高三一輪復(fù)習(xí)生物：基因工程的基本工具和基本操作程序課件

第44講基因工程的基本工具和基本操作程序[課標(biāo)要求]1.概述基因工程是在遺傳學(xué)、微生物學(xué)、生物化學(xué)和分子生物學(xué)等學(xué)科基礎(chǔ)上發(fā)展而來的。2.闡明DNA重組技術(shù)的實(shí)現(xiàn)需要利用限制性內(nèi)切核酸酶、DNA連接酶和載體三種基本工具。3.闡明基因工程的基本操作程序主要包括目的基因的獲取、基因表達(dá)載體的構(gòu)建、目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞和目的基因及其表達(dá)產(chǎn)物的檢測鑒定等步驟。4.活動:DNA的提取和鑒定。5.活動:利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)擴(kuò)增DNA片段并完成電泳鑒定,或運(yùn)用軟件進(jìn)行虛擬PCR實(shí)驗(yàn)。1.基因工程的概念解讀考點(diǎn)一重組DNA技術(shù)的基本工具目的基因基因重組分子2.基因工程的基本工具(1)限制性內(nèi)切核酸酶(也稱“限制酶”)。原核生物特定核苷酸序列黏性末端(2)DNA連接酶。磷酸二酯鍵黏性末端黏性末端(3)載體。質(zhì)粒噬菌體有一個(gè)至多個(gè)自我復(fù)制受體DNA標(biāo)記[正誤辨析]1.切割質(zhì)粒的限制性內(nèi)切核酸酶均能特異性地識別6個(gè)核苷酸序列。(

)提示:大多數(shù)限制酶的識別序列由6個(gè)核苷酸組成,也有少數(shù)限制酶的識別序列由4個(gè)、8個(gè)或其他數(shù)量的核苷酸組成。2.限制性內(nèi)切核酸酶、DNA連接酶和質(zhì)粒是基因工程中常用的三種工具酶。(

)提示:質(zhì)粒不是工具酶,是工具?！痢?.E.coliDNA連接酶既可連接平末端,又可連接黏性末端。(

)提示:E.coliDNA連接酶只能連接黏性末端,而T4DNA連接酶能連接平末端和黏性末端。4.DNA聚合酶和DNA連接酶都能催化磷酸二酯鍵的形成。(

)5.載體質(zhì)粒通常采用抗生素合成基因作為篩選的標(biāo)記基因。(

)提示:質(zhì)粒上常有抗生素抗性基因等特殊的基因作為標(biāo)記基因,而非抗生素合成基因。×√×[教材微點(diǎn)思考]1.(選擇性必修3P71正文拓展)限制酶主要來源于原核生物,為什么不能切割自身的DNA分子?提示:限制酶具有特異性,即一種限制酶只能識別一種特定的核苷酸序列,并在特定位點(diǎn)進(jìn)行切割。原核生物DNA分子中不存在自身限制酶的識別序列,或其識別序列已被修飾。2.(選擇性必修3P72正文拓展)DNA連接酶和DNA聚合酶功能上有何不同?提示:DNA連接酶連接的是兩個(gè)DNA片段,而DNA聚合酶是把單個(gè)的脫氧核苷酸連接到已有的DNA片段上;DNA聚合酶起作用時(shí)需要以一條DNA鏈為模板,而DNA連接酶不需要模板。1.與DNA有關(guān)的酶的比較酶種類作用底物作用部位作用結(jié)果限制酶DNA分子磷酸二酯鍵將DNA切成一個(gè)或多個(gè)片段DNA連接酶DNA分子片段磷酸二酯鍵將兩個(gè)DNA片段連接為一個(gè)DNA分子DNA聚合酶脫氧核苷酸磷酸二酯鍵以DNA單鏈為模板,將單個(gè)脫氧核苷酸依次連接到另一條短的單鏈末端解旋酶DNA分子堿基對中的氫鍵將雙鏈DNA分子局部解旋為單鏈,形成兩條長鏈DNA水解酶DNA分子磷酸二酯鍵將DNA片段水解為單個(gè)脫氧核苷酸2.標(biāo)記基因的作用標(biāo)記基因可用于檢測目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞。3.限制酶的選擇構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí),需要選擇合適的限制酶切割含有目的基因的DNA片段和載體。已知限制性內(nèi)切核酸酶Ⅰ的識別序列和切點(diǎn)是,限制性內(nèi)切核酸酶Ⅱ的識別序列和切點(diǎn)是,根據(jù)圖示分析回答下列問題。(1)請用圖示法寫出限制性內(nèi)切核酸酶Ⅰ和限制性內(nèi)切核酸酶Ⅱ切割后形成黏性末端的過程。提示:限制性內(nèi)切核酸酶Ⅰ限制性內(nèi)切核酸酶Ⅱ(2)切割圖示中的目的基因和質(zhì)粒應(yīng)選用哪類限制酶?請說明理由。提示:用限制酶Ⅱ切割目的基因,用限制酶Ⅰ切割質(zhì)粒。限制酶Ⅰ的識別序列包含限制酶Ⅱ的識別序列,因此限制酶Ⅱ也可切割限制酶Ⅰ的位點(diǎn),故使用限制酶Ⅱ時(shí),可在目的基因兩端同時(shí)切割,從而切出“目的基因”,但若使用限制酶Ⅱ切割質(zhì)粒,會同時(shí)破壞質(zhì)粒中的兩個(gè)“標(biāo)記基因”,故只能使用限制酶Ⅰ切割質(zhì)粒。(1)不破壞目的基因原則:如圖甲中可選擇PstⅠ,而不選擇SmaⅠ。(2)保留標(biāo)記基因(至少保留一個(gè))、啟動子、終止子、復(fù)制原點(diǎn)原則:所選擇的限制酶盡量不要破壞這些結(jié)構(gòu),如圖乙中不選擇SmaⅠ。(3)確保出現(xiàn)相同黏性末端原則:通常選擇與切割目的基因相同的限制酶切割質(zhì)粒,如圖中PstⅠ;為避免目的基因和質(zhì)粒自身環(huán)化和隨意連接,也可使用不同的限制酶切割目的基因和質(zhì)粒,如圖也可選擇PstⅠ和EcoRⅠ兩種限制酶。1.(2023·山西沂州期中)如圖表示由不同的限制酶切割而成的DNA末端及相關(guān)的酶作用位點(diǎn)。下列敘述錯(cuò)誤的是(

)A.甲、乙、丙都屬于黏性末端B.甲、乙片段可形成重組DNA分子,但甲、丙不能C.DNA連接酶的作用位點(diǎn)在圖乙中b處D.切割甲的限制酶不能識別由甲、乙片段形成的重組DNA分子√基因工程中工具酶的應(yīng)用甲、乙的黏性末端相同,因此可在DNA連接酶的作用下形成重組DNA分子,但甲、丙的黏性末端不同,它們之間不能形成重組DNA分子;DNA連接酶將兩個(gè)DNA片段連接為一個(gè)DNA分子,作用部位是磷酸二酯鍵,即圖乙中a處;切割甲的限制酶的識別序列為GAATTC∥CTTAAG,而甲、乙片段形成的重組DNA分子序列為GAATTG∥CTTAAC,因此切割甲的限制酶不能識別由甲、乙片段形成的重組DNA分子。解析2.(2023·江蘇鹽城調(diào)研)圖甲、乙中的箭頭表示三種限制性內(nèi)切核酸酶的酶切位點(diǎn),AmpR表示氨芐青霉素抗性基因,neoR表示新霉素抗性基因。下列敘述錯(cuò)誤的是(

)A.在構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí),可用PstⅠ和HindⅢ切割質(zhì)粒和外源DNAB.在酶切過程中,不能破壞質(zhì)粒中全部的標(biāo)記基因C.若只用PstⅠ處理質(zhì)粒和外源DNA分子片段,無法避免自身環(huán)化和反向連接D.導(dǎo)入重組質(zhì)粒的大腸桿菌可以在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基中生長√切割目的基因時(shí),用BamHⅠ切割會破壞目的基因,只用PstⅠ切割目的基因和質(zhì)粒載體,會出現(xiàn)目的基因和質(zhì)粒的自身環(huán)化,或目的基因和質(zhì)粒的反向連接,而用PstⅠ和HindⅢ進(jìn)行酶切,能確保目的基因和質(zhì)粒的正向連接,并且質(zhì)粒上保留新霉素抗性基因作為標(biāo)記基因;在酶切過程中,不能破壞質(zhì)粒中全部的標(biāo)記基因,至少需保留其中的一個(gè);用PstⅠ切割后,質(zhì)粒上氨芐青霉素抗性基因被破壞了,導(dǎo)入重組質(zhì)粒的大腸桿菌不可以在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基中生長。解析3.(2023·遼寧凌源期中)將外源基因送入細(xì)胞通常是利用質(zhì)粒作為載體。下列有關(guān)質(zhì)粒的敘述,正確的是(

)A.質(zhì)粒上常有特殊的標(biāo)記基因,以便于重組DNA分子的篩選B.質(zhì)粒從細(xì)胞中提取出來后即可以直接使用,無須人工改造C.質(zhì)粒是具有自我復(fù)制能力的DNA分子,只存在于原核生物中D.質(zhì)粒一般只有一個(gè)限制酶切割位點(diǎn),以便于目的基因插入√載體的作用和特點(diǎn)質(zhì)粒一般需要經(jīng)過人工改造才可以使用;質(zhì)粒存在于真核細(xì)胞和原核細(xì)胞中;質(zhì)粒一般具有一個(gè)至多個(gè)限制酶切割位點(diǎn),以供目的基因插入其中。解析1.目的基因的篩選與獲取(1)篩選合適的目的基因。①目的基因:在基因工程的設(shè)計(jì)和操作中,用于改變

或獲得

等的基因。主要是指

的基因。②篩選方法:從相關(guān)的已知結(jié)構(gòu)和功能清晰的基因中進(jìn)行篩選是較為有效的方法之一。考點(diǎn)二基因工程的基本操作程序受體細(xì)胞性狀預(yù)期表達(dá)產(chǎn)物編碼蛋白質(zhì)引物(2)利用PCR獲取和擴(kuò)增目的基因。脫氧核苷酸耐高溫溫度兩種引物耐高溫的DNA聚合酶瓊脂糖凝膠電泳(1)在PCR過程中實(shí)際加入的為dNTP(即dATP、dGTP、dTTP、dCTP),既可作為合成DNA子鏈的原料,又可為DNA的合成提供能量。(2)引物是一小段單鏈的DNA或RNA,作為新子鏈的合成起點(diǎn),只能結(jié)合在母鏈的3′端,使DNA聚合酶能從引物的3′端開始連接脫氧核苷酸。(3)真核細(xì)胞和細(xì)菌的DNA聚合酶都需要Mg2+激活。因此,PCR反應(yīng)緩沖溶液中一般都要添加Mg2+。2.基因表達(dá)載體的構(gòu)建(1)構(gòu)建基因表達(dá)載體的目的。①使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在,并且遺傳給下一代。②使目的基因能夠

和發(fā)揮作用。表達(dá)(2)基因表達(dá)載體的組成。RNA聚合酶轉(zhuǎn)錄啟動子、起始密碼子、終止子、終止密碼子的區(qū)別(3)基因表達(dá)載體的構(gòu)建過程。生物種類植物動物微生物常用方法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、

顯微注射法

處理法受體細(xì)胞

原核細(xì)胞轉(zhuǎn)化過程將目的基因插入Ti質(zhì)粒的T-DNA中→農(nóng)桿菌→導(dǎo)入植物細(xì)胞→整合到受體細(xì)胞的染色體DNA上→表達(dá)將含有目的基因的表達(dá)載體提純→取卵(受精卵)→顯微注射→受精卵發(fā)育→獲得具有新性狀的動物Ca2+處理細(xì)胞→細(xì)胞處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)→基因表達(dá)載體導(dǎo)入3.將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞花粉管通道法體細(xì)胞或受精卵Ca2+受精卵(1)農(nóng)桿菌特點(diǎn)。①能在自然條件下侵染雙子葉植物和裸子植物,而對大多數(shù)單子葉植物沒有侵染能力。②農(nóng)桿菌細(xì)胞內(nèi)含有Ti質(zhì)粒,當(dāng)它侵染植物細(xì)胞后,能將Ti質(zhì)粒上的T-DNA轉(zhuǎn)移到被侵染的細(xì)胞,并且將其整合到該細(xì)胞的染色體DNA上。(2)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法中的兩次拼接和兩次導(dǎo)入:第一次拼接是將目的基因拼接到Ti質(zhì)粒的T-DNA上,第二次拼接(非人工操作)是指插入目的基因的T-DNA拼接到受體細(xì)胞的染色體DNA上;兩次導(dǎo)入:第一次導(dǎo)入是將含目的基因的Ti質(zhì)粒導(dǎo)入農(nóng)桿菌,第二次導(dǎo)入(非人工操作)是指含目的基因的T-DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞。(3)導(dǎo)入的目的基因,可能存在于細(xì)胞質(zhì)中,也可能整合到染色體DNA上。存在于染色體DNA上的目的基因有可能通過花粉傳播進(jìn)入雜草或其他作物中,造成“基因污染”。4.目的基因的檢測與鑒定[正誤辨析]1.用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)不必知道基因的全部序列。(

)2.利用PCR擴(kuò)增目的基因時(shí),要用2種不同但能夠互補(bǔ)配對的引物。(

)提示:PCR擴(kuò)增目的基因時(shí),2種不同的引物不能互補(bǔ)配對。3.外源DNA必須位于重組質(zhì)粒的啟動子和終止子之間才能進(jìn)行復(fù)制。(

)提示:啟動子和終止子與外源DNA表達(dá)有關(guān),控制轉(zhuǎn)錄過程;要進(jìn)行復(fù)制,需要的是復(fù)制原點(diǎn)?！獭痢羀教材微點(diǎn)思考]1.(選擇性必修3P77正文拓展)PCR技術(shù)為什么需要引物?為檢測胚乳細(xì)胞中Wx基因是否表達(dá),科研人員提取胚乳中的總RNA,經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄過程獲得總cDNA,通過PCR技術(shù)可在總cDNA中專一性地?cái)U(kuò)增出Wx基因的cDNA,原因是什么?提示:DNA聚合酶不能從頭開始合成DNA,只能從3′端延伸DNA鏈。引物是依據(jù)Wx基因的一段已知序列設(shè)計(jì)合成的(或引物能與Wx基因的cDNA特異性結(jié)合)。2.(選擇性必修3P81“資料卡”拓展)在用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的過程中,為什么一定要將目的基因插入Ti質(zhì)粒的T-DNA上?提示:Ti質(zhì)粒的T-DNA也稱為可轉(zhuǎn)移的DNA,可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞,并且整合到受體細(xì)胞染色體DNA上。1.PCR技術(shù)和DNA復(fù)制的比較2.PCR擴(kuò)增過程中的循環(huán)圖示與規(guī)律循環(huán)次數(shù)123nDNA分子數(shù)2482n含引物A(或B)的DNA分子數(shù)1372n-1同時(shí)含引物A、B的DNA分子數(shù)0=21-22=22-26=23-22n-2共消耗的引物數(shù)量2=21+1-26=22+1-214=23+1-22n+1-21.農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒上的T-DNA可以轉(zhuǎn)移并隨機(jī)插入被侵染植物的染色體DNA中。研究者將圖中被侵染植物的DNA片段連接成環(huán),并以此環(huán)為模板進(jìn)行PCR,擴(kuò)增出T-DNA插入位置兩側(cè)的未知序列,以此可確定T-DNA插入的具體位置。下列說法錯(cuò)誤的是(

)A.PCR擴(kuò)增依據(jù)的是DNA分子雙鏈復(fù)制的原理B.進(jìn)行PCR擴(kuò)增需要耐高溫的DNA聚合酶C.利用圖中的引物②③組合可擴(kuò)增出兩側(cè)的未知序列D.通過與受體細(xì)胞的基因組序列比對,可確定T-DNA的插入位置√利用PCR獲取和擴(kuò)增目的基因由于DNA的兩條鏈反向平行,且子鏈從引物的3′端開始延伸,故利用圖中的引物①④組合可擴(kuò)增出兩側(cè)的未知序列。解析2.(2023·黑龍江大慶月考)通過引物設(shè)計(jì),運(yùn)用PCR技術(shù)可以實(shí)現(xiàn)目的基因的定點(diǎn)誘變,如圖為基因工程中獲取突變基因的過程,其中引物1序列中含有一個(gè)堿基T不能與目的基因片段配對,但不影響引物與模板鏈的整體配對,反應(yīng)體系中引物1和引物2分別設(shè)計(jì)增加限制酶a和限制酶b的識別位點(diǎn)。下列有關(guān)敘述正確的是(

)A.限制酶a和限制酶b的識別位點(diǎn)分別加在引物1和引物2的3′端B.PCR反應(yīng)體系中需要加入脫氧核苷酸、模板、Ca2+等C.第2輪PCR中,引物1與圖中②結(jié)合并形成兩條鏈等長的突變基因D.在第3輪PCR結(jié)束后,同時(shí)含引物1和引物2的DNA占3/4√DNA的合成方向是從子鏈的5′端向3′端延伸,據(jù)此可知,圖中限制酶a和限制酶b的識別位點(diǎn)分別加在引物1和引物2的5′端;PCR反應(yīng)體系中需要加入模板、脫氧核苷酸、耐高溫的DNA聚合酶和擴(kuò)增緩沖液(含Mg2+)等物質(zhì);第3輪PCR中,引物1與圖中②結(jié)合并形成兩條鏈等長的突變基因;在第3輪PCR結(jié)束后,會產(chǎn)生23=8(個(gè))DNA分子,其中含有模板的DNA分子有2個(gè)只含有一個(gè)引物,則同時(shí)含引物1和引物2的DNA占3/4。解析基因工程的基本操作程序3.(2023·北京海淀二模)OsGLO1、EcCAT、EcGCL和TSR四個(gè)基因分別編碼四種不同的酶,研究人員將這些基因分別與葉綠體轉(zhuǎn)運(yùn)肽(引導(dǎo)合成的蛋白質(zhì)進(jìn)入葉綠體)基因連接,構(gòu)建多基因表達(dá)載體(載體中部分序列如圖所示),利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法轉(zhuǎn)化水稻,在水稻葉綠體內(nèi)構(gòu)建了一條新代謝途徑,提高了水稻的產(chǎn)量。下列敘述正確的是(

)A.可用抗原—抗體雜交技術(shù)檢測四種酶在轉(zhuǎn)基因水稻中是否表達(dá)B.四個(gè)基因轉(zhuǎn)錄時(shí)都以DNA的同一條單鏈為模板C.應(yīng)選用含卡那霉素的培養(yǎng)基篩選被農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化的水稻細(xì)胞D.四個(gè)基因都在水稻葉綠體內(nèi)進(jìn)行轉(zhuǎn)錄翻譯√由題圖可知,在同一個(gè)T-DNA中OsGLO1啟動子啟動轉(zhuǎn)錄的方向與其他三個(gè)基因的不同,說明四個(gè)基因轉(zhuǎn)錄時(shí)并不都以DNA的同一條單鏈為模板;卡那霉素抗性基因不在T-DNA中,而潮霉素抗性基因在T-DNA中,應(yīng)選用含潮霉素的培養(yǎng)基篩選被農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化的水稻細(xì)胞;由題意知,利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法轉(zhuǎn)化水稻,可使目的基因插入水稻細(xì)胞中染色體的DNA上,所以與葉綠體轉(zhuǎn)運(yùn)肽基因連接的四個(gè)基因,在水稻細(xì)胞核內(nèi)進(jìn)行轉(zhuǎn)錄,在核糖體中進(jìn)行翻譯。解析4.(多選)(2024·湖南衡陽月考)戊型肝炎病毒是一種RNA病毒,ORF2基因編碼的結(jié)構(gòu)蛋白(pORF2)位于病毒表面,構(gòu)成病毒的衣殼。我國科研人員利用基因工程技術(shù),在大腸桿菌中表達(dá)pORF2,制備戊型肝炎疫苗,過程如圖。下列關(guān)于該疫苗的敘述正確的是(

)A.過程①需要的酶是RNA聚合酶,原料是A、U、G、CB.重組基因表達(dá)載體上的啟動子需來源于大腸桿菌C.過程⑤需要用聚乙二醇處理大腸桿菌使其處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)D.過程⑥大量制備pORF2蛋白前應(yīng)做相應(yīng)的檢測與鑒定√√戊型肝炎病毒是一種RNA病毒,過程①是以病毒RNA為模板合成DNA,獲取目的基因的過程,需要的酶是逆轉(zhuǎn)錄酶,原料是四種脫氧核苷酸;啟動子是一段有特殊序列結(jié)構(gòu)的DNA片段,其作用是供RNA聚合酶的識別結(jié)合以驅(qū)動目的基因的轉(zhuǎn)錄,啟動子具有物種或組織特異性,構(gòu)建在大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)特異表達(dá)pORF2的載體時(shí),需要選擇大腸桿菌細(xì)胞的啟動子,而不能選擇其他物種的啟動子;將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞的方法是Ca2+處理法,需要用Ca2+處理大腸桿菌,使其處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)。解析1.DNA的粗提取與鑒定(1)基本原理。考點(diǎn)三DNA的粗提取與鑒定、DNA片段的擴(kuò)增及電泳鑒定不溶于2mol/L二苯胺(2)操作流程。95％沸水提醒加入酒精和用玻璃棒攪拌時(shí),動作要輕緩,以免加劇DNA分子的斷裂,導(dǎo)致DNA分子不能形成絮狀沉淀。2.DNA片段的擴(kuò)增及電泳鑒定(1)實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。①PCR原理:利用了

原理。②電泳:DNA分子具有可解離的基團(tuán),在一定的pH下,這些基團(tuán)可以帶上正電荷或負(fù)電荷。在電場的作用下,這些帶電分子會向著與它所帶電荷

的電極移動,這個(gè)過程就是電泳。③PCR的產(chǎn)物一般通過瓊脂糖凝膠電泳來鑒定。在凝膠中DNA分子的遷移速率與凝膠的濃度、DNA分子的

等有關(guān)。DNA的熱變性相反大小和構(gòu)象(2)PCR實(shí)驗(yàn)操作步驟。微量移液器(3)DNA的電泳鑒定:凝膠中的DNA分子通過染色,可以在波長為

的紫外燈下被檢測出來。底部300nm[正誤辨析]1.用同樣方法從等體積兔血和雞血中提取的DNA量相近。(

)提示:哺乳動物(如兔)成熟的紅細(xì)胞無細(xì)胞核,細(xì)胞內(nèi)基本不含DNA。2.DNA析出過程中,攪拌操作要輕柔以防DNA斷裂。(

)3.在凝膠中DNA分子的遷移速率只與DNA分子的大小有關(guān)。(

)提示:在凝膠中DNA分子的遷移速率與凝膠的濃度、DNA分子的大小和構(gòu)象等有關(guān)?！痢獭羀教材微點(diǎn)思考]1.(選擇性必修3P74“探究·實(shí)踐”拓展)過濾研磨液用紗布不用濾紙的原因是什么?提示:DNA會吸附在濾紙上,影響提取DNA的量。2.(選擇性必修3P85“探究·實(shí)踐”拓展)如果電泳鑒定結(jié)果未出現(xiàn)擴(kuò)增條帶,可能是哪些原因造成的?提示:未出現(xiàn)擴(kuò)增條帶可能的原因有模板DNA含有雜蛋白或TaqDNA聚合酶的抑制劑;TaqDNA聚合酶失活;引物出現(xiàn)質(zhì)量問題,濃度不合適;Mg2+濃度過低;變性溫度低,變性時(shí)間短等。1.(2022·山東卷)關(guān)于“DNA的粗提取與鑒定”實(shí)驗(yàn),下列說法錯(cuò)誤的是(

)A.過濾液沉淀過程在4℃冰箱中進(jìn)行是為了防止DNA降解B.離心研磨液是為了加速DNA的沉淀C.在一定溫度下,DNA遇二苯胺試劑呈現(xiàn)藍(lán)色D.粗提取的DNA中可能含有蛋白質(zhì)√DNA的粗提取與鑒定低溫時(shí)DNA酶的活性較低,過濾液沉淀過程在4℃冰箱中進(jìn)行是為了防止DNA降解;離心研磨液是為了使細(xì)胞碎片沉淀;在沸水浴條件下,DNA遇二苯胺試劑呈現(xiàn)藍(lán)色;細(xì)胞中的某些蛋白質(zhì)可以溶于酒精,但可能有的蛋白質(zhì)不溶于酒精,在95%的冷酒精中與DNA一塊兒析出,故粗提取的DNA中可能含有蛋白質(zhì)。解析2.(2023·山西晉城月考)如圖是“DNA的粗提取與鑒定”實(shí)驗(yàn)中的兩個(gè)操作步驟示意圖。