維生素B1鑒別(趙云騰制作)

維生素B1的質(zhì)量分析組長：趙云騰組員：閆雪娜齊云環(huán)

1.維生素B1概述

2.維生素B1理化性質(zhì)

3.維生素B1鑒別試驗4.維生素B1片含量測定維生素B1概述維生素B1主要存在于種子的外皮核賠亞種，如米糠和麩皮中含量很豐富，在酵母菌中含量也極豐富。瘦肉、白菜和芹菜中含量也較豐富。缺乏維生素B1時，可引起多種神經(jīng)炎癥，如腳氣病菌。維生素B1理化性質(zhì)維生素B1（鹽酸硫胺）：

氨基嘧啶環(huán)－CH2－噻唑環(huán)(季銨堿)氨基嘧啶環(huán)噻唑環(huán)維生素B1為白色結(jié)晶或結(jié)晶性粉末；有微弱的特臭；味苦；干燥在空氣中訊即吸收約4﹪的水分。易溶于水，在乙醇中微溶，在乙醚中不溶。水溶液顯酸性，且在酸性溶液中穩(wěn)定。維生素B1中的噻唑環(huán)在堿性介質(zhì)中可開環(huán)，在與嘧啶環(huán)上的氨基環(huán)合，經(jīng)鐵氰化鉀等氧化劑氧化生成具有熒光的硫色素。維生素B1分子結(jié)構(gòu)中含有雜環(huán)，可與硅鎢酸等生物堿沉淀試劑反應(yīng)生成沉淀。維生素B1分子結(jié)構(gòu)中具有共軛雙鍵，對紫外光有吸收。維生素B1理化性質(zhì)維生素B1鑒別試驗氯化物反應(yīng)硫色素反應(yīng)沉淀反應(yīng)紅外光譜硝酸鉛反應(yīng)紫外吸收光譜方法維生素B1（5mg）氫氧化鈉（2.5mL）鐵氰化鉀（0.5mL）正丁醇（5mL）藍色熒光熒光消失溶解＋強力振搖H＋OH－放置分層硫色素反應(yīng)鑒別方法：維生素B1＋NaOHNa2S共熱黃經(jīng)棕Na2S＋Pb(NO3)2PbS2黑色硝酸鉛反應(yīng)紫外吸收光譜紫外分光光度計光源單色器樣品室檢測器顯示紫外吸收光譜基本組成：（動畫）1.光源

在整個紫外光區(qū)或可見光譜區(qū)可以發(fā)射連續(xù)光譜，具有足夠的輻射強度、較好的穩(wěn)定性、較長的使用壽命。

可見光區(qū)：鎢燈作為光源，其輻射波長范圍在320～2500nm。

紫外區(qū)：氫、氘燈。發(fā)射185～400nm的連續(xù)光譜。紫外吸收光譜

2.單色器將光源發(fā)射的復(fù)合光分解成單色光并可從中選出一任波長單色光的光學(xué)系統(tǒng)。入射狹縫：光源的光由此進入單色器；準(zhǔn)光裝置：透鏡或返射鏡使入射光成為平行光束；

色散元件：將復(fù)合光分解成單色光；棱鏡或光柵；

聚焦裝置：透鏡或凹面反射鏡，將分光后所得單色光聚焦至出射狹縫；⑤出射狹縫。紫外吸收光譜3.樣品室

樣品室放置各種類型的吸收池（比色皿）和相應(yīng)的池架附件。吸收池主要有石英池和玻璃池兩種。在紫外區(qū)須采用石英池，可見區(qū)一般用玻璃池。4.檢測器

利用光電效應(yīng)將透過吸收池的光信號變成可測的電信號，常用的有光電池、光電管或光電倍增管。5.結(jié)果顯示記錄系統(tǒng)

檢流計、數(shù)字顯示、微機進行儀器自動控制和結(jié)果處理紫外吸收光譜分光光度計的類型:1.單光束

簡單，價廉，適于在給定波長處測量吸光度或透光度，一般不能作全波段光譜掃描，要求光源和檢測器具有很高的穩(wěn)定性。2.雙光束

自動記錄，快速全波段掃描。可消除光源不穩(wěn)定、檢測器靈敏度變化等因素的影響，特別適合于結(jié)構(gòu)分析。儀器復(fù)雜，價格較高。紫外吸收光譜3.雙波長將不同波長的兩束單色光(λ1、λ2)快束交替通過同一吸收池而后到達檢測器。產(chǎn)生交流信號。無需參比池?！?/p>

=1～2nm。兩波長同時掃描即可獲得導(dǎo)數(shù)光譜。紫外吸收光譜分光光度計原理：

物質(zhì)的吸收光譜本質(zhì)上就是物質(zhì)中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波長的光能量，相應(yīng)地發(fā)生了分子振動能級躍遷和電子能級躍遷的結(jié)果。由于各種物質(zhì)具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結(jié)構(gòu)，其吸收光能量的情況也就不會相同，因此，每種物質(zhì)就有其特有的、固定的吸收光譜曲線，可根據(jù)吸收光譜上的某些特征波長處的吸光度的高低判別或測定該物質(zhì)的含量。

紫外吸收光譜操作步驟及使用方法：準(zhǔn)備工作：

將以裝好的儀器接入220V的市電，開機，同時開啟所需光源（鎢燈和氘燈，不需要用氘燈時請不要打開氘燈開關(guān)）。開機后儀器顯示800-3，表示主機進入預(yù)熱十分鐘。

預(yù)熱完畢后，顯示器將顯示HELLO，表示儀器可以進入工作狀態(tài)。（在預(yù)熱過程中，如果想直接進入工作狀態(tài)，可以按STOP鍵進入HELLO工作狀態(tài)。儀器要求開機后預(yù)熱十分鐘以使儀器工作更穩(wěn)定。）儀器進入工作狀態(tài)后，首先根據(jù)實際測量的需求調(diào)節(jié)好光源、波長、狹縫、濾色片。選擇后即可準(zhǔn)備好樣品進行各種測量。根據(jù)所需的測量進入相應(yīng)的測量功能（T、A、C）。測量工作：1.確定工作波長2.建立工作曲線3.測試帶測樣品紫外吸收光譜測量樣品透射比（T）：

將參比、樣品放入樣品池，拉動樣品池拉桿使參比的比色皿對準(zhǔn)光線通道，按100%T鍵（調(diào)百），待顯示ｔ100.0，然后打開樣品池蓋，按Clear鍵（調(diào)零），待顯示ｔ0000，蓋上樣品池蓋再次按100%T鍵，待顯示ｔ100.0，拉動樣品池拉桿使樣品的比色皿對準(zhǔn)光線通道，按Enter鍵后等待顯示結(jié)果。

紫外吸收光譜測量樣品吸光值（A）：

將參比、樣品放入樣品池，拉動樣品池拉桿使參比的比色皿對準(zhǔn)光線通道，按ABSO鍵，待顯示A0.000，然后打開樣品池蓋，按Clear鍵，待顯示A0000，蓋上樣品池蓋再次按ABSO鍵，待顯示A0.000，拉動樣品池拉桿使樣品的比色皿對準(zhǔn)光線通道，按Enter鍵后等待顯示結(jié)果。紫外吸收光譜測量樣品濃度（C）：

在測量濃度之前，必須建立標(biāo)準(zhǔn)曲線才能進行濃度測量。如沒有建立標(biāo)準(zhǔn)曲線則不能進行濃度測量，儀器會提示操作出錯。

測量濃度應(yīng)該按以下過程操作：

A：建立標(biāo)準(zhǔn)曲線（共有三種方法選擇）；

B：工作曲線的修正（自己認(rèn)為工作曲線沒問題可以不修正）；

C：測量濃度。紫外吸收光譜工作曲線的修正

工作曲線方程為C=K×A+B，最多測量標(biāo)準(zhǔn)液的樣點為20個。因此在建立曲線時是選20個樣點的平均值建立方程，因此總有其中的樣點離曲線較遠（壞點），可以剔除該樣點來達到修正曲線的目的，方法是在建立完曲線顯示K、B、R后按STOP鍵，則程序會自動剔除壞點，按一次STOP鍵則剔除一個壞點，最多可以有n-1次（n個標(biāo)準(zhǔn)液）。cAc0A`

配置一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，以不含被測組分的溶液為參比溶液，測定標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的吸光度，以吸光度A為縱坐標(biāo)，濃度C為橫坐標(biāo)，繪制吸光度-濃度曲線，稱為標(biāo)準(zhǔn)曲線。在相同條件下測定樣品溶液的吸光度，從校正曲線上找出與之相對應(yīng)的未知組分的濃度，用于單組分的定量分析。參比容液的選擇：1.溶劑參比2.試劑參比3.樣品參比4.平行操作溶液參比標(biāo)準(zhǔn)曲線法儀器的維護保養(yǎng)與注意事項當(dāng)顯示錯誤信息時一定查閱錯誤故障表，找出原因，再繼續(xù)操作。放入樣品池架時，要檢查是否定位準(zhǔn)確平穩(wěn)，不能出現(xiàn)歪斜現(xiàn)象。當(dāng)儀器執(zhí)行程序發(fā)生錯誤時，先用STOP鍵轉(zhuǎn)出，讓顯示器顯示HELLO。如果出現(xiàn)的錯誤比較嚴(yán)重，不能轉(zhuǎn)出的話，可以用復(fù)位鍵Reset鍵復(fù)位。儀器運行期間，注意儀器附近電磁干擾比較嚴(yán)重的電器應(yīng)該關(guān)閉。以免儀器受到電磁干擾。儀器開電后不要用手撥保護光閘片，因為儀器的接收器不能受強光的照射。為了延長儀器的使用壽命，一般情況下，如果不使用氘燈，請最好不要開氘燈。氘燈關(guān)閉后，要等幾分鐘才能重新點燃。關(guān)閉儀器前，請先關(guān)氘燈。紅外光譜取本品適量，加水溶解，水浴蒸干，在105℃干燥2h測定。本品的紅外光吸收圖譜應(yīng)與對應(yīng)的圖譜一致。維生素B1可與多種生物堿沉淀試劑反應(yīng)，生成不同的顏色的沉淀。如：維生素B1＋碘

紅色沉淀維生素B1＋碘化汞鉀淡黃色沉淀維生素B1＋硅鎢酸白色沉淀維生素B1＋苦味酸黃色沉淀沉淀反應(yīng)氯化物反應(yīng)維生素B1是一種鹽酸鹽，固本品水溶液顯氯化物的鑒別反應(yīng)。鹽酸鹽維生素B1含量測定原理：本品的12.5ug/ml鹽酸液(9

1000)，在246nm波長處測定吸收度吸，收系數(shù)為421。根據(jù)吸光系數(shù)法測定維生素B1片含量.UV共軛雙鍵λmax=246nm

取本品20片，精密稱定，研細，精密稱取細粉適量（約相當(dāng)于維生素B125mg），置100ml量瓶中，加鹽酸溶液(91000)約70ml，振搖15min使維生素B1

溶解，加鹽酸溶液(91000)稀釋至刻