重組DNA技術(shù)的基本工具課件【知識(shí)精講精研】高二下學(xué)期生物人教版（2019）選擇性必修3

選擇性必修3生物技術(shù)與工程——第3章基因工程2019-2020年普通高等學(xué)校招生全國(guó)統(tǒng)一考試大綱(生物)現(xiàn)代生物科技專題知識(shí)內(nèi)容要求6-1基因工程

(1)基因工程的誕生(2)基因工程的原理及技術(shù)(含PCR技術(shù))(3)基因工程的應(yīng)用(4)蛋白質(zhì)工程ⅠⅡⅡⅠ6-2克隆技術(shù)

(1)植物的組織培養(yǎng)(2)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)與體細(xì)胞克隆(3)細(xì)胞融合與單克隆抗體ⅡⅡⅡ6-3胚胎工程

(1)動(dòng)物胚胎發(fā)育的基本過程與胚胎工程的理論基礎(chǔ)(2)胚胎干細(xì)胞的移植(3)胚胎工程的應(yīng)用ⅠⅠⅡ2019-2020年普通高等學(xué)校招生全國(guó)統(tǒng)一考試大綱(生物)現(xiàn)代生物科技專題知識(shí)內(nèi)容要求6-4生物技術(shù)的安全性和倫理問題

(1)轉(zhuǎn)基因生物的安全性(2)生物武器對(duì)人類的威脅(3)生物技術(shù)中的倫理問題ⅠⅠⅠ6-5生態(tài)工程

(1)簡(jiǎn)述生態(tài)工程的原理(2)生態(tài)工程的實(shí)例ⅡⅠ實(shí)驗(yàn)要求7-1基因工程(1)DNA的粗提取與鑒定實(shí)驗(yàn)與探究能力Ⅰ.對(duì)所列知識(shí)點(diǎn)要知道其含義，能夠在試題所給予的相對(duì)簡(jiǎn)單的情境中識(shí)別和使用它們。Ⅱ.理解所列知識(shí)和其他相關(guān)知識(shí)之間的聯(lián)系和區(qū)別，并能在較復(fù)雜的情境中綜合運(yùn)用其進(jìn)行分析、判斷、推理和評(píng)價(jià)?？季V要求歷年年考情(1)基因工程的誕生(l)[2017全國(guó)Ⅰ，T38(5)](2)基因工程的原理及技術(shù)(含PCR技術(shù))(ll)[2017全國(guó)Ⅰ，T38(1)(2)(3)(4)][2017全國(guó)Ⅲ，T38(1)(2)](2016全國(guó)Ⅰ，T40)(2014全國(guó)Ⅱ，T40)[2013全國(guó)Ⅰ，T40(1)](3)基因工程的應(yīng)用(ll)(2017全國(guó)Ⅱ，T38)(2015全國(guó)Ⅰ，T40)(4)蛋白質(zhì)工程(l)(2015全國(guó)Ⅱ，T40)[2013全國(guó)Ⅰ，T40(2)]選修三

2014-2020年全國(guó)卷考察內(nèi)容一覽2019全國(guó)Ⅰ卷細(xì)胞工程2019全國(guó)Ⅱ卷生態(tài)工程2019全國(guó)Ⅲ卷基因工程、胚胎工程2019全國(guó)Ⅰ卷基因工程、PCR技術(shù)2019全國(guó)Ⅱ卷植物組織培養(yǎng)技術(shù)2019全國(guó)Ⅲ卷植物組織培養(yǎng)技術(shù)2018全國(guó)Ⅰ卷基因工程2018全國(guó)Ⅱ卷基因工程、PCR技術(shù)2018全國(guó)Ⅲ卷胚胎工程、細(xì)胞工程-核移植2017新課標(biāo)Ⅰ卷基因工程、基因組文庫(kù)2017新課標(biāo)Ⅱ卷基因工程、cDNA文庫(kù)2017新課標(biāo)Ⅲ卷基因工程、PCR技術(shù)、細(xì)胞工程-細(xì)胞培養(yǎng)2016新課標(biāo)Ⅰ卷基因工程2016新課標(biāo)Ⅱ卷細(xì)胞工程-核移植2016新課標(biāo)Ⅲ卷基因工程2015新課標(biāo)Ⅰ卷基因工程-逆轉(zhuǎn)錄cDNA文庫(kù)2015新課標(biāo)Ⅱ卷蛋白質(zhì)工程2014新課標(biāo)Ⅰ卷細(xì)胞工程-動(dòng)物細(xì)胞融合-單克隆抗體制備2014新課標(biāo)Ⅱ卷基因工程-基因文庫(kù)我國(guó)是棉花的生產(chǎn)和消費(fèi)大國(guó)。棉花在種植過程中，常常會(huì)受到一些害蟲的侵襲，其中以棉鈴蟲最為常見。棉鈴蟲可以使棉花產(chǎn)量減少三分之一，嚴(yán)重時(shí)，甚至能使一片棉田絕收。大量施用農(nóng)藥殺蟲不僅會(huì)提高生產(chǎn)成本，還可能造成農(nóng)產(chǎn)品和環(huán)境的污染。要是能培育出自身就能抵抗蟲害的棉花新品種這一問題就會(huì)迎刃而解，我國(guó)擁有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的轉(zhuǎn)基因抗蟲棉就是在這樣的背景下產(chǎn)生的。為什么傳統(tǒng)的雜交育種方法培育不出抗蟲棉，基因工程卻可以呢?基因工程是如何進(jìn)行操作的?它給我們的生產(chǎn)和生活帶來了怎樣的影響?基因工程是指按照人們的愿望，通過轉(zhuǎn)基因等技術(shù)，賦予生物新的遺傳特性，創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品。從技術(shù)操作層面看，由于基因工程是在DNA分子水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)和施工的，因此又叫作重組DNA技術(shù)。

我國(guó)是棉花的生產(chǎn)和消費(fèi)大國(guó)，棉花在種植過程中常常會(huì)受到棉鈴蟲的侵襲，使棉花大量減產(chǎn)，嚴(yán)重時(shí)甚至絕收。大量施用農(nóng)藥殺蟲不僅提高了生產(chǎn)成本，還可能造成農(nóng)產(chǎn)品和環(huán)境的污染，如果能培育出自身就能抵抗蟲害的棉花新品種，就能解決這一問題。

棉花本身不具有“殺蟲基因”，而蘇云金桿菌有一種“殺蟲基因”，它能通過編碼產(chǎn)生抗蟲蛋白來殺死棉鈴蟲?？瓜x棉棉花細(xì)胞

普通棉花

(無抗蟲特征)(含抗蟲基因)

棉花植株(有抗蟲特征)基因工程抗蟲基因提取蘇云金芽孢桿菌(有抗蟲特征)基因工程主要內(nèi)容基因工程概念科技探索之路——基因工程的誕生和發(fā)展重組DNA技術(shù)的基本工具探究●實(shí)踐DNA的粗體與鑒定基因工程的基本操作程序探究●實(shí)踐DNA片段的擴(kuò)增即電泳鑒定拓展視野歷史不能忘記中國(guó)科學(xué)家對(duì)PCR的貢獻(xiàn)基因工程的應(yīng)用蛋白質(zhì)工程的原理和應(yīng)用發(fā)展素養(yǎng)通過本章的學(xué)習(xí)，應(yīng)在以下兩個(gè)方面得到發(fā)展。能夠基于基因工程應(yīng)用的事實(shí)，運(yùn)用基因工程的原理參與有關(guān)推廣和應(yīng)用基因工程產(chǎn)品等社會(huì)行為的討論，理性地作出個(gè)人決策。認(rèn)同基因工程給現(xiàn)代農(nóng)牧業(yè)、食品及醫(yī)藥等行業(yè)帶來了深刻的變化，產(chǎn)生了巨大的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益。基因工程主要內(nèi)容基因工程概念科技探索之路——基因工程的誕生和發(fā)展重組DNA技術(shù)的基本工具限制性內(nèi)切核酸酶——“分子手術(shù)刀”DNA連接酶——“分子縫合針”基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體——“分子運(yùn)輸車探究●實(shí)踐DNA的粗體與鑒定學(xué)習(xí)目標(biāo)科學(xué)思維：結(jié)合具體的應(yīng)用實(shí)例，說明基因工程技術(shù)的原理、工具和操作過程?？茖W(xué)思維和社會(huì)責(zé)任：通過對(duì)比分析蛋白質(zhì)工程和傳統(tǒng)基因工程的不同及應(yīng)用價(jià)值?？茖W(xué)思維和科學(xué)探究：通過實(shí)際操作學(xué)會(huì)細(xì)胞中DNA的提取和鑒定方法，學(xué)習(xí)PCR技術(shù)原理和操作一、基因工程的概念1.基因工程的概念

是指按照人們的愿望，通過轉(zhuǎn)基因等技術(shù)，賦予生物新的遺傳特性，創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品。從技術(shù)操作層面看，由于基因工程是在DNA分子水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)和施工的，因此又叫做DNA重組技術(shù)。別名重組DNA技術(shù)、轉(zhuǎn)基因技術(shù)原理基因重組(廣義)操作水平DNA分子水平操作環(huán)境主要在生物體外操作對(duì)象基因(DNA)基本過程剪切→拼接→導(dǎo)入→表達(dá)結(jié)果/目的獲得人類需要的基因產(chǎn)物或定向改造生物性狀優(yōu)點(diǎn)：與雜交育種相比：克服遠(yuǎn)緣雜交不親和障礙

（打破生殖隔離，實(shí)現(xiàn)跨物種間的基因交流）與誘變育種相比：定向改造生物的遺傳性狀（可遺傳的定向變異）另：蛋白質(zhì)工程也可定向改造蛋白質(zhì)基因工程操作導(dǎo)致的基因重組與有性生殖中的基因重組的主要區(qū)別是什么？有性生殖中的基因重組是隨機(jī)的，并且只能在同一物種間進(jìn)行重組；基因工程可以實(shí)現(xiàn)遺傳物質(zhì)在不同物種間進(jìn)行重組，并且方向性強(qiáng)，可以定向地改變生物的性狀。減數(shù)分裂I前期，同源染色體上非姐妹染色單體間的互換；減數(shù)分裂I后期，非同源染色體上非等位基因的自由組合。2.科技探索之路——基因工程的誕生和發(fā)展一、基因工程的概念3.基因工程的理論基礎(chǔ)——拓展拼接的基礎(chǔ)1.DNA的基本組成單位相同（四種脫氧核苷酸）表達(dá)的基礎(chǔ)2.都遵循堿基互補(bǔ)配對(duì)原則3.DNA分子的空間結(jié)構(gòu)都是規(guī)則的雙螺旋結(jié)構(gòu)1.基因是控制生物性狀的結(jié)構(gòu)與功能單位2.遺傳信息的傳遞都遵循中心法則基因在空間上轉(zhuǎn)移并成功表達(dá)3.生物界共用一套遺傳密碼。（相同的遺傳信息在不同的生物體內(nèi)表達(dá)出相同的蛋白質(zhì)）DNA（基因）

轉(zhuǎn)錄翻譯mRNA蛋白質(zhì)番木瓜容易受番木瓜環(huán)斑病毒的侵襲，當(dāng)番木瓜被這種病毒感染后，產(chǎn)量會(huì)大大下降?？茖W(xué)家通過精心設(shè)計(jì)，用“分子工具”培育出了轉(zhuǎn)基因番木瓜，它可以抵御番木瓜環(huán)斑病毒。DNA雙螺旋的直徑只有2nm，對(duì)如此微小的分子進(jìn)行操作，是一項(xiàng)非常精細(xì)的工作，更需要專門的“分子工具”。那么，科學(xué)家究竟用到了哪些“分子工具”？這些“分子工具”各具有什么特征呢？“分子運(yùn)輸車”“分子手術(shù)刀”“分子縫合針”限制性內(nèi)切核酸酶（限制酶）DNA連接酶基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體（如質(zhì)粒）科學(xué)家用到了限制酶、DNA連接酶、載體等“分子工具”。限制酶能識(shí)別雙鏈DNA分子的特定核苷酸序列，并將DNA雙鏈切斷，形成具有黏性末端或平末端的片段。DNA連接酶催化磷酸二酯鍵的形成，即催化一個(gè)DNA片段3'端的羥基與另ー個(gè)DNA片段5'端的磷酸基團(tuán)上的羥基連接起來形成酯鍵。載體上可以插入外源基因，它能攜帶該基因進(jìn)入受體細(xì)胞，并在受體細(xì)胞中進(jìn)行自我復(fù)制，或者整合到受體DNA上，隨著受體DNA同步復(fù)制。載體一般還帶有標(biāo)記基因，以便進(jìn)行重組DNA分子的篩選。那么，科學(xué)家究竟用到了哪些“分子工具”？這些“分子工具”各具有什么特征呢？工具分子運(yùn)輸車工具酶分子手術(shù)刀分子縫合針限制性內(nèi)切核酸酶：準(zhǔn)確切割DNA分子DNA連接酶：將DNA片段連接起來【易錯(cuò)警示】工具酶≠工具載體：將體外重組好的DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體（如質(zhì)粒）二、重組DNA技術(shù)的基本工具1.

限制性內(nèi)切核酸酶——“分子手術(shù)刀”切割DNA分子的工具是限制性內(nèi)切核酸酶，簡(jiǎn)稱限制酶。(1)分布(來源)：主要是從原核生物中分離純化出來的。(2)化學(xué)本質(zhì)：蛋白質(zhì)(3)種類：從近多種微生物中分離出了約數(shù)千種限制酶。(限制酶不是一種酶，而是一類酶)(4)作用特性：能夠識(shí)別雙鏈DNA分子中特定的(脫氧)核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位（兩個(gè)核苷酸之間）的磷酸二酯鍵斷開。(切割具有專一性)磷酸二酯鍵例如：限制酶EcoRⅠ5’-G↓AATTC-3’3’-CTTAA↑G-5’5’-GAATTC-3’3’-CTTAAG-5’特定的核苷酸序列特定部位（兩個(gè)核苷酸之間）的磷酸二酯鍵切點(diǎn)中軸線二、重組DNA技術(shù)的基本工具1.

限制性內(nèi)切核酸酶——“分子手術(shù)刀”切割DNA分子的工具是限制性內(nèi)切核酸酶，簡(jiǎn)稱限制酶。(5)限制酶的識(shí)別序列：一般為4-8個(gè)堿基，多為6個(gè)。大多數(shù)限制酶的識(shí)別序列由6個(gè)核苷酸組成，也有少數(shù)限制酶的識(shí)別序列由4個(gè)、8個(gè)或其他數(shù)量的核苷酸組成。思考·討論：想一想限制酶所識(shí)別的序列有什么特點(diǎn)？限制酶所識(shí)別的序列，呈現(xiàn)堿基互補(bǔ)對(duì)稱。無論是6個(gè)堿基還是4個(gè)堿基，都可以找到一條中心軸線（如圖），中軸線兩側(cè)的雙鏈DNA上的堿基是反向?qū)ΨQ、重復(fù)排列的，稱為回文序列(一條鏈正向讀的堿基順序與另一條鏈反向讀的順序完全一致)。二、重組DNA技術(shù)的基本工具1.

限制性內(nèi)切核酸酶——“分子手術(shù)刀”切割DNA分子的工具是限制性內(nèi)切核酸酶，簡(jiǎn)稱限制酶。(6)限制酶的作用結(jié)果：DNA分子經(jīng)限制酶切割產(chǎn)生的DNA片段末端通常有兩種形式一一黏性末端和平末端。當(dāng)限制酶識(shí)別序列的中心軸線兩側(cè)將DNA分子的兩條鏈分別切開時(shí)，產(chǎn)生的是黏性末端；當(dāng)限制酶識(shí)別序列的中心軸線處切開時(shí)，產(chǎn)生的是平末端。大腸桿菌(E.coli)的EcoRⅠ

限制酶能特異性識(shí)別__________序列，并切割___和___之間的____________，切割后產(chǎn)生__________。EcoRI限制酶GAATTCGA磷酸二酯鍵黏性末端SmaI限制酶Sma

I限制酶只能識(shí)別

序列，切割

和

之間的

切開，切割后產(chǎn)生

。CCCGGGCG磷酸二酯鍵平末端NaCl有抑制作用，能被Mg2+激活，多數(shù)限制酶的識(shí)別序列為回文結(jié)構(gòu)二、重組DNA技術(shù)的基本工具1.

限制性內(nèi)切核酸酶——“分子手術(shù)刀”切割DNA分子的工具是限制性內(nèi)切核酸酶，簡(jiǎn)稱限制酶。(7)命名規(guī)則：

限制酶是用生物屬名的頭一個(gè)字母與種加詞的頭兩個(gè)字母，組成了三個(gè)字母的略語，以此來表示這個(gè)酶是從哪種生物中分離出來的。限制酶的命名是根據(jù)細(xì)菌種類而定，以EcoRI為例:

E：Escherichia

（屬名）

co：coli

（種加詞）

R：RY13（品系）

I：首先發(fā)現(xiàn)在此類細(xì)菌中發(fā)現(xiàn)的順序?qū)倜?種名+品系+此菌中發(fā)現(xiàn)順序。如：EcoRⅠ=E+co+R+ⅠEcoRⅠ：大腸桿菌（Escherichiacoli）R型菌株中分離出的第一個(gè)限制酶；SmaⅠ：粘質(zhì)沙雷氏菌（Serratiamarcescens）中分離出的第一個(gè)限制酶。練習(xí)：流感嗜血桿菌的d菌株（Haemophilusinfluenzaed）中先后分離到3種限制酶，則分別命名為：

。HindⅠ、HindⅡ、HindⅢNaCl有抑制作用，能被Mg2+激活，多數(shù)限制酶的識(shí)別序列為回文結(jié)構(gòu)二、重組DNA技術(shù)的基本工具1.

限制性內(nèi)切核酸酶——“分子手術(shù)刀”1.你能推測(cè)限制酶存在于原核生物中的作用是什么嗎？2.為什么限制酶不剪切細(xì)菌本身的DNA？思考·討論：

原核生物易受自然界外源DNA的入侵，但生物在長(zhǎng)期的進(jìn)化過程中形成了一套完善的防御機(jī)制，以防止外來病原物的侵害。限制酶就是細(xì)菌的一種防御性工具，當(dāng)外源DNA侵入時(shí)，會(huì)利用限制酶將外源DNA切割掉，以保證自身的安全。所以，限制酶在原核生物中主要起到切割外源DNA、使之失效，從而達(dá)到保護(hù)自身的目的。

通過長(zhǎng)期的進(jìn)化，細(xì)菌中含有某種限制酶的細(xì)胞，其DNA分子中不具備這種限制酶識(shí)別的特定核苷酸序列，或者通過甲基化酶將甲基轉(zhuǎn)移到所識(shí)別序列的堿基上，使限制酶不能將其切開。這樣，盡管細(xì)菌中含有某種限制酶也不會(huì)使自身的DNA被切斷，并且可以防止外源DNA的入侵。原核生物中不存在該酶的識(shí)別序列或識(shí)別序列已被修飾切割外源DNA、使之失效，以保證自身安全5’-GAATTC………………Bt基因序列………………GAATTC-3’3’-CTTAAG………………Bt基因序列………………CTTAAG-5’探究?活動(dòng)一、用剪刀模擬EcoRI剪切目的基因(Bt基因)操作（1）該DNA片段上EcoRI的識(shí)別序列在哪兒？（2）請(qǐng)用剪刀模擬EcoRI的識(shí)別序列和切割位點(diǎn)將目的基因“切割”下來。5’-GAATTC………………Bt基因序列………………GAATTC-3’3’-CTTAAG………………Bt基因序列………………CTTAAG-5’目的基因(Bt基因)識(shí)別序列識(shí)別序列5’-GAATTC………………Bt基因序列………………GAATTC-3’3’-CTTAAG………………Bt基因序列………………CTTAAG-5’目的基因黏性末端黏性末端黏性末端黏性末端5’-3’-3’-5’-(3)要想獲得某個(gè)特定性狀的目的基因必須要用限制酶切幾個(gè)切口？可產(chǎn)生幾個(gè)黏性(平)末端？要切2個(gè)切口，產(chǎn)生4個(gè)黏性(平)末端。1.請(qǐng)結(jié)合限制酶的作用特點(diǎn)，回答以下問題：(1)限制酶能切開RNA分子的磷酸二酯鍵嗎？提示

不能。課堂練習(xí)(2)請(qǐng)結(jié)合右圖，推斷限制酶切割一次可斷開幾個(gè)磷酸二酯鍵？產(chǎn)生多少游離的磷酸基團(tuán)？產(chǎn)生幾個(gè)黏性末端？消耗幾分子水？提示

斷開2個(gè)磷酸二酯鍵；產(chǎn)生2個(gè)游離的磷酸基團(tuán)；產(chǎn)生2個(gè)黏性末端；消耗2分子水。2.請(qǐng)判斷：以下黏性末端是由

種限制酶作用產(chǎn)生的。三課堂練習(xí)識(shí)別DNA分子中不同核苷酸序列，但能切割產(chǎn)生相同黏性末端的限制酶被稱為同尾酶。同尾酶構(gòu)建載體時(shí)，切割位點(diǎn)的選擇范圍擴(kuò)大。例如，我們選擇了用某種限制酶切割載體，如果目的基因的核苷酸序列中恰好有該限制酶的識(shí)別序列，那么用該限制酶切割含有目的基因的DNA片段時(shí)，目的基因就很可能被切斷；這時(shí)可以考慮用合適的同尾酶(目的基因的核苷酸序列中不能有它的識(shí)別序列)來獲取目的基因。同尾酶3.請(qǐng)寫出下列限制酶切割形成的黏性末端，并思考同種限制酶切割產(chǎn)生的黏性末端是否相同？不同限制酶切割產(chǎn)生的黏性末端是否一定不同？提示

如圖同種限制酶產(chǎn)生的黏性末端相同，不同的限制酶產(chǎn)生的黏性末端一般不同，但有些可能會(huì)形成相同的黏性末端（同尾酶）。二、重組DNA技術(shù)的基本工具2.

DNA連接酶——“分子縫合針”(1)作用：將雙鏈DNA片段“縫合”起來，恢復(fù)被限制酶切開的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵。

(2)分類：種類E·coliDNA連接酶T4DNA連接酶來源大腸桿菌T4噬菌體功能特性只能將雙鏈DNA片段互補(bǔ)的黏性末端之間的磷酸二酯鍵連接起來可用于連接黏性末端和平末端，但連接效率低。相同點(diǎn)恢復(fù)磷酸二酯鍵E·coliDNA連接酶或T4DNA連接酶可把黏性末端之間的縫隙“縫合”起來，即恢復(fù)被限制酶切開的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵兩DNA片段要具有互補(bǔ)的黏性末端才能拼起來Ecoli

DNA連接酶或T4DNA連接酶T4DNA連接酶(可用于連接末端，但連接效率低，但效率較低)注意：DNA連接酶可連接雙鏈DNA中的缺口，但不能連接單鏈DNA！

限制酶酶切DNA連接酶連接

旁欄思考（P72）：DNA連接酶與DNA聚合酶是一回事嗎？為什么？解旋酶DNA聚合酶DNA聚合酶游離的脫氧核苷酸5′5′3′3′新合成的子鏈

旁欄思考（P72）：DNA連接酶與DNA聚合酶是一回事嗎？為什么？DNA連接酶DNA聚合酶相同點(diǎn)作用實(shí)質(zhì)化學(xué)本質(zhì)不同點(diǎn)模板作用對(duì)象作用結(jié)果用途都能催化形成磷酸二酯鍵都是蛋白質(zhì) 不需要需要DNA的一條鏈作模板形成完整的重組DNA分子形成DNA的一條鏈基因工程DNA復(fù)制只能將單個(gè)核苷酸連接到已有的DNA片段上，形成磷酸二酯鍵在兩個(gè)DNA片段之間形成磷酸二酯鍵二、重組DNA技術(shù)的基本工具2.

DNA連接酶——“分子縫合針”幾種相關(guān)酶的比較名稱作用部位作用底物作用結(jié)果限制酶磷酸二酯鍵DNA將DNA切成兩個(gè)片段DNA連接酶磷酸二酯鍵DNA片段將兩個(gè)DNA片段連接為一個(gè)DNA分子DNA聚合酶磷酸二酯鍵脫氧核苷酸將單個(gè)脫氧核苷酸依次連接到單鏈末端DNA(水解)酶磷酸二酯鍵DNA將DNA片段水解為單個(gè)脫氧核苷酸解旋酶堿基對(duì)之間的氫鍵DNA將雙鏈DNA分子局部解旋為單鏈，形成兩條長(zhǎng)鏈RNA聚合酶磷酸二酯鍵核糖核苷酸將單個(gè)核糖核苷酸依次連接到單鏈末端課堂練習(xí)1.根據(jù)所學(xué)知識(shí)，完成以下填空：①限制酶②解旋酶③DNA連接酶④DNA聚合酶⑤RNA聚合酶baA.切斷a處的酶為_______

B.連接a處的酶為_______C.切斷b處的酶為_______①③④②a：磷酸二酯鍵；b：氫鍵2.(2022·天津耀華中學(xué)高二期中)以下是幾種不同限制酶切割DNA分子后形成的部分片段。下列敘述正確的是A.以上DNA片段是由4種限制酶切割后產(chǎn)生的B.②片段是在識(shí)別序列為

的限制酶作用下形成的C.①和④兩個(gè)片段在DNA聚合酶的作用下可形成重組DNA分子D.限制酶和DNA連接酶作用的部位都是磷酸二酯鍵D二、重組DNA技術(shù)的基本工具3.基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體——“分子運(yùn)輸車”(1)作用：作為運(yùn)載工具，將外源基因?qū)胧荏w細(xì)胞中，并能在細(xì)胞中進(jìn)行自我復(fù)制，或整合到受體DNA上隨受體DNA同步復(fù)制。(2)載體的必要條件①能在宿主細(xì)胞中進(jìn)行自我復(fù)制，或整合到受體DNA上，隨受體DNA同步復(fù)制。②有一個(gè)至多個(gè)限制酶切割位點(diǎn)，供外源DNA片段插入其中。③常有特殊的標(biāo)記基因，便于重組DNA分子的篩選。④對(duì)受體細(xì)胞無害，容易分離。(3)載體的種類：質(zhì)粒（常用）、噬菌體、動(dòng)植物病毒等。種類用途不同點(diǎn)質(zhì)粒、噬菌體植物病毒動(dòng)物病毒將外源基因?qū)氪竽c桿菌等受體細(xì)胞將外源基因?qū)胫参锛?xì)胞將外源基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞來源不同，在大小、結(jié)構(gòu)、復(fù)制方式以及可以插入外源DNA片段的大小也有很大差別二、重組DNA技術(shù)的基本工具3.基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體——“分子運(yùn)輸車”(4)常用載體——質(zhì)粒質(zhì)粒是一種裸露的、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、獨(dú)立于真核細(xì)胞細(xì)胞核或原核細(xì)胞擬核DNA之外，并具有自我復(fù)制能力的環(huán)狀雙鏈DNA分子。真正被用作載體的質(zhì)粒，都是在天然質(zhì)粒的基礎(chǔ)上進(jìn)行過人工改造的。質(zhì)粒主要存在于細(xì)菌、放線菌和酵母菌等生物體內(nèi)。有(多個(gè))切割位點(diǎn)能復(fù)制，并帶著插入的目的基因一起復(fù)制有標(biāo)記基因的存在，可用含青霉素的培養(yǎng)基鑒別，便于重組DNA分子的篩選二、重組DNA技術(shù)的基本工具3.基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體——“分子運(yùn)輸車”(4)常用載體——質(zhì)粒標(biāo)記基因的篩選原理

載體上的標(biāo)記基因一般是某種抗生素的抗性基因，而受體細(xì)胞沒有抵抗該抗生素的能力。將含有某抗生素抗性基因的載體導(dǎo)入受體細(xì)胞，抗性基因在受體細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，受體細(xì)胞對(duì)該抗生素產(chǎn)生抗性。在含有該抗生素的培養(yǎng)基上，能夠生存的是被導(dǎo)入了載體的受體細(xì)胞。如圖所示：含有氨芐青霉素抗性基因載體（如質(zhì)粒）導(dǎo)入受體細(xì)胞培養(yǎng)加入氨芐青霉素只有含有載體，并且載體上的抗性基因表達(dá)的大腸桿菌才能存活并增殖如何提高篩選的準(zhǔn)確性

當(dāng)質(zhì)粒上有兩個(gè)標(biāo)記基因時(shí)，可將目的基因插入其中一個(gè)標(biāo)記基因中，也就是重組質(zhì)粒上只含一個(gè)標(biāo)記基因，普通質(zhì)粒上含有兩個(gè)標(biāo)記基因。則沒有導(dǎo)入質(zhì)粒的受體細(xì)胞不具有標(biāo)記基因控制的性狀，導(dǎo)入普通質(zhì)粒的受體細(xì)胞具有兩個(gè)標(biāo)記基因控制的性狀，導(dǎo)入重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞只具有一個(gè)標(biāo)記基因控制的性狀。這樣可根據(jù)標(biāo)記基因控制的性狀準(zhǔn)確篩選出含有重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞。氨芐青霉素抗性基因ampR四環(huán)素抗性基因tetR導(dǎo)入受體細(xì)胞培養(yǎng)質(zhì)粒目的基因重組質(zhì)粒氨芐青霉素抗性基因ampR目的基因加入氨芐青霉素含有氨芐青霉素抗性基因并且表達(dá)的大腸桿菌才能存活并增殖加入四環(huán)素(1)原理：將目的基因插入含有兩種抗生素的載體時(shí)，如果插入某種抗生素基因內(nèi)部，則會(huì)導(dǎo)致該抗生素基因失活。如圖，目的基因插入了四環(huán)素基因內(nèi)部，則四環(huán)素基因失活。(2)被轉(zhuǎn)化的細(xì)菌有三種：含環(huán)狀目的基因的細(xì)菌、含重組質(zhì)粒的細(xì)菌、含質(zhì)?！|(zhì)粒的細(xì)菌。(3)篩選方法：將含有重組質(zhì)粒的細(xì)菌先放在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，能生長(zhǎng)的是含重組質(zhì)粒的細(xì)菌和含質(zhì)?！|(zhì)粒的細(xì)菌，如圖1、2、3、4、5菌落，再利用滅菌的絨布影印到含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上，如圖能生長(zhǎng)的菌落為2、3、4，則在含四環(huán)素培養(yǎng)基上不生長(zhǎng)的即為含有目的基因的菌落，如圖1、5菌落。最后，可在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上挑取1、5菌落進(jìn)行培養(yǎng)。含有四環(huán)素抗性基因并且表達(dá)的大腸桿菌才能存活并增殖二、重組DNA技術(shù)的基本工具3.基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體——“分子運(yùn)輸車”(5)λ噬菌體的衍生物或某些動(dòng)植物病毒作為運(yùn)載體利用的原理這些基因工程載體，相當(dāng)于一種運(yùn)輸工具，因此將它們比喻為“分子運(yùn)輸車”λ噬菌體的衍生物或某些動(dòng)植物病毒作為運(yùn)載體利用的原理是利用病毒對(duì)宿主細(xì)胞的侵染性。病毒對(duì)宿主細(xì)胞的侵染具有一定的物種（組織）特異性。例：若用家蠶作為某基因表達(dá)載體的受體細(xì)胞，在噬菌體和昆蟲病毒兩種載體中，不選用

作為載體，其原因是

。霍亂弧菌中含有質(zhì)粒，但

（填“能”、“不能”）用來做載體，因?yàn)檫x擇的載體應(yīng)該

。噬菌體噬菌體的宿主細(xì)胞是細(xì)菌，而不是家蠶不能對(duì)受體細(xì)胞無害重組DNA分子請(qǐng)?jiān)趦蓮埣埳戏謩e寫上下面兩段DNA序列：

請(qǐng)你根據(jù)圖3-3中的相關(guān)信息找到兩條片段上EcoRI

的識(shí)別序列和切割位點(diǎn)。然后，用剪刀進(jìn)行“切割”。待切割位點(diǎn)全部切開后，將從下面那條DNA鏈上切下的片段重組到上面那條DNA鏈的切口處，并用透明膠條將切口粘連起來。重組DNA分子

請(qǐng)你根據(jù)圖3-3中的相關(guān)信息找到兩條片段上EcoRI

的識(shí)別序列和切割位點(diǎn)。然后，用剪刀進(jìn)行“切割”。待切割位點(diǎn)全部切開后，將從下面那條DNA鏈上切下的片段重組到上面那條DNA鏈的切口處，并用透明膠條將切口粘連起來?！璗ATCGTACGATAGGTACTTAA

…ATAGCATGCTATCCATGAATTCGGCATAC…GCCGTATG……TCCTAG…AGGATCTTAAGAGCCATACTTAAAATTCTCGGTATGAATTCCATAC…

GGTATG…GAGCCATACTTAAAATTCTCGGTATG重組DNA分子1.剪刀和透明膠條分別代表哪種“分子工具”？

剪刀代表限制酶；透明膠條代表DNA連接酶。

如果制作的黏性末端的堿基不能互補(bǔ)配對(duì)，可能是剪切位點(diǎn)或連接位點(diǎn)選得不對(duì)，也可能是其他原因。

不能，因?yàn)榛虻拈L(zhǎng)度一般在100個(gè)堿基對(duì)以上。2.你制作的黏性末端的堿基能不能互補(bǔ)配對(duì)？如果不能，可能是什么原因造成的？3.你插入的DNA片段能稱得上一個(gè)基因嗎？…TATCGTACGATAGGTACTTAA

…ATAGCATGCTATCCATGAATTCGGCATAC…GCCGTATG…GAGCCATACTTAAAATTCTCGGTATG重組DNA分子…TATCGTACGATAGGTACTTAA

…ATAGCATGCTATCCATGAATTCGGCATAC…GCCGTATG…GAGCCATACTTAAAATTCTCGGTATG4.從以上操作可推知，在切割含“目的片段”的DNA分子時(shí)，需用限制酶切割____次此DNA分子，產(chǎn)生____個(gè)黏性末端。5.目的片段翻轉(zhuǎn)過來，可以連接嗎？______6.目的片段可以自身環(huán)化嗎？_______7.切割目的基因和載體時(shí)，需要用______限制酶，目的是____________________24可以可以同種產(chǎn)生相同的黏性末端*必須是同一種限制酶嗎？不一定，不同的限制酶切割可能形成相同的黏性末端。知識(shí)鞏固下列操作中選用哪種限制酶切割來構(gòu)建重組質(zhì)粒？1、選目的基因兩端和運(yùn)載體都有的酶切位點(diǎn)；2、所選酶切位點(diǎn)不能破壞目的基因以及標(biāo)記基因。規(guī)律——選擇酶切位點(diǎn)的原則：BamHI

和

HindIII①

防止目的基因的自身環(huán)化不能用EcoRI的原因②

防止目的基因反向連接到載體圖1圖2目的基因自身環(huán)化與目的基因反向連接到載體AATTCGGCTTAA目的基因自身環(huán)化目的基因和載體的隨機(jī)連接目的基因正向連接到載體目的基因反向連接到載體5’-GAATTC………………Bt基因序列1………………GAATTC-3’3’-CTTAAG………………Bt基因序列2………………CTTAAG-5’5’-GAATTC………………Bt基因序列1………………GAATTC-3’3’-CTTAAG………………Bt基因序列2………………CTTAAG-5’目的基因自身環(huán)化與目的基因反向連接到載體的解決方法選擇兩種不同的限制酶同時(shí)對(duì)目的基因和質(zhì)粒切割-G-CTTAA-A-TCTAG-A-TCTAG-G-CTTAA知識(shí)鞏固規(guī)律——選擇酶切位點(diǎn)的原則

圖甲

圖乙根據(jù)目的基因兩端的限制酶切割位點(diǎn)確定限制酶的種類①應(yīng)選擇切割位點(diǎn)位于目的基因兩端的限制酶，如圖甲可選擇PstⅠ；②不能選擇切割位點(diǎn)位于目的基因內(nèi)部的限制酶，如圖甲不能選擇SmaⅠ；③為避免目的基因和質(zhì)粒的自身環(huán)化和隨意連接，也可使用不同的限制酶切割目的基因和質(zhì)粒，如圖甲也可選擇用PstⅠ和EcoRⅠ兩種限制酶(但要確保質(zhì)粒上也有這兩種酶的切割位點(diǎn))根據(jù)質(zhì)粒的特點(diǎn)確定限制酶的種類①所選限制酶要與切割目的基因的限制酶一致，以確保產(chǎn)生相同的黏性末端；②質(zhì)粒作為載體必須具備標(biāo)記基因等，所以所選擇的限制酶盡量不要破壞這些結(jié)構(gòu)，如圖乙中限制酶SmaⅠ會(huì)破壞標(biāo)記基因；如果所選酶的切割位點(diǎn)不止一個(gè)，則切割重組后可能丟失某些片段，若丟失的片段含復(fù)制起點(diǎn)區(qū)，則切割重組后的片段進(jìn)入受體細(xì)胞后不能自主復(fù)制(1)獲取目的基因和切割載體時(shí),通常使用同種限制酶,目的是

。但是使用該法缺點(diǎn)是容易發(fā)生

，為了避免上述情況發(fā)生，可采取的措施是

。(2)獲取一個(gè)目的基因需限制酶切割

次,共產(chǎn)生

個(gè)游離的磷酸基團(tuán)。為了產(chǎn)生相同的黏性末端，便于連接兩4分別使用兩種限制酶去切割目的基因和運(yùn)載體目的基因、質(zhì)粒的自身環(huán)化以及目的基因與質(zhì)粒反向連接知識(shí)鞏固規(guī)律——選擇酶切位點(diǎn)的原則

(3)選擇限制酶切割位點(diǎn)的基本原則：

①切割目的基因時(shí)：

。

②切割質(zhì)粒時(shí)：

。能切下目的基因且不破壞目的基因至少保留一個(gè)完整的標(biāo)記基因，便于篩選限制酶作用部位：種類E.coliDNA連接酶運(yùn)載工具條件③

有一個(gè)至多個(gè)限制酶切割位點(diǎn)質(zhì)粒、噬菌體、動(dòng)植物病毒DNA連接酶課堂小結(jié)作用部位：切開DNA分子的磷酸二酯鍵來源：主要存在于原核生物中特點(diǎn)：具有專一性（能識(shí)別雙鏈DNA分子的特定核苷酸序列）T4DNA連接酶①

對(duì)受體細(xì)胞無害②

能自我復(fù)制或整合到宿主DNA上。④

常有特殊的標(biāo)記基因種類：磷酸二酯鍵作用結(jié)果：產(chǎn)生黏性末端或平末端基因工程的基本工具①不同DNA分子用同一種限制酶切割形成的黏性末端都相同；【解析：酶具有專一性，識(shí)別的序列相同】②判斷兩個(gè)末端是否為同一種限制酶切割產(chǎn)生的方法：將其中一個(gè)末端旋轉(zhuǎn)180度，若與另一個(gè)完全相同，則說明兩個(gè)末端是用同一種限制酶切割拓展——能力提升③同一個(gè)DNA分子用不同限制酶切割，產(chǎn)生的黏性末端一般不相同；【解析：酶具有專一性，識(shí)別的序列不同】也有可能切割出相同的黏性末端，可以相互配對(duì)連接成鏈（同尾酶）故：產(chǎn)生相同的黏性末端不一定都是用同一種限制酶切割④不同限制酶切割形成的黏性末端，如果互補(bǔ)則可以相互重新配對(duì)連接總結(jié)：兩種同尾酶切割的DNA片段連接后，原來的酶切位點(diǎn)將不存在，不能再被原來的限制酶識(shí)別課堂練習(xí)5.某細(xì)菌質(zhì)粒上有標(biāo)記基因如圖所示，通過標(biāo)記基因可以推知外源基因(目的基因)是否轉(zhuǎn)入成功。外源基因插入的位置不同，細(xì)菌在培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)情況也不同，如圖所示是外源基因插入位置(插入點(diǎn)有a、b、c)示意圖，請(qǐng)根據(jù)表中提供的細(xì)菌生長(zhǎng)情況，推測(cè)①②③三種重組后細(xì)菌的外源基因插入點(diǎn)，正確的一組是A插入點(diǎn)細(xì)菌在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)狀況細(xì)菌在含四環(huán)素的培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)狀況①能生長(zhǎng)能生長(zhǎng)②能生長(zhǎng)不能生長(zhǎng)③不能生長(zhǎng)能生長(zhǎng)A.①是c；②是b；③是a

B.①是a和b；②是a；③是bC.①是a和b；②是b；③是a

D.①是c；②是a；③是b課堂練習(xí)6.圖甲是含有目的基因的外源DNA片段，圖乙是用于將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的質(zhì)粒（陰影部分表示抗生素抗性基因），相關(guān)限制酶的作用部位如圖所示，現(xiàn)欲培養(yǎng)轉(zhuǎn)基因抗病植株，回答下列問題。（1）在基因工程的操作中，不宜選用SmaI，原因是SmaI會(huì)破壞__________和__________________________。（2）在基因工程的操作中，不宜選用EcoRI，原因是用EcoRI切割外源DNA片段后，___________________________________________________。目的基因質(zhì)粒上的抗生素抗性基因目的基因只有一側(cè)含有黏性末端，不能插入到質(zhì)粒中（3）由于反應(yīng)體系中含有大量的外源DNA片段和質(zhì)粒，加入PstI一種限制酶后，會(huì)得到大量的目的基因片段和質(zhì)粒片段，再加入DNA連接酶后，除了會(huì)形成目的基因與質(zhì)粒連接的環(huán)狀產(chǎn)物外，還會(huì)形成______________________連接的環(huán)狀產(chǎn)物以及_____________________連接的環(huán)狀產(chǎn)物。此外，目的基因與質(zhì)粒的連接既可以是正向連接，也可以是____________，后者可能會(huì)導(dǎo)致目的基因無法正常表達(dá)。目的基因與目的基因質(zhì)粒片段與質(zhì)粒片段反向連接實(shí)驗(yàn)：DNA的粗提取與鑒定實(shí)驗(yàn)原理1.提取DNA的原理DNA的粗提取與鑒定(1)提取DNA的基本思路（DNA的粗提取）：利用DNA與RNA、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等在物理和化學(xué)性質(zhì)方面的差異，提取DNA，去除其他成分。(2)DNA不溶于酒精，但某些蛋白質(zhì)溶于酒精，利用這一原理，可以初步分離DNA與蛋白質(zhì)。(3)DNA在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同，它能溶于2mol/L的NaCl溶液。(在2mol/L的NaCl溶液中溶解度較高，在0.14mol/L的NaCl溶液中溶解度最低)2.鑒定DNA的原理在一定溫度下，DNA遇二苯膠試劑會(huì)呈現(xiàn)藍(lán)色，因此二苯胺試劑可以作為鑒定DNA的試劑。0DNA溶解度NaCl濃度0.14mol/L2mol/L實(shí)驗(yàn)：DNA的粗提取與鑒定材料用具1.選材：新鮮洋蔥（也可以選擇香焦、菠菜、菜花和豬肝等作為實(shí)驗(yàn)材料，提取DNA的方法可能稍有不同）DNA的粗提取與鑒定目的要求1.了解DNA的物理和化學(xué)性質(zhì)，理解DNA粗提取和鑒定的原理。2.學(xué)會(huì)DNA粗提取的方法以及用二苯膠試劑對(duì)DNA進(jìn)行鑒定。染色體數(shù)目多，細(xì)胞分裂旺盛，DNA含量較高。問題1:能否選用牛、羊、馬、豬等哺乳動(dòng)物的紅細(xì)胞做實(shí)驗(yàn)材料？不能選擇哺乳動(dòng)物成熟的紅細(xì)胞，因?yàn)槠浼t細(xì)胞中沒有細(xì)胞核和線粒體，幾乎不含DNA。實(shí)驗(yàn)：DNA的粗提取與鑒定材料用具DNA的粗提取與鑒定2.試劑：①研磨液3.用具：燒杯、量筒、玻璃棒、研缽、紗布、漏斗、試管、試管架、試管夾、酒精燈、石棉網(wǎng)、三腳架、火柴、刀片和天平等。SDS（十二烷基磺酸鈉）：EDTA（乙二胺四乙酸）：使DNA保持穩(wěn)定狀態(tài)。能有效的破壞細(xì)胞膜的磷脂和膜蛋白。是一種DNA酶的抑制劑，可防止細(xì)胞破碎后DNA酶降解DNA;Tris-HCl的緩沖體系（PH=8.0）：NaCl：DNA與蛋白質(zhì)分離。②體積分?jǐn)?shù)為95%的酒精析出DNA③2mol/L的NaCl溶液溶解DNA④二苯胺試劑鑒定DNA，要現(xiàn)配現(xiàn)用實(shí)驗(yàn)：DNA的粗提取與鑒定方法步驟DNA的粗提取與鑒定1.ＤＮＡ的提?、倨扑榧?xì)胞：稱取約30g洋蔥，切碎，然后放入研缽中，倒入10mL研磨液，充分研磨；研磨不充分，會(huì)使DNA分子不能從細(xì)胞核中釋放出來，從而影響提取的DNA含量上清液可能含有DNA、RNA以及蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、糖類等。②去除雜質(zhì)：在漏斗中墊上紗布，將洋蔥研磨液過濾到燒杯中，在4℃冰箱中放置幾分鐘后，再取上清液?；?qū)⒀笫[研磨液倒入塑料離心管中離心，在1500r/min的轉(zhuǎn)速下離心5min,再取上清液放入燒杯中。不能用濾紙代替紗布，因?yàn)镈NA會(huì)被吸附到濾紙上而大量損失?？梢栽黾覦NA分子的柔韌度，減少斷裂，能降低DNA水解酶的活性，利于提取DNA。ａ、抑制核酸水解酶活性，防止DNA降解；ｂ、低溫有利于增加DNA分子的柔韌性，減少斷裂。ｃ、抑制分子運(yùn)動(dòng)，使DNA易形成沉淀析出實(shí)驗(yàn)：DNA的粗提取與鑒定方法步驟DNA的粗提取與鑒定1.ＤＮＡ的提?、跠NA的析出：在上清液中加入體積相等的、預(yù)冷的酒精溶液（體積分?jǐn)?shù)為95%），靜置2～3min，溶液中出現(xiàn)的白色絲狀物就是粗提取的DNA。用玻璃棒沿一個(gè)方向攪拌，卷起絲狀物，并用濾紙吸去上面的水分；或者將溶液倒入塑料離心管中，在10000r/min的轉(zhuǎn)速下離心5min，棄上清液，將管底的沉淀物（粗提取的DNA）晾干。避免破壞DNA動(dòng)作要輕緩，以免加劇DNA分子的斷裂，導(dǎo)致DNA分子不能形成絮狀沉淀。攪拌時(shí)動(dòng)作要輕緩的原因玻璃表面帶電荷，DNA易被吸附于玻璃表面實(shí)驗(yàn)：DNA的粗提取與鑒定方法步驟DNA的粗提取與鑒定2.ＤＮＡ的鑒定④溶解ＤＮＡ：取兩支20mL的試管，各加入2mol/L的NaCl溶液5mL。將絲狀物或沉淀物溶于其中一支試管的NaCl溶液中。⑤鑒定ＤＮＡ：向兩支試管中各加入4mL的二苯胺試劑?；旌暇鶆蚝螅瑢⒃嚬苤糜诜兴屑訜?min。待試管冷卻后，比較兩支試管中溶液顏色的變化?？瞻讓?duì)照組

在等體積的NaCl溶液中加入二苯胺試劑，將試管置于同等沸水浴中加熱5min。實(shí)驗(yàn)：DNA的粗提取與鑒定方法步驟DNA的粗提取與鑒定2.ＤＮＡ的鑒定實(shí)驗(yàn)組對(duì)照組加入2mol/L氯化鈉溶液加入2mol/L氯化鈉溶液水浴加熱不加入絲狀物加入絲狀物加入4mL二苯胺試劑加入4mL二苯胺試劑空白對(duì)照組實(shí)驗(yàn)：DNA的粗提取與鑒定結(jié)果分析與評(píng)價(jià)DNA的粗提取與鑒定試管編號(hào)A（對(duì)照組）B（實(shí)驗(yàn)組）步驟12mol/L的NaC1溶液5mL步驟2不進(jìn)行任何處理步驟3步驟4沸水浴加熱5min實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象溶液不變藍(lán)色實(shí)驗(yàn)結(jié)論加絲狀物或沉淀物加4mL的二苯胺試劑溶液逐漸變藍(lán)DNA在沸水浴的情況下遇二苯胺試劑會(huì)被染成藍(lán)色【請(qǐng)同學(xué)們補(bǔ)充完整以下實(shí)驗(yàn)步驟】實(shí)驗(yàn)：DNA的粗提取與鑒定結(jié)果分析與評(píng)價(jià)DNA的粗提取與鑒定思考·討論：1.你提取出白色絲狀物或沉淀物了嗎？用二苯胺試劑鑒定的結(jié)果如何？

觀察提取的DNA的顏色，如果不是白色狀物，說明DNA中的雜質(zhì)較多。二苯胺試劑鑒定呈現(xiàn)藍(lán)色，說明實(shí)驗(yàn)基本成功；如果不呈現(xiàn)藍(lán)色，可能原因有所提取的DNA含量低，或者在實(shí)驗(yàn)操作過程中出現(xiàn)了失誤等。評(píng)價(jià)結(jié)果——看提取物顏色——看與二苯胺反應(yīng)顏色的深淺DNA純度

DNA的量2.你能分析出粗提取的DNA中可能含有哪些雜質(zhì)嗎？本實(shí)驗(yàn)出提取的DNA可能仍然含有核蛋白、多糖等雜質(zhì)。實(shí)驗(yàn)：DNA的粗提取與鑒定結(jié)果分析與評(píng)價(jià)DNA的粗提取與鑒定思考·討論：3.與其他同學(xué)提取的DNA進(jìn)行比較，看看實(shí)驗(yàn)結(jié)果有何不同分析產(chǎn)生差異的原因。本實(shí)驗(yàn)可以采取分組的方式進(jìn)行?？梢赃x取不同的實(shí)驗(yàn)材料；也可以查閱資料了解其他提取DNA的方法；對(duì)同種材料采用不同的方法。最