DB63∕T 2291-2024 青稞育成品種DNA指紋圖譜鑒別規(guī)范

DB63青海省市場監(jiān)督管理局發(fā)布I本文件起草單位：中國科學(xué)院西北高原生物研究所、青海省農(nóng)作物種子站、海南州農(nóng)牧業(yè)綜合服包天忠、李俊仁、李春橋、王健斌、趙璨、尤1標準名稱本文件規(guī)定了青稞（Hordeumvulgarevar.nudumHook.f.）育成品種DNA指紋圖譜采集的術(shù)語和定本文件適用于青稞育成品種DNA指紋圖譜的采集GB/T3543.2農(nóng)作物種子檢驗規(guī)程GB/T3543.4農(nóng)作物種子檢驗規(guī)程GB4404.1糧食作物種子第1部GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和GB/T30988多酚類植物基因組DNA提取純化GB/T34265Sanger法通過DNA檢測技術(shù)，獲得由多個位點上的等位基因組成的長度不等4縮略語DNA：脫氧核糖核苷酸（DeoxyribonucleicSNP：單核苷酸多態(tài)性（SingleNucleotidePoly2PCR：聚合酶鏈式反應(yīng)（PolymeraseChainReac見附錄A。超純水符合GB/T6682的要種子質(zhì)量應(yīng)符合GB4404.1的要求。按照GB/按照GB/T3543.4的規(guī)定進行發(fā)芽，發(fā)芽的籽粒數(shù)需按照GB/T30988中的DNA純度、濃度測試將附錄C中引物稀釋至10μmol/L，DNA濃度稀釋至100ng/μl~200ng/μl。反應(yīng)體系為25μl,包含物0.5μl，TaqDNA聚合酶0.2μl，超純3參照附錄D中青稞育成品種的DNA圖譜，判斷所鑒定的品種是否為4A.1主要儀器設(shè)備器（2.5μl、10μl、100μl、1000μl）、微波爐、量筒、電泳裝置、電泳儀、凝膠成像系統(tǒng)或紫外A.2主要試劑乙二胺四乙酸二納、三羥甲基氨基甲烷、鹽酸、氫氧化鈉、氯化鈉、十六烷基三甲基溴化銨、β-巰基乙醇、Tris-飽和酚、三氯甲烷、異丙醇、無水乙醇、10×PCR反應(yīng)緩沖液、4種脫氧核糖核苷酸、TaqDNA聚合酶、瓊脂糖、溴酚藍、硼酸、二甲苯青、甘油、二甲基腈藍FF、溴化乙錠。5溶液配制B.1.10.5mol/L乙二胺四乙酸二納鹽（EDTApH8.0）溶液定容至50ml。在103.4kPa（121℃)條件下滅B.1.21mol/L三羥甲基氨基甲烷鹽酸（Tris-HClpH8稱取6.06g的Tris，加40mL的超純水，充分溶解。用1.8mL～2.2mL的濃HCl（36%~38%）準確調(diào)節(jié)pH至8.0，定容至50ml。滅菌溫度和時間同B.1.1，（見B.1.2），4mLEDTA溶液（pH8.0）（見B.1.1），加超純水充分溶解后定容至400mL。滅菌溫度B.1.1），混合均勻，定容至100ml，分裝后滅菌。滅菌溫度和時間同），稱取EDTA8.7672g，二甲苯腈藍FF0.5g，溴酚藍0.5g，加入360ml甘油，調(diào)節(jié)PH至7.0，再用在100ml超純水中加入1g溴化乙錠，磁力攪拌數(shù)小時確保其完全溶解，棕色瓶室溫6F:GACACCGGCATGGACATR:ACCGCAAGGATAGTAGACR:CCTTTCACTATTATTGC7福8-4奠多吉1號門農(nóng)1號東青1號同德系選8號互青2號北青1號北青4號北青5號北青6號北青7號北青3號昆侖1號昆侖2號昆侖3號昆侖8號昆侖10號昆侖12號昆侖164S502產(chǎn)監(jiān)88繁34-202產(chǎn)監(jiān)88繁3102產(chǎn)監(jiān)91-4102品比17區(qū)91-88-5-4-102品比7區(qū)92-322002年93H2-28-202產(chǎn)監(jiān)98006(蘭)C02品比1區(qū)911-71喜馬拉雅4號康青1號康青3號康青6號甘