷程基因克隆、基因表達、基因組測序、單核苷酸多態(tài)性(SNP)檢測等?；A(chǔ)研究醫(yī)學(xué)診斷生物多樣性研究感染性疾病、遺傳性疾病、腫瘤等疾病的診斷。物種鑒定、種群遺傳學(xué)分析、生態(tài)學(xué)研究等。030201pcr技術(shù)的應(yīng)用范圍pcr技術(shù)的基本步驟02CATALOGUE選擇合適的樣本類型，如血液、組織等，以便后續(xù)實驗操作。樣本類型采集樣本時需遵循無菌操作原則，確保樣本質(zhì)量。樣本采集存儲樣本時需選擇適當(dāng)?shù)拇鎯Ψ绞?，以保持樣本的穩(wěn)定性。樣本存儲樣本準(zhǔn)備通過化學(xué)或物理方法裂解細胞，釋放出基因組DNA。細胞裂解采用特殊的緩沖液和洗滌劑去除雜質(zhì)，純化DNA。DNA純化通過電泳或紫外分光光度法檢測DNA質(zhì)量，確保其純度和濃度符合要求。DNA質(zhì)量檢測基因組DNA的提取循環(huán)擴增反復(fù)進行變性、引物結(jié)合和DNA合成步驟，使目標(biāo)基因片段得到指數(shù)級擴增。DNA合成在DNA聚合酶的作用下，按照模板DNA序列合成新的DNA片段。引物結(jié)合引物與DNA模板結(jié)合，為后續(xù)的DNA合成提供起始點。引物設(shè)計根據(jù)目標(biāo)基因序列設(shè)計特異性引物，以便擴增出目標(biāo)基因片段。DNA變性加熱使DNA雙鏈解開，暴露出堿基對。pcr擴增熒光定量PCR利用熒光定量PCR儀進行定量分析，測定目標(biāo)基因片段的拷貝數(shù)或相對表達量。電泳分析將PCR產(chǎn)物進行電泳，根據(jù)遷移率判斷目標(biāo)基因片段的大小和純度。序列分析對PCR產(chǎn)物進行測序，確定目標(biāo)基因序列是否與參考基因序列一致。產(chǎn)物檢測和分析pcr技術(shù)的實驗流程03CATALOGUE明確實驗?zāi)繕?biāo)和檢測樣本，如臨床樣本、環(huán)境樣本等。確定實驗?zāi)康暮蜆颖靖鶕?jù)目標(biāo)基因序列設(shè)計PCR引物。設(shè)計引物確定反應(yīng)體系中所需的試劑和濃度。選擇合適的PCR反應(yīng)體系根據(jù)目標(biāo)基因序列和引物組合設(shè)定PCR儀的反應(yīng)程序。設(shè)定PCR儀的反應(yīng)程序?qū)嶒炃皽?zhǔn)備提取、純化樣本DNA，去除雜質(zhì)和干擾。樣本處理構(gòu)建PCR反應(yīng)體系進行PCR擴增產(chǎn)物檢測和分析將DNA模板、引物、dNTPs、酶等試劑加入PCR反應(yīng)管中。將PCR反應(yīng)管放入PCR儀中，按照設(shè)定的程序進行擴增。收集PCR擴增產(chǎn)物，進行電泳分析或熒光定量PCR等檢測方法，確定目標(biāo)基因序列是否被成功擴增。操作步驟引物和反應(yīng)體系的優(yōu)化根據(jù)實驗結(jié)果對引物和反應(yīng)體系進行優(yōu)化，提高PCR擴增效率和特異性。樣品處理和儲存對使用過的樣本進行妥善處理，并儲存未使用的樣本以備后續(xù)使用。數(shù)據(jù)分析和結(jié)論對實驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計和分析，得出結(jié)論。實驗后處理pcr技術(shù)的注意事項04CATALOGUE明確實驗的目的和預(yù)期結(jié)果，并熟悉PCR儀的使用步驟。確認(rèn)實驗?zāi)康暮筒襟E根據(jù)目的基因序列，選擇特異性好、擴增效率高的引物。選擇合適的引物確保使用的模板DNA無降解、無污染，濃度和純度適中。確認(rèn)模板DNA的質(zhì)量根據(jù)引物、模板和PCR儀的規(guī)格，設(shè)置合理的反應(yīng)體系。設(shè)置合理的反應(yīng)體系實驗前的注意事項控制好反應(yīng)溫度和時間PCR反應(yīng)中，每個溫度點的反應(yīng)時間和升溫/降溫速度應(yīng)保持一致。避免出現(xiàn)非特異性擴增通過優(yōu)化反應(yīng)條件和引物設(shè)計，減少非特異性擴增的產(chǎn)生。注意觀察熒光信號的變化在實時PCR過程中，密切觀察熒光信號的變化，確保反應(yīng)正常進行。避免樣品交叉污染每次實驗前，徹底清洗PCR儀和管路，避免樣品間的交叉污染。實驗中的注意事項根據(jù)實驗數(shù)據(jù)，進行定量和定性分析，并處理異常值。數(shù)據(jù)分析與處理將用過的引物和模板妥善儲存，以備后續(xù)實驗使用。引物和模板的儲存定期對PCR儀進行維護和保養(yǎng)，確保設(shè)備的正常運行。儀器的維護與保養(yǎng)實驗后的注意事項pcr技術(shù)的優(yōu)缺點05CATALOGUE靈敏度高特異性強操作簡便應(yīng)用廣泛優(yōu)點01020304PCR技術(shù)可以檢測出微量的DNA，靈敏度非常高。通過設(shè)計特異性的引物，PCR技術(shù)可以特異地擴增目標(biāo)DNA片段，不擴增其他非目標(biāo)DNA。PCR技術(shù)流程相對固定，操作相對簡單，易于標(biāo)準(zhǔn)化和自動化。PCR技術(shù)廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)、分子生物學(xué)、基因組學(xué)等領(lǐng)域。PCR技術(shù)需要使用大量的DNA模板，容易造成實驗室內(nèi)的交叉污染，影響實驗結(jié)果。容易污染PCR技術(shù)需要精密的儀器設(shè)備，如PCR儀、電泳儀等，設(shè)備成本較高。對設(shè)備要求高PCR技術(shù)需要已知目標(biāo)DNA序列，才能設(shè)計特異性的引物進行擴增。只能擴增已知序列PCR技術(shù)需要進行多輪反應(yīng)才能獲得足夠的DNA片段，實驗時間較長。實驗耗時長01030204缺點采用自動化設(shè)備采用自動化設(shè)備可以減少人為操作失誤，提高實驗的穩(wěn)定性。應(yīng)用新技術(shù)結(jié)合其他新技術(shù)如納米孔測序、