常用緩沖液配置

/實(shí)驗(yàn)室常用緩沖液配置方案1)1MTris-HCl(pH7.4,7.6,8.0)

組份濃度：1MTris-HCl

配制量：1L

配制方法：

1.稱量121.1gTris置于1L燒杯中。

2.加入約800ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?/p>

3.按下表量加入濃鹽酸調(diào)節(jié)所需要的pH值。PH值濃HCl7.4約70ml7.6約60ml8.0約42ml4.將溶液定容至1L。

5.高溫高壓滅菌后，室溫保存。

注意：應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定pH值，因?yàn)門ris溶液的pH值隨溫度的變化差異很大，溫度每升高1℃，溶液的pH值大約降低0.03個(gè)單位。

2)10×TEBuffer(pH7.4,7.6,8.0)

組份濃度：100mMTris-HCl,10mMEDTA

配制量：1L

配制方法：

1.量取下列溶液，置于1L燒杯中。1MTris－HClBuffer（PH7.4，7.6，8.0）100ml500mMEDTA(PH8.0)20ml2.向燒杯中加入約800ml的去離子水，均勻混合。

3.將溶液定容至1L后，高溫高壓滅菌。

4.室溫保存。3)1.5MTris-HCl(pH8.8)

組份濃度：1.5MTris-HCl

配制量：1L

配制方法：

1.稱量181.7gTris置于1L燒杯中。

2.加入約800ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?/p>

3.用濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值至8.8。

4.將溶液定容至1L。

5.高溫高壓滅菌后，室溫保存。

注意：應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定pH值，因?yàn)門ris溶液的pH值隨溫度的變化差異很大，溫度每升高1℃，溶液的pH值大約降低0.034)3M醋酸鈉(pH5.2)

組份濃度：3M醋酸鈉

配制量：100ml

配制方法：

1.稱量40.8gNaAc·3H2O置于100-200ml燒杯中，加入月40ml的去離子水?dāng)嚢枞芙?/p>

2.加入冰醋酸調(diào)節(jié)pH值至5.2

3.加去離子水將溶液定容至100ml

4高溫高壓滅菌后，室溫保存。

5)PBSBuffer

組份濃度：137mMNaCl,2.7mMKCl,10mMNa2HPO4,2mMKH2PO4

配制量：1L

配制方法：

1.稱量下列試劑，置于1L燒杯中。NaCl8gKCl0.2gNa2HPO41.42gKH2PO40.27g2.向燒杯中加入約800ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?/p>

3.滴加濃鹽酸將pH值調(diào)節(jié)至7.4，然后加入去離子水將溶液定容至1L。

4.高溫高壓滅菌后，室溫保存。

注意：上述PBSBuffer中無(wú)二價(jià)陽(yáng)離子，如需要，可在配方中補(bǔ)充1mMCaCl2和0.5mMMgCl2。

6)10M醋酸銨

組份濃度：10M醋酸銨配制量：100ml

配制方法：

1.稱量77.1g醋酸銨置于100～200ml燒杯中，加入約30ml的去離子水?dāng)嚢枞芙狻?/p>

2.加去離子水將溶液定容至100ml。

3.使用0.22mm濾膜過(guò)濾除菌。

4.密封瓶口于室溫保存。

注意：醋酸銨受熱易分解，所以不能高溫高壓滅菌。

7)苯酚/氯仿/異戊醇(25:24:1)

配制方法：

1.說(shuō)明：從核酸樣品中除去蛋白質(zhì)時(shí)常常使用苯酚/氯仿/異戊醇（25:24:1)。氯仿可使蛋白質(zhì)變性并有助于液相與有機(jī)相的分離，而異戊醇則有助于消除抽提過(guò)程中出現(xiàn)的氣泡。

2.配制方法：將Tris-HCl平衡苯酚與等體積的氯仿/異戊醇（24:1）混合均勻后，移入棕色玻璃瓶中4℃保存。8）10％(W/V)SDS

組份濃度：10％(W/V)SDS

配制量：100ml

配制方法：

1.稱量10g高純度的SDS置于100-200ml燒杯中，加入約80ml的去離子水，68℃加入溶解

2.滴加濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值至7.2

3.將溶液定容至100ml后，室溫保存。9）2NNaOH

組份濃度：2NNaOH

配制量：100ml

配制方法：

1.量取80ml去離子水置于100～200ml塑料燒杯中（NaOH溶解過(guò)程中大量放熱，有可能使玻璃燒杯炸裂)。

2.稱取8gNaOH小心地逐漸加入到燒杯中，邊加邊攪拌。

3.待NaOH完全溶解后，用去離子水將溶液體積定容至100ml。

4.將溶液轉(zhuǎn)移至塑料容器中后，室溫保存。10）2.5NHCl

組份濃度：2.5NHCl

配制量：100ml

配制方法：

1.在78.4ml的去離子水中加入21.6ml的濃鹽酸（11.6N)，均勻混合。

2.室溫保存。

11）5MNaCl

組份濃度：5MNaCl

配制量：1L

配制方法：

1.稱取292.2gNaCl置于1L燒杯中，加入約800ml的去離子水后攪拌溶解。

2.加去離子水將溶液定容至1L后，適量分成小份。

3.高溫高壓滅菌后，4℃保存。11）20％(W/V)Glucose

組份濃度：20％(W/V)Glucose

配制量：100ml

配制方法：

1.稱取20gGlucose置于100～200ml燒杯中，加入約80ml的去離子水后，攪拌溶解。

2.加去離子水將溶液定容至100ml。

3.高溫高壓滅菌后，4℃12）SolutionI(質(zhì)粒提取用)

組份濃度：25mMTris-HCl（pH8.0),10mMEDTA,50mMGlucose

配制量：1L

配制方法：

1.量取下列溶液，置于1L燒杯中。1MTris-HCl（PH8.0）25ml0.5MEDTA（PH8.0）20ml20％Glucose（1.11M）45mldH2O910ml2.高溫高壓滅菌后，4℃保存。

3.使用前每50ml的SolutionI中加入2ml的RNaseA（20mg/ml)13）SolutionII(質(zhì)粒提取用)

組份濃度：200mMNaOH，1％(W/V)SDS

配制量：500ml

配制方法：

1.量取下列溶液，置于500ml燒杯中

10％SDS50ml

2NNaOH50ml

2.加滅菌水定容至500ml，充分混勻

3.室溫保存，此溶液保存時(shí)間最好不要超過(guò)一個(gè)月

注意：SDS易產(chǎn)生氣泡，不要?jiǎng)×覕嚢?4）SolutionIII(質(zhì)粒提取用)

組份濃度：3MKOAc,5MCH3COOH

配制量：500ml

配制方法：

1.稱量下列試劑，置于500ml燒杯中。KOAc

147g

CH3COOH57.5ml2.加入300ml去離子水后攪拌溶解。

3.加去離子水將溶液定容至500ml。

4.高溫高壓滅菌后，4℃15）0.5MEDTA(pH8.0)

組份濃度：0.5MEDTA

配制量：1L

配制方法：稱取186.1gNa2EDTA·2H2O，置于1L燒杯中。

2.加入約800ml的去離子水，充分?jǐn)嚢琛?/p>

3.用NaOH調(diào)節(jié)pH值至8.0（約20gNaOH)。

注意：pH值至8.0時(shí)，EDTA才能完全溶解。

4.加去離子水將溶液定容至1L。

5.適量分成小份后，高溫高壓滅菌。

6.室溫保存。16）1MDTT組份濃度：1MDTT

配制量：20ml

配制方法：

1.稱取3.09gDTT，加入到50ml塑料離心管內(nèi)。

2.加20ml的0.01MNaOAc（pH5.2)，溶解后使用0.22mm濾器過(guò)濾除菌。

3.適量分成小份后，-20℃保存。17）10mMATP

組份濃度：10mMATP

配制量：20ml

配制方法：

1.稱取121mgNa2ATP·3H2O，加入到50ml塑料離心管內(nèi)。

2.加20ml的25mMTris-HCl（pH8.0)，攪拌溶解。

3.適量分成小份后，-20℃一.常用貯液與溶液1mol/L亞精胺（Spermidine）:溶解2.55g亞精胺于足量的水中，使終體積為10ml。分裝成小份貯存于-20℃1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使終體積為10ml。分裝成小份貯存于-20℃10mol/L乙酸胺（ammoniumacetate）：將77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔徑的濾膜過(guò)濾除菌。10mg/ml牛血清蛋白(BSA）：加100mg的牛血清蛋白（組分V或分子生物學(xué)試劑級(jí)，無(wú)DNA酶）于9.5ml水中（為減少變性，

須將蛋白加入水中，而不是將水加入蛋白），蓋好蓋后，輕輕搖動(dòng)，直至牛血清蛋白完全溶解為止。不要渦旋混合。加水定容到10ml，然后分裝成小份貯存于-20℃1mol/L二硫蘇糖醇（DTT）：在二硫蘇糖醇5g的原裝瓶中加32.4ml水，分成小份貯存于-20℃?；蜣D(zhuǎn)移100mg的二硫蘇糖醇

至微量離心管，加0.65ml的水配制成1mol/L8mol/L乙酸鉀（potassiumacetate）：溶解78.5g乙酸鉀于足量的水中，加水定容到100ml。1mol/L氯化鉀（KCl）：溶解7.46g氯化鉀于足量的水中，加水定容到100ml。3mol/L乙酸鈉（sodiumacetate）：溶解40.8g的三水乙酸鈉于約90ml水中，用冰乙酸調(diào)溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。0.5mol/LEDTA:配制等摩爾的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三鈉鹽。或稱取186.1g的Na2EDTA·2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。1mol/LHEPES：將23.8gHEPES溶于約90ml的水中，用NaOH調(diào)pH（6.8-8.2），然后用水定容至100ml。1mol/LHCl：加8.6ml的濃鹽酸至91.4ml的水中。25mg/mlIPGT：溶解250mg的IPGT（異丙基硫代-β-D-半乳糖苷）于10ml水中，分成小份貯存于-20℃1mol/LMgCl2:溶解20.3gMgCl2·6H2O于足量的水中，定容到100ml。100mmol/LPMSF：溶解174mg的PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量的異丙醇中，定容到10ml。分成小份并用鋁箔將裝液管包裹

或貯存于-20℃20mg/ml蛋白酶K（proteinaseK）：將200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中，輕輕搖動(dòng)，直至蛋白酶K完全溶解。不要渦旋混合。加水定容到10ml，然后分裝成小份貯存于-20℃10mg/mlRnase（無(wú)DNase）（DNase－freeRNase）：溶解10mg的胰蛋白R(shí)NA酶于1ml的10mmol/L的乙酸鈉水溶液中（pH5.0）。溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。用1mol/L的Tris－HCl調(diào)pH至7.5，于-20℃5mol/L氯化鈉（NaCl）：溶解29.2g氯化鈉于足量的水中，定容至100ml。10N氫氧化鈉（NaOH）：溶解400g氫氧化鈉顆粒于約0.9L水的燒杯中（磁力攪拌器攪拌），氫氧化鈉完全溶解后用水定容至1L。10％SDS（十二烷基硫酸鈉）：稱取100gSDS慢慢轉(zhuǎn)移到約含0.9L的水的燒杯中，用磁力攪拌器攪拌直至完全溶解。用水定容至1L。2mol/L山梨（糖）醇（Sorbitol）：溶解36.4g山梨（糖）醇于足量水中使終體積為100ml。100％三氯乙酸（TCA）:在裝有500gTCA的試劑瓶中加入100ml水，用磁力攪拌器攪拌直至完全溶解。（稀釋液應(yīng)在臨用前配制）2.5％X－gal（5-溴-4-氯-3-吲哚－β-半乳糖苷）：溶解25mg的X－gal于1ml的二甲基甲酰胺（DMF）,用鋁箔包裹裝液管，貯存于-20℃100×Denhardt試劑（Denhardt'sregent）成分與終濃度配制100ml溶液各成分的用量2％聚蔗糖（Ficoll，400型）

2％聚乙烯吡咯烷酮（PVP-40）

2％BSA（組分V）

水2g

2g

2g

加水至總體積為100ml依照上表稱取各組分，溶于水中定容。過(guò)濾除菌與雜質(zhì)，分裝成小份于-20℃貯存。10×標(biāo)準(zhǔn)DNA連接酶緩沖液（standardDNAligasebuffer）（粘端、平端連接）成分與終濃度配制10ml溶液各成分的用量0.5mol/LTris-HCl

100mmol/LMgCl2

100mmol/LDTT

2mmol/LATP

5mmol/L鹽酸亞精胺（可選）

0.5mg/mlBSA（組分V）（可選）

水5ml1mol/L貯液

1ml1mol/L貯液

1ml1mol/L貯液

200ul100mmol/L貯液

50ul1mmol/L貯液

0.5ml10mg/mL貯液

2.25ml

將配制好的緩沖液分裝成小份，貯存于-20℃100mmol/LdNTP溶液（dNTPsolutions）

可以購(gòu)買到100mmol/L純dNTPs貯液，-80℃可貯存至少610mmol/LdNTP混合液成分與終濃度配制20ul溶液各成分的用量10mmol/LdATP

10mmol/LdCTP

10mmol/LdGTP

10mmol/LdTTP

水2ul100mmol/LdATP貯液

2ul100mmol/LdCTP貯液

2ul100mmol/LdGTP貯液

2ul100mmol/LdTTP貯液

12ul20％PEG8000/2.5MNaCl成分與終濃度配制10ml溶液各成分的用量質(zhì)量濃度為20％聚乙二醇

2.5mol/L氯化鈉

水20g

50ml5mol/L氯化鈉或14.6g固體氯化鈉

補(bǔ)足100ml

加聚乙二醇于含有氯化鈉的燒杯中，加水至終體積100ml，用磁力攪拌器攪拌溶解。20×SSC成分與終濃度配制1L溶液各成分的用量300mmol/L檸檬酸三鈉（二水）

3mol/L氯化鈉

水88.2g

175.3g

補(bǔ)足1L

溶解檸檬酸三鈉（二水）和氯化鈉于約0.9L水中，加幾滴10NNaOH溶液調(diào)pH為7.0，用水補(bǔ)足體積至1L。DEPC（焦碳酸二乙酯）處理水

加100ulDEPC于100ml水中，使DEPC的體積分?jǐn)?shù)為0.1％。在37℃溫浴至少12h，然后在15psi條件下高壓滅菌20min，以使殘余的DEPC失活。DEPC會(huì)與胺起反應(yīng)，不可用DEPC處理Tris甲酰胺（deionizedformamide）

直接購(gòu)買或加DowexXG8混合樹脂于裝有甲酰胺的玻璃燒杯中，用磁力攪拌器輕輕攪拌1h，可去除甲酰胺中的離子。經(jīng)Whatman1號(hào)濾紙過(guò)濾除去樹脂后分成小份，充氮?dú)庥?80℃貯存（防止氧化）。磷酸緩沖液（phosphatebuffer）

按照下表所給定的體積，混合1mol/L的磷酸二氫鈉（單堿）和1mol/L磷酸氫二鈉（雙堿）貯液，獲得所需pH的磷酸緩沖液。配制1mol/L的磷酸二氫鈉（NaH2PO4·H2O）貯液：溶解138g于足量水中，使終體積為1L;1mol/L磷酸氫二鈉（Na2HPO4）貯液:溶解142g于足量水中使終體積為1L。1mol/L磷酸二氫鈉（ml）1mol/L磷酸氫二鈉（ml）最終pH值877

850

815

775

735

685

625

565

510

450

390

330

280123

150

185

225

265

315

375

435

490

550

610

670

7206.0

6.1

6.2

6.3

6.4

6.5

6.6

6.7

6.8

6.9

7.0

7.1

7.2TE（用于懸浮和貯存DNA）成分與終濃度配制100ml溶液各成分的用量10mmol/LTris－HCl

1mmol/LEDTA

水1ml1mol/LTris-HCl（pH7.4-8.0，25℃）

200ul0.5mol/LEDTA（pH8.0）Tris緩沖液（Tris-HClbuffer）

將121g的Tris堿溶解于約0.9L水中，再根據(jù)所要求的pH（25℃下）加一定量的濃鹽酸（11.6N），用水調(diào)整終體積至1L濃鹽酸的體積（ml）pH8.6

14

21

28.5

38

46

56

66

71.3

769.0

8.8

8.6

8.4

8.2

8.0

7.8

7.6

7.4

7.2二.電泳緩沖液、染料和凝膠加樣液電泳緩沖液50×Tris-乙酸（TAE）緩沖液成分與終濃度配制1L溶液各成分的用量2mol/LTris堿

1mol/L乙酸

100mmol/LEDTA

水242g

57.1ml的冰乙酸（17.4mol/L）

200ml的0.5mol/LEDTA（pH8.0）

補(bǔ)足1L5×Tris-硼酸（TBE）緩沖液成分與終濃度配制1L溶液各成分的用量445mmol/LTris堿

445mmol/L硼酸鹽

10mmol/LEDTA

水54g

27.5g硼酸

20ml的0.5mol/LEDTA（pH8.0）

補(bǔ)足1L染料1％溴酚藍(lán)（bromophenolblue）

加1g水溶性鈉型溴酚藍(lán)于100ml水中，攪拌或渦旋混合直到完全溶解。1％二甲苯青FF（xylenecyanoleFF）

溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml。10mg/ml的溴化乙錠（ethidiumbromide）

小心稱取1g溴化乙錠，轉(zhuǎn)移到廣口瓶中，加100ml水，用磁力攪拌器攪拌直到完全溶解。用鋁箔包裹裝液管，于4℃凝膠上樣液（gelloadingsolutions）

6×堿性凝膠上樣液（室溫貯存）成分與終濃度配制10ml溶液各成分用量0.3N氫氧化鈉

6mmol/LEDTA

18％聚蔗糖（400型）

0.15％溴甲酚綠

0.25％二甲苯青FF

水300ul10N氫氧化鈉

120ul0.5mol/LEDTA（pH8.0）

1.8g

15mg

25mg

補(bǔ)足到10ml6×聚蔗糖凝膠上樣液（室溫貯存）成分與終濃度配制10ml溶液各成分用量0.15％溴酚藍(lán)

0.15％二甲苯青FF

5mmol/LEDTA

15％聚蔗糖（400型）

水1.5ml1％溴酚藍(lán)

1.5ml1％二甲苯青FF

100ul0.5mol/LEDTA（pH8.0）

1.5g

補(bǔ)足到10ml6×溴酚藍(lán)/二甲苯青/聚蔗糖凝膠上樣液（室溫貯存）成分與終濃度配制10ml溶液各成分用量0.25％溴酚藍(lán)

0.25％二甲苯青FF

15％聚蔗糖（400型）

水2.5ml1％溴酚藍(lán)

2.5ml1％二甲苯青FF

1.5g

補(bǔ)足到10ml6×甘油凝膠上樣液（4℃成分與終濃度配制10ml溶液各成分用量0.15％溴酚藍(lán)

0.15％二甲苯青FF

5mmol/LEDTA

50％甘油

水1.5ml1％溴酚藍(lán)

1.5ml1％二甲苯青FF

100ul0.5mol/LEDTA（pH8.0）

3ml

3.9ml6×蔗糖凝膠上樣液（室溫貯存）成分與終濃度配制10ml溶液各成分用量0.15％溴酚藍(lán)

0.15％二甲苯青FF

5mmol/LEDTA

40％聚蔗糖

水1.5ml1％溴酚藍(lán)

1.5ml1％二甲苯青FF

100ul0.5mol/LEDTA（pH8.0）

4g

補(bǔ)足到10ml10×十二烷基硫酸鈉/甘油凝膠上樣液（室溫貯存）成分與終濃度配制10ml溶液各成分用量0.2％溴酚藍(lán)

0.2％二甲苯青FF

200mmol/LEDTA

0.1％SDS

50％甘油

水20mg

20mg

4ml0.5mol/LEDTA(pH8.0)

100ul10％SDS

5ml

補(bǔ)足到10ml三.常用培養(yǎng)基1）LB培養(yǎng)基

將下列組分溶解在0.9L水中：蛋白胨10g酵母提取物5g氯化鈉10g如果需要用1NNaOH（～1ml）調(diào)整pH至7.0，再補(bǔ)足水至1L。注：瓊脂平板需添加瓊脂粉12g/L,上層瓊脂平板添加瓊脂粉7g/L。SOB培養(yǎng)基

將下列組分溶解在0.9L水中：蛋白胨20g酵母提取物5g氯化鈉0.5g1mol/L氯化鉀2.5ml

用水補(bǔ)足體積到1L。分成100ml的小份，高壓滅菌。培養(yǎng)基冷卻到室溫后，再在每100ml的小份中加1ml滅過(guò)菌的1mol/L氯化鎂。2）SOC培養(yǎng)基

成分、方法同SOB培養(yǎng)基的配制，只是在培養(yǎng)基冷卻到室溫后，除了在每100ml的小份中加1ml滅過(guò)菌的1mol/L氯化鎂外，再加2ml滅菌的1mol/L葡萄糖（18g葡萄糖溶于足夠水中，再用水補(bǔ)足到100ml，用0.22um的濾膜過(guò)濾除菌）。3）TB培養(yǎng)基

將下列組分溶解在0.9L水中：蛋白胨12g酵母提取物24g甘油4ml各組分溶解后高壓滅菌。冷卻到60℃，再加100ml滅菌的170mmol/LKH2PO4/0.72mol/LK2HPO4的溶液（2.31g的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中，使終體積為100ml。高壓滅菌或用0.22um的濾膜過(guò)濾除菌）。4）2×YT培養(yǎng)基

將下列組分溶解在0.9L水中：蛋白胨16g酵母提取物10g氯化鈉4ml如果需要用1NNaOH（～1ml）調(diào)整pH至7.0，再補(bǔ)足水至1L。注：瓊脂平板需添加瓊脂粉12g/L,上層瓊脂平板添加瓊脂粉7g