銀杏達(dá)莫針劑對(duì)急性肺損傷兔肺組織氧自由基的影響

銀杏達(dá)莫針劑對(duì)急性肺損傷兔肺組織氧自由基的影響摘要】目的觀察銀杏達(dá)莫針劑對(duì)油酸所致急性肺損傷氧自由基的影響。方法

24只家兔隨機(jī)分為3組：假手術(shù)組、油酸模型組及銀杏達(dá)莫治療組，每組8只。連續(xù)監(jiān)測(cè)并記錄造模前、造模和治療后1、2、3、4h的心率、平均動(dòng)脈壓的變化；實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)測(cè)定肺組織濕、干重量，計(jì)算濕/干重比，并取肺組織檢測(cè)丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）。結(jié)果

銀杏達(dá)莫組外周血管阻力降低；銀杏達(dá)莫組與模型組比較，可以降低MDA（p【關(guān)鍵詞】油酸急性肺損傷氧自由基銀杏達(dá)莫針劑

基金項(xiàng)目：廣東省中醫(yī)藥局建設(shè)中醫(yī)藥強(qiáng)省科研課題（編號(hào)：20242071）

【Abstract】Objective

ToobservetheeffectsofGinkgodipyridoluminjectiononoxygenfreeradicalsinrabbitswithacutelunginjury（ALI）inducedbyoleicacid（OA）.Methods

24rabbitswererandomlydividedintothreegroups：shamoperationgroup，OAmodelgroupandginkgodipyridolum（GLE-DD）groupinequalnumber.Thechangesoftheheartrateandmeanarterialpressure（MAP）beforeandaftermakingmodelandathours1，2，3and4aftertreatmentwereconstantlymonitoredandrecorded.Attheendoftheexperiment，thewetweightanddryweightofthelungtissuewasdetectedtocountwet-to-dry（W/D）weightratio.TheMDAandSODinthelungtissueweretested.Results

TheperipheralvascularresistancewasdecreasedinGLE-DDgroup.Incomparisonwiththemodelgroup，thelevelofMDAwasdecreased（p【Keywords】Oleicacid，Acutelunginjury，Oxygenfreeradicals，Ginkgodipyridoluminjection

【Author′saddress】TheSecondPeople’sHospitalofGuangdongProvince，Guangzhou510317，GuangdongProvince，China

doi：10.3969/j.issn.1671-332X.2024.09.008

急性肺損傷（AcuteLungInjury，ALI）是一種危及生命的疾病，其特征是肺組織的炎癥發(fā)展迅速而嚴(yán)重，由于肺泡毛細(xì)血管壁的損傷、中性粒細(xì)胞浸潤，導(dǎo)致肺泡內(nèi)充滿含豐富蛋白質(zhì)的水腫液，引起肺順應(yīng)性差和低氧血癥。其病死率極高，可達(dá)18.0％～54.7%［1］。中性粒細(xì)胞的活化和遷移到肺是發(fā)展成ALI的關(guān)鍵［2］。中性粒細(xì)胞的活化產(chǎn)生大量的炎癥介質(zhì)，氧自由基作為主要的炎癥介質(zhì)是造成肺損傷的重要因素。

銀杏達(dá)莫為銀杏葉提取物銀杏總黃酮和雙密達(dá)莫的復(fù)方針劑。研究發(fā)現(xiàn)，銀杏提取物具有多方面的生物效能，其中重要的藥理功能即為抗氧化應(yīng)激作用［3］，在ALI時(shí)可抑制氧應(yīng)激，減少氧自由基損傷作用［4］。本研究采用油酸所致的家兔肺損傷模型，觀察銀杏達(dá)莫對(duì)急性肺損傷抗氧自由基的作用。

1材料與方法

1.1動(dòng)物及材料新西蘭大白兔24只，體重2.0～2.5kg，雌雄各半，由南方醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。油酸（分析純純度>99.0）；銀杏達(dá)莫注射液（貴州益佰制藥有限公司，批號(hào)：H52024242，每支5ml，主要成分銀杏總黃酮4.5～5.5mg，雙嘧達(dá)莫1.8～2.2mg）。丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）測(cè)定試劑盒（南京建成生物公司）。

1.2方法

1.2.1動(dòng)物處理腹腔注射3%戊巴比妥鈉20mg/kg，麻醉后將白兔仰臥于手術(shù)臺(tái)，耳緣靜脈置24G留置針；分離右側(cè)股骨動(dòng)脈并置管，通過壓力傳感器連接多功能監(jiān)護(hù)儀。

1.2.2動(dòng)物分組隨機(jī)分為3組，每組8只。假手術(shù)組：手術(shù)后經(jīng)耳緣靜脈注射0.9%生理鹽水0.1ml/kg，10min后緩慢推注0.9%生理鹽水30ml；油酸肺損傷模型組：經(jīng)耳緣靜脈注射油酸0.1ml/kg，10min后緩慢推注0.9%生理鹽水30ml；銀杏達(dá)莫治療組：經(jīng)耳緣靜脈注射油酸0.1ml/kg，10min后緩慢推注銀杏達(dá)莫注射液5ml/kg+0.9%生理鹽水，共30ml。

1.3觀察指標(biāo)

1.3.1平均動(dòng)脈壓和心率多功能監(jiān)護(hù)儀監(jiān)測(cè)造模前和造模及治療后1、2、3、4h平均動(dòng)脈壓和心率。

1.3.2肺組織濕干比值（W／D）的測(cè)定實(shí)驗(yàn)結(jié)束處死家兔后，開胸取左上肺，濾紙吸干肺表面水分和血跡后稱質(zhì)量，然后將組織置于75℃電熱恒溫干燥箱中干燥，24h后稱其干質(zhì)量，計(jì)算左肺W／D值。

1.3.3肺組織MDA和SOD測(cè)定實(shí)驗(yàn)結(jié)束取左上肺組織1g，制成勻漿，將制備好的勻漿以3500r／rain離心15min。取上清液0.1ml，考馬斯亮蘭蛋白測(cè)定法檢測(cè)肺組織勻漿液中蛋白濃度，按照試劑盒說明操作，測(cè)MDA和SOD含量。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用spss13.0軟件包處理數(shù)據(jù)，計(jì)量數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用ANOVA單因素方差分析，組間比較采用q檢驗(yàn)。

2結(jié)果

2.1一般情況

假手術(shù)組家兔實(shí)驗(yàn)前后無紫紺，呼吸頻率無異常變化；油酸組家兔靜脈注射油酸后均出現(xiàn)躁動(dòng)，呼吸急促、紫紺，在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中上述癥狀有逐漸加重的趨勢(shì)；銀杏達(dá)莫組有躁動(dòng)，呼吸急促、紫紺的現(xiàn)象，但程度明顯較油酸組減輕。

2.2平均動(dòng)脈壓與心率與假手術(shù)組比較，另2組平均動(dòng)脈壓無明顯改變，但心率于2、3、4h時(shí)點(diǎn)呈現(xiàn)下降，且油酸模型組更加明顯（p

2.3肺組織濕干重比值（W/D）模型組W/D明顯增加，提示肺水腫嚴(yán)重，與假手術(shù)組比較，有顯著差異（p0.05），而與油酸模型組比較有顯著差異（p2.4肺組織SOD和MDA

SOD在模型組與假手術(shù)組比較明顯下降（p

3討論

ALI的發(fā)病機(jī)制仍不完全清楚，且病理生理過程非常復(fù)雜。研究顯示：活化的中性粒細(xì)胞（PMN）在肺組織內(nèi)的浸潤是發(fā)展成急性肺損傷的關(guān)鍵［2］。當(dāng)油酸靜脈注射后通過神經(jīng)體液因素使肺微血管強(qiáng)烈收縮，同時(shí)其脂肪栓子阻塞肺毛細(xì)血管，使肺微循環(huán)障礙，油酸還可直接損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞和肺上皮細(xì)胞，當(dāng)通透性發(fā)生改變后，富含蛋白質(zhì)的液體及其他大分子物資涌入肺泡腔，引起肺水腫，破壞肺泡上皮屏障，中性粒細(xì)胞進(jìn)入肺間質(zhì)和支氣管肺泡空間［2，5］。隨著中性粒細(xì)胞的活化，一系列的炎癥介質(zhì)釋放出來，氧自由基即為主要的炎癥介質(zhì)之一?；钚匝酰≧OS）和氮（RNS）等分解成超氧陰離子和一氧化氮等物質(zhì)。正常情況下，機(jī)體所產(chǎn)生的自由基可通過細(xì)胞內(nèi)氧自由基清除酶予以清除，如肺細(xì)胞含有超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）等，可清除有害的自由基。然而當(dāng)肺組織遭受物理、化學(xué)和毒素等損傷時(shí)，PMN分泌的大量炎癥介質(zhì)如自由基等造成了細(xì)胞氧化酶系統(tǒng)的損傷，不能滅活氧自由基，出現(xiàn)多種病理損傷，特別是脂質(zhì)的損傷。脂質(zhì)過氧化后，其終產(chǎn)物MDA水平上升，進(jìn)一步引起蛋白質(zhì)交聯(lián)變性、DNA斷裂，肺組織結(jié)構(gòu)遭到破壞［4］。本研究中油酸損傷模型組，肺組織W/D比值明顯增加，提示存在嚴(yán)重肺水腫，反應(yīng)脂質(zhì)過氧化的MDA明顯增高和SOD明星下降，提示機(jī)體出現(xiàn)了氧化應(yīng)激反應(yīng)，氧自由基活躍，清除自由基的酶系統(tǒng)受到損傷。

近年來的研究提示，多種中藥及其復(fù)方或中藥提取物具有抗氧化功能，可以減輕重要器官急性損傷時(shí)的氧自由基作用，如川芎秦、葛根素、清開靈、參脈等可以減輕肺損傷時(shí)的氧自由基作用［6-7］；銀杏提取物可減少急性肝損傷的過氧化反應(yīng)［8］。銀杏達(dá)莫針劑為銀杏葉提取物銀杏總黃酮和雙密達(dá)莫的中西藥復(fù)方制劑，兩藥組合具有加強(qiáng)和協(xié)同作用。本實(shí)驗(yàn)顯示銀杏達(dá)莫針劑能夠降低油酸性肺損傷家兔的外周血管壓力，減少肺組織W/D比值明顯，即減輕肺水腫，并使MDA明顯降低和SOD明顯上升，部分抑制了氧化應(yīng)激反應(yīng)，提示對(duì)油酸性急性肺損傷有一定的保護(hù)作用。銀杏達(dá)莫的作用機(jī)制，文獻(xiàn)報(bào)告有抗氧化作用，能夠清除氧自由基、過氧化氫和一氧化氮，增加抗氧化酶活性，從而改善細(xì)胞生存，減少自由基誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，提高氧化應(yīng)激能力［3，9］；通過抑制氧化應(yīng)激和核因子kappaB（NF-κB）依賴性基質(zhì)的金屬蛋白酶-9通路而起作用。而NF-κB是一種調(diào)節(jié)基因表達(dá)的重要轉(zhuǎn)錄因子，已經(jīng)被證明在ALI的形成中，可調(diào)節(jié)MMP-9的表達(dá)［4］。本研究結(jié)果提示，銀杏達(dá)莫對(duì)油酸性急性肺損傷有一定的保護(hù)作用，其臨床療效如何有待進(jìn)一步研究。

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