藥物的體外抗菌試驗(yàn)

關(guān)于藥物的體外抗菌試驗(yàn)藥物的體外抗菌試驗(yàn)用途：抗菌藥物的篩選、藥物的抗菌譜測(cè)定及臨床藥物敏感性試驗(yàn)等方面。

第2頁(yè),共23頁(yè)，星期六，2024年，5月抑菌：即抑制微生物的生長(zhǎng)繁殖，但不能殺死微生物，在藥物除去后微生物又能生長(zhǎng)；殺菌：即能殺死微生物，當(dāng)藥物除去后，微生物也不能再生長(zhǎng)繁殖。兩者并非絕對(duì)，只是在一定條件下相對(duì)而言。第3頁(yè),共23頁(yè)，星期六，2024年，5月常用的體外抑菌試驗(yàn)

瓊脂擴(kuò)散法濾紙片法挖溝法連續(xù)稀釋法第4頁(yè),共23頁(yè)，星期六，2024年，5月瓊脂擴(kuò)散法原理：藥物可以在瓊脂培養(yǎng)基中自由擴(kuò)散，形成一定濃度的含藥區(qū)域。由于各種微生物對(duì)不同藥物或同一藥物不同濃度的敏感性不同，因而形成一定大小的抑菌圈或抑菌距離，根據(jù)其大小，可以了解藥物的抗菌作用大小或是微生物對(duì)試驗(yàn)藥物的敏感性。第5頁(yè),共23頁(yè)，星期六，2024年，5月濾紙片法：制成含菌平板后，將濾紙片蘸取藥液置于平板上，培養(yǎng)后觀察結(jié)果，量取抑菌圈直徑以此判斷試驗(yàn)藥物抑菌作用的強(qiáng)弱。用于新藥的初篩及臨床的藥敏試驗(yàn)。

第6頁(yè),共23頁(yè)，星期六，2024年，5月第7頁(yè),共23頁(yè)，星期六，2024年，5月挖溝法：1、在瓊脂平板上挖溝，溝兩邊垂直劃線接種各種試驗(yàn)菌，溝內(nèi)加入藥液。2、培養(yǎng)后，根據(jù)溝兩邊所生長(zhǎng)的試驗(yàn)菌離溝的距離來判斷藥物對(duì)試驗(yàn)菌的抗菌作用強(qiáng)弱。適用于在一個(gè)平板上試驗(yàn)一種藥物對(duì)幾種不同試驗(yàn)菌的抗菌作用。第8頁(yè),共23頁(yè)，星期六，2024年，5月第9頁(yè),共23頁(yè)，星期六，2024年，5月

瓊脂擴(kuò)散法具有方法簡(jiǎn)便，技術(shù)要求不高，易掌握操作的特點(diǎn)。但精確度不高，一般能用于定性或初步判斷其作用的強(qiáng)弱。液體稀釋法是一種測(cè)定藥物的抗菌作用定量方法，較瓊脂擴(kuò)散法精確，因而運(yùn)用較普遍。

第10頁(yè),共23頁(yè)，星期六，2024年，5月連續(xù)稀釋法可用于測(cè)定藥物的最低抑菌濃度（MIC）和最低殺菌濃度（MBC）?？梢杂靡后w培養(yǎng)基，也可用固體培養(yǎng)基。凡能抑制試驗(yàn)菌生長(zhǎng)的最高藥物稀釋度為該藥的最低抑菌濃度（Minimalinhibitoryconcentration，MIC）。以培養(yǎng)后無細(xì)菌生長(zhǎng)的最高藥物稀釋度為最小殺菌濃度（Minimalbactericidalconcentration，MBC）。第11頁(yè),共23頁(yè)，星期六，2024年，5月液體連續(xù)稀釋法

1、在一系列的試管中用液體培養(yǎng)基將試驗(yàn)藥物作連續(xù)對(duì)倍稀釋，使藥物的濃度沿試管順序成倍遞減。2、再于各管中加入等量的實(shí)驗(yàn)菌，經(jīng)16～24h培養(yǎng)后，與陰性及陽(yáng)性對(duì)照管進(jìn)行對(duì)照觀察。3、將未長(zhǎng)細(xì)菌的培養(yǎng)液取出，分別轉(zhuǎn)種瓊脂平皿。如培養(yǎng)后重新長(zhǎng)出試驗(yàn)菌，說明該藥僅有抑菌作用。如無菌生長(zhǎng)則可以認(rèn)為該藥物有殺菌作用。第12頁(yè),共23頁(yè)，星期六，2024年，5月第13頁(yè),共23頁(yè)，星期六，2024年，5月聯(lián)合抗菌試驗(yàn)

在藥學(xué)中，常需要檢查兩種抗菌藥物在聯(lián)合應(yīng)用時(shí)的相互作用以及抗菌藥物與不同PH值或不同離子溶液的相互影響。

加強(qiáng)藥物抗菌作用的為協(xié)同（synergism）；減弱藥物作用的為拮抗（antagonism）；互相無影響的為無關(guān)（indifference）；作用二者之和為累加（addition）。

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聯(lián)合抗菌試驗(yàn)的常用方法

一、紙條試驗(yàn)（paperstriptest）

即在已接種實(shí)驗(yàn)菌的平板表面垂直放置兩條浸有一種藥液的濾紙條，培養(yǎng)后根據(jù)抑菌區(qū)的加強(qiáng)、減弱或無影響來判斷它們?cè)诼?lián)合應(yīng)用時(shí)的效應(yīng)。圖20-2是紙條實(shí)驗(yàn)的示意圖。

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圖20-2是紙條實(shí)驗(yàn)的示意圖。圖中A列的兩紙條中只有一條含有抗菌藥物，另一條不含抗菌藥物；B列的兩紙條均含有抗菌藥物。

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二、棋盤格法（checkboardtest）

是由于在試驗(yàn)時(shí),含兩種不同濃度藥物的試管排列呈棋盤狀而得名,用以評(píng)價(jià)兩種藥物同時(shí)用不同濃度進(jìn)行聯(lián)合試驗(yàn)時(shí)的抗菌活性。實(shí)驗(yàn)時(shí)排列6排試管，每排6管，共36管使成方塊，A及B藥各以液體培養(yǎng)基進(jìn)行稀釋，A藥各稀釋度縱行定量加入各管，B藥各稀釋定量按橫排加入，兩藥同時(shí)作單獨(dú)抗菌實(shí)驗(yàn)對(duì)照。然后加入定量菌液，經(jīng)培養(yǎng)后觀察結(jié)果。第17頁(yè),共23頁(yè)，星期六，2024年，5月抗菌試驗(yàn)的影響因素1、試驗(yàn)菌：用專門的供應(yīng)機(jī)構(gòu)提供的標(biāo)準(zhǔn)菌株。北京衛(wèi)生部藥品生物制品檢定所菌種保藏中心。試驗(yàn)菌應(yīng)合理保藏，用前加以純化及生物學(xué)特征鑒定。第18頁(yè),共23頁(yè)，星期六，2024年，5月所用的試驗(yàn)菌株應(yīng)處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，因此期的微生物對(duì)外界因素變化最敏感。試驗(yàn)結(jié)果的靈敏度在一定程度上與試驗(yàn)菌的接種量成反比關(guān)系，故應(yīng)選用適宜的接種量。第19頁(yè),共23頁(yè)，星期六，2024年，5月抗菌試驗(yàn)的影響因素2、培養(yǎng)基抗菌試驗(yàn)的培養(yǎng)基應(yīng)按試驗(yàn)菌的需求配制，如鏈球菌常用含血清的肉湯培養(yǎng)基，抗真菌藥物試驗(yàn)需用沙氏培養(yǎng)基。培養(yǎng)基的酸堿度、電解質(zhì)、還原性物質(zhì)等均可影響試驗(yàn)結(jié)果，實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)盡可能排除各種影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果因素的摻入。經(jīng)無菌檢查合格。第20頁(yè),共23頁(yè)，星期六，2024年，5月抗菌試驗(yàn)的影響因素3、抗菌藥物藥物的濃度、pH及含有的其他成分均可影響試驗(yàn)結(jié)果，特別是中草藥制劑往往含有色素、雜質(zhì)和鞣質(zhì)等，這些均可造成錯(cuò)誤結(jié)果，應(yīng)加注意。

第21頁(yè),共23頁(yè)，星期六，2024年，