DB6111T 211-2014 羊肚菌菌種生產技術規(guī)程

ICS65.020CCSB616111楊凌農業(yè)高新技術產業(yè)示范區(qū)地方標準IDB6111/T211—2014本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構不承擔識別專利的責任。本文件由楊凌示范區(qū)現(xiàn)代農業(yè)和鄉(xiāng)村振興局提出并歸口。本文件起草單位：楊凌職業(yè)技術學院、楊凌君寶家庭農場、陜西楊凌金麒麟生物科技有限公司。本文件主要起草人：杜璨、王鋒、胡煜、姚瑞祺、杜璇、周濟銘、黃無非、高敏、趙玉鵬、任文飛、強磊、張嘉程、陳德財、王時聰、王玉鵬、李應濤。本文件首次發(fā)布。本文件由楊凌職業(yè)技術學院負責解釋。聯(lián)系方式系地址：陜西省楊凌示范區(qū)渭惠路24號2羊肚菌菌種生產技術規(guī)程本文件規(guī)定了羊肚菌菌種生產的術語和定義、生產要求、技術要求、檢驗、貯藏、記錄與留樣、標簽、標志、包裝、運輸和貯存等要求。本文件適用于羊肚菌各級菌種生產。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規(guī)范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB191包裝儲運圖示標志GB5749生活飲用水衛(wèi)生標準GB/T12728-2006食用菌術語NY/T528食用菌菌種生產技術規(guī)程NY/T1742食用菌菌種通用技術要求NY/T1846食用菌菌種檢驗規(guī)程NY/T1935食用菌栽培基質質量安全要求3術語和定義下列術語和定義適用于本文件。3.1羊肚菌Morel學名：Morchellaspp.。羊肚菌科、羊肚菌屬真菌。菌蓋近球形、卵形至橢圓形，頂端鈍圓或尖，菌蓋表面有似羊肚狀的凹坑，且凹坑大小不定，呈淡黃褐色至深褐色。菌柄近圓柱形，近白色，中空，圓筒形，孢子長橢圓形，無色，側絲頂端膨大，體輕，質酥脆。3.2菌種Strains通過生產試驗驗證具有特異性、均一性和穩(wěn)定性，產量高、抗性強的菌株或品種，具結實性的菌絲培養(yǎng)物。包括母種、原種和栽培種。[來源：GB/T12728—2006，2.5.6，有修改]3.3母種Stockculture具有結實性的菌絲體純培養(yǎng)物及其繼代培養(yǎng)物。也稱一級種、試管種。[來源：GB/T12728—2006，2.5.7，有修改]3.4原種Pre-culturespawn3DB6111/T211—2014由母種移植、擴大培養(yǎng)而成的菌絲體純培養(yǎng)物。也稱二級種。[來源：GB/T12728—2006，2.5.8]3.5栽培種Spawn由原種移植、擴大培養(yǎng)而成的菌絲體純培養(yǎng)物。也稱為三級種。注：只用于擴大到栽培出菇袋或直接出菇，不宜再次擴大繁殖菌種。[來源：GB/T12728—2006，2.5.9，有修改]4生產要求4.1生產人員從事菌種生產的技術人員和檢驗人員，應經過專業(yè)培訓、熟練掌握菌種生產技術要求。4.2生產環(huán)境場地選擇、廠房設置和布局、設備設施應符合NY/T528的規(guī)定。4.3生產設備生產菌種的粉碎機、電子秤、攪拌機、裝袋（瓶）機、高壓滅菌鍋或常壓滅菌鍋、超凈工作臺或接種箱、恒溫培養(yǎng)箱、培養(yǎng)架、顯微鏡等設備，應符合NY/T528規(guī)定。4.4菌種來源生產原種應從具有相應資質的供種單位引進。應選擇抗性強，優(yōu)質高產、適合當?shù)卦耘嗟膬?yōu)良菌株。菌種質量符合NY/T1742的要求。4.5生產原料生產原種及栽培種所需的小麥粒、玉米芯、麥麩、石膏、石灰等主料原料的質量及貯藏應符合NY/T1935要求。生產用水應符合GB5749要求。5技術要求5.1母種5.1.1容器應選用18mm×180mm或者20mm×200mm的試管。試管棉塞應使用梳棉、化纖棉或硅膠塞。5.1.2培養(yǎng)基配方馬鈴薯200g(用浸出液)，葡萄糖20g，瓊脂20g，水1000mL，pH自然。5.1.3分裝滅菌配置好的培養(yǎng)基應立即分裝。裝量為試管長度的1/4～1/5。試管口應保持潔凈，并用試管塞封口后包扎，直立放入高壓滅菌鍋內（壓力0.12Mpa～0.15Mpa、溫度121℃~126℃),滅菌20min。5.1.4擺斜面4滅菌完成后，在壓力表指針降為0Mpa時，打開排氣閥，立即將試管趁熱擺成適當?shù)男倍?，緩慢冷卻至瓊脂凝固成長度不超過試管3/4的斜面。5.1.5接種5.1.5.1接種室(箱)處理程序清潔→搬入接種物和被接種物→接種室(箱)的消毒處理。5.1.5.2接種室(箱)消毒應藥物消毒后，再用紫外燈照射30min。5.1.5.3超凈工作臺的消毒應先用75%酒精或新潔爾滅溶液進行表面擦拭消毒，之后預凈20min。5.1.5.4接種操作在超凈工作臺上，嚴格按無菌操作要求接種。每一箱(室)接種應為單一品種，接種完成后應及時貼好標簽。5.1.5.5接種點試管斜面的中部。5.1.5.6接種室(箱)后處理接種室(箱)每次使用后，要及時清理清潔，排除廢氣，清除廢物，臺面要用75%酒精或新潔爾滅溶液擦拭消毒。5.1.6培養(yǎng)接種后，將試管置于培養(yǎng)室，在溫度16℃~20℃,空氣濕度75%以下，通風避光培養(yǎng)。定期檢查，清除污染試管。菌絲長滿試管，穩(wěn)定3d～5d即可用于原種生產。5.2原種5.2.1容器采用750mL以下、瓶口直徑≤40mm、耐126℃高溫的聚丙烯菌種瓶或玻璃瓶。5.2.2培養(yǎng)基配方小麥53%，玉米芯40%，麥麩5%，石膏1%，石灰1%。5.2.3培養(yǎng)基制備玉米芯粉碎至5mm以下，用清水浸泡24h，瀝干，堆成梯形，在堆面上每間隔30cm～50cm打1個通氣孔，用塑料薄膜遮蓋，自然發(fā)酵24h～48h備用。小麥用1%的石灰水浸泡12h后，清水煮沸15min，攪動至麥粒漲而不破立即撈出，瀝干。將發(fā)酵后的玉米芯、煮漲后的麥粒與麥麩、石膏、石灰等干原料按比例拌和均勻，含水量65%，pH值6.5～7.5。5DB6111/T211—20145.2.4裝瓶采用裝瓶機或人工，將培養(yǎng)基質裝至瓶身的3/4處，裝瓶后立即滅菌。采用人工裝瓶的，需用打孔器在瓶口處打直徑1.0cm～1.5cm、深8.0cm～12.0cm的孔。5.2.5滅菌滅菌要：a)高壓滅菌在121℃~126℃下滅菌3h～4h。b)常壓滅菌在3h之內使溫度升至100℃,恒溫保持10h～12h。5.2.6冷卻采用高壓滅菌的，滅菌結束自然降壓至0.05Mpa以下，打開排氣閥降溫20min～30min取出料袋；常壓滅菌的，滅菌結束后保持3h后取出料袋。迅速移入冷卻室，冷卻至25℃以下即可接種。5.2.7接種5.2.7.1接種室(箱)處理程序同5.1.5.1。5.2.7.2接種室(箱)消毒同5.1.5.2。5.2.7.3超凈工作臺的消毒同5.1.5.3。5.2.7.4接種操作同5.1.5.4。5.2.7.5接種點應從容器開口處一點接種，不應打孔多點接種。1支母種轉接原種不超過6瓶。5.2.7.6接種室(箱)后處理同5.1.5.6。5.2.8培養(yǎng)接種后放入培養(yǎng)室，溫度15℃~18℃,相對濕度不超過60%，避光。保持培養(yǎng)室通風良好，每天通風1～2次，每次25min～30min。15d～20d菌絲長滿全瓶后，繼續(xù)培養(yǎng)3d～5d即可用于栽培種生產。培養(yǎng)期間應定期檢查，及時揀出不合格菌種。5.3栽培種5.3.1容器宜采用15cm×28cm×0.005cm或17cm×35cm×0.005cm規(guī)格的聚丙烯（高壓滅菌）或低壓聚乙烯（常壓滅菌）折角塑料袋。65.3.2培養(yǎng)基配方同5.2.2。5.3.3培養(yǎng)基制備同5.2.3。5.3.4裝袋將培養(yǎng)料分裝在塑料袋內，松緊適度，袋口和袋外壁保持潔凈。當天拌好的料應當天裝完，并立即滅菌。5.3.5滅菌 5.3.6冷卻同5.2.6。5.3.7接種1瓶原種轉接裁培種不超過60袋，其他技術要求同5.2.7。5.3.8培養(yǎng)同5.2.8。6檢驗母種、原種和栽培種的抽樣、感官檢驗和判定按照NY/T1846中的規(guī)定執(zhí)行。7貯藏培養(yǎng)好的菌種應置于0℃~4℃的冷庫中貯存。栽培種貯存應不超過30d。8記錄與留樣8.1記錄應詳細記錄生產單位、菌種來源、生產時間、生產數(shù)量等信息。記錄表參見附錄A，保留2年以上。8.2留樣各級菌種均應按生產批次隨機抽樣留存?zhèn)洳?。每個批次抽樣留存量應不少于3支(瓶、袋)，并在1℃~4℃條件下保存至正常出菇。9標簽、標志、包裝、運輸和貯存9.1標簽、標志7DB6111/T211—2014出售的菌種應貼標簽。注明菌種品種、級別、接種日期、生產單位、地址電話等。外包裝上應有符合GB191規(guī)定的防曬、防潮、防倒立、防高溫、防雨、防重壓等標志。9.2包裝母種外包裝應用木盒或有足夠強度的紙盒、原種和栽培種外包裝用木箱或有足夠強度的紙箱包裝，盒（箱）內除菌種外的空隙應用輕質材料填滿塞牢。盒（箱）內應附使用說明書。9.3運輸菌種運輸中應有防曬、防潮、防雨、防凍、防震及防止雜菌污染的設施與措施。不得與有毒有害物品混裝混運。9.4貯存應在干燥