DB32T 4840-2024大球蓋菇菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

ICS65.020.20江蘇省地方標(biāo)準(zhǔn)DB32/T4840—2024大球蓋菇菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程TechnicalregulationsforStrophariarugosoannulataspawnproduction2024-09-12發(fā)布2024-10-12實(shí)施江蘇省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)發(fā)出布版Ⅰ本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由江蘇省園藝標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)提出、歸口并組織實(shí)施。本文件起草單位：江蘇江南生物科技有限公司、江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院、丹陽(yáng)市園藝推廣站、鎮(zhèn)江市標(biāo)準(zhǔn)化研究中心。1大球蓋菇菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程本文件規(guī)定了大球蓋菇（Strophariarugosoannulata）菌種生產(chǎn)的基本要求，母種，原種，栽培種，記錄與留樣的要求。本文件適用于大球蓋菇菌種生產(chǎn)。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB4806.7食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品接觸用塑料材料及制品GB5749生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)NY/T528食用菌菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程3術(shù)語(yǔ)和定義本文件沒(méi)有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。4基本要求技術(shù)人員、場(chǎng)地選擇、廠房設(shè)置和布局、設(shè)備設(shè)施、使用品種和種源應(yīng)符合NY/T528的規(guī)定。宜使用18mm×180mm或20mm×200mm玻璃試管。5.2培養(yǎng)基馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA馬鈴薯200g（浸出汁葡萄糖20g，瓊脂20g，水1000mL，pH5.3配置滅菌培養(yǎng)基分裝量不超過(guò)試管容量1/4，121℃滅菌30min。滅菌結(jié)束后溫度降至65℃±5℃時(shí)，在潔凈的環(huán)境中擺斜面，斜面長(zhǎng)度不超過(guò)試管長(zhǎng)度的2/3。斜面凝固后，按NY/T528的規(guī)定進(jìn)行試管滅菌效果檢驗(yàn)。25.5接種培養(yǎng)按NY/T528的規(guī)定執(zhí)行，做好標(biāo)記。接種后試管置于23℃~25℃下避光培養(yǎng)，待菌絲長(zhǎng)滿斜面6.1固體原種符合NY/T528的規(guī)定，塑料制品符合GB4806.7的規(guī)定。6.1.2培養(yǎng)料宜使用但不限于以下配方：a）谷粒98%，碳酸鈣2%，含水量60%~62%；b）木屑78%，麩皮20%，碳酸鈣2%，含水量60%~626.1.3配制滅菌按NY/T528的規(guī)定配制后分裝入原種瓶（袋121℃~123℃滅菌2h。6.1.4接種培養(yǎng)料溫冷卻至26℃以下，按NY/T528的規(guī)定接種，做好標(biāo)記。接種后置于培養(yǎng)室，23℃~25℃遮光培養(yǎng)，空氣相對(duì)濕度保持在55%~65%，二氧化碳濃度低于0.5%，當(dāng)菌絲長(zhǎng)滿瓶（袋）時(shí)結(jié)束培養(yǎng)。培養(yǎng)期間按NY/T528要求定期檢查。6.1.5質(zhì)量檢驗(yàn)培養(yǎng)完成后對(duì)菌種進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn)，檢查要求應(yīng)符合附錄A的規(guī)定。6.2液體原種6.2.1搖瓶液體原種6.2.1.1培養(yǎng)基6.2.1.2配制滅菌馬鈴薯和稻殼煮汁過(guò)濾后，加入葡萄糖、磷酸二氫鉀、硫酸鎂，加水至1000mL攪拌均勻，裝入搖瓶，裝液量不超過(guò)搖瓶容量的2/5。裝好的搖瓶放入高壓滅菌鍋內(nèi)滅菌，121℃下滅菌30min。6.2.1.3接種培養(yǎng)培養(yǎng)基溫度降至26℃以下，嚴(yán)格按照無(wú)菌操作程序，將母種塊切割成3mm~5mm顆粒，接入待接種搖瓶培養(yǎng)基內(nèi)，每100mL液體培養(yǎng)基接種10粒。接種后在25℃環(huán)境下靜置培養(yǎng)2d，待接入的菌種塊萌發(fā)出白色菌絲體后，置于振蕩培養(yǎng)箱，25℃下150r/min振蕩培養(yǎng)5d~7d。36.2.1.4質(zhì)量檢驗(yàn)培養(yǎng)完成后對(duì)菌種進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn)，檢驗(yàn)要求應(yīng)符合附錄B的規(guī)定。6.2.2發(fā)酵罐液體原種6.2.2.1培養(yǎng)基6.2.2.2配制滅菌原料攪拌均勻，不應(yīng)有結(jié)塊，轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)，裝液量不超過(guò)罐體容量的70%，加入0.03%消泡劑。121℃滅菌90min。生產(chǎn)用水應(yīng)符合GB5749的規(guī)定。6.2.2.3接種培養(yǎng)培養(yǎng)基溫度降至26℃以下，維持罐體壓力在0.03MPa，快速接入搖瓶菌種。接種量為罐內(nèi)培養(yǎng)基總體積的0.1%~0.2%。維持罐體壓力在0.03MPa，溫度25℃,攪拌狀態(tài)下培養(yǎng)7d~10d。6.2.2.4質(zhì)量檢驗(yàn)培養(yǎng)完成后對(duì)菌種進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn)，檢驗(yàn)要求應(yīng)符合附錄B的規(guī)定。7栽培種應(yīng)符合NY/T528的規(guī)定。宜使用17cm×35cm×0.005cm規(guī)格的聚丙烯塑料袋，塑料制品符合GB4806.7的規(guī)定。7.2培養(yǎng)料宜使用但不限于以下配方：7.3配制滅菌按NY/T528的規(guī)定配制后分裝入菌種袋，121℃~123℃滅菌2h。7.4接種培養(yǎng)滅菌結(jié)束后在冷卻室冷卻至25℃以下。固體原種接種按NY/T528的規(guī)定執(zhí)行。發(fā)酵罐液體原種用液體菌種接種器接種，每袋接種量20mL~30mL，封口并貼好標(biāo)簽。接種后置于培養(yǎng)室，23℃~25℃遮光培養(yǎng)，空氣相對(duì)濕度保持在55%~65%，二氧化碳濃度低于0.5%，待菌絲長(zhǎng)滿菌袋。培養(yǎng)期間按NY/T528的規(guī)定定期檢查。7.5質(zhì)量檢驗(yàn)培養(yǎng)完成后對(duì)菌種進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn)，檢驗(yàn)要求應(yīng)符合附錄A的規(guī)定。4完成培養(yǎng)后，菌種應(yīng)在4℃冷庫(kù)內(nèi)儲(chǔ)藏，時(shí)間不應(yīng)超過(guò)30d。8記錄與留樣各級(jí)菌種按NY/T528的規(guī)定建立生產(chǎn)記錄并留樣，檔案保留2年以上。5DB32/T4840—2024（規(guī)范性）固體菌種質(zhì)量要求固體菌種質(zhì)量要求見(jiàn)表A.1。表A.1固體菌種質(zhì)量要求項(xiàng)目指標(biāo)檢驗(yàn)方法容器外觀菌袋干凈，無(wú)破損。塞子干燥，無(wú)破損肉眼觀察菌絲生長(zhǎng)量菌絲潔白，長(zhǎng)滿培養(yǎng)料肉眼觀察氣味無(wú)異味鼻嗅菌袋外觀培養(yǎng)基貼壁，不收縮肉眼觀察無(wú)拮抗線、高溫線無(wú)菌皮、子實(shí)體原基微生物學(xué)檢測(cè)6（規(guī)