無菌檢查法課件

無菌檢查法無菌檢查法2無菌檢查法無菌檢查的定義無菌檢查的環(huán)境無菌檢查的設(shè)備無菌檢查的人員無菌檢查的外部供應(yīng)無菌檢查的樣品管理無菌檢查的具體步驟無菌檢查的結(jié)果保證3無菌檢查法無菌檢查的定義中國(guó)藥典2005年版對(duì)無菌檢查的定義是：無菌檢查法系用于檢查藥典要求無菌的藥品、醫(yī)療器具、原料、輔料及其他品種是否無菌的一種方法。由于無菌是一個(gè)相對(duì)的概念，因此，對(duì)無菌檢查的結(jié)果應(yīng)該有一個(gè)正確的認(rèn)識(shí)－即產(chǎn)品通過無菌檢查僅僅意味著在該檢驗(yàn)條件下，供試品未發(fā)現(xiàn)有微生物污染，并不表示所有的產(chǎn)品都是無菌的。反之，當(dāng)供試品中檢出微生物污染，則可以認(rèn)為批產(chǎn)品的微生物污染風(fēng)險(xiǎn)相當(dāng)高。4無菌檢查法無菌檢查的環(huán)境中國(guó)藥典2005年版對(duì)無菌檢查環(huán)境的規(guī)定主要有：無菌檢查應(yīng)該在潔凈度為10000級(jí)，局部100級(jí)的單向流空氣區(qū)域內(nèi)或隔離系統(tǒng)內(nèi)進(jìn)行無菌檢查的全過程，應(yīng)該遵守?zé)o菌操作，避免微生物污染，檢查的環(huán)境應(yīng)該能夠提供這種保障無菌檢查的單向流空氣區(qū)域、工作臺(tái)面和環(huán)境應(yīng)該定期驗(yàn)證隔離系統(tǒng)應(yīng)該按相關(guān)技術(shù)要求進(jìn)行驗(yàn)證，內(nèi)部潔凈度應(yīng)該符合無菌檢查的要求5無菌檢查法潔凈室一般應(yīng)該具備核心操作區(qū)、緩沖區(qū)、更衣區(qū)、陽(yáng)性對(duì)照操作區(qū)等區(qū)域?qū)嶒?yàn)室應(yīng)該根據(jù)潔凈室的特點(diǎn)，制訂并執(zhí)行潔凈室的使用、維護(hù)、驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程為避免交叉污染，無菌檢查的潔凈室宜單獨(dú)設(shè)置，單獨(dú)使用潔凈室的使用在實(shí)驗(yàn)開始之前1小時(shí)啟動(dòng)風(fēng)機(jī)系統(tǒng)（空調(diào)系統(tǒng)），并開啟空氣消毒裝置，消毒至少半小時(shí)后關(guān)閉觀察并確保潔凈室的壓差物品經(jīng)物流通道進(jìn)入潔凈室人員正確著裝后經(jīng)人流通道進(jìn)入潔凈室使用完畢，應(yīng)用消毒液清潔工作臺(tái)面。實(shí)驗(yàn)人員在更衣室換下無菌工作衣后出潔凈工作室。開啟空氣消毒裝置，消毒至少半小時(shí)后，關(guān)閉潔凈工作室的控制開關(guān)。6無菌檢查法潔凈室的維護(hù)系統(tǒng)維護(hù)過濾器的清洗更換：每月清洗凈化空調(diào)系統(tǒng)的新風(fēng)口和初效空氣過濾器；每季度更換凈化空調(diào)系統(tǒng)的中效過濾器；每年更換單向流區(qū)域的高效空氣過濾器，并視潔凈室驗(yàn)證結(jié)果，選擇更換其他區(qū)域內(nèi)的高效空氣過濾器。風(fēng)機(jī)系統(tǒng)的維護(hù)：每半年檢查送風(fēng)風(fēng)機(jī)和排風(fēng)風(fēng)機(jī)的各項(xiàng)指標(biāo)，視情況更換風(fēng)機(jī)渦輪軸承?？照{(diào)系統(tǒng)的維護(hù)：每年夏、冬兩季之初，對(duì)空調(diào)機(jī)組進(jìn)行維護(hù)，重點(diǎn)是壓縮機(jī)保養(yǎng)、制冷劑補(bǔ)充和遠(yuǎn)程控制系統(tǒng)驗(yàn)證。潔凈室內(nèi)壓力梯度的維護(hù)：每半年調(diào)試潔凈室內(nèi)各區(qū)域間的壓力梯度，確保正壓房間對(duì)相鄰房間有5Pa以上的正壓，負(fù)壓房間對(duì)相鄰房間有5Pa以上的負(fù)壓。7無菌檢查法清潔維護(hù)潔凈室的清潔維護(hù)分為日常維護(hù)、定期維護(hù)和不符合時(shí)的維護(hù)。日常維護(hù)由每次實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)行，維護(hù)的范圍為進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的潔凈工作室和輔助潔凈區(qū)，維護(hù)的頻率為每次實(shí)驗(yàn)后。定期維護(hù)由實(shí)驗(yàn)室指定專人進(jìn)行，維護(hù)的范圍為所有潔凈工作室，維護(hù)的頻率為每二周一次。不符合時(shí)的維護(hù)由實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)行，維護(hù)的范圍為所有不符合的潔凈室，維護(hù)的時(shí)機(jī)為出現(xiàn)不符合時(shí)。潔凈室的驗(yàn)證驗(yàn)證的項(xiàng)目：潔凈度、微生物數(shù)、換氣次數(shù)、靜壓差、照度、溫度、相對(duì)濕度8無菌檢查法驗(yàn)證的技術(shù)要求9無菌檢查法驗(yàn)證的周期建議每半年一次，也可根據(jù)潔凈室的使用頻率適當(dāng)增加驗(yàn)證次數(shù)驗(yàn)證的方法潔凈度和微生物數(shù)：采用GB/T16292~16294-1996其他項(xiàng)目：參照J(rèn)GJ71－90驗(yàn)證不符合項(xiàng)的處理當(dāng)潔凈度、微生物數(shù)、換氣次數(shù)、靜壓差等指標(biāo)出現(xiàn)不符合時(shí)，應(yīng)停用潔凈室，對(duì)凈化系統(tǒng)進(jìn)行調(diào)整后，在重新驗(yàn)證，直至符合規(guī)定才能重新啟用潔凈室當(dāng)溫度、相對(duì)濕度和照度等指標(biāo)出現(xiàn)不符合時(shí)，潔凈室可不必停用，但應(yīng)及時(shí)修復(fù)空調(diào)系統(tǒng)（或更換照明裝置），使其符合規(guī)定10無菌檢查法隔離系統(tǒng)可以不必使用潔凈室，在普通實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，放置隔離系統(tǒng)就可以進(jìn)行無菌檢查實(shí)驗(yàn)隔離系統(tǒng)一般分為實(shí)驗(yàn)區(qū)域、傳遞區(qū)域等隔離系統(tǒng)通常采用臭氧或氣態(tài)過氧化氫等消毒劑進(jìn)行空間消毒隔離系統(tǒng)通常具有高效空氣過濾器，使操作區(qū)域符合局部100的要求隔離系統(tǒng)通常對(duì)外界呈正壓對(duì)隔離系統(tǒng)，驗(yàn)證的重點(diǎn)是消毒效果的持續(xù)保持能力11無菌檢查法無菌檢查的設(shè)備用于無菌檢查的主要儀器設(shè)備有：超凈工作臺(tái)、集菌儀、生物安全柜、高壓蒸汽滅菌器、電熱恒溫干燥箱、隔水式恒溫培養(yǎng)箱、生化培養(yǎng)箱、立式冷藏柜和生物顯微鏡等。上述儀器設(shè)備中，溫度設(shè)備應(yīng)進(jìn)行校準(zhǔn)或驗(yàn)證，超凈工作臺(tái)和生物安全柜應(yīng)進(jìn)行性能確認(rèn)。校準(zhǔn)、驗(yàn)證和確認(rèn)的頻次通常為每年。溫度設(shè)備的校準(zhǔn)：對(duì)培養(yǎng)箱、干熱滅菌器等溫度設(shè)備，應(yīng)進(jìn)行熱分布和熱均勻性等指標(biāo)的檢定；對(duì)濕熱滅菌設(shè)備應(yīng)檢定安全閥、壓力表等安全裝置，同時(shí)應(yīng)采用生物指示劑進(jìn)行有效性確認(rèn)。超凈工作臺(tái)和生物安全柜的性能確認(rèn)：應(yīng)進(jìn)行潔凈度和微生物數(shù)的測(cè)定，生物安全柜還應(yīng)該進(jìn)行氣流流型和壓差測(cè)定。12無菌檢查法無菌檢查的人員應(yīng)由具備微生物學(xué)專業(yè)背景，并經(jīng)過無菌操作培訓(xùn)的專業(yè)人員來從事無菌檢查從事無菌檢查的專業(yè)人員除了應(yīng)該具備專業(yè)技能外，還應(yīng)該具有高度的責(zé)任心和嚴(yán)謹(jǐn)細(xì)致的工作作風(fēng)上崗培訓(xùn)應(yīng)至少包括以下內(nèi)容無菌操作的基本技能無菌操作環(huán)境的使用、維護(hù)、驗(yàn)證技能儀器設(shè)備的使用和維護(hù)、驗(yàn)證技能培養(yǎng)基的配制和質(zhì)量控制技術(shù)不同產(chǎn)品無菌檢查的操作技能無菌檢查方法驗(yàn)證的技能無菌檢查結(jié)果判斷的能力無菌檢查異常結(jié)果的分析處理能力陽(yáng)性對(duì)照菌種的使用和生物安全知識(shí)13無菌檢查法無菌檢查的外部供應(yīng)外部服務(wù)的采購(gòu)試劑、試藥的采購(gòu)過濾系統(tǒng)的采購(gòu)其他物品的采購(gòu)14無菌檢查法外部服務(wù)的采購(gòu)電力供應(yīng)微生物檢驗(yàn)?zāi)芎妮^高，確保電力的持續(xù)供應(yīng)是保證實(shí)驗(yàn)正常開展和結(jié)果準(zhǔn)確可靠的重要保障。為此，至少需要對(duì)下列設(shè)備提供備用電力供應(yīng)。微生物檢驗(yàn)潔凈室（區(qū)），包括送風(fēng)風(fēng)機(jī)、排風(fēng)風(fēng)機(jī)、空調(diào)和潔凈室（區(qū)）內(nèi)部的照明和插座用電以及高壓蒸汽滅菌器。要求市電停止供應(yīng)后，能夠立即無縫切換至備用電力供應(yīng)，保證設(shè)施環(huán)境和被滅菌物品的滅菌質(zhì)量不被短暫停電破壞。冰箱、冷柜、培養(yǎng)箱和干燥箱。要求市電停止供應(yīng)后，應(yīng)在1小時(shí)內(nèi)提供備用電力供應(yīng)，避免持續(xù)斷電對(duì)溫度控制的較大影響。15無菌檢查法潔凈室系統(tǒng)維護(hù)前述潔凈室的系統(tǒng)維護(hù)應(yīng)采用合同約定的方式予以保障試劑、試藥的采購(gòu)培養(yǎng)基通常采用干粉培養(yǎng)基，應(yīng)確定主要供應(yīng)商和備用供應(yīng)商，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)儲(chǔ)備足夠數(shù)量的干粉培養(yǎng)基稀釋級(jí)、沖洗劑如采用外購(gòu)成品的方式，應(yīng)確定主要的供應(yīng)商，并建立采購(gòu)物品的驗(yàn)收制度過濾系統(tǒng)的采購(gòu)首選一次性使用全封閉過濾集菌器，應(yīng)確定主要供應(yīng)商和備用供應(yīng)商，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)儲(chǔ)備足夠數(shù)量的過濾器，并建立驗(yàn)收制度也可使用反復(fù)使用的過濾器，應(yīng)確定濾膜的主要供應(yīng)商，并對(duì)采購(gòu)的濾膜進(jìn)行驗(yàn)收16無菌檢查法其他物品的采購(gòu)無菌檢查還需要使用以下物品：試劑瓶及封口、消毒劑、脫脂棉花、消毒劑缸、無菌衣、一次性手套、口罩、剪刀、鑷子、止血鉗、酒精燈、一次性注射器、環(huán)境微生物采樣器材和純化水。試劑瓶及封口主要用于配制盛裝培養(yǎng)基，其徑高比應(yīng)符合規(guī)定。封口可以采用橡膠塞加鋁蓋軋口的方式，也可以采用紗布包裹的方式。無菌衣采用可重復(fù)使用的無紡布面料的產(chǎn)品。每位檢驗(yàn)人員應(yīng)確保有1套新的無菌衣作為貯備?？谡帧⑹痔拙鶠橐淮涡杂闷?，應(yīng)確保有足夠的數(shù)量。消毒劑、脫脂棉花、消毒劑缸主要用于配制盛裝消毒劑，應(yīng)確保有足夠的數(shù)量。常用的消毒劑有75％乙醇、1％苯扎溴銨溶液、20％聚維酮碘溶液、3％碘酒溶液和5％石炭酸溶液。環(huán)境微生物采樣器材主要包括表面接觸碟、拭子和TSA平板，應(yīng)貯備足夠數(shù)量的上述產(chǎn)品，并確保處于有效期內(nèi)。純化水用于培養(yǎng)基和消毒劑配制，應(yīng)保證有足夠的數(shù)量。其他物品均為實(shí)驗(yàn)室常用器材，應(yīng)確保有足夠的數(shù)量用于無菌檢查。17無菌檢查法無菌檢查的樣品管理檢驗(yàn)數(shù)量的確定抽樣樣品的貯存檢樣的確定檢畢樣品的處置18無菌檢查法檢驗(yàn)數(shù)量的確定藥品生產(chǎn)企業(yè)在進(jìn)行產(chǎn)品的放行檢驗(yàn)時(shí)，均應(yīng)根據(jù)無菌檢查法中表1的規(guī)定確定檢驗(yàn)數(shù)量；藥品檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)在進(jìn)行監(jiān)督檢驗(yàn)、委托檢驗(yàn)時(shí)，應(yīng)根據(jù)無菌檢查法中表2、表3第3列的規(guī)定確定檢驗(yàn)數(shù)量。需要特別指出的是：所確定的檢驗(yàn)數(shù)量是最少量，意味著不能少于該數(shù)量，但允許多于該數(shù)量表1的附注應(yīng)正確理解。如：批產(chǎn)量大于500個(gè)的注射劑，按規(guī)定每種培養(yǎng)基的最少檢驗(yàn)數(shù)量為20個(gè)包裝，同時(shí)附注指出“若每個(gè)容器中的裝量不足接種兩種培養(yǎng)基，那么表中的檢驗(yàn)數(shù)量應(yīng)加倍”，表明當(dāng)這20個(gè)包裝中的內(nèi)容物足夠分別接種兩種培養(yǎng)基時(shí)，最少檢驗(yàn)數(shù)量就是20個(gè)包裝。19無菌檢查法如何確定每個(gè)容器中的裝量是否足夠接種兩種培養(yǎng)基呢？請(qǐng)看表2和表3的第2列。如：供試品為注射液，裝量為1ml，按表2第2列的規(guī)定，每支樣品接種每管培養(yǎng)基的最少樣品量為全量，則對(duì)每支樣品而言，其裝量是不夠接種兩種培養(yǎng)基的，因此，對(duì)該規(guī)格的產(chǎn)品，其出廠檢驗(yàn)最少檢驗(yàn)數(shù)量應(yīng)為40支。以上確定的檢驗(yàn)數(shù)量均不包括陽(yáng)性對(duì)照實(shí)驗(yàn)的量，對(duì)于采用薄膜過濾法的實(shí)驗(yàn)而言，應(yīng)再增加1/2的量，上例中，最終的一次檢驗(yàn)用量應(yīng)為60支；對(duì)于采用直接接種法的實(shí)驗(yàn)而言，應(yīng)再增加1支，上例中，最終的一次檢驗(yàn)用量應(yīng)為41支。20無菌檢查法抽樣樣品的代表性越強(qiáng)，檢驗(yàn)結(jié)果的可信度就越高抽樣數(shù)量：檢驗(yàn)數(shù)量的3倍藥品生產(chǎn)企業(yè)的抽樣生產(chǎn)線抽樣時(shí)：不同生產(chǎn)時(shí)段的產(chǎn)品均應(yīng)涉及倉(cāng)庫(kù)抽樣時(shí)：不同包裝箱的產(chǎn)品均應(yīng)涉及藥品檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)的抽樣一般監(jiān)督檢驗(yàn)的樣品：盡可能涉及多個(gè)包裝箱問題產(chǎn)品：對(duì)被控制的所有產(chǎn)品均應(yīng)開箱檢查，通過外觀檢查盡可能發(fā)現(xiàn)有外觀異常的樣品，抽取作為檢樣抽樣的標(biāo)識(shí)和記錄對(duì)于來自不同時(shí)段、部位的樣品應(yīng)有明顯的標(biāo)識(shí)以示區(qū)別所有的抽樣均應(yīng)有詳細(xì)的記錄，主要記錄被抽樣品在抽樣當(dāng)時(shí)所處的狀態(tài)對(duì)于問題樣品的抽樣過程應(yīng)有視頻記錄21無菌檢查法關(guān)于無菌采樣對(duì)于無菌原料藥的一種抽樣方式應(yīng)有專用的場(chǎng)所，并在百級(jí)層流保護(hù)下進(jìn)行應(yīng)由具備無菌操作技術(shù)的專業(yè)人員進(jìn)行應(yīng)制訂無菌采樣的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，規(guī)定抽樣環(huán)境確認(rèn)、人員進(jìn)入、物品進(jìn)入、開包裝、取樣、混樣、分裝、記錄和樣品標(biāo)識(shí)等技術(shù)環(huán)節(jié)如：抗生素?zé)o菌原料藥的無菌采樣①確定檢驗(yàn)數(shù)量：6個(gè)容器，另加3個(gè)容器作為陽(yáng)性對(duì)照②確定檢驗(yàn)量：每個(gè)容器至少取1g③確定是否需要分裝：根據(jù)產(chǎn)品的溶解性能而定，如產(chǎn)品易溶于水，則不必分裝，否則應(yīng)分裝④步驟：無菌打開每個(gè)容器，從中取出至少1g，置無菌混樣容器內(nèi)；混勻；根據(jù)需要，分裝至適宜的無菌玻瓶中，鋁蓋軋口。22無菌檢查法樣品的貯存所有抽取的樣品應(yīng)盡快傳遞至實(shí)驗(yàn)室，在開檢之前，應(yīng)根據(jù)樣品的貯藏要求，置適宜的場(chǎng)所貯存。

如：注射用頭孢哌酮鈉標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定：應(yīng)置冷處保存；則在開檢之前樣品應(yīng)放置在不高于10℃的環(huán)境中藥品檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)對(duì)問題樣品在開檢之前除了在技術(shù)上保證樣品的貯存條件符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定外，還應(yīng)該從證據(jù)保全的角度確保樣品的安全23無菌檢查法檢樣的確定普通樣品：根據(jù)隨機(jī)的原則，從抽取的樣品中，確定一次檢驗(yàn)用量作為檢樣問題樣品：應(yīng)優(yōu)先使用外觀異常的樣品作為檢樣檢畢樣品的處置已破壞的檢畢樣品應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)室廢棄物處置的規(guī)程處理對(duì)于問題樣品，應(yīng)根據(jù)上級(jí)部門的要求，保存所有檢畢樣品，并確保其安全24無菌檢查法無菌檢查的具體步驟實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備人流、物流程序消毒劑配制環(huán)境微生物的采集檢驗(yàn)方法的確認(rèn)檢驗(yàn)過程結(jié)果觀察與判斷記錄25無菌檢查法實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備潔凈室的啟用在檢驗(yàn)開始前，應(yīng)確保：a.潔凈室凈化空調(diào)系統(tǒng)持續(xù)運(yùn)轉(zhuǎn)不少于1小時(shí)，并能夠持續(xù)工作；b.潔凈室持續(xù)開啟紫外光燈不少于半小時(shí)；c.潔凈室中有壓差要求的房間之間的壓差達(dá)到規(guī)定，并能夠持續(xù)保持。d.潔凈室的更衣室內(nèi)有新鮮制備的用于消毒雙手的消毒劑。在確認(rèn)以上狀態(tài)要求得到滿足的情況下，可以啟用潔凈室。26無菌檢查法培養(yǎng)基的準(zhǔn)備無菌檢查至少需要準(zhǔn)備以下培養(yǎng)基：液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基、改良馬丁培養(yǎng)基、營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基等。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立培養(yǎng)基配制的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程并按規(guī)程配制上述培養(yǎng)基。液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基每瓶分裝略大于200ml。改良馬丁培養(yǎng)基每瓶分裝略大于100ml。營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基應(yīng)根據(jù)需要制備平板和斜面，主要用于環(huán)境微生物樣本的分離鑒定。營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基每支分裝10ml，用于菌種鑒定。27無菌檢查法以上培養(yǎng)基按驗(yàn)證合格的滅菌程序滅菌。滅菌程序一般可選擇121℃20分鐘。在滅菌時(shí)應(yīng)在滅菌器的上中下三層中分別放置留點(diǎn)溫度計(jì)，并粘貼滅菌指示條。滅菌結(jié)束后，應(yīng)立即將所有培養(yǎng)基從滅菌器內(nèi)取出，室溫放置，自然冷卻。營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面應(yīng)趁熱放置，平板應(yīng)在潔凈室內(nèi)澆注。無菌檢查用培養(yǎng)基冷卻后，應(yīng)觀察氧化層的高度，符合要求的，可用于無菌檢查。28無菌檢查法培養(yǎng)基的質(zhì)量檢查無菌檢查：取上述滅菌好的培養(yǎng)基各5個(gè)包裝，分別置規(guī)定溫度培養(yǎng)14天，培養(yǎng)結(jié)束后觀察是否有菌生長(zhǎng)。該檢查可以與樣品的檢驗(yàn)同步進(jìn)行，其結(jié)果作為樣品檢驗(yàn)結(jié)果判斷的一個(gè)重要參照指標(biāo)。培養(yǎng)基靈敏度檢查：菌種：金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、生孢梭菌、白色念珠菌和黑曲霉菌液制備：取上述菌種，分別制備濃菌液，稀釋至100cfu以下，用于接種培養(yǎng)基。接種：硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基每管12ml，分別接種金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌和生孢梭菌，每種菌各兩管培養(yǎng)基，另取1管作為空白對(duì)照；改良馬丁培養(yǎng)基每管9ml，分別接種白色念珠菌和黑曲霉，每種菌各兩管培養(yǎng)基，另取1管作為空白對(duì)照。分別置規(guī)定溫度培養(yǎng)5天，逐日觀察結(jié)果。頻次：干粉培養(yǎng)基購(gòu)入后，首次使用時(shí)，應(yīng)進(jìn)行靈敏度檢查，以后當(dāng)更換培養(yǎng)基批號(hào)、培養(yǎng)基配制方法和滅菌程序發(fā)生變化時(shí)需要重新做靈敏度檢查。29無菌檢查法實(shí)驗(yàn)器材、消耗品的準(zhǔn)備無菌檢查至少需要使用以下器材和消耗品：a.無菌衣、平皿、消毒劑配制缸、脫脂棉花球、純化水、剪刀、鑷子、止血鉗b.一次性使用集菌過濾器、一次性注射器、手套、口罩、環(huán)境微生物采集器材c.稀釋劑、沖洗劑d.消毒劑、燈用酒精30無菌檢查法其中a項(xiàng)在使用前應(yīng)經(jīng)過滅菌處理。滅菌方法根據(jù)器材的特點(diǎn)選擇，無菌衣和脫脂棉花球、純化水可采用濕熱蒸汽滅菌，其他應(yīng)選擇干熱滅菌法。干熱滅菌不需放置留點(diǎn)溫度計(jì)，但應(yīng)粘貼滅菌指示條。b項(xiàng)為一次性使用物品。其中手套、口罩和一次性注射器均放置于潔凈室內(nèi)，實(shí)驗(yàn)開始后，可直接取用。集菌過濾器和環(huán)境微生物采集器材應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要，確定使用的型號(hào)和數(shù)量，并到器材暫存室領(lǐng)用。c項(xiàng)均為滅菌后的成品，應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要，確定使用的種類和數(shù)量。d項(xiàng)所指的消毒劑為濃溶液，如無水乙醇。應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要，確定領(lǐng)用的種類和數(shù)量。31無菌檢查法人流、物流程序物流取塑料筐數(shù)個(gè)，內(nèi)外表面均用適宜消毒劑消毒后（普通區(qū)使用的消毒劑），備用。從樣品室取規(guī)定量的注射劑產(chǎn)品，用消毒劑消毒外包裝后，放入塑料筐中。將滅菌好的物品從滅菌器內(nèi)取出后，放入塑料筐中。取集菌過濾器、環(huán)境微生物采集器材、稀釋劑、沖洗劑和潔凈室內(nèi)用消毒劑，消毒外表面后，放入塑料筐中。上述物品在控制區(qū)內(nèi)轉(zhuǎn)移入潔凈室的傳遞窗內(nèi)，其中樣品需要脫去外包裝。打開傳遞窗內(nèi)的紫外燈，照射不少于0.5小時(shí)。32無菌檢查法人員按下列程序進(jìn)入潔凈室檢驗(yàn)人員在物品紫外消毒即將結(jié)束時(shí)，開始進(jìn)入潔凈室。在更衣室脫去外衣和鞋。清洗雙手后，在物品柜內(nèi)取口罩和手套，戴上口罩。打開滅菌后的無菌衣外包裝，取出無菌衣，穿戴整齊，要求嚴(yán)格覆蓋頭發(fā)、胡須和頸部。打開手套外包裝，取出手套戴上，無菌衣袖口應(yīng)包裹在手套內(nèi)。用更衣室內(nèi)的消毒劑浸泡雙手后，自然揮干。進(jìn)入緩沖走廊，關(guān)閉傳遞窗內(nèi)的紫外燈后，打開傳遞窗的門，取出樣品和其他實(shí)驗(yàn)物品，置潔凈室專用推車中，經(jīng)二級(jí)緩沖，進(jìn)入無菌操作間。在正式開始實(shí)驗(yàn)前，應(yīng)配制無菌操作間內(nèi)使用的直接接觸樣品的消毒劑，并采集人員、物品表面的微生物樣本。33無菌檢查法消毒劑配制根據(jù)消毒劑使用區(qū)域和對(duì)象的不同，將消毒劑分成3類，分別是：第一類消毒劑，專用于普通實(shí)驗(yàn)區(qū)，僅用于物品外表面的消毒，常用的有聚維酮碘和石炭酸等；第二類消毒劑，專用于潔凈室的更衣室，僅用于佩戴手套的雙手消毒，常用的有苯扎溴銨和75％乙醇；第三類消毒劑，專用于無菌操作間，直接用于消毒直接接觸藥品的容器表面，也用于實(shí)驗(yàn)操作過程中的手部消毒和實(shí)驗(yàn)臺(tái)面消毒，常用的有聚維酮碘溶液和75％乙醇。34無菌檢查法第一類消毒劑的配制方法不需使用無菌器具，可直接在普通實(shí)驗(yàn)區(qū)按消毒劑使用說明書的配制方法，用純化水稀釋消毒劑的濃溶液后使用。第二類消毒劑的配制方法不需使用無菌器具，應(yīng)在更衣室內(nèi)按消毒劑使用說明書的配制方法，用純化水稀釋消毒劑的濃溶液后使用。第三類消毒劑的配制方法需要使用無菌器具并在無菌操作間內(nèi)配制。首先取一次性集菌過濾器一個(gè)，將排液口放置在滅菌過的錐形瓶上，將消毒劑濃溶液通過薄膜過濾的方式除菌。然后，按比例取滅菌后的純化水，稀釋濃溶液，制成可供使用的消毒劑。將此消毒劑倒入放置有無菌脫脂棉球的消毒劑缸中，得到可直接使用的消毒劑棉球。該類消毒劑制備后，應(yīng)收集消毒劑中的微生物。35無菌檢查法環(huán)境微生物的采集無菌檢查操作過程中，人、物、空氣和消毒劑中攜帶的微生物對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確有重要的影響。按藥典規(guī)定，在結(jié)果判斷時(shí)，需要排除這些因素的干擾。因此，有必要收集這些環(huán)境中存在的微生物樣本，為結(jié)果比較提供證據(jù)。以下規(guī)定的是收集這些實(shí)驗(yàn)室環(huán)境中微生物的操作方法。36無菌檢查法人體表面微生物樣本的采集：采用接觸碟按壓方式采樣。當(dāng)人員進(jìn)入無菌操作間，配制消毒劑完畢，并用消毒劑消毒雙手后，取表面采樣接觸碟若干個(gè)，打開外蓋后，分別在額頭、頸部和胸部的無菌衣表面以及雙手的大拇指和食指上按壓采樣。按壓時(shí)間參照使用說明書的要求。采樣完畢，關(guān)閉外蓋，做好標(biāo)記。采樣結(jié)束后，應(yīng)使用消毒劑清潔被采樣表面。37無菌檢查法物品表面微生物樣本的采集：采用拭子涂抹取樣的方式采樣。當(dāng)人體表面微生物樣本采集完畢后，取拭子，采集直接接觸藥品的包裝容器表面和瓶塞、瓶蓋等處的微生物樣本，應(yīng)選取不少于3個(gè)采樣點(diǎn)；取拭子，對(duì)集菌過濾器、稀釋劑、沖洗劑等外表面進(jìn)行微生物采樣，每種不少于3個(gè)采樣點(diǎn)。拭子按使用說明書的要求立即釋放微生物，并盡快加入培養(yǎng)基。采樣完畢后，應(yīng)使用消毒劑清潔被采樣表面。38無菌檢查法空氣中微生物樣本的采集：采用浮游微生物采樣器收集空氣中的微生物樣本。在進(jìn)行其他環(huán)境微生物樣本采集的同時(shí)，取營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板或TSA平板，用浮游微生物采樣器在無菌操作間回風(fēng)口位置上，采集微生物樣本。采樣應(yīng)不少于2點(diǎn)，每點(diǎn)的采樣量為1m3。所有實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，應(yīng)重復(fù)在上述采樣點(diǎn)的采樣，要求同實(shí)驗(yàn)開始前。消毒劑中攜帶的微生物樣本的采集：第三類消毒劑配制完畢后，可取適量，用薄膜過濾法處理后，取膜，貼在營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板或TSA平板上。39無菌檢查法所有采樣標(biāo)本均應(yīng)在實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，置36℃培養(yǎng)48小時(shí)，觀察并保留出現(xiàn)的微生物菌落。根據(jù)注射劑產(chǎn)品無菌檢查的結(jié)果，確定是否需要對(duì)這些菌落開展進(jìn)一步的分離鑒定工作。如開展分離鑒定，則應(yīng)采用-70℃低溫冷凍保藏的方式，保藏上述樣本中分離得到菌種的純培養(yǎng)物。40無菌檢查法檢驗(yàn)方法的確認(rèn)（無菌檢查方法驗(yàn)證）方法驗(yàn)證的基本概念：1、開展方法驗(yàn)證的必要性：確保無菌檢查實(shí)驗(yàn)方法的有效。2、方法驗(yàn)證的對(duì)象主要有：無菌檢查薄膜過濾法的驗(yàn)證、無菌檢查直接接種法的驗(yàn)證3、方法驗(yàn)證的主要思路：加菌回收4、方法驗(yàn)證的時(shí)機(jī)：在建立一個(gè)產(chǎn)品的無菌檢查方法時(shí)；當(dāng)產(chǎn)品的組分或方法的參數(shù)發(fā)生改變時(shí)。5、方法驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)可與供試品的無菌檢查同時(shí)進(jìn)行41無菌檢查法方法驗(yàn)證的具體操作：例1、薄膜過濾法無菌檢查方法的驗(yàn)證例2、直接接種法無菌檢查方法的驗(yàn)證42無菌檢查法例1、薄膜過濾法無菌檢查方法的驗(yàn)證一、目的考察薄膜過濾法無菌檢查的有效性，確定供試品的稀釋濃度，沖洗劑的種類、用量和沖洗方式以及陽(yáng)性對(duì)照菌二、供試品薄膜過濾法檢驗(yàn)數(shù)量為20瓶，分別接種每種培養(yǎng)基。驗(yàn)證時(shí)的檢驗(yàn)量應(yīng)從全量開始。

43無菌檢查法三、菌種無菌檢查方法驗(yàn)證的菌種和培養(yǎng)基靈敏度實(shí)驗(yàn)的菌種相同，分別為金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、生孢梭菌、白色念珠菌和黑曲霉。按藥典提供的方法，分別用滅菌生理鹽水稀釋上述菌液，適宜的菌濃度為小于100cfu/ml。44無菌檢查法四、培養(yǎng)基提供培養(yǎng)基供應(yīng)商、配制方法和配制日期等信息。五、濾器提供濾器供應(yīng)商、濾器型號(hào)規(guī)格以及滅菌日期等信息。六、稀釋液和沖洗液藥典提供的沖洗液以0.1％蛋白胨水溶液為首選。驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)需要確定該溶液是否適用，如適用，還應(yīng)確定用量和沖洗方式。

45無菌檢查法七、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)1、濾器：應(yīng)至少準(zhǔn)備12個(gè)濾器。2、供試品：應(yīng)至少有60瓶的量。3、確定供試品溶液的濃度：將10瓶樣品溶解在500ml適宜的稀釋劑中，用待驗(yàn)證的方法過濾和沖洗，以抗菌譜中的最敏感菌為驗(yàn)證菌種（1種即可）或直接選擇金黃色葡萄球菌，進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)4、沖洗液數(shù)量的設(shè)定：按梯次設(shè)定的方法，每個(gè)濾器沖洗液的過濾總量應(yīng)分別按300、500和1000ml設(shè)定：亦可根據(jù)以往相同類別產(chǎn)品的驗(yàn)證經(jīng)驗(yàn)，采用固定值設(shè)定，如統(tǒng)一為500ml。5、沖洗方式的設(shè)定：主要是對(duì)蠕動(dòng)泵的轉(zhuǎn)速和沖洗次數(shù)進(jìn)行設(shè)定。該項(xiàng)參數(shù)的設(shè)定可首先根據(jù)經(jīng)驗(yàn)采用固定值，如過濾時(shí)泵速為80rpm，500ml沖洗液分為50、50、100、100、100、100ml6次進(jìn)行。46無菌檢查法八、實(shí)驗(yàn)操作1、菌液的制備：略2、供試品溶液的制備：略3、過濾：取雙聯(lián)濾器一套，安裝在底座上；取制備好的供試品溶液適量過濾。4、沖洗：向兩個(gè)濾器內(nèi)泵入50ml沖洗液，調(diào)節(jié)泵速置設(shè)定值，在反復(fù)振搖中將沖洗液濾過，重復(fù)這個(gè)過程，直至每個(gè)濾器沖洗液的過濾總量接近設(shè)定值。47無菌檢查法5、菌種的加入：向沖洗液的殘液中加入稀釋至規(guī)定濃度的某一種菌液適量，使每個(gè)濾器接種的菌量為小于100cfu。將接種有上述菌種的沖洗液殘液通過上述濾器。6、培養(yǎng)基的加入：根據(jù)菌種的種類，選擇適宜的培養(yǎng)基加入到上述濾器中。7、培養(yǎng)及結(jié)果判斷：上述濾器置規(guī)定溫度培養(yǎng)，18～24小時(shí)后，即可開始觀察培養(yǎng)結(jié)果。若供試品管和空白對(duì)照管微生物的生長(zhǎng)情況較為一致，則可以判斷該供試品在上述實(shí)驗(yàn)方法下進(jìn)行無菌檢查是有效的；若供試品管微生物不生長(zhǎng)或生長(zhǎng)微弱，則表明上述實(shí)驗(yàn)方法無效，需要重新摸索各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)參數(shù)，再重做驗(yàn)證。8、陽(yáng)性對(duì)照菌的選擇：可根據(jù)使用說明書中抗菌譜的敏感菌確定，也可根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果選擇最不容易生長(zhǎng)的菌作為陽(yáng)性對(duì)照菌。48無菌檢查法九、驗(yàn)證的結(jié)論1、對(duì)觀察到的實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)，得出方法有效或無效的結(jié)論。2、對(duì)有效的方法，應(yīng)將方法的具體細(xì)節(jié)詳細(xì)表述，內(nèi)容應(yīng)大致包括：1）培養(yǎng)基的來源、制法以及配制日期2）供試品溶液的配制濃度3）沖洗液主要成分的來源、制法和配制日期4）過濾器的來源和型號(hào)5）供試品的檢驗(yàn)量6）沖洗液的總量以及沖洗方式7）陽(yáng)性對(duì)照菌49無菌檢查法注射用泮托拉唑鈉無菌檢查方法驗(yàn)證結(jié)果.doc50無菌檢查法例2、直接接種法無菌檢查方法的驗(yàn)證樣品的基本情況：如供試品為混懸型注射液，則無法用薄膜過濾法；假定供試品的裝量為5ml一、目的考察直接接種法無菌檢查的有效性，確定培養(yǎng)基的裝量。二、供試品直接接種法供試品的檢驗(yàn)數(shù)量為20支，分別接種2ml置兩種培養(yǎng)基中。因此，驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)時(shí)向每種培養(yǎng)基管內(nèi)接種供試品的檢驗(yàn)量為2ml。51無菌檢查法三、菌種與例1相同。四、培養(yǎng)基提供培養(yǎng)基供應(yīng)商、配制方法和配制日期等信息。直接接種法培養(yǎng)基的裝量并未在方法項(xiàng)下明確規(guī)定。因此，驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)有必要確定培養(yǎng)基的用量。對(duì)本例中出現(xiàn)的混懸型注射液，無法采用薄膜過濾法，因此若該產(chǎn)品有抑菌作用，應(yīng)重新確定培養(yǎng)基裝量后再做驗(yàn)證。根據(jù)藥典的原則規(guī)定，首先確認(rèn)兩種培養(yǎng)基的裝量均為20ml。（2ml/10％）52無菌檢查法五、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)1、培養(yǎng)基管數(shù)：由于對(duì)照菌中有四種為細(xì)菌，因此，液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基應(yīng)準(zhǔn)備8管，改良馬丁培養(yǎng)基應(yīng)準(zhǔn)備4管?？紤]到該產(chǎn)品為混懸型注射液，供試品性質(zhì)對(duì)結(jié)果觀察有影響，需要在培養(yǎng)之后進(jìn)行轉(zhuǎn)種，因此，液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基應(yīng)再準(zhǔn)備4管，改良馬丁培養(yǎng)基應(yīng)再準(zhǔn)備2管。2、供試品：應(yīng)至少有12ml。53無菌檢查法六、實(shí)驗(yàn)操作1、菌液制備：略2、供試品的接種：吸取供試品各2ml，分別接種4支液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基和2支改良馬丁培養(yǎng)基。3、對(duì)照菌液的加入：四種細(xì)菌稀釋菌液分別加入到8管液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基中，兩種真菌稀釋菌液分別加入到4管改良馬丁培養(yǎng)基中。54無菌檢查法4、培養(yǎng)及結(jié)果判斷上述兩種培養(yǎng)基分別置規(guī)定溫度培養(yǎng)規(guī)定的時(shí)間。將加有供試品溶液的培養(yǎng)基管培養(yǎng)物轉(zhuǎn)種至相同的培養(yǎng)基管內(nèi)，繼續(xù)培養(yǎng)2～3天。若轉(zhuǎn)種后的供試品管微生物生長(zhǎng)與空白管相同，則表明該產(chǎn)品無抑菌性，可在20ml培養(yǎng)基裝量下用直接接種法進(jìn)行無菌檢查。若上述管內(nèi)微生物生長(zhǎng)緩慢、微弱或不生長(zhǎng)，則本次驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)證明在該培養(yǎng)基裝量下，供試品有抑菌作用，應(yīng)擴(kuò)大培養(yǎng)基裝量后再做驗(yàn)證。55無菌檢查法七、驗(yàn)證的結(jié)論1、對(duì)觀察到的實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)，得出方法有效或無效的結(jié)論。2、對(duì)有效的方法，應(yīng)將方法的具體細(xì)節(jié)詳細(xì)表述，內(nèi)容應(yīng)大致包括：1）培養(yǎng)基的來源、制法、配制日期以及裝量2）供試品的檢驗(yàn)量56無菌檢查法檢驗(yàn)過程（以常用的薄膜過濾法為例）取消毒劑棉球，消毒雙手和集菌過濾器的外表面后，打開過濾器外包裝，取出3聯(lián)過濾器，將其固定在集菌儀底座上。取沖洗劑1瓶，消毒外表面和瓶蓋后，打開瓶蓋，在酒精燈上燒灼滅菌后，在火焰附近打開過濾器的針頭，插入沖洗劑瓶中。運(yùn)行集菌儀，泵入少量沖洗劑（每個(gè)濾筒中約25ml）潤(rùn)濕濾膜。（當(dāng)供試品為油性樣品時(shí)，該步驟可省略）57無菌檢查法取規(guī)定量的供試品，仔細(xì)消毒外表面（和瓶蓋、瓶塞）。在酒精燈火焰附近，打開供試品包裝。如供試品為安瓿包裝的液體制劑，則折斷安瓿頸后，應(yīng)立即將過濾器針頭插入開口的容器中，迅速將藥液過濾。如供試品為瓶裝、袋裝的液體制劑，則應(yīng)在打開瓶蓋后，將膠塞在火焰上燒灼滅菌后，插入過濾器針頭，過濾藥液。如供試品為粉針劑，則應(yīng)首先溶解樣品，再按液體制劑的操作方法過濾。注意，用于溶解樣品的稀釋劑不應(yīng)用完，保留部分殘液作為陰性對(duì)照樣本的來源。取沖洗劑，沖洗濾膜，用量根據(jù)方法驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)確定。注意，使用的每瓶沖洗劑均不要用完，保留部分殘液作為陰性對(duì)照樣本的來源。58無菌檢查法取培養(yǎng)基，去除瓶塞包裹物后，用消毒劑棉球消毒瓶塞后，經(jīng)過火焰燒灼滅菌后，插入過濾器針頭，分別向3個(gè)濾筒中泵入相應(yīng)的培養(yǎng)基各100ml。此時(shí)，兩種培養(yǎng)基瓶中各還有部分殘液，可妥善包扎瓶塞后，取出作為陰性對(duì)照樣本。另取1套過濾器，消毒外表面后，打開外包裝，取出3聯(lián)過濾器，固定在集菌儀的底座上。將上述殘存的稀釋劑、沖洗劑通過薄膜過濾，并泵入相應(yīng)的培養(yǎng)基。培養(yǎng)基的操作方法按照前述的規(guī)定，保留部分作為陰性對(duì)照。59無菌檢查法另取過濾器3套，消毒外表面后，分別打開外包裝，分別泵入相應(yīng)的培養(yǎng)基。培養(yǎng)基的操作方法按照前述的規(guī)定，保留部分作為陰性對(duì)照。實(shí)驗(yàn)應(yīng)設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照組。根據(jù)供試品的特點(diǎn)，選擇正確的陽(yáng)性對(duì)照菌。所有灌注培養(yǎng)基的過濾器以及殘存培養(yǎng)基的包裝瓶，均應(yīng)置規(guī)定溫度培養(yǎng)。同時(shí)，取未開封的同批滅菌的培養(yǎng)基若干瓶，置相同溫度培養(yǎng)，作為空白對(duì)照。60無菌檢查法結(jié)果觀察與判斷根據(jù)藥典的要求，無菌檢查的實(shí)驗(yàn)結(jié)果應(yīng)逐日觀察。每日的觀察時(shí)間應(yīng)基本一致。觀察時(shí)，避免劇烈振搖。如樣品干擾結(jié)果觀察，應(yīng)根據(jù)藥典規(guī)定，在培養(yǎng)到期后，再轉(zhuǎn)種培養(yǎng)。轉(zhuǎn)種培養(yǎng)加入供試品后、或在培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)基出現(xiàn)渾濁，培養(yǎng)14天后，不能從外觀上判斷有無微生物生長(zhǎng)，則應(yīng)進(jìn)行轉(zhuǎn)種轉(zhuǎn)種培養(yǎng)的方式：同種新鮮培養(yǎng)基接種或劃線接種于斜面培養(yǎng)基上轉(zhuǎn)種培養(yǎng)時(shí)間：細(xì)菌2天、真菌3天轉(zhuǎn)種培養(yǎng)判斷標(biāo)準(zhǔn)：同種培養(yǎng)基是否渾濁，斜面是否有菌生長(zhǎng)；或涂片、染色、鏡檢61無菌檢查法藥典規(guī)定的結(jié)果判斷原則供試品管均澄清或雖顯渾濁但經(jīng)確認(rèn)無菌生長(zhǎng)，判供試品符合規(guī)定供試品管顯渾濁并確認(rèn)有菌生長(zhǎng)，判供試品不符合規(guī)定在有證據(jù)表明下列情況屬實(shí)時(shí)，在供試品管出現(xiàn)渾濁時(shí)，可判實(shí)驗(yàn)無效，允許重試設(shè)備及環(huán)境監(jiān)控結(jié)果不符合規(guī)定無菌檢查過程可能存在無所謂污染的可能陰性對(duì)照有菌生長(zhǎng)供試品管中的無所謂經(jīng)鑒定，確認(rèn)是檢驗(yàn)所用物品和（或）操作技術(shù)不當(dāng)引起重試若無菌生長(zhǎng)，則判供試品符合規(guī)定，否則，為不符合規(guī)定。62無菌檢查法對(duì)于觀察中發(fā)現(xiàn)的供試品管出現(xiàn)的渾濁情況，應(yīng)立即按下列方法處理：a.該供試品管結(jié)束培養(yǎng)。b.從該供試品管中，吸取1～2ml培養(yǎng)物，接種至相同的培養(yǎng)基中，繼續(xù)在規(guī)定溫度培養(yǎng)。c.取該培養(yǎng)物，低溫冷凍保藏不少于3支凍存管。d.取該培養(yǎng)物，在TSA平板上劃線接種，進(jìn)行分離培養(yǎng)。e.若液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基管中出現(xiàn)渾濁，則取該培養(yǎng)物，劃線接種至血瓊脂平板上，厭氧培養(yǎng)，分離培養(yǎng)厭氧菌。f.對(duì)所有分離得到的菌落，應(yīng)與陰性對(duì)照、空白對(duì)照可能出現(xiàn)的菌落以及實(shí)驗(yàn)室環(huán)境微生物樣本的培養(yǎng)結(jié)果進(jìn)行微生物相似性分析，并應(yīng)將出現(xiàn)的菌落鑒定到種。63無菌檢查法對(duì)無菌檢查結(jié)果的判斷可遵循下列原則：a.陽(yáng)性對(duì)照管必須有菌生長(zhǎng)，否則，應(yīng)視為實(shí)驗(yàn)失敗，應(yīng)重新調(diào)整方法后，再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。b.陰性對(duì)照、空白對(duì)照無菌生長(zhǎng)，實(shí)驗(yàn)室收集的環(huán)境微生物樣本培養(yǎng)后未見明顯菌落，陽(yáng)性對(duì)照有菌生長(zhǎng)，供試品管培養(yǎng)基培養(yǎng)14天后未見渾濁，可判供試品無菌檢查符合規(guī)定。c.供試品管培養(yǎng)基培養(yǎng)14天后未見渾濁，但陰性對(duì)照、空白對(duì)照中有菌生長(zhǎng)，或者實(shí)驗(yàn)室收集的環(huán)境微生物樣本培養(yǎng)后可見明顯的菌落，陽(yáng)性對(duì)照有菌生長(zhǎng)，則可判供試品無菌檢查符合規(guī)定，但應(yīng)對(duì)陰性對(duì)照、空白對(duì)照進(jìn)行微生物分離鑒定，并根據(jù)實(shí)驗(yàn)室收集的環(huán)境微生物樣本的培養(yǎng)結(jié)果，通過相似性分析技術(shù)和菌種鑒定技術(shù)，來分析查找導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)室污染的原因。64無菌檢查法d.供試品管培養(yǎng)基培養(yǎng)14天后，發(fā)現(xiàn)渾濁，陽(yáng)性對(duì)照管有菌生長(zhǎng)，則應(yīng)分析陰性對(duì)照、空白對(duì)照的培養(yǎng)結(jié)果，并結(jié)合實(shí)驗(yàn)室收集的環(huán)境微生物樣本的培養(yǎng)結(jié)果，在相似性分析的基礎(chǔ)上，予以判斷。當(dāng)供試品管中的微生物與陰性對(duì)照、空白對(duì)照或環(huán)境中的微生物不相似時(shí)，應(yīng)判該供試品不符合規(guī)定；當(dāng)兩者相似時(shí)，表明實(shí)驗(yàn)過程可能存在實(shí)驗(yàn)室污染的風(fēng)險(xiǎn)，本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果不能成立，應(yīng)盡快重新實(shí)驗(yàn)。f.供試品管培養(yǎng)基培養(yǎng)14天后，發(fā)現(xiàn)渾濁，陽(yáng)性對(duì)照管有菌生長(zhǎng)，陰性對(duì)照、空白對(duì)照均未見有菌生長(zhǎng)，同時(shí)實(shí)驗(yàn)室收集的所有環(huán)境微生物樣本的培養(yǎng)結(jié)果均為未見有菌生長(zhǎng)，則可直接判供試品不符合規(guī)定。65無菌檢查法記錄培養(yǎng)基配制記錄：包括使用的培養(yǎng)基名稱、批號(hào)、配制方法、pH調(diào)整、分裝體積、滅菌程序等。滅菌記錄：包括培養(yǎng)基滅菌記錄、其他物品的滅菌記錄，內(nèi)容應(yīng)至少包括滅菌程序、滅菌時(shí)間、留點(diǎn)溫度計(jì)指示溫度、粘帖滅菌指示條。第三類消毒劑的配制記錄：包括消毒劑的名稱、批號(hào)、過濾除菌的濾器種類、批號(hào)、配制具體方法等。66無菌檢查法環(huán)境微生物采樣記錄：包括接觸碟、拭子的批號(hào)，廠牌，具體的采樣方法，各采樣點(diǎn)收集樣本的培養(yǎng)結(jié)果等。檢驗(yàn)方法和檢驗(yàn)過程的記錄：詳細(xì)描述檢驗(yàn)的全過程，包括檢驗(yàn)方法的確認(rèn)、檢驗(yàn)數(shù)量、沖洗劑和稀釋劑的名稱、批號(hào)等。檢驗(yàn)結(jié)果的觀察和判斷記錄：包括逐日觀察的結(jié)果、出現(xiàn)陽(yáng)性樣本后的處理方法、陽(yáng)性對(duì)照的培養(yǎng)結(jié)果、陰性對(duì)照、空白對(duì)照的培養(yǎng)結(jié)果等。相似性分析的記錄：如果實(shí)行了相似性分析，需要提供菌種分離、純培養(yǎng)、相似性分析的圖譜等。如有必要，也可提供菌種鑒定的基本信息。67無菌檢查法無菌檢查結(jié)果保證的實(shí)驗(yàn)技術(shù)環(huán)境微生物的采集技術(shù)微生物相似性分析技術(shù)菌種鑒定和溯源技術(shù)68無菌檢查法環(huán)境微生物的采集技術(shù)如前所述，主要包括表面微生物采樣技術(shù)、空氣微生物采樣技術(shù)和液體微生物采樣技術(shù)等常用的儀器和器材主要有接觸碟、拭子空氣微生物采樣器、培養(yǎng)基平皿薄膜過濾器、濾膜69無菌檢查法微生物相似性分析技術(shù)形態(tài)學(xué)鑒定染色鏡檢技術(shù)生化鑒定技術(shù)紅外光譜分析技術(shù)70無菌檢查法紅外光譜分析技術(shù)在二十世紀(jì)五十年代紅外光譜法已被報(bào)導(dǎo)可以區(qū)分和鑒定不同的微生物，但由于當(dāng)時(shí)紅外光譜儀的低選擇性，這項(xiàng)工作在70年代中期基本停滯不前。隨著現(xiàn)代傅立葉變換技術(shù)的發(fā)展，以及多元統(tǒng)計(jì)分析、模式識(shí)別等化學(xué)計(jì)量學(xué)方法的應(yīng)用，80年代以后傅立葉變換紅外(FTIR)光譜法在微生物學(xué)上的應(yīng)用出現(xiàn)復(fù)興。1986-1989年，德國(guó)羅伯特·科赫研究所和德國(guó)Bruker公司合作開發(fā)用FTIR法分析無損微生物的有效方法。1991年，該所的D.Naumann博士等在Nature雜志上發(fā)表文章介紹了用FTIR技術(shù)鑒定微生物的信息基礎(chǔ)、實(shí)驗(yàn)方法和應(yīng)用前景,為本方法的使用起到了開創(chuàng)性的作用目前國(guó)外已將此方法應(yīng)用于微生物的鑒別，污染路徑的檢測(cè)，食品生產(chǎn)及生物工程中微生物的質(zhì)控。但在藥品檢驗(yàn)中的應(yīng)用尚未見報(bào)道。71無菌檢查法原理：利用紅外光的穿透能力，測(cè)定微生物細(xì)胞整體組分化學(xué)信息的紅外光譜。不同微生物的結(jié)構(gòu)不同，呈現(xiàn)的IR光譜不同，具有光譜指紋性，用于區(qū)分和鑒別。72無菌檢查法呈現(xiàn)寬峰，輪廓線化學(xué)信息埋藏于輪廓線中，對(duì)主要吸收峰可以歸屬，完全確證存在困難73無菌檢查法一株微生物（金黃色葡萄球菌）FTIR圖譜及其主要譜段分布標(biāo)示譜段(cm-1)振動(dòng)類型代表的細(xì)胞組分Ｗ１3000-2800CH伸縮振動(dòng)區(qū)細(xì)胞膜脂肪酸Ｗ２1800-1500酰氨（Ⅰ、Ⅱ）區(qū)細(xì)胞蛋白和肽類，DNA、RNA結(jié)構(gòu)Ｗ３1500-1200混合區(qū)蛋白質(zhì)和脂肪酸，磷酯Ｗ３１1500-1400二級(jí)脂肪酸區(qū)兩性細(xì)胞質(zhì)膜成分（蛋白質(zhì)和類脂）Ｗ４1200-900C-O伸縮振動(dòng)區(qū)細(xì)胞壁多聚糖Ｗ５900-700指紋區(qū)長(zhǎng)鏈脂肪酸74無菌檢查法譜圖存在差異—鑒別的基礎(chǔ)75無菌檢查法G+和G-細(xì)菌圖譜區(qū)別76無菌檢查法一般程序采集并建立實(shí)驗(yàn)室常見環(huán)境污染微生物圖庫(kù)將供試品中獲得的微生物與實(shí)驗(yàn)控制樣本中獲得的微生物均掃描圖譜通過計(jì)算機(jī)自動(dòng)判別供試品中獲得的微生物是否與控制樣本中獲得的微生物相似判斷控制樣本中獲得的微生物是否與圖庫(kù)中的典型微生物相似，如不相似，則擴(kuò)充圖庫(kù)77無菌檢查法菌種鑒定和溯源技術(shù)全自動(dòng)微生物鑒定系統(tǒng)基于基因分型的菌種溯源技術(shù)78無菌檢查法全自動(dòng)微生物鑒定系統(tǒng)目的：判斷供試品及控制樣本中獲得的微生物在分類學(xué)上屬于那一種微生物，為正確判斷污染的來源提供信息