XRCC1基因多態(tài)性與膀胱癌關系的病例對照研究

1/1XRCC1基因多態(tài)性與膀胱癌關系的病例對照研究XRCC1基因多態(tài)性與膀胱癌關系的病例對照研究XRCC1基因多態(tài)性與膀胱癌關系的病例對照研究作者：

張薇，項永兵，程家蓉，邵常霞，方茹蓉，袁劍敏，高玉堂【摘要】［目的］探討人類DNA修復基因XRCC1Arg194Trp單核苷酸多態(tài)性與膀胱癌危險性的關系。

［方法］采用PCR,RFLP分析技術檢測242例膀胱癌患者及225例人群對照XRCC1基因194位點的多態(tài)性。

應用非條件Logistic回歸模型，調整混雜因素后,分析各基因型與膀胱癌發(fā)生的關系以及是否與吸煙因素存在著交互作用。

［結果］膀胱斤癌病例組的194Trp/Trp突變基戤因型頻率顯著高于對照組(%)。

調整年眚齡、性別、吸煙、高危職業(yè)史、膀胱感染煽和體質指數(shù)等因素后，攜帶194Trp/Trp基因型個體患膀胱癌的風險是194Arg/Arg基因型個體的倍(9┣5%CI：

～)。

此基因型與吸煙對增加膀胱癌發(fā)病風險無明顯交互作用。

去除了淋吸煙的混雜效應后，194Trp/Tr卞p基因型個體患膀胱癌的危險性是其它基幔因型個體的倍(95%CI：

～)。

［結ㄒ論］XRCC1基因194Trp/Tr黿p突變基因型增加膀胱癌發(fā)病風險，與吸誕煙無交互作用。

【關鍵詞】膀胱腫瘤枕病例對照研究XRCC1單核苷酸多態(tài)性吸煙流行病學Abstract:［P籜urpose］Toinvestigatetherelationshipbetweenthecodon194arganinetotryptopha頷nsubstitutionpolym痹orphismofX,rayrepaㄌircrosscomplementi腥nggroup1(XRCC1)andbladdercancerriski踺napopulation,based鯰case,controlstudy.幀［Methods］Apolymera仟sechainreaction,baぅsedassaywasusedtodetectPvuⅡrestricti︽onfragmentlengthpo繆lymorphismsin242pa淫tientswithbladderc脧ancerand225healthy鴿controls.Afteradju秋stedforage,sex,smo霍king,highriskoccup購ation,bladderinfec喳tionandbodymassind骨ex,interactioneffe鋪ctsofthegenotypesa犖ndbladdercancerriskwasestimatedusing〈unconditionalLogis恿ticregression.［Res味ults］Thefrequencyo只fXRCC1codon194Trp/冷Trpgenotypeinthecaくsegroup(%)wassigni嶷ficantlyhigherthan匾thatinthecontrolgr蝎oup(%).Theindividu憔alscarrying194Trp/ぞTrpgenotypehadasig奧nificantlyincrease楊driskforbladdercancer(OR=,95%CI:～).Tゲherewasnoevidenceo圻finteractionbetwee猞nXRCC1codon194Trp/酷Trpgenotypeandtoba儷ccosmoking.Mantel,Haenszelstratified幅analysisrevealedth銣attheindividualcar瀅rying194Trp/Trpgen黟otypewasassociatedwithasignificantin簋creasedriskforbladㄡdercancer(adjusted鬮OR=,95%CI:～)comparのedthosewith194Arg/殄Arggenotype.［Conclusion］Thegenotypeo體fXRCC1194Trp/Trpmi毖ghtbeassociatedwit抒htheriskofbladdercancer,butthegenoty碣pemightnotinteractヌwithtobaccosmoking鈹toincreasetherisko鴆fbladdercancer.Ke夤ywords:bladderneop氓lasms;case,control塌study;XRCC1;polymorphism;cigarettesm郅oking;epidemiology韉膀胱癌是我國常見惡性腫瘤之一，多發(fā)長于男性。

2001年上海市區(qū)膀胱癌新發(fā)戎病例569例，男、女性世界標化發(fā)病率瓚分別為/10萬和/10萬[1]。

吸煙攘是膀胱癌病因中最重要的因素，吸煙者罹滲患膀胱癌的危險性是不吸煙者的2～4倍隆，且隨著每日吸煙量的增加、吸煙年限的收延長、開始吸煙年齡的提前和煙霧吸入深魏度的增加而增加。

估計25%～60%男喹性膀胱癌和20%～32%女性病例可歸亻因于此。

另一個已知的病因是職業(yè)性接觸跛某些芳香胺[2]。

最近的研究顯示，熱XRCC1基因多態(tài)性與頭頸部、肺、食屯管、胃、結腸、胰腺、膀胱以及前列腺癌決等腫瘤的風險相關[3~14]。

但在膀據(jù)胱癌方面少見詳細報道。

本研究在以往病貿例對照研究的基礎上，進一步探索X射線損傷修復交叉互補基因1Arg194T叼rp單核苷酸多態(tài)性對膀胱癌發(fā)生的可能》影響，并探討吸煙因素與基因多態(tài)的交互塾作用對患癌風險的影響。

1材料與方靶法研究對象通過上海市腫瘤登記處的盲發(fā)病登記，共訪問到上海市區(qū)膀胱癌新病迭例608例和人群對照607例，具體調捃查方法及變量定義詳見文獻[15]。

按百照知情同意原則，調查人員在家訪時預約孜抽取外周靜脈血15ml，置于含有肝素熙抗凝血的采血管內，并于6h內放保溫袋◎送至實驗室登記，初步處理后置于-70臟℃低溫冰箱保存，直至DNA抽提。

病例趄組與對照組的采血率分別為%和%。

本次研究從中抽取250對病例和對照血樣進似行XRCC1Arg194Trp基因型柬測定，最終成功獲得XRCC1Arg194Trp基因型467例。

基因型分則析基因組DNA提取應用Promeg鰥a公司DNA提取試劑盒。

用Beckm醚an公司640分光光度計進行DNA定訣量及純度分析。

用聚合酶鏈反應限制性鞫片段長度多態(tài)性分析技術檢測研究對象的カXRCC1Arg194Trp基因型。

腫XRCC1全基因序列來自基因庫，所用引物序列為5,GCCAGGGCCCCTCCTTCAA,3和5,TAěCCCTCAGACCCACGAGT,但3，擴增片段為485bp。

PCR反⒌應體積50l:內含g模板DNA，彌mol/L各引物，/LdNTPs，餛/LMgCl2，Taq聚合酶及l(fā)反茳應緩沖液。

PCR反應條件為：

94℃預變性4min后，于94℃變性35s，60℃退火40s和72℃延伸1min茭進行35個循環(huán)，最后72℃延伸4mi魄n，4℃保存。

取5l含Arg194Trp的PCR產物與限制性核酸內切酶PvuⅡ于37℃溫育過夜。

酶切產物于豪2%瓊脂糖凝膠電泳分析。

如圖1所示，鏍第194密碼子CT突變后可被Pvu︻Ⅱ識別，酶切產物有396bp和89b壩p兩個片段；雜合子則產生485bp，氬396bp和89bp三個片段，而野生型只有485bp一個片段。

質量控制稃現(xiàn)場調查的質量控制詳見文獻[15]嗖。

實驗室質量控制如下：

實驗采用雙盲法化進行。

實驗前，先抽取一部分樣品進行預實驗，充分估計實驗中可能遇到的問題。

實驗過程中嚴格遵守實驗操作規(guī)程預防交哲叉感染。

為確定實驗的可靠性，設立陽性鄙陰性對照，隨機抽取10%樣品進行重復矍實驗，并隨機抽取兩個樣品測序證實其真實性。

統(tǒng)計分析設計Access數(shù)铘據(jù)庫進行原始數(shù)據(jù)輸入，資料的整理與分燕析采用SPSS統(tǒng)計軟件包。

采用2檢氪驗比較各基因型在病例與對照以及人口學尢特征、不同吸煙狀況等分布的差異。

以比建值比(oddsratio,OR)及其祚95%可信區(qū)間(confidence篋interval,CI)表示各種基因鉻型與膀胱癌危險的相關性。

所有的檢驗均快為雙側概率檢驗，檢驗水準=。

2結艉果病例組和對照組均衡性檢驗進入分祛析的病例組和對照組分別為242例和225例，研究對象的人口學特征和相關危材險因素見表1。

病例組與對照組在性別、餑年齡、教育程度、婚姻狀態(tài)和出生地等方呂面的均衡性較好，但與對照組相比，病例組吸煙、有膀胱感染史及高體質指數(shù)的比鉭例較大，雖然未發(fā)現(xiàn)年齡和職業(yè)因素在病砬例和對照組間的分布有顯著性差異，但這聱兩者與膀胱癌的發(fā)生關系較密切，為了避浯免混雜因素對結果產生影響，在隨后分析判中調整了性別、年齡、吸煙、高危職業(yè)、歌膀胱感染和體質指數(shù)。

XRCC1Ar烏g194Trp基因型分布對照人群X斬RCC1194Arg/Arg，Arg/Trp和Trp/Trp基因型頻率分ㄨ別為%，%和%，而膀胱癌病例組分別為賕%，%和%，差異有顯著性。

研究人群1尼94Trp和194Arg等位基因頻率樾分別為%和%，經遺傳平衡檢驗，Arg萆194Trp位點各基因型的分布符合H遐ardy,WEinbery遺傳平衡定［律，表明樣本具有良好的代表性。

XRCC1Arg194Trp基因型與膀胱癌的關系膀胱癌病例組的Trp/Tr咆p突變基因型頻率高于對照組。

調整年齡嶼、性別、吸煙、高危職業(yè)史、體質指數(shù)和膀胱感染等因素后，此基因型個體發(fā)生膀簦胱癌風險是Arg/Arg基因型個體的狀倍(95%CI：

～)。

其中，男性攜帶櫧Trp/Trp基因型個體發(fā)生膀胱癌風相險是Arg/Arg基因型個體的倍(9侑5%CI：

～)，女性相應的OR值為。

見表2。

吸煙狀況與XRCC1Arg耪194Trp基因型的關系病例組與對蠐照組吸煙狀況不同(2=，P=)，考紂慮吸煙是已確認的膀胱癌危險因素，故按Ш個體的吸煙狀況進行了分層分析。

各層OＯR值分別為倍(95%CI：

～)和倍。

謊一致性檢驗結果表明層間同質；分層卡方幔檢驗提示去除了吸煙的混雜作用后，Tr鰣p/Trp基因型與膀胱癌的發(fā)生有關；虢合并ORMH=(95%CI：

～)，說機明去除了吸煙的混雜效應后，Trp/T┵rp基因型個體患膀胱癌的危險性大約是●其它基因型個體的倍。

見表3。

為了評嚀價XRCC1Arg194Trp基因型菜是否與吸煙因素存在交互作用，我們將攜帶Arg/Arg基因型的不吸煙個體作為參比組，根據(jù)吸煙年限、吸煙支數(shù)、吸煙包年、是否吸入香煙煙霧分別進行了叉怊生分析。

結果顯示，調整年齡、性別、高褰危職業(yè)、膀胱感染和體質指數(shù)后，開始吸僬煙年齡大于25歲且攜帶Arg/Arg饣基因型個體罹患膀胱癌的危險性為參比組佑的倍，開始吸煙年齡小于25歲且攜帶Arg/Arg基因型個體罹患膀胱癌的危坯險性是參比組的倍，而開始吸煙年齡小于В25歲且攜帶Trp/Trp基因型個體罹患膀胱癌的OR值是。

在其它吸煙因素趺叉生分析中也觀察到相似結果，提示雖然逅膀胱癌的危險性隨著吸煙水平的增加而增頓加，Trp/Trp基因型個體罹患膀胱蕈癌的危險性可能更大。

相乘模型交互作用濤檢驗結果未發(fā)現(xiàn)吸煙與XRCC1194必Trp/Trp基因型有明顯交互作用。

雒3討論膀胱癌的病因迄今尚未完全冶闡明，但許多流行病學研究結果顯示吸煙樹、職業(yè)性接觸某些芳香胺、泌尿系統(tǒng)感染篤等可能是引起膀胱癌的重要病因[2]。

趣香煙中含有多環(huán)芳烴、芳香胺和N,亞硝賦基化合物等多種致癌物質，環(huán)境致癌物經伶代謝活化后產生的親電子物質及細胞在生雇理或者炎癥等病理狀態(tài)下產生的反應活性簡物質(如氧自由基、脂質過氧化物、一氧ｎ化碳、親電子烷化劑等)均可引起DNA詁損傷，如果這些損傷不能及時有效地修復，將導致基因不穩(wěn)定性增加，誘發(fā)細胞癌您變。

DNA損傷修復是一個涉及許多酶和蛋白質參與的復雜過程，其中任何一個基憾因表達降低或功能缺陷都會影響相應的修榮復能力[16]。

人類X射線損傷修復交鶉叉互補基因1是一種重要的DNA修復基猿因，定位于，它編碼的蛋白質與DNA連殘接酶Ⅲ相互作用，修復DNA單鏈斷裂，魎并與DNA聚合酶一起進行堿基切除修魴復[17~19]。

對人類XRCC1基醋因DNA序列分析的結果顯示，存在三個浪會導致對應氨基酸發(fā)生變化的非保守性位崽點，它們分別是C26304T、G27酋466A和G28152A[20]。

其澀中，26304位點CT的變異，可導裔致194密碼子編碼氨基酸ArgTr粳p改變，從位置上看，194密碼子位于錫XRCC1蛋白質與DNA聚合酶結合才區(qū)域和與PARP結合區(qū)域之間，因此該變異可能改變XRCC1的功能，從而影繃響個體的腫瘤易感性。

本研究顯示上海企市區(qū)人群的194Trp等位基因頻率為ａ26%，與已報道的中國河南林縣[3]蘞、江蘇淮安[4]、臺灣[5]及美國舊括金山[20]等地區(qū)人群非常相近，高于慣文獻報道的埃及人[6]、高加索人[7鏑]和非洲裔美國人[8]。

提示XRCC禪1基因Arg194Trp基因型存在著滄種族和地域的差異。

本研究發(fā)現(xiàn)XRC藤C1Arg194Trp單核苷酸多態(tài)與腚膀胱癌易感性的關系不受年齡、性別及吸ｌ煙、職業(yè)等因素的影響，說明194Trいp等位基因是膀胱癌的獨立危險因素。

雖訪然吸煙是膀胱癌的危險因素，但本研究未蟀發(fā)現(xiàn)XRCC1基因Arg194Trp沔多態(tài)與吸煙有增加膀胱癌危險性的交互作用存在。

本研究結果與部分相關研究報道鷚的結果相符，如Xing等[3]檢測了㈡433例中國河南林縣食管癌患者和524例正常對照XRCC1基因194Ar禰g/Trp多態(tài)性，結果發(fā)現(xiàn)，攜帶194Trp/Trp基因型者發(fā)生食管癌的危險性比194Arg/Arg或194侏Arg/Trp基因型增加倍(95%C乓I：

～)。

Chen等[9]對中國人群艿109例肺癌患者和109例正常對照的作研究發(fā)現(xiàn)，194Trp/Trp基因型個體發(fā)生肺癌的相對危險性增加(OR=欏，95%CI：

~)。

但也有資料顯示X妯RCC1194Trp等位基因與腫瘤風右險無關[5,6,10～12]。

甚至在砟某些研究中，得出的結論與本實驗結果相厚反，即發(fā)現(xiàn)194位點變異降低某些部位腫瘤的發(fā)病風險[4,8,13,14]倚，Stern等[13]對235例膀胱珩癌患者和213例對照人群的研究發(fā)現(xiàn)，霞至少攜帶一個194Trp變異基因型的痛個體與Arg/Arg純合野生型相比，檎發(fā)生膀胱癌的相對危險性降低，此多態(tài)位蟄點與吸煙無交互作用。

Shen等[4]淖對188例胃癌患者和166例對照人群的研究發(fā)現(xiàn),與Arg/Trp基因型和芩Trp/Trp基因型相比，Arg/A悅rg基因型患胃賁門癌的相對危險性顯著蓁增加(OR=，95%CI：

～)，提示廠Trp等位基因可能降低個體的胃賁門癌隰易感性。

有關XRCC1單核苷酸多態(tài)性捺與腫瘤易感性關系的研究結果尚存在很大髀分歧，這一方面可能與研究對象的種族差耶異、環(huán)境暴露的差異、疾病種類有關，另溽一方面可能與樣本量大小、對混雜因素的臾控制以及對修飾因素的分析等有關。

本骰研究建立在以人群為基礎的病例對照研究上，樣本量較大，質量控制嚴格，研究中櫸充分地考慮了可能混雜因素的影響，為X媳RCC1基因多態(tài)性與膀胱癌關系的評價提供了有價值的線索。

但膀胱癌的發(fā)生是環(huán)境因素與遺傳因素共同作用的結果，除町了吸煙、職業(yè)等危險因素外，還涉及多種矽原癌基因的激活和許多抑癌基因的突變失左活，就DNA修復基因本身而言，除了XRCC1外，還有XRCC3、XPD等ジ，因此XRCC1基因194位點的多態(tài)グ性在膀胱癌中的作用有待于進一步研究。

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