實驗一、油鏡的使用和細(xì)菌形態(tài)觀察及革蘭氏染色

實驗一、油鏡的使用和細(xì)菌形態(tài)觀察及革蘭氏染色微生物學(xué)實驗指導(dǎo)老師：實驗要求堅持課前預(yù)習(xí)不遲到，不早退，更不能無故缺課；嚴(yán)格按正確規(guī)范實驗方法進(jìn)行實驗，作好記錄；保持實驗室整潔注意安全事實求是地、獨(dú)立地寫好實驗報告實驗報告姓名、班級和學(xué)號實驗題目實驗原理（略寫）實驗操作（（略寫）實驗結(jié)果畫圖文字描述分析和討論思考題實驗一、顯微鏡油鏡的使用和細(xì)菌形態(tài)的觀察、細(xì)菌的革蘭氏染色

教學(xué)目標(biāo)或要求：鞏固和掌握顯微鏡油鏡的正確使用；學(xué)習(xí)細(xì)菌制片和單染色技術(shù)；對人體微生物染色檢查，初步建立無菌操作的概念。學(xué)習(xí)細(xì)菌的革蘭氏染色方法

顯微鏡油鏡的使用油鏡頭的識別和重要參數(shù)油鏡物鏡的工作原理油鏡的使用方法和注意事項油鏡頭的識別和重要參數(shù)放大倍數(shù)數(shù)值孔徑工作距離油鏡物鏡的工作原理使用油質(zhì)作為玻片與接物鏡之間的介質(zhì)——油浸系可以增加顯微鏡的放大倍數(shù)可以增加視野的照明度可以增大顯微鏡的分辨率油鏡的使用方法和注意事項1、用低倍鏡對光。最大光圈2、低倍鏡觀察（尋找觀察目標(biāo)）。適當(dāng)縮小光圈3、高倍鏡觀察（選取理想的觀察目標(biāo)）。4、油鏡觀察：高倍鏡觀察后-上升鏡筒-油鏡轉(zhuǎn)至正下方，在載玻片上加一小滴油-小心地下降鏡筒使鏡頭浸在油里-用粗螺旋將鏡筒緩慢上升，尋找目標(biāo)（物象）用細(xì)螺旋調(diào)節(jié)，使物象清晰-觀察記錄。最大光圈5、觀察完畢。上升鏡筒，轉(zhuǎn)動物鏡轉(zhuǎn)換器，使油鏡物鏡偏位。用干凈擦鏡紙擦去鏡頭上的油跡，再取一張擦鏡紙醮上二甲苯擦去鏡頭上殘留的香柏油，最后再用一張干凈的擦鏡紙擦去殘留在鏡頭上的二甲苯。6、將顯微鏡各部分還原，放回箱中。細(xì)菌的制片與染色單染色復(fù)染色染料①堿性染料（basicdye）—帶正電染料。其陽離子部分為發(fā)色基團(tuán)，可與細(xì)胞中帶負(fù)電的組分結(jié)合。如結(jié)晶紫沙黃,甲基藍(lán),堿性復(fù)紅等。②酸性染料（Aciddye）—帶負(fù)電染料。其陰離子部分為發(fā)色基團(tuán)，可與細(xì)胞中帶正電的組分結(jié)合。如剛果紅、酸性復(fù)紅等。③脂溶性染料—如Sudanblack。

多數(shù)染料都是中性有機(jī)鹽。據(jù)著色基的不同可分為以下類型：涂片干燥固定染色1~2min水洗、吸干鏡檢細(xì)菌的單染色步驟：結(jié)果:

陽性菌——紫色

陰性菌——紅色結(jié)晶紫初染碘液媒染乙醇脫色番紅復(fù)染涂片固定由丹麥醫(yī)生HansChristianGram于1884年創(chuàng)立。革蘭氏染色法（GramStain）革蘭氏染色法操作步驟涂片——干燥——固定結(jié)晶紫1min——水洗I-KI1min——水洗95%乙醇脫色約10~20s——水洗沙黃或石炭酸復(fù)紅1min——水洗干燥——鏡檢革蘭氏染色注意事項

p45實驗內(nèi)容1、用美藍(lán)對蘇云金芽孢桿菌進(jìn)行單染色，在顯微鏡油鏡下觀察形態(tài)；2、用混合涂片的方法對大腸桿菌、蘇云金芽孢桿菌進(jìn)行革蘭氏染色3、自選材料：用牙簽挑取牙垢觀察實驗報告繪出革蘭氏染色后大腸桿菌和