高效液相色譜法測定蒙藥復(fù)方述達(dá)格-4有效部位中山奈素和高良姜素的含量

高效液相色譜法測定蒙藥復(fù)方述達(dá)格-4有效部位中山奈素和高良姜素的含量摘要]目的探析蒙藥復(fù)方述達(dá)格-4有效部位高良姜素2與中山奈素應(yīng)用高效液相色譜法檢測的方法。方法應(yīng)用高效液相反相色譜法，流動(dòng)相為乙腈（A）-0.5%磷酸水溶液，檢測波長286nm，梯度洗脫（0min～20min，34%A→37%A；20min～60min，37%A），流速1.0mL/min，色譜柱為DiamosilC18（4.6mm×250mm，5μm），柱溫30°C，進(jìn)樣量20μL。結(jié)果山柰素的線性范圍為0.01656μg～0.1656μg（γ=0.9999），高良姜素線性范圍為0.04μg～0.40μg（γ=0.9999）。重復(fù)性試驗(yàn)中，山柰素、高良姜素的平均含量分別為0.43%、1.21%；RSD分別為1.43%、0.94%；加樣回收率試驗(yàn)評(píng)估中，山柰素、高良姜素的回收率平均值分別為98.92%、99.92%，RSD為2.33%、2.09%。結(jié)論高效液相色譜檢測法的重復(fù)性較佳，簡便準(zhǔn)確，可為蒙藥復(fù)方述達(dá)格-4質(zhì)量控制提供依據(jù)。

關(guān)鍵詞 山柰素；高良姜素；有效部位；蒙藥復(fù)方述達(dá)格-4

[中圖分類號(hào)]R29[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A[文章編號(hào)]1674-074２（２０１4）07（b）－０130-03

[作者簡介]張海玉（1968-），女，內(nèi)蒙古呼和浩特人，大專，副主任蒙藥師，研究方向：蒙藥相關(guān)。

[通訊作者]李常勝，講師，E-mail:immc_kjc@163。

述達(dá)格-4為蒙藥傳統(tǒng)配方，蒙醫(yī)中用于止痛平喘，藥物成分為100g石菖蒲、100g木香、200g紫硵砂，可止痛消喘，具有鎮(zhèn)“巴達(dá)干赫依”的作用[1]。用于胃腸消化功能低下、胸肋刺痛、氣短胸悶、膈肌痙攣等臨床病癥[2]。述達(dá)格-4中主藥高良姜具有抗血栓、抗凝血、鎮(zhèn)痛、抗腹瀉、止嘔、抗?jié)兊裙δ?，黃酮為其主要藥理成分[3]。本研究富集復(fù)方藥物中黃酮類成分，對(duì)其有效部位的含量應(yīng)用HPLC法進(jìn)行檢測，取得滿意效果，現(xiàn)報(bào)道如下。

1試藥與儀器

MettlerToledo公司生產(chǎn)的AB135-S電子天平，AB135-S型超聲清洗儀，日本日立公司生產(chǎn)的LC-2000全自動(dòng)進(jìn)樣高效液相色譜儀，AgilentChemstation，L-2455紫外檢測器。安國市康達(dá)中藥材有限公司提供蒙藥復(fù)方述達(dá)格-4中各藥材，娃哈哈純凈水，乙腈為Fisher色譜純試劑，其他試劑為分析純；山柰素（批號(hào)：110861-202408；中國藥品生物制品檢定所）高良姜素對(duì)照品（批號(hào)：111699-202401；中國藥品生物制品檢定所）。

2方法與結(jié)果

2.1混合對(duì)照品儲(chǔ)備液制備

于5mL容量瓶內(nèi)精密稱量2.50mg干燥減壓后恒重的高良姜素對(duì)照品，于10mL容量瓶內(nèi)稱量2.07mg山柰素對(duì)照品，甲醇定容混勻后，于25mL容量瓶內(nèi)分別吸取1mL兩種對(duì)照品溶液，混合對(duì)照品濃度為0.00828mg/mL。

2.2供試品溶液制備

精密稱量5g述達(dá)格-4藥材，放入250mL圓底燒瓶內(nèi)，將50%的乙醇100mL精密加入，進(jìn)行2次回流提取，2h/次，用脫脂棉趁熱粗濾，將兩次提取液合并，溶劑無醇味后回收，對(duì)入蒸餾水稀釋至15mL；經(jīng)大孔樹脂柱純化，收集乙醇洗脫液，溶劑回收，25mL容量瓶內(nèi)定容70%乙醇，搖勻，即為有效部位樣品溶液，25mL容量瓶內(nèi)吸取1mL此溶液，定容70%乙醇，搖勻后用0.45μm微孔濾膜濾過。

2.3色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

流動(dòng)相為乙腈（A）-0.5%磷酸水溶液，檢測波長286nm，梯度洗脫0min～20min，34%A→37%A；20min～60min，37%A），流速1.0mL/min，色譜柱為DiamosilC18（4.6mm×250mm，5μm），柱溫30°C，進(jìn)樣量20μL。在以上色譜條件下，山柰素、高良姜素與相鄰色譜峰的分離度均≥1.5，對(duì)稱因子在0.95~1.05之間，理論板數(shù)均≥7000。色譜圖見下圖1。

1山奈素

2高良姜素

2.4線性關(guān)系考察

分別取混合對(duì)照品溶液分別進(jìn)樣2.0μL、4.0μL、6.0μL、8.0μL、10.0μL、20.0μL在以上色譜條件下進(jìn)行HPLC分析，以峰面積Y為縱坐標(biāo)，溶液質(zhì)量X（μg）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，達(dá)到山柰素、高良姜素的回歸方程分別為：Y=6469053.8311X-1420.7869γ=0.9999（山柰素線性方程）；Y=9011119.0984X-26100.0164γ=0.9999（高良姜素線性方程）；山柰素的線性范圍為0.01656～0.1656μg，高良姜素線性范圍為0.04～0.40μg。

2.5精密度試驗(yàn)

在以上色譜條件下，選擇同一供試品溶液連續(xù)6次進(jìn)樣，測得山柰素、高良姜素的峰面積的RSD（n=6）分別為0.90%、2.52%。

2.6重復(fù)性試驗(yàn)

同一供試品溶液制備6份，按以上色譜條件檢測。

2.7統(tǒng)計(jì)方法

采用spss17.0軟件系統(tǒng)分析所有數(shù)據(jù)，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。山柰素、高良姜素的平均含量分別為0.43%、1.21%；RSD分別為1.43%、0.94%，見表1。

2.8穩(wěn)定性試驗(yàn)

在以上色譜條件下，同一份供試品溶液分別于0、2、4、6、8、10、12、24h重復(fù)進(jìn)樣，檢測山柰素、高良姜素的峰面積的RSD（n=8）分別為0.79%、2.40%，說明24h內(nèi)供試品溶液的穩(wěn)定性較佳。

2.9加樣回收率試驗(yàn)

精密稱量2.5g述達(dá)格-4藥材6份，進(jìn)行有效部位樣品溶液制備，在25mL容量瓶內(nèi)分別吸取1mL樣品溶液，加入0.0245mg山柰素、0.0588mg高良姜素標(biāo)準(zhǔn)品，25mL容量瓶內(nèi)定容70%乙醇，混勻后用0.45μm微孔濾膜濾過，按以上色譜條件檢測，計(jì)算RSD及回收率。山柰素、高良姜素的回收率平均值分為98.92%、99.92%，RSD為2.33%、2.09%，見表2。

3樣品含量測定

取樣品3批，3份/批，按以上方法制備供試品溶液，液相色譜儀內(nèi)注入20μL供試品溶液，記錄峰面積，藥物中山柰素、高良姜素含量測定依據(jù)外標(biāo)一點(diǎn)法。見表3。

3討論

3.1選擇測定波長

選擇測定波長時(shí)，高良姜素、山柰素分別在282nm、286nm、290nm處可最大吸收[4]，但經(jīng)研究二者在286nm處吸收效果最佳[5]，所以測定波長選定為286nm。

3.2選擇流動(dòng)相

在對(duì)流動(dòng)相的系統(tǒng)選擇中，高良姜素在乙腈—磷酸水系統(tǒng)中的分離效果較佳[6]。

3.3選擇對(duì)照品

分析對(duì)照樣品時(shí)，發(fā)現(xiàn)黃酮為復(fù)方述達(dá)格—4有效部位的主要藥理成分，山柰素、高良姜素的藥理活性較強(qiáng)[7]。山柰素可發(fā)揮抗變態(tài)反應(yīng)、抗炎功能，影響人胃癌細(xì)胞原位移植裸鼠中的和一表達(dá)[8]；而高良姜素可顯著防護(hù)小鼠酒精型胃潰瘍及大鼠結(jié)扎性胃潰瘍，同時(shí)抗炎、抗病毒、抗畸形[9]。

該研究蒙藥復(fù)方述達(dá)格-4有效部位高良姜素2與中山奈素應(yīng)用高效液相色譜法檢測，結(jié)果顯示：重復(fù)性試驗(yàn)中，山柰素、高良姜素的平均含量分為為0.43%、1.21%；RSD分別為1.43%、0.94%；加樣回收率試驗(yàn)評(píng)估中，山柰素、高良姜素的回收率平均值分為為98.92%、99.92%，RSD為2.33%、2.09%，說明高效液相色譜檢測法的重復(fù)性較佳，簡便準(zhǔn)確，可為蒙藥復(fù)方述達(dá)格—4質(zhì)量控制提供依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

[1]董玉，賈鑫，馬強(qiáng).蒙藥復(fù)方述達(dá)格-4不同配伍對(duì)總黃酮和高良姜素含量的影響[J].內(nèi)蒙古大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版，2024，43(5):173-174.

[2]賈鑫，武娜，董玉.高效液相色譜法測定蒙藥復(fù)方述達(dá)格-4有效部位中山奈素和高良姜素的含量[J].內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2024，33(3):702-703.

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