莜麥水溶性蛋白的提取及SDS-PAGE分析

莜麥水溶性蛋白的提取及SDS分析摘要：以莜麥為實(shí)驗(yàn)材料，通過脫脂、水提、鹽析和SephadexG25凝膠排阻層析等步驟提取莜麥水溶性總蛋白。通過SDS初步分析莜麥的蛋白組成，與黑麥、高粱、薏米水溶性蛋白進(jìn)行比較，結(jié)果表明莜麥蛋白含量較高，具有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。關(guān)鍵詞：莜麥水溶性蛋白黑麥高粱薏米 TheExtractionandSDSAnalysisofWater-solubleProteinofNakedoatsAbstract:Usingnakedoatsastheexperimentalmaterial,extracttotalwatersolubleproteinofnakedoatsbydegreasing,extraction,saltingandSephadexG25size-exclusionchromatography.AnalysethecompositionofthenakedoatsproteinpreliminarybySDSandcomparewiththewatersolubleproteinofryechinesessorghumandbarley.Theresultsshowthatcontentofnakedoatsproteinishigherandhasthehighnutritionalvalue.Keywords:NakedoatsWater-solubleProteinRyeCchinesesSorghumBarley莜麥為禾谷類作物，學(xué)名裸燕麥。莜麥原產(chǎn)中國(guó)，喜寒涼，耐干旱，抗鹽堿，生長(zhǎng)期短。莜麥營(yíng)養(yǎng)豐富，耐饑抗寒，糖分少，是糖尿病患者較好的食品，脂肪中含有較多的亞油酸，是老年人常用的療效食品。此外，維生素和磷、鐵等物質(zhì)也比較豐富。山西省莜麥種植面積約為17萬(wàn)公頃，總產(chǎn)量14～15萬(wàn)噸，占到全國(guó)的10%。莜麥在山西省農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)中占有重要地位，因此，對(duì)莜麥的深入研究有利于提高莜麥?zhǔn)称返纳罴庸?，產(chǎn)生一定的經(jīng)濟(jì)效益。1材料與方法1.1儀器與材料莜麥、黑麥、高粱、薏米購(gòu)自當(dāng)?shù)厥袌?chǎng)實(shí)驗(yàn)所用試劑均為分析純SephadexG25層析柱、蛋白質(zhì)純化系統(tǒng)為GEHealthcare產(chǎn)品電泳槽及電泳儀為北京六一產(chǎn)品1.2實(shí)驗(yàn)方法1.2.1莜麥水溶性蛋白的提取莜麥經(jīng)過低溫干燥后粉碎，過0.2mm孔徑篩網(wǎng)，以3:1（V/m）的比例加入丙酮，4℃條件下攪拌脫脂3小時(shí)后減壓抽濾，向所得濾餅中加入乙醚，低溫?cái)嚢?小時(shí)，減壓抽濾，濾餅低溫干燥后即為莜麥脫脂粉。取莜麥脫脂粉20g，加入200mL浸提緩沖液（20mmol/LTris-HCl，pH8.0），在4℃條件下攪拌浸提6小時(shí)，12000×g離心，取上清，加入硫酸銨至80%飽和度，4℃條件下攪拌鹽析6小時(shí)，12000×g離心，沉淀用少量浸提緩沖液溶解。所得溶液含有大量硫酸銨，影響進(jìn)一步電泳及活性測(cè)定。因此，選用SephadexG25層析柱進(jìn)行脫鹽處理，緩沖液為20mmol/LTris-HCl，100mmol/LNaClpH8.0，控制流速為0.5mL/min。收集蛋白洗脫峰，進(jìn)行SDS分析。同樣方法制備黑麥、高粱、薏米水溶性總蛋白。1.2.2莜麥水溶性蛋白的SDS分析對(duì)提取的莜麥、黑麥、高粱、薏米水溶性總蛋白進(jìn)行SDS[]分析。濃縮膠濃度為4%，分離膠濃度為12.5%，濃縮膠電壓80V，分離膠電壓100V，使用考馬斯亮藍(lán)R-250染色。2結(jié)果與討論2.1莜麥水溶性蛋白的提取由圖可知，隨著洗脫體積的增加，吸光度值增加，當(dāng)洗脫體積達(dá)到一定值時(shí)，吸光度值出現(xiàn)第一個(gè)峰值，此后吸光度值隨著洗脫體積的增加而減小，當(dāng)減小到最小值時(shí)，吸光度值隨著洗脫體積的增加而增加，當(dāng)洗脫體積達(dá)到一定值時(shí)，吸光度值出現(xiàn)第二個(gè)峰值，且第一個(gè)峰值大于第二個(gè)峰值。此后吸光度值隨著洗脫體積的增加而減小。由圖可知，隨著洗脫體積的增加，電導(dǎo)率增加，當(dāng)洗脫體積達(dá)到一定值時(shí)，電導(dǎo)率出現(xiàn)第一個(gè)峰值，此后電導(dǎo)率隨著洗脫體積的增加而減小，當(dāng)減小到最小值時(shí)，電導(dǎo)率隨著洗脫體積的增加而增加，當(dāng)洗脫體積達(dá)到一定值時(shí)，電導(dǎo)率出現(xiàn)第二個(gè)峰值，此后電導(dǎo)率隨著洗脫體積的增加而減小。2.2莜麥水溶性蛋白的SDS分析蛋白條帶蛋白條帶12345圖中1，2，3，4，5均為水溶性蛋白條帶，從上到下蛋白的分子量依次減小。前四個(gè)蛋白條帶與5相比較寬，且個(gè)別蛋白不是很明顯，是脫鹽前樣品對(duì)應(yīng)的電泳圖，條帶5較窄，蛋白種類較多，且明顯，是脫鹽后樣品對(duì)應(yīng)的電泳圖。2.3討論水溶性植物功能蛋白因其具有“三高一強(qiáng)”的功能特性，在面制品應(yīng)用中不但能提高蛋白質(zhì)含量，增加營(yíng)養(yǎng)，而且明顯改善組織結(jié)構(gòu)，增加饅頭、面包、面條的彈性、韌性及表面光澤度，且因其是來(lái)源于小麥蛋白，使用后無(wú)需增加任何標(biāo)識(shí)，衛(wèi)生安全。在沙拉醬的生產(chǎn)過程中，由于使用蛋黃，其質(zhì)量環(huán)節(jié)較難控制，使用該產(chǎn)品生產(chǎn)無(wú)蛋沙拉醬不僅生產(chǎn)過程易于操作，保質(zhì)期延長(zhǎng)，而且由于是植物蛋白，不含膽固醇，更利于健康。植脂末產(chǎn)品一直是以酪蛋白鈉或酪蛋白作為乳化劑，該乳化劑的成本較高，影響植脂末的市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力。水溶性植物功能蛋白由于具有高水溶性和強(qiáng)乳化能力，可以全部替代酪蛋白鈉或酪蛋白而應(yīng)用于植脂末中，從而在不影響其品質(zhì)的前提下大大降低了生產(chǎn)成本。水溶性植物功能蛋白還可與植物油、淀粉和麥芽糊精配合使用，可部分代替奶粉應(yīng)用于冰淇淋、甜奶等乳制品中。還可廣泛應(yīng)用于其他需要添加植