定點(diǎn)熒光標(biāo)記蛋白：輕松搞定CAR-T陽(yáng)性率檢測(cè)

定點(diǎn)熒光標(biāo)記蛋白：輕松搞定CAR-T陽(yáng)性率檢測(cè)CAR-T細(xì)胞療法在8月份提前進(jìn)入“豐收季”。8月27日NMPA官網(wǎng)公示，國(guó)內(nèi)第五款CAR-T細(xì)胞療法——來(lái)自傳奇生物的西達(dá)基奧侖賽注射液獲批上市。這款靶向BCMA的細(xì)胞療法用于治療復(fù)發(fā)或難治性多發(fā)性骨髓瘤（R/RMM）成人患者。同一天，藥明巨諾靶向CD19的瑞基奧侖賽注射液新適應(yīng)癥上市申請(qǐng)獲得批準(zhǔn)，用于治療成人復(fù)發(fā)或難治性套細(xì)胞淋巴瘤（R/RMCL）。與傳統(tǒng)藥物不同，CAR-T在靜脈注射給藥后會(huì)分布在各個(gè)器官。在CAR與腫瘤靶點(diǎn)結(jié)合后，CAR-T細(xì)胞被激活并增殖，一般在2周內(nèi)達(dá)到峰值，之后根據(jù)個(gè)體差異呈現(xiàn)不同程度的下降趨勢(shì)，因此CAR細(xì)胞陽(yáng)性率是CAR-T產(chǎn)品活性的關(guān)鍵指標(biāo)之一。CAR細(xì)胞陽(yáng)性率檢測(cè)貫穿CAR-T療法始終，是其質(zhì)量控制的“基石”。在研發(fā)階段，為確保CAR結(jié)構(gòu)改進(jìn)能最大化的提高緩解率，需要對(duì)CAR陽(yáng)性細(xì)胞的數(shù)量和比例進(jìn)行檢測(cè)。在CAR-T生產(chǎn)過(guò)程中的質(zhì)量控制、臨床試驗(yàn)監(jiān)測(cè)以及患者體內(nèi)擴(kuò)能和存活能力等各階段均需檢測(cè)細(xì)胞活性。因此CAR-T細(xì)胞治療產(chǎn)品從臨床前研究到患者治療后隨訪，都需要CAR陽(yáng)性率檢測(cè)。圖源義翹講堂《定點(diǎn)標(biāo)記技術(shù)平臺(tái)——專(zhuān)為細(xì)胞檢測(cè)打造》講座課件選擇合適的技術(shù)是構(gòu)建CAR陽(yáng)性率檢測(cè)的基礎(chǔ)。目前實(shí)驗(yàn)室常用的檢測(cè)技術(shù)有聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）、流式細(xì)胞術(shù)（FCM）、抗獨(dú)特型抗體等。流式細(xì)胞術(shù)（FCM）基于熒光標(biāo)記，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行多參數(shù)、快速定量分析及分選。FCM具有高通量快速分析優(yōu)勢(shì)，每秒可達(dá)10萬(wàn)個(gè)細(xì)胞，并且分選純度在99%以上。同時(shí)還能檢測(cè)多種細(xì)胞信息，如細(xì)胞群的比例、數(shù)量、T細(xì)胞功能、免疫分型、蛋白豐度等，進(jìn)而判斷特定細(xì)胞類(lèi)型及其蛋白豐度。利用熒光標(biāo)記蛋白與細(xì)胞表面重要標(biāo)志物特異性結(jié)合的特性，進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)，是現(xiàn)階段普遍公認(rèn)的主流檢測(cè)技術(shù)。然而，熒光標(biāo)記蛋白的選擇面臨諸多挑戰(zhàn)。傳統(tǒng)化學(xué)標(biāo)記是主要的蛋白標(biāo)記技術(shù)，但批間一致性差，檢測(cè)結(jié)果不穩(wěn)定，影響對(duì)治療效果的評(píng)估。此外，傳統(tǒng)化學(xué)標(biāo)記蛋白易聚集，檢測(cè)時(shí)可能產(chǎn)生非特異信號(hào)。因此，開(kāi)發(fā)高活性、高批間一致性的熒光標(biāo)記蛋白對(duì)細(xì)胞檢測(cè)尤為重要?；谝陨闲枨螅x翹神州憑借其特色定點(diǎn)標(biāo)記技術(shù)平臺(tái)，成功開(kāi)發(fā)了一系列專(zhuān)為CAR細(xì)胞檢測(cè)打造的定點(diǎn)標(biāo)記蛋白產(chǎn)品，熒光標(biāo)記類(lèi)型多樣，涵蓋PE、APC、AF488、AF647等，全方位滿足不同研究需求，如細(xì)胞藥物質(zhì)控和檢測(cè)、抗體篩選、蛋白互作研究等。義翹神州定點(diǎn)標(biāo)記蛋白義翹神州定點(diǎn)標(biāo)記蛋白優(yōu)勢(shì)★在某一特定氨基酸上標(biāo)記★在特定位置標(biāo)記★標(biāo)記數(shù)量確定；★保持天然構(gòu)象和活性★批內(nèi)高度均質(zhì)性★批間高度一致性詳細(xì)驗(yàn)證數(shù)據(jù)特異性靈敏度高（Cat#:11880-H08W1-SG）AF647熒光定點(diǎn)標(biāo)記CD19蛋白經(jīng)FCM驗(yàn)證可高特異性檢測(cè)CD19CAR細(xì)胞。Flowcytometricanalysisofanti-CD19CARexpression.293cellswerelentivirallytransducedwithanti-CD19CAR.FlowcytometricanalysiswasperformedwithanegativecontrolproteinandAF647-conjugatedhumanCD19protein(Cat#:11880-H08W1-SG),respectively.Non-transduced293cellswereusedasacontrol(left)(QCtested).非特異性背景低（Cat#:11880-H08W1-SG）AF647熒光定點(diǎn)標(biāo)記CD19蛋白經(jīng)未轉(zhuǎn)染CAR的PBMC細(xì)胞驗(yàn)證，無(wú)特異性背景，保證CAR表達(dá)檢測(cè)結(jié)果的特異性和準(zhǔn)確性，適用于CAR細(xì)胞陽(yáng)性檢測(cè)。BindingactivityofAF647-conjugatedCD19protein(Cat#:11880-H08W1-SG)toPBMCcells.PBMCcellswerestainedwithanti-CD3antibodyandAF647-conjugatedhumanCD19proteinanddetectedbyflowcytometry.PBMCcellsstainedwithanti-CD3antibodywereusedasacontrol(left)(QCtested).批間一致性穩(wěn)定（Cat#:11188-H86H-SD）：標(biāo)記前后蛋白活性、不同批次的標(biāo)記蛋白之間活性保持一致ComparisonofELISAactivitybetweenpre-conjugationanddifferentbatchesofsite-specificAF488conjugatedB7-H3(Cat#:11188-H86H-SD)(routinelytested).穩(wěn)定性高（Cat#:11188-H86H-SD）經(jīng)多次凍融和加速穩(wěn)定性測(cè)試，仍保持較高生物活性TheB7-H3protein(Site-specificconjugation,ECD,Histag.Cat#:11188-H86H-SD)showednoperformancereductiononflowcytometryaftermultiplefreeze-thawcycles(0,5,10cycles)andtwoweeks(Day0,Day7,Day14)ofstorageat37℃(routinelytested).純度高（Cat#:10001-H86H-SD）：標(biāo)記前后產(chǎn)品純度均高于90%Thepurityofsite-specificAF488conjugatedEGFRProtein(Cat#:10001-H86H-SD)ismorethan90%asdeterminedbySDSandSEC-HPLC(routinelytested).免責(zé)聲明：義翹神州內(nèi)容