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作業(yè)55動物細胞的培養(yǎng)A組基礎(chǔ)達標1.動物細胞培養(yǎng)是動物細胞工程的基礎(chǔ)。下列關(guān)于動物細胞培養(yǎng)的敘述,錯誤的是()A.液體培養(yǎng)基中的動物血清需過濾除菌B.定期更換培養(yǎng)液可以防止細胞代謝產(chǎn)生有毒物質(zhì)危害細胞C.在二氧化碳培養(yǎng)箱中進行原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)D.動物細胞培養(yǎng)體現(xiàn)了動物細胞核的全能性2.(2024浙江新力量聯(lián)盟)下列關(guān)于動物細胞培養(yǎng)的敘述,正確的是()A.胰蛋白酶能消化細胞內(nèi)的膠原纖維和其他成分,獲得細胞懸液B.細胞進行一次傳代培養(yǎng)所需時間等于一個細胞周期的時間C.培養(yǎng)基中添加胎牛血清有助于提高動物細胞克隆形成率D.動物細胞只能貼壁生長,不能進行懸浮培養(yǎng)3.動物細胞培養(yǎng)是動物細胞工程的基礎(chǔ),科研人員將數(shù)量相等的動物肝臟腫瘤細胞和肝臟正常細胞分別置于相同培養(yǎng)液中培養(yǎng)。下列有關(guān)敘述正確的是()A.在培養(yǎng)過程中通常要通入5%的CO2刺激細胞呼吸B.細胞培養(yǎng)液中通常含有維生素、激素、糖等多種能源物質(zhì)C.定期更換培養(yǎng)液可以防止代謝產(chǎn)物的積累對細胞造成危害D.為了防止細菌污染,可向培養(yǎng)液中加入適量的干擾素4.一般來說,動物細胞體外培養(yǎng)需要滿足以下哪些條件?()①無毒的環(huán)境②無菌的環(huán)境③合成培養(yǎng)基需加血清④溫度與動物體溫相近⑤需要O2,不需要CO2⑥CO2能調(diào)節(jié)培養(yǎng)液pHA.①②③④⑤⑥B.①②③④C.①③④⑤⑥ D.①②③④⑥5.如圖為動物成纖維細胞的培養(yǎng)過程示意圖。下列敘述正確的是()A.步驟①的操作不需要在無菌環(huán)境中進行B.步驟②中用鹽酸溶解細胞間物質(zhì)使細胞分離C.步驟③到④的分瓶操作前常用胰蛋白酶處理D.步驟④培養(yǎng)過程中不會發(fā)生細胞轉(zhuǎn)化6.如圖為動物細胞培養(yǎng)過程中細胞增殖情況的變化曲線,圖中B、D兩點表示經(jīng)篩選、分裝后繼續(xù)培養(yǎng)。下列判斷正確的是()A.細胞培養(yǎng)過程中應(yīng)通入95%的O2和5%的CO2B.細胞在培養(yǎng)過程中都會出現(xiàn)接觸抑制的現(xiàn)象C.原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)的分界點是曲線中B點D.制備單克隆抗體應(yīng)選擇B點后的細胞與B淋巴細胞融合7.動物細胞培養(yǎng)就是從動物機體中取出相關(guān)的組織,將它分散成單個細胞,然后放在適宜的培養(yǎng)基和環(huán)境條件中,讓這些細胞生長和增殖。下列關(guān)于動物細胞培養(yǎng)條件的設(shè)置,不合理的是()A.培養(yǎng)基中除含有細胞所需的各種營養(yǎng)成分外,還需添加抗生素和瓊脂B.對培養(yǎng)動物細胞所用的培養(yǎng)液和培養(yǎng)用具等,需要進行相應(yīng)滅菌處理C.細胞培養(yǎng)時通常采用培養(yǎng)皿或松蓋培養(yǎng)瓶,以保證細胞對氣體的需求D.培養(yǎng)基中常需加入血清等天然物質(zhì),因為其中含有細胞生長所必需的物質(zhì)8.某研究小組為測定某藥物對體外培養(yǎng)細胞的毒性,準備對某種動物的肝腫瘤細胞(甲)和正常肝細胞(乙)進行動物細胞培養(yǎng)。下列說法不正確的是()A.對配制好的動物細胞培養(yǎng)液需進行高壓蒸汽滅菌處理B.乙細胞在原代培養(yǎng)過程中,最終會出現(xiàn)停止增殖的現(xiàn)象C.甲細胞連續(xù)培養(yǎng)下去可獲得連續(xù)細胞系D.將數(shù)量相等的甲、乙細胞分別置于相同且適宜的條件下培養(yǎng),一段時間后,會觀察到甲細胞的數(shù)量比乙細胞多9.下列關(guān)于動物細胞培養(yǎng)的說法,錯誤的是()A.若直接取組織塊進行組織培養(yǎng),僅少量細胞可以生存和繁殖,為了獲得大量生長良好的細胞,須把組織細胞分散開B.連續(xù)細胞系中的細胞喪失了接觸抑制C.細胞株一般具有恒定的染色體組型、病毒敏感性或者抗性等,基因型一致D.動物細胞培養(yǎng)需要用到二氧化碳培養(yǎng)箱,目的之一是使培養(yǎng)基中的pH處于平衡狀態(tài),同時適宜O2濃度可以保證細胞需氧呼吸B組素能培優(yōu)10.實驗小鼠皮膚細胞培養(yǎng)的基本過程如圖所示。下列敘述錯誤的是()實驗小鼠皮膚組織皮膚細胞懸液細胞群體1細胞群體2A.甲過程需要對實驗小鼠進行消毒B.乙過程需要用胰蛋白酶等處理皮膚組織,使細胞分散開C.丙過程表示原代培養(yǎng),該過程中會出現(xiàn)接觸抑制現(xiàn)象D.丁過程表示傳代培養(yǎng),此過程中的細胞分瓶后能無限增殖11.通常選取皮膚燒傷患者的自身細胞,經(jīng)體外培養(yǎng)獲得自體健康皮膚,再通過皮膚移植手術(shù)對患者進行治療。下列說法錯誤的是()A.通常選取皮膚中分裂能力強、易培養(yǎng)的成纖維細胞或皮膚干細胞進行體外培養(yǎng)B.在體外培養(yǎng)細胞時,需要對培養(yǎng)液和用具進行滅菌處理,并且定期更換培養(yǎng)液C.細胞培養(yǎng)過程需要提供含有95%的O2和5%的CO2的混合氣體,以維持培養(yǎng)液的pHD.進行傳代培養(yǎng)時,貼壁生長的細胞需經(jīng)酶消化后制成細胞懸液,分瓶培養(yǎng)12.為檢測某藥物X的抗癌活性,在細胞培養(yǎng)板的每個孔中加入相同數(shù)量的肝癌細胞,使其貼壁生長,實驗組加入溶于二甲基亞礬的藥物X,培養(yǎng)72h后進行計數(shù),比較實驗組和對照組每個孔中細胞數(shù)目。下列有關(guān)敘述錯誤的是()A.細胞培養(yǎng)液中通常需要加入血清或其他天然成分B.可用胰蛋白酶處理使肝癌細胞脫落下來并進行計數(shù)C.對照組中應(yīng)加入等體積的無菌蒸餾水,其他條件一致D.若實驗組細胞數(shù)遠低于對照組,可初步判斷此藥物有抗癌效果13.(2024浙江麗水質(zhì)檢)動物細胞培養(yǎng)時,培養(yǎng)細胞的生命期如下圖所示。下列敘述正確的是()A.可以使用稀釋涂布平板法或顯微鏡計數(shù)法對細胞進行計數(shù)B.傳代培養(yǎng)前,常用胰蛋白酶處理使原培養(yǎng)瓶內(nèi)的細胞分散C.隨著細胞傳代次數(shù)不斷增加,傳代間隔的時長越來越小D.有限細胞系培養(yǎng)過程中會出現(xiàn)接觸抑制現(xiàn)象,而無限細胞系不會14.某研究小組欲探究HCV入侵時間對肝細胞活力的影響,請根據(jù)提供的實驗材料和儀器完成實驗思路,并回答相關(guān)問題。材料與用具:人體肝組織、新分離的HCV株(RNA病毒)、胎牛血清、動物細胞培養(yǎng)液、胰蛋白酶、培養(yǎng)瓶、相關(guān)檢測儀器等。(要求與說明:檢測時間間隔12h,保證48h內(nèi)懸浮培養(yǎng)的營養(yǎng)條件適宜,不出現(xiàn)接觸抑制,實驗儀器、試劑等操作不作要求,細胞活力的檢測方法不作要求)(1)實驗思路:①;
②將肝細胞懸液均等加入若干培養(yǎng)瓶中,;
③甲組用適量且等量新分離HCV感染肝細胞,乙組不作處理;④在適宜條件下培養(yǎng),,統(tǒng)計分析數(shù)據(jù)。
(2)預(yù)測最可能的實驗結(jié)果。(用曲線圖表示,坐標軸上標出初始值)(3)分析與討論:胰蛋白酶可以分散細胞獲得單個細胞的懸浮液的原因是
。答案:1.D動物血清可為動物細胞提供生長因子等物質(zhì),培養(yǎng)過程中需要經(jīng)過過濾除菌,以保持無菌環(huán)境,A項正確;定期更換培養(yǎng)液可以防止代謝產(chǎn)物的積累對細胞造成危害,B項正確;在二氧化碳培養(yǎng)箱中進行原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng),兩者的主要區(qū)別在于是否分瓶培養(yǎng),C項正確;動物細胞培養(yǎng)得到的是多個動物細胞,該過程沒有得到完整的動物個體,不能體現(xiàn)動物細胞核的全能性,D項錯誤。2.C胰蛋白酶能消化組織中的膠原纖維和細胞外的其他成分,獲得單細胞懸液,A項錯誤;傳代培養(yǎng)的實質(zhì)就是分離后再次培養(yǎng),進行一次分離再培養(yǎng)稱之為傳一代,因此細胞進行一次傳代培養(yǎng)所需時間應(yīng)該大于一個細胞周期的時間,B項錯誤;動物血清能為細胞增殖提供有利的環(huán)境條件,有助于提高動物細胞克隆形成率,C項正確;動物細胞可以貼壁生長,有些動物細胞也能進行懸浮培養(yǎng),D項錯誤。3.C在培養(yǎng)過程中通常要通入5%的CO2是為了維持培養(yǎng)液的pH,A項錯誤;維生素和激素不是能源物質(zhì),B項錯誤;定期更換培養(yǎng)液可以防止代謝產(chǎn)物的積累對細胞造成危害,C項正確;為了防止細胞培養(yǎng)過程中細菌的污染,可向培養(yǎng)液中加入適量的抗生素,D項錯誤。4.D動物細胞培養(yǎng)需要滿足以下條件:無菌、無毒的環(huán)境,在培養(yǎng)液中可以添加一定量的抗生素,以防止培養(yǎng)過程中的污染;細胞體外培養(yǎng)需要的營養(yǎng)物質(zhì)與體內(nèi)基本相同,需要水、糖類、氨基酸、生長因子、無機鹽、微量元素等;在使用合成培養(yǎng)基時,通常需要加入血清、血漿等一些天然成分;細胞體外培養(yǎng)的適宜溫度一般與動物的體溫相近;多數(shù)細胞生存的適宜pH為7.2~7.4;細胞培養(yǎng)需要的氣體主要有O2和CO2,O2是細胞代謝所必需的,CO2的主要作用是維持培養(yǎng)液的pH,二者缺一不可。5.C步驟①是獲取組織粗提物,一般先采用剪刀、鑷子等工具在無菌環(huán)境中將組織塊剪碎,有利于細胞懸液的制備,A項錯誤。步驟②是制備細胞懸液,利用胰蛋白酶可將組織中的膠原纖維和細胞外的其他成分消化掉,獲得單個細胞。不能使用鹽酸,因為使用鹽酸會導(dǎo)致細胞死亡,B項錯誤。步驟③是將獲得的細胞懸液放入卡氏瓶中培養(yǎng),動物成纖維細胞屬于貼壁生長的細胞類型(除血細胞等幾種細胞外,大部分動物細胞都是貼壁生長的),因此細胞在培養(yǎng)過程中會吸附在卡氏瓶壁上,在進行傳代培養(yǎng)前,需使用胰蛋白酶處理,將細胞膜上用于吸附的蛋白質(zhì)消化掉,使細胞重新變?yōu)閼腋顟B(tài),C項正確。步驟④傳代培養(yǎng)過程中,因培養(yǎng)環(huán)境(培養(yǎng)物、溫度或其他因素)或人工誘導(dǎo)等可以發(fā)生轉(zhuǎn)化,形成轉(zhuǎn)化細胞系,D項錯誤。6.C細胞培養(yǎng)過程中應(yīng)通入95%的空氣和5%的CO2,A項錯誤。細胞的懸浮培養(yǎng)不會出現(xiàn)接觸抑制的現(xiàn)象,B項錯誤。人們通常將動物組織消化后的初次培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng),分瓶后的培養(yǎng)稱為傳代培養(yǎng);當貼壁細胞分裂生長到表面相互接觸時,細胞就會停止分裂增殖,即會發(fā)生接觸抑制現(xiàn)象如AB段;B點之后細胞繼續(xù)生長,可見B點之后進行了傳代培養(yǎng),C項正確。制備單克隆抗體時,可選取圖中D點后的細胞即能無限增殖的細胞與B淋巴細胞融合形成雜交細胞,D項錯誤。7.A培養(yǎng)動物細胞要用液體培養(yǎng)基,不需要添加瓊脂,A項不合理;動物細胞培養(yǎng)需要無菌、無毒的環(huán)境,因此對培養(yǎng)動物細胞所用的培養(yǎng)液和培養(yǎng)用具等,需要進行相應(yīng)滅菌處理,B項合理;細胞培養(yǎng)時通常采用培養(yǎng)皿或松蓋培養(yǎng)瓶,這樣培養(yǎng)箱內(nèi)的氣體可以進入培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中,保證細胞對氣體的需求,C項合理;培養(yǎng)基中常需加入血清、淋巴液等,因為其中含有細胞生長所必需的物質(zhì),D項合理。8.A動物細胞培養(yǎng)液中常含有在高溫條件下會變性失去功能的物質(zhì),如血清等,因而對培養(yǎng)液的這些成分采用過濾除菌,A項錯誤;正常肝細胞在原代培養(yǎng)過程中會出現(xiàn)接觸抑制現(xiàn)象,B項正確;甲細胞為腫瘤細胞,將其培養(yǎng)可獲得連續(xù)細胞系,C項正確;肝腫瘤細胞代謝和增殖速度較快,故一段時間后,會觀察到甲細胞的數(shù)量比乙細胞多,D項正確。9.B連續(xù)細胞系是指能連續(xù)培養(yǎng)下去的細胞系,有些連續(xù)細胞系仍有接觸抑制現(xiàn)象,B項錯誤。10.D離體動物細胞培養(yǎng)需要無菌、無毒的環(huán)境,甲過程表示從實驗小鼠身上取下皮膚組織,該過程需要對小鼠進行消毒,A項正確;皮膚細胞培養(yǎng)前需用胰蛋白酶等處理皮膚組織使細胞分散開,并制成細胞懸液,B項正確;丙過程表示原代培養(yǎng),該過程中會出現(xiàn)接觸抑制現(xiàn)象,C項正確;丁過程表示傳代培養(yǎng),但分瓶后,細胞并非都能無限增殖,D項錯誤。11.C動物細胞培養(yǎng)所需的氣體主要有O2和CO2,O2是細胞代謝所必需的,CO2的主要作用是維持培養(yǎng)液的pH,故培養(yǎng)時需要通入含有95%的空氣和5%CO2的混合氣體(維持培養(yǎng)液的pH),C項錯誤。12.C培養(yǎng)動物細胞時,細胞培養(yǎng)液中通常需要加入血清或其他天然成分,A項正確;對于已經(jīng)貼壁生長的肝癌細胞,可用胰蛋白酶處理,使肝癌細胞脫落下來并進行計數(shù),B項正確;實驗組加入適量的溶于二甲基亞礬(溶劑)的藥物X,對照組中應(yīng)加入等體積的二甲基亞礬(溶劑),C項錯誤;若實驗組細胞數(shù)目遠低于對照組,即添加藥物X的實驗組肝癌細胞數(shù)目少,可以初步判斷藥物X有抗癌效果,D項正確。13.B動物細胞不能用稀釋涂布平板法計數(shù),A項錯誤;傳代培養(yǎng)前,常用胰蛋白酶處理使原培養(yǎng)瓶內(nèi)細胞的分散,B項正確;根據(jù)曲線圖可知,隨著細胞傳代次數(shù)不斷增加,傳代間隔的時長基本不變,C項錯誤;無限細胞系中的良性無限細胞系雖已獲得了不死性,但保留接觸抑制現(xiàn)象,D項錯誤。14.答案(1)①將人體肝細胞培養(yǎng)在添加了胎牛血清的動物細胞培養(yǎng)液中,當細胞處于快速增長期時,用胰蛋白酶將細胞分散并懸浮培養(yǎng)②將培養(yǎng)瓶均分為甲、乙兩組,檢測細胞活力,并記錄④分別在12h、24h、36h、48h檢測細胞活力,記錄(2)HCV入侵時間對肝細胞活力影響曲線圖(3)胰蛋白酶可消化組織中的膠原纖維和細胞外其他成分解析(1)本實驗的目的是探究HCV入侵時間對肝細胞活力的影響,自變量是HCV及其入侵時間。根據(jù)實驗設(shè)計的對照原則和單一變量原則,實驗思路為:①將人體肝細胞培養(yǎng)在添加了胎牛血清的動物細胞培養(yǎng)液中,當細胞處于快速增長期時,用胰蛋白酶將細胞分散并懸浮培養(yǎng);②將肝細胞懸液均
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