檢驗(yàn)技術(shù)操作規(guī)程

第2頁(yè)共19頁(yè)檢驗(yàn)技術(shù)操作規(guī)范目錄第一節(jié)全自動(dòng)血液細(xì)胞分析儀操作規(guī)程第二節(jié)尿液分析儀使用規(guī)程第三節(jié)自動(dòng)凝血儀操作規(guī)程第四節(jié)半自動(dòng)生化分析儀操作規(guī)程第五節(jié)血常規(guī)檢驗(yàn)操作規(guī)程第六節(jié)尿常規(guī)檢驗(yàn)操作規(guī)程第七節(jié)肝功能檢驗(yàn)操作規(guī)程第八節(jié)腎功能檢驗(yàn)操作規(guī)程第九節(jié)血脂檢驗(yàn)操作規(guī)程第十節(jié)血液葡萄糖測(cè)定技術(shù)操作規(guī)程第十一節(jié)凝血四項(xiàng)檢驗(yàn)操作規(guī)程第十二節(jié)AB0血型正、反血型鑒定技術(shù)操作規(guī)程第十三節(jié)交叉配血試驗(yàn)技術(shù)操作規(guī)程3.請(qǐng)勿使用過(guò)有效期或變質(zhì)的尿液分析試紙；4.尿樣本中血的濃度高時(shí)，可影響測(cè)試的準(zhǔn)確性，儀器能夠識(shí)別出高濃度血尿并打印出“結(jié)果無(wú)效”的提示；5.必須在推進(jìn)器動(dòng)作前，將待測(cè)試紙條放好；6.在放置試紙條時(shí)應(yīng)確保試紙條前端接觸工作臺(tái)前壁；7.如果儀器測(cè)試頭下發(fā)生故障導(dǎo)致紙條運(yùn)行受阻。關(guān)掉儀器，拉出工作臺(tái)，取出受阻試紙條后，重新安裝工作臺(tái)。開(kāi)機(jī)自檢后，對(duì)未得出結(jié)果的樣本重測(cè)。第三節(jié)自動(dòng)凝血儀操作規(guī)程1、儀器的常規(guī)操作1.1打開(kāi)電源開(kāi)關(guān)前的檢查。檢查廢液瓶及洗液瓶。如果洗液瓶中洗液的液面過(guò)低，請(qǐng)用蒸餾水或去離子水將罐充滿(mǎn)。清空廢液瓶。管道連接檢查各種管線(xiàn)的連接。確保沒(méi)有管子脫落或扭結(jié)，電源線(xiàn)被安全的插入交流插座。確保打印機(jī)中有足夠的紙張以供打印當(dāng)天所需處理的所有樣本結(jié)果。補(bǔ)充反應(yīng)杯丟棄用過(guò)的反應(yīng)杯，加入適量的干凈的反應(yīng)杯。1.2打開(kāi)電源開(kāi)機(jī)順序：打印機(jī)→壓力單元→電源單元和主單元（右側(cè)）。打開(kāi)電源后，儀器自動(dòng)進(jìn)入自檢。將病人樣本，質(zhì)控與試劑分別按要求準(zhǔn)備就緒，進(jìn)入分析過(guò)程：試劑準(zhǔn)備→SetReagent→輸入確認(rèn)試劑體積→補(bǔ)充反應(yīng)杯→安放樣本架1.3樣本分析:WorkList→IDNo.Entry→輸入樣本號(hào)→ENTER→選擇所需檢測(cè)的項(xiàng)目(－變?yōu)椤?,確認(rèn)所有的設(shè)置結(jié)束后→ENTER→按屏幕右上方“Start”鍵,執(zhí)行分析。分析完畢,儀器進(jìn)入準(zhǔn)備狀態(tài)。1.4關(guān)機(jī)前的工作每日清潔所有樣本針和試劑針：在主菜單屏上按下【Rinseprobe】鍵。將出現(xiàn)清洗針屏。按下【Excute】鍵。1.5關(guān)機(jī)關(guān)閉電源。2.儀器保養(yǎng)2.1每日保養(yǎng)清洗樣品針每次做完試驗(yàn)都必須清洗樣品針，主要是預(yù)防堵針，執(zhí)行[RinseProbe]→[Excute]清空垃圾箱2.2清空廢液查看儀器后面防逆流瓶TrapChamber有無(wú)水，防止因?yàn)橛兴鴮?dǎo)致真空泵不能抽真空在洗液瓶中注蒸餾水，最高不要超過(guò)上面的凹槽，防止因水過(guò)滿(mǎn)，工作時(shí)水回流到壓力泵和壓力傳感器上導(dǎo)致人為破壞。2.3每周保養(yǎng)做一次管路清潔，執(zhí)行[SpecialOperate]→[Rinse&Prepare]清潔儀器2.4每半年保養(yǎng)清洗洗液瓶?jī)?nèi)部，清洗洗液瓶出水管上的過(guò)濾網(wǎng)一次。2.5每三或六個(gè)月保養(yǎng)清潔傳動(dòng)滑軌(X軸、Y軸)并上潤(rùn)滑油。防止因積塵而使樣品針運(yùn)行不到位，向下扎錯(cuò)位置造成樣品針彎曲或斷裂第四節(jié)半自動(dòng)生化分析儀操作規(guī)程【操作規(guī)程】1.開(kāi)機(jī)之前檢查電源線(xiàn)是否連接無(wú)誤，電源要求接地良好;連接打印機(jī)電源線(xiàn)，接通打印機(jī)電源開(kāi)關(guān);將廢液管插入廢液容器內(nèi);接通顯示器開(kāi)關(guān)及主機(jī)背部電源開(kāi)關(guān)。2.開(kāi)機(jī)→自檢后→鍵入Enter，確定已設(shè)定測(cè)試參數(shù)→鍵入Enter，進(jìn)入編制工作表→在設(shè)置欄，開(kāi)啟聯(lián)機(jī)打印→儀器預(yù)熱20分鐘后，調(diào)用已設(shè)定測(cè)試項(xiàng)目進(jìn)行樣品測(cè)定→打印結(jié)果→清洗儀器→關(guān)機(jī)。3.吸液口由不銹鋼保護(hù)管和鋼管內(nèi)聚四氟乙烯吸液管組成，應(yīng)注意保護(hù)，不要碰彎。4.切忌在帶電狀態(tài)下連接任何連接口。【儀器的保養(yǎng)與維護(hù)】1.日常保養(yǎng)工作主要是清洗流動(dòng)比色皿，每天工作結(jié)束后，要用蒸餾水清洗。具體方法如下：將吸液管插入蒸餾水中，向上扳動(dòng)吸液開(kāi)關(guān)，反復(fù)沖洗流動(dòng)比色皿，直到蒸餾水的吸光度值正常為止。2.每周要用專(zhuān)門(mén)的清洗劑清洗一次流動(dòng)比色皿，清洗時(shí)，讓清洗劑停留在比色皿中約半小時(shí)，然后排掉，再用蒸餾水沖洗干凈，最后注入蒸餾水。3.不使用儀器時(shí)，流動(dòng)比色皿內(nèi)一定要保證充滿(mǎn)蒸餾水。4.更換打印機(jī)色帶時(shí)，嚴(yán)格遵照打印機(jī)操作手冊(cè)，避免不規(guī)范操作。5.光源燈更換時(shí)一定要先切斷儀器的電源，手不可觸摸光源燈的玻璃部分，萬(wàn)一光源燈的玻璃部分弄臟了，可用無(wú)水乙醇將污物除去。6.更換的蠕動(dòng)泵管尺寸材料應(yīng)與原泵管一致，如不一致則要重新調(diào)整吸液量。第五節(jié)血常規(guī)檢驗(yàn)操作規(guī)程【標(biāo)本】抗凝靜脈血（有些儀器也可用末梢血）?！痉椒ā垦杭?xì)胞自動(dòng)分析儀測(cè)定法?！驹噭垦杭?xì)胞自動(dòng)分析儀配套試劑?！静僮鳌吭斠?jiàn)血液細(xì)胞自動(dòng)分析儀使用手冊(cè)?！靖阶ⅰ?.血常規(guī)包括白細(xì)胞計(jì)數(shù)及分類(lèi)、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白濃度、紅細(xì)胞比積、血小板計(jì)數(shù)等項(xiàng)目。這些項(xiàng)目亦有相應(yīng)的手工方法，詳見(jiàn)有關(guān)資料。2.半自動(dòng)及全自動(dòng)血液細(xì)胞分析儀從設(shè)計(jì)上均要求用抗凝靜脈血。其優(yōu)點(diǎn)為：（1）靜脈血能正確地反映病人實(shí)際情況，重復(fù)性好；（2）利于延長(zhǎng)儀器的使用壽命；（3）解決了采血盤(pán)的交叉感染問(wèn)題等。3.血細(xì)胞計(jì)數(shù)應(yīng)用EDTA·K2：為抗凝劑（EDTA·K2·2H2O1.5～2.2mg可抗凝1ml血）。4.貯血容器應(yīng)選用有蓋塑料管。抗凝血采集后在室溫中貯存應(yīng)不超過(guò)6h；如需制作血涂片應(yīng)在2h內(nèi)完成。5.測(cè)定前必須將EDTA·K2抗凝血充分混勻。6.血細(xì)胞分析儀測(cè)定最適溫度為18～22℃，低于15℃或高于7.血細(xì)胞分析儀用于白細(xì)胞分類(lèi)只能當(dāng)作一種過(guò)篩手段，當(dāng)白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血紅蛋白和血小板的任何一項(xiàng)有明顯升高或降低；白細(xì)胞分類(lèi)出現(xiàn)異常結(jié)果（中間細(xì)胞群百分率≥8.0%）；紅細(xì)胞、白細(xì)胞和血小板的任何一個(gè)直方圖出現(xiàn)異常圖形等情況，須用顯微鏡檢查及分類(lèi)。第六節(jié)尿常規(guī)檢驗(yàn)操作規(guī)程【標(biāo)本】新鮮尿液。【方法】化學(xué)試帶法?！驹噭扛餍吞?hào)尿液化學(xué)分析儀配套試帶?！静僮鳌吭斠?jiàn)尿液化學(xué)分析儀使用手冊(cè)?！靖阶ⅰ?.尿常規(guī)檢查使用尿液化學(xué)分析儀，目前能進(jìn)行8～10項(xiàng)檢測(cè)（PH、蛋白、葡萄糖、酮體、隱血、尿膽紅素、尿膽素原、亞硝酸鹽、比重、白細(xì)胞）。這些項(xiàng)目亦有相應(yīng)的手工方法，詳見(jiàn)有關(guān)資料。2.必須了解所用試帶各膜塊注意事項(xiàng)、藥物干擾。3.要注意尿液化學(xué)分析儀測(cè)定結(jié)果與手工法的差異，必要時(shí)用手工法復(fù)查。4.尿液化學(xué)分析儀檢測(cè)僅是一個(gè)過(guò)篩手段，當(dāng)?shù)鞍?、隱血、白細(xì)胞等出現(xiàn)異常結(jié)果（如尿蛋白“＋”或以上）時(shí)，應(yīng)進(jìn)行鏡檢。5.尿液顏色、透明度等一般性狀異常時(shí)也應(yīng)報(bào)告。第七節(jié)肝功能檢驗(yàn)操作規(guī)程血清總膽紅素（TBIL）和結(jié)合膽紅素（DBIL）測(cè)定改良J~G法【試劑】參照書(shū)刊文獻(xiàn)（如《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》第二版）自配，配制標(biāo)準(zhǔn)液的膽紅素應(yīng)符合如下標(biāo)準(zhǔn)，純膽紅素的氯仿溶液在25℃當(dāng)光徑1.000±0.001Cm,波長(zhǎng)453nm條件下其摩爾吸光系數(shù)應(yīng)在60700±1600范圍內(nèi)，偶氮膽紅素的摩爾吸光系數(shù)應(yīng)在74380±【操作】按試劑盒說(shuō)明書(shū)或相應(yīng)書(shū)刊文獻(xiàn)規(guī)程手工操作，比色測(cè)定，波長(zhǎng)600nm.制作準(zhǔn)曲線(xiàn)。血樣測(cè)定，從標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上求TBIL及DBIL的含量以u(píng)mo1/L報(bào)告。也可按廠家提供的試劑及儀器使用的說(shuō)明書(shū)的要求將相應(yīng)的程序及參數(shù)設(shè)入，用自動(dòng)生化分析儀測(cè)定?！緲?biāo)本】血清，空腹血為宜，脂血、脂溶性色素及嚴(yán)重溶血干擾此測(cè)定，暫不能測(cè)定的標(biāo)本應(yīng)避光保存，室溫可穩(wěn)定8h，2~8℃可保存48h含疊氮鈉作防腐劑的質(zhì)控血清不宜用此法測(cè)定膽紅素。膽紅素氧化酶（BOD）法【試劑】市售成套試劑。BOD試劑復(fù)溶后2~8℃【操作】按廠家提供的試劑及儀器說(shuō)明書(shū)要求設(shè)置程序輸入?yún)?shù)用自動(dòng)生化分析儀測(cè)定。波長(zhǎng)450或460nm?！緲?biāo)本】血清要求與改良J一G法相似。二甲亞楓（DMSO）法【試劑】市售現(xiàn)成試劑?！静僮鳌堪丛噭┖姓f(shuō)明書(shū)手工操作比色測(cè)定或用自動(dòng)生化儀測(cè)定。波長(zhǎng)560nm?！緲?biāo)本】血清、輕度脂血，溶血標(biāo)本對(duì)結(jié)果無(wú)明顯影響、重度脂血、溶血標(biāo)本須作標(biāo)本空白進(jìn)行較正。血氨測(cè)定【方法】酶兩點(diǎn)法?！驹噭渴惺鄢商自噭??！静僮鳌堪丛噭┘皟x器使用說(shuō)明書(shū)要求，設(shè)入相應(yīng)的程序及各項(xiàng)參數(shù)、用自動(dòng)生化分析儀測(cè)定。波長(zhǎng)340nm。【標(biāo)本】EDTA.Na2抗凝血漿。靜脈采血后與EDTA.Na2混勻，立即置冰水中盡快分離出血漿，加塞置2~4℃保存，在2~3h內(nèi)分析，-20℃第八節(jié)腎功能檢驗(yàn)操作規(guī)程尿素氮1.檢測(cè)目的：檢測(cè)血清、血漿或尿液中尿素的含量，為臨床對(duì)相關(guān)疾病的診斷、觀察疾病的變化及治療效果，以及對(duì)健康人群正常生理指標(biāo)的監(jiān)測(cè)提供重要的參考價(jià)值。2.標(biāo)本要求：2.1病人準(zhǔn)備：空腹12小時(shí)。2.2標(biāo)本類(lèi)型：血清、肝素化的血漿或24小時(shí)尿。3.設(shè)備和試劑：3.1儀器設(shè)備：邁瑞半自動(dòng)生化分析儀3.2試劑材料：試劑3.3試劑的貯存：3.3.12～8℃3.3.2開(kāi)蓋上機(jī)2～83.3.3變質(zhì)指示：試劑混濁變色或空白吸光度值<1.03.4注意：此試劑為體外診斷用，禁止入口，吞下有害。試劑含有疊氮化鈉，誤入眼、口中或沾染到皮膚上請(qǐng)立即用清水徹底沖洗，必要時(shí)到醫(yī)院就診。疊氮化鈉可以和銅、鉛等金屬反應(yīng)形成爆炸性化合物，故廢棄時(shí)請(qǐng)充分稀釋廢液和沖洗排水管。3.5試劑準(zhǔn)備：即開(kāi)即用的，無(wú)需特殊準(zhǔn)備。4.操作步驟：見(jiàn)生化分析儀操作流程。5.質(zhì)量控制：5.1質(zhì)控物：RANDOX多項(xiàng)人基質(zhì)血清5.2質(zhì)控措施：.26.干擾因素：總膽紅素≤40mg/dL，血紅蛋白≤450mg/dL，抗壞血酸≤400mg/dL對(duì)本法無(wú)干擾。7.參考區(qū)間及可報(bào)區(qū)間：7.1參考范圍：血清/血漿2.86～8.20mmol/L24小時(shí)尿15～35g/24h7.2可報(bào)范圍：0.00～35.008.異常結(jié)果處理：結(jié)果異常、與臨床診斷不符，應(yīng)復(fù)查或與臨床聯(lián)絡(luò)。肌酐1.檢測(cè)目的：檢測(cè)血清、血漿或尿液中肌酐的含量，為臨床對(duì)相關(guān)疾病的診斷、觀察疾病的變化及治療效果，以及對(duì)健康人群正常生理指標(biāo)的監(jiān)測(cè)提供重要的參考價(jià)值。3.標(biāo)本要求：3.1病人準(zhǔn)備：空腹12小時(shí)。3.2標(biāo)本類(lèi)型：血清、肝素化的血漿或尿液。4.設(shè)備和試劑：4.1儀器設(shè)備：邁瑞半自動(dòng)生化分析儀4.2試劑材料：試劑4.3試劑的貯存：4.3.12～8℃4.3.2開(kāi)蓋上機(jī)2～8℃4.3.3變質(zhì)指示：試劑混濁變色或空白吸光度值>0.050時(shí)，不能繼續(xù)使用。4.4注意：此試劑為體外診斷用，禁止入口，吞下有害。試劑含有疊氮化鈉，誤入眼、口中或沾染到皮膚上請(qǐng)立即用清水徹底沖洗，必要時(shí)到醫(yī)院就診。疊氮化鈉可以和銅、鉛等金屬反應(yīng)形成爆炸性化合物，故廢棄時(shí)請(qǐng)充分稀釋廢液和沖洗排水管。4.5試劑準(zhǔn)備：即開(kāi)即用的，無(wú)需特殊準(zhǔn)備。5.操作步驟：見(jiàn)半自動(dòng)生化分析儀操作流程。6.質(zhì)量控制：6.1質(zhì)控物：RANDOX多項(xiàng)人基質(zhì)血清6.2質(zhì)控措施：.27.干擾因素：直接膽紅素≤257μmol/L，血紅蛋白≤0.5g/L，抗壞血酸≤3mmol/L,甘油三酯≤15.0mmol/L,肝素≤50KU/L，枸櫞酸鈉≤10g/L對(duì)本法無(wú)干擾。8.參考區(qū)間及可報(bào)區(qū)間：8.1參考范圍：血清/血漿53.0～123.0μmol/L(男性)44.0～106.0μmol/L(女性)首次晨尿1530～15320μmol/L24小時(shí)尿6.6～15.0mmol/24h8.2可報(bào)范圍：0.0～8840.0μmol/L。樣品Crea含量超過(guò)線(xiàn)性范圍應(yīng)用生理鹽水稀釋重做，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。9.異常結(jié)果處理：結(jié)果異常、與臨床診斷不符，應(yīng)復(fù)查或與臨床聯(lián)絡(luò)。9.危急值及處理方法：>177μmol/L。及時(shí)與臨床聯(lián)絡(luò)。10.實(shí)驗(yàn)室解釋?zhuān)涸龈撸簢?yán)重腎功能不全、各種腎障礙、肢端肥大癥等。降低：營(yíng)養(yǎng)不良、多尿等。第九節(jié)血脂檢驗(yàn)操作規(guī)程標(biāo)本采集與處理1．受檢者抽血前二周應(yīng)保持平衡的飲食習(xí)慣，近期體重穩(wěn)定無(wú)外傷，手術(shù)等意外情況。并注意如有使用降糖、降脂、降壓、避孕藥，β-受體阻滯劑，免疫抑制劑，激素藥物等，則應(yīng)根據(jù)所用藥物特性停藥數(shù)天或數(shù)周后再作血液脂類(lèi)檢測(cè)。2．空腹抽血，TG，脂蛋白，載脂蛋白測(cè)定應(yīng)至少禁食12小時(shí)（僅作膽固醇測(cè)定不必強(qiáng)求空腹）24小時(shí)內(nèi)不作劇烈運(yùn)動(dòng)。抽血前不要久站立。至少應(yīng)靜坐5分鐘。抽血時(shí)止血帶使用不可超過(guò)1分鐘。3．標(biāo)本用血清，也可用肝素或EDTA.Na2抗凝之血漿。EDTA.Na2濃度不宜太高。4．血標(biāo)本室溫放置不得超過(guò)3h，放置30~45分鐘后應(yīng)即時(shí)分離出血清（漿）蓋封於4℃冰箱中可穩(wěn)定至少4天，如需長(zhǎng)期保存，應(yīng)於-血清總膽固醇（TC）測(cè)定酶法（CHOD~PAP法）【試劑】市售現(xiàn)成試劑。【操作】按試劑及儀器使用說(shuō)明書(shū)要求設(shè)定程序，輸入?yún)?shù)用自動(dòng)或半自動(dòng)生化分析儀測(cè)定（速率法）終點(diǎn)法可手工操作，用普通分光光度計(jì)比色測(cè)定。波長(zhǎng)500nm或520nm?！緲?biāo)本】血清（漿）參看本節(jié)的標(biāo)本采集與處理?！靖阶ⅰ勘痉橹腥A醫(yī)學(xué)會(huì)檢驗(yàn)學(xué)會(huì)推薦的TC測(cè)定常規(guī)方法（中華醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志，1995、18：185）。膽固醇標(biāo)準(zhǔn)液以定值參考血清為宜，而不宜用Chol的水溶液作標(biāo)準(zhǔn)。Chol定值質(zhì)控血清亦不應(yīng)用作標(biāo)準(zhǔn)液。主要技術(shù)指標(biāo)：終點(diǎn)法批內(nèi)CV＜1.5%、批間CV≤2.5%。靈敏度：顯色劑用酚時(shí)，TC5.2mmo1/L(200mg/dl)時(shí)的吸光度（A500nm）約0.30~0.35，故A500nm=0.005時(shí)TC濃度約為0.08mmo1/L(3mg/dL)。測(cè)定范圍：當(dāng)血清與試劑用量之比為1:100時(shí)其測(cè)定的上界為13mmo1/L(500ng/dL)。血清甘油三酯（TG）測(cè)定酶法（GPO~PAP法）【試劑】市售現(xiàn)成試劑。有兩種。一步酶法單一試劑，二步酶法雙試劑。標(biāo)準(zhǔn)液（參考物）一步酶法之用三油酸甘油酯水溶液，也可用甘油，但甘油不適用於二步酶法?！静僮鳌堪丛噭┘皟x器使用說(shuō)明書(shū)要求設(shè)定程序和參數(shù)，用自動(dòng)或半自動(dòng)生化分析儀測(cè)定，終點(diǎn)法可用普通分光光度計(jì)手工操作，比色測(cè)定。波長(zhǎng)500nm。【標(biāo)本】血清（漿）參看本節(jié)標(biāo)本采集與處理?！靖阶ⅰ勘痉ㄔ诓僮鞒绦蛏戏譃橐徊矫阜ㄅc二步酶法，二步酶法為中華醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)學(xué)會(huì)的推薦方法（中華醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志1995、18：249）?，F(xiàn)階段允許二法并存，要求逐步過(guò)渡到統(tǒng)一采用二步酶法，在方法尚未統(tǒng)一前，實(shí)驗(yàn)室報(bào)告TG測(cè)定結(jié)果時(shí)應(yīng)注明“除FG值”或“未除FG值”。主要枝術(shù)指標(biāo)：酶試劑用緩沖液配制后，20~25℃應(yīng)穩(wěn)定1天，4℃可穩(wěn)定3~7天，試劑空白為A500nm≤0.05；顯色后穩(wěn)定≥30min：測(cè)定上界11.3mmo1/精密度：批內(nèi)CV≤3%，批間CV≤5%：靈敏度：2mmo1/LTGA500nm≥0.2。血清高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)測(cè)定磷鎢酸鎂沉淀法【試劑】市售成套試劑，沉淀劑，酶試劑（同TG測(cè)定）。【操作】按試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。1．沉淀含apoB的脂蛋白。2．測(cè)定上清液（只含HDL）的膽固醇含量（方法同酶法TC測(cè)定）。【標(biāo)本】血清（漿）。硫酸葡聚糖一鎂沉淀法【試劑】市售成套試劑：總HDL試劑，HDL3試劑，酶試劑（同TC試劑）。【操作】按試劑說(shuō)明書(shū)操作：1．沉淀含apoB的脂蛋白，（總HDL試劑）；2．沉淀含apoB的脂蛋白及HDL2（HDL3試劑）；3．測(cè)定總HDL~C及HDL3~C（同酶法TC測(cè)定），并計(jì)算出HDL2~C量?！緲?biāo)本】血清（漿）血樣在室溫中不宜久放，應(yīng)即時(shí)測(cè)定，原則應(yīng)低溫保存。直接HDL~C測(cè)定法【試劑】市售專(zhuān)門(mén)的試劑，無(wú)沉淀劑。酶試劑同TC測(cè)定。（如日本第一化學(xué)藥品株式會(huì)社的產(chǎn)品）。【操作】按試劑盒及儀器使用說(shuō)明書(shū)要求設(shè)置程序，輸入?yún)?shù)直接用自動(dòng)或半自動(dòng)生化分析儀測(cè)定，無(wú)須沉淀離心分離出HDL步驟。【標(biāo)本】血清（漿）。血清低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）測(cè)定1．Friedwald工式計(jì)算法：（1）LDL-C=TC―HDL-C―TG/5（以mg/dl為單位計(jì)）；（2）LDL-C=TC―HDL-C―TG/2.2(以mmo1/L為單位計(jì))；（3）只有當(dāng)血TG＜4.52mmo/L結(jié)果才較準(zhǔn)確；（4）只有TC、TG、HDL-C三項(xiàng)測(cè)定都準(zhǔn)確且符合標(biāo)準(zhǔn)化要求時(shí)，才可計(jì)算出LDL-C的近似值。2．聚乙烯硫酸沉淀法【試劑】沉淀劑市售，酶試劑同TC測(cè)定?！静僮鳌?．TC測(cè)定。2．選擇性沉淀血清中LDL，測(cè)定上清液之HDL－C與VLDL－C之和的量，（同TC測(cè)定）。3．計(jì)算出LDL－C的含量。【標(biāo)本】血清。血清載脂蛋白A1（apoA1）測(cè)定免疫透射比濁法。波長(zhǎng)340nm，本法批間CV＜5%?！驹噭渴惺墼噭┖校噭?~8℃保存，不同批號(hào)試劑不能混合使用，抗血清效價(jià)不應(yīng)低於16【操作】按試劑及儀器使用說(shuō)明書(shū)要求，設(shè)定程序和參數(shù)用自動(dòng)生化分析儀測(cè)定，也可用特定蛋白分析儀作速率法散射比濁測(cè)定，或用含340nm的分光光度計(jì)手工操作測(cè)定?！緲?biāo)本】血清。血清載脂蛋白B（apoB）測(cè)定免疫透射比濁法。波長(zhǎng)340nm，本法批間CV＜5%?！驹噭渴惺墼噭?~8℃保存，不同批號(hào)試劑不能混合使用，抗血清效價(jià)不應(yīng)低於1：128【操作】參看apoA1測(cè)定?！緲?biāo)本】血清。第十節(jié)血液葡萄糖測(cè)定技術(shù)操作規(guī)程1.檢測(cè)目的：檢測(cè)血清或血漿中葡萄糖的含量，為臨床對(duì)相關(guān)疾病的診斷、觀察疾病的變化及治療效果，以及對(duì)健康人群正常生理指標(biāo)的監(jiān)測(cè)提供重要的參考價(jià)值。3.標(biāo)本要求：3.1病人準(zhǔn)備：空腹12小時(shí)。3.2標(biāo)本類(lèi)型：血清或NaF抗凝的血漿。采血后及時(shí)分離，以避免血清或血漿中葡萄糖被細(xì)胞利用而降低。4.設(shè)備和試劑：4.1儀器設(shè)備：奧林巴斯AU600生化分析儀4.2試劑材料：四川邁克公司試劑參與反應(yīng)成份：R1：酚（12.0mmol/L）R2：GOD（≥35KU/L）、POD（≥5KU/L）、4-AAP（1.20mmol/L）4.3試劑的貯存：4.3.12～8℃4.3.2開(kāi)蓋上機(jī)2～8℃4.3.3變質(zhì)指示：試劑混濁變色或空白吸光度值>0.150時(shí)，不能繼續(xù)使用。4.4注意：此試劑為體外診斷用，禁止入口，吞下有害。試劑含有疊氮化鈉，誤入眼、口中或沾染到皮膚上請(qǐng)立即用清水徹底沖洗，必要時(shí)到醫(yī)院就診。疊氮化鈉可以和銅、鉛等金屬反應(yīng)形成爆炸性化合物，故廢棄時(shí)請(qǐng)充分稀釋廢液和沖洗排水管。4.5試劑準(zhǔn)備：即開(kāi)即用的，無(wú)需特殊準(zhǔn)備。5質(zhì)量控制：5.1質(zhì)控物：RANDOX多項(xiàng)人基質(zhì)血清5.2質(zhì)控措施：.26.參考區(qū)間及可報(bào)區(qū)間：6.1參考范圍：空腹3.89～6.11mmol/L餐后1小時(shí)7.78～8.89mmol/L餐后2小時(shí)3.89～7.78mmol/L6.2可報(bào)范圍：0.00～22.30mmol/L。樣品GLU含量超過(guò)線(xiàn)性范圍應(yīng)用生理鹽水稀釋重做，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。7.危急值及處理方法：<2.5mmol/L或>10mmol/L。及時(shí)與臨床聯(lián)絡(luò)。第十一節(jié)凝血四項(xiàng)檢驗(yàn)操作規(guī)程全血凝固時(shí)間檢驗(yàn)（CT）【標(biāo)本】靜脈取血3ml?！痉椒ㄅc操作】試管法、硅管法操作參見(jiàn)《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》（第二版）。【附注】1.靜脈取血要一針見(jiàn)血，盡量減少組織液和空氣混入。2.水浴箱溫度要恒定，過(guò)高或過(guò)低，可影響結(jié)果?；罨糠帜蠲笗r(shí)間測(cè)定（APTT）【標(biāo)本】自靜脈取血，用109mmol/L枸椽酸鈉作1:9抗凝。【試劑】市售成套試劑。【方法與操作】按試劑及有關(guān)儀器說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行。【附注】1.標(biāo)本應(yīng)及時(shí)檢測(cè)，最遲不超過(guò)2h。2.分離血漿應(yīng)在3000r/min，離心10min。3.本試驗(yàn)較試管法全血凝血時(shí)間敏感，能檢出因子Ⅷ：C＜25％輕型血友病。血漿凝血酶原時(shí)間測(cè)定（PT，一期法）【標(biāo)本】靜脈血1.8ml，用109mmol/L枸椽酸鈉0.2ml抗凝?！驹噭?.組織凝血活酶浸出液；2.0.025mol/LCaCl2【方法與操作】見(jiàn)《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》（第二版）?！靖阶ⅰ?.采血后宜在1h內(nèi)完成，置冰箱4℃保存,不應(yīng)超過(guò)4h，-20℃下可放置2周，-702.水溫箱控制在37℃±1簡(jiǎn)易凝血活酶生成試驗(yàn)（STGT）【標(biāo)本】取全血0.04ml加5ml蒸餾水，混勻，即成溶血液，備用?！痉椒ㄅc操作】見(jiàn)《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》（第二版）第十二節(jié)AB0血型正、反血型鑒定技術(shù)操作規(guī)程1.檢測(cè)目的用于檢測(cè)患者血型，實(shí)施輸血治療和組織器官移植等。2.檢測(cè)原理（正定型法）根據(jù)IgM類(lèi)特異性血型抗體與紅細(xì)胞上特異性抗原結(jié)合能夠出現(xiàn)凝集反應(yīng)的原理，用已知IgM類(lèi)特異性標(biāo)準(zhǔn)抗血清與被檢紅細(xì)胞在室溫條件下反應(yīng)，若被檢紅細(xì)胞出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，表明被檢紅細(xì)胞上有與血型抗體對(duì)應(yīng)的抗原。3.標(biāo)本要求新鮮全血。4.試劑標(biāo)準(zhǔn)抗A、抗B血清。5.操作步驟（玻片法）5.1標(biāo)記：取一載玻片，用蠟筆畫(huà)上直徑2cm5.2抗血清：在玻片蠟筆圈內(nèi)按標(biāo)記所示分別滴加抗A、抗B標(biāo)準(zhǔn)抗血清各一滴。5.3紅細(xì)胞：在抗A、抗B圈內(nèi)加被檢者全血各一滴。用玻棒將紅細(xì)胞與抗體充分混勻，室溫下放置18～30min（為防止天氣干燥造成玻片干涸，可把試驗(yàn)玻片放在有濕紗布的蓋盤(pán)中）。5.4血型判讀：搖動(dòng)玻片，肉眼觀察玻片蠟筆圈內(nèi)有無(wú)顆粒狀凝集及凝集程度，判定陰性、陽(yáng)性和陽(yáng)性程度。陰性指視野中紅細(xì)胞程均勻散布，無(wú)凝集顆粒，顯微鏡下紅細(xì)胞分散存在，無(wú)聚集靠攏現(xiàn)象。陽(yáng)性時(shí)紅細(xì)胞出現(xiàn)凝集。6.質(zhì)量控制6.1分型血清質(zhì)量性能符合要求，用畢后應(yīng)放置冰箱保存，以免細(xì)菌污染。6.2試管、滴管和玻片必須清潔干燥，防止溶血。6.3按理IgM抗-A和抗-B與相應(yīng)紅細(xì)胞的反應(yīng)溫度以6℃為最強(qiáng)，但為了防止冷凝集現(xiàn)象的干擾，一般仍在室溫內(nèi)進(jìn)行試驗(yàn)，366.4觀察時(shí)應(yīng)注意紅細(xì)胞呈特異性凝集、繼發(fā)性凝固以及緡錢(qián)狀排列的區(qū)別。7.干擾因素7.1分型血清效價(jià)太低、親和力不強(qiáng)；7.2受檢者紅細(xì)胞上抗原位點(diǎn)過(guò)少或抗原性減弱；7.3受檢者血清中缺乏應(yīng)有的抗-A/抗-B抗體；7.4各種原因引起的紅細(xì)胞溶解，誤判為不凝集。部分溶血時(shí)，可溶性血型物質(zhì)中和了相應(yīng)的抗體；7.5由細(xì)菌污染或遺傳因素引起多凝集或全凝集往往是正反定型不符的原因；7.6血清中有意外抗體，如自身抗-I，常引起干擾；7.7老年人血清中抗體水平大幅度下降；7.8更換新批號(hào)抗血清或?qū)υ噭┙Y(jié)果有懷疑時(shí)，可設(shè)定陽(yáng)性、陰性和自身對(duì)照；7.9為避免交叉污染，尖吸管、玻棒只能一次性使用；7.10嬰幼兒紅細(xì)胞抗原未發(fā)育完全、老年體弱者抗原性較弱；7.11有些疾病可能使紅細(xì)胞定性出現(xiàn)困難，如：嚴(yán)重的腸道細(xì)菌感染；嚴(yán)重的細(xì)菌感染；血清中存在病理性冷凝集素與紅細(xì)胞上抗原結(jié)合；部分高球蛋白和異常高球蛋白血癥患者；7.12輸入異型血或做過(guò)與受者血型不同的異體骨髓器官移植的病人在血型堅(jiān)定時(shí)可能出現(xiàn)混合外觀。第十三節(jié)交叉配血操作規(guī)程交叉配血試驗(yàn)（凝聚胺法）[原理]凝聚胺試驗(yàn)是利用低離子溶液促進(jìn)紅細(xì)胞抗原與血清（漿）中的抗體反應(yīng)，再利用凝聚胺引起紅細(xì)胞間非免疫性的凝集，讓已有抗體（IgG）反應(yīng)的紅細(xì)胞間的距離縮短。距離縮短后更能引起已反應(yīng)的抗體和別的紅細(xì)胞產(chǎn)生反應(yīng)形成免疫性的凝集。而由凝聚胺所引起的非免疫性紅細(xì)胞凝集反應(yīng)可被后來(lái)加入的復(fù)懸液所中和而散開(kāi)，如有免疫反應(yīng)，凝集就不會(huì)散開(kāi)，為陽(yáng)性反應(yīng)。如沒(méi)有免疫反應(yīng)，凝集就會(huì)散開(kāi)，為陰性反應(yīng)。交叉配血試驗(yàn)是在鹽水介質(zhì)的基礎(chǔ)上加入凝聚胺，檢測(cè)供患之間是否相合，患者血清（漿）中是否含有具臨床意義的紅細(xì)胞異體抗體。[試劑組成]1潔凈試管，離心機(jī)，顯微鏡。20.85%氯化鈉溶液：準(zhǔn)確稱(chēng)取氯化鈉（AR）8.5g，用蒸餾水溶解并定容至1000ml。

試劑啟用后，有效期為：二周。3聚胺試劑（1）質(zhì)溶液：含葡萄糖，乙二胺四醋酸-2鈉及穩(wěn)定劑。（2）凝聚胺溶液：含凝聚胺，氯化鈉及穩(wěn)定劑。（3）復(fù)懸液：含檸檬酸鈉，葡萄糖及穩(wěn)定劑。（4）陽(yáng)性對(duì)照血清：含抗D血清，氯化鈉及穩(wěn)定劑。

4

抗人IgG血清。[試劑保存和穩(wěn)定性]1．凝聚胺試劑須保存在2-25℃2．有效期內(nèi)可使用。3．抗人IgG血清低溫冰箱保存。復(fù)溶后放2—4℃冰箱保存。

1．抽取受血者靜脈血3-4ml（操作中小心防止紅細(xì)胞破損），放入一已貼標(biāo)簽干燥潔凈的試管中為血清管(也可用EDTA-K2抗凝血液)，并將注射器中余下的少量血液配成2%紅細(xì)胞生理鹽水懸液，放入另一已貼標(biāo)簽干燥潔凈的試管中為紅細(xì)胞懸液管。以上標(biāo)本有效期為三天；若受血者抽取標(biāo)本后，輸用過(guò)血液或血液制品，且輸用時(shí)間超過(guò)12小時(shí)的，必須重新采集標(biāo)本。2．2%紅細(xì)胞懸液：用生理鹽水洗滌紅細(xì)胞3次。根據(jù)下表進(jìn)行紅細(xì)胞懸液的配制。懸液濃度（%）

壓積紅細(xì)胞（滴）

鹽水（滴）

2

1

2ml(40)

5

1

0.8ml(16)

[操作步驟]取出3支試管分別標(biāo)記主，次及對(duì)照測(cè)試：主測(cè)管：加入病人血清（漿）2滴，再加入供血者3-5%紅細(xì)胞懸液1滴，次測(cè)管：加入供血者血清（漿）2滴，再加入病人3-5%紅細(xì)胞懸液1滴，對(duì)照管：加入2滴*4陽(yáng)性對(duì)照血清，再加入供血者3-5%紅細(xì)胞懸液1滴。2．各加入*1低離子介質(zhì)溶液0.6ml，輕輕混勻，于室溫下靜置1分鐘。3．

再滴入2滴*2凝聚胺溶液，輕輕混勻，于室溫下靜置15秒。4．

3400rpm離心1分鐘，然后把上清液倒掉，管底保留大約0.1ml的液體。5．

目測(cè)紅細(xì)胞有無(wú)變成凝塊，如果沒(méi)有凝塊，則必須重做，（請(qǐng)看注意事項(xiàng)6）。重做后仍然沒(méi)有凝集現(xiàn)象出現(xiàn)，可能試劑失效。6．

各滴入2滴*3復(fù)懸液，并輕輕混勻，觀察結(jié)果。若為凝聚胺引起的非免疫性凝集，應(yīng)該在1分鐘內(nèi)散開(kāi)；若是異體抗體所引起的免疫性凝集，則不會(huì)散開(kāi)。7．

倒在玻片上用顯微鏡觀察有無(wú)凝集。如有凝集反應(yīng)，表示不合，此供血者的血液不適合病人使用；如無(wú)凝集反應(yīng)，表示供血者的血液適合病人輸注。如果想進(jìn)一步檢測(cè)Anti-K抗體，則必須繼續(xù)做輔助性的抗球蛋白試驗(yàn)，步驟如下：8．再滴入1滴*3復(fù)懸液。9．用生理鹽水洗紅細(xì)胞3—5次