8.動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體

動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體專項(xiàng)2細(xì)胞工程蛇身馬首鹿角獸腳鬣尾鷹爪魚鱗虎須。。。受精卵來自精子來自卵細(xì)胞一、動(dòng)物細(xì)胞融合1、動(dòng)物細(xì)胞融合的過程不同DNA的兩個(gè)細(xì)胞AB思考題1、植物體細(xì)胞雜交中誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合慣用的辦法有哪些？離心、振動(dòng)和電激等物理辦法；PEG等化學(xué)辦法2、動(dòng)物細(xì)胞融合能運(yùn)用上述兩類方法嗎？尚有其它辦法嗎?能能夠運(yùn)用滅活的病毒進(jìn)行誘導(dǎo)滅活病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合的原理用滅活的病毒誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合過程細(xì)胞核病毒顆粒細(xì)胞核滅活喪失感染性保存融合活性為什么細(xì)胞融合過程中使用的病毒需要滅活？不同DNA的兩個(gè)細(xì)胞滅活病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合融合后的細(xì)胞進(jìn)行有絲分裂AB3、植物體細(xì)胞雜交過程應(yīng)先進(jìn)行原生質(zhì)體融合再進(jìn)行組織培養(yǎng)形成完整的個(gè)體，動(dòng)物細(xì)胞融合后能形成雜種動(dòng)物個(gè)體嗎？4、你能歸納出什么叫做動(dòng)物細(xì)胞融合嗎？不能思考題2、動(dòng)物細(xì)胞融合的概念動(dòng)物細(xì)胞融合也稱細(xì)胞雜交，是指兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一種細(xì)胞（單核的雜交細(xì)胞）的過程。4、動(dòng)物細(xì)胞融合的應(yīng)用生物新品種哺育細(xì)胞遺傳細(xì)胞免疫腫瘤運(yùn)用動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)誘導(dǎo)形成雜交瘤細(xì)胞，制備單克隆抗體3、動(dòng)物細(xì)胞融合的意義突破了有性雜交辦法的局限，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能。如果你掌握了動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)，你想用它來解決什么問題？植物體細(xì)胞雜交和動(dòng)物細(xì)胞融合在原理、細(xì)胞融合的辦法、誘導(dǎo)辦法等方面有什么差別呢？小結(jié)：雜種植株融合的原生質(zhì)體AB再生出細(xì)胞壁脫分化愈傷組織再分化植物細(xì)胞的融合植物組織培養(yǎng)植物細(xì)胞A原生質(zhì)體B原生質(zhì)體A雜種細(xì)胞AB去壁去壁人工誘導(dǎo)辦法？增進(jìn)融合的辦法？融合完畢的標(biāo)志植物細(xì)胞B復(fù)習(xí):植物體細(xì)胞雜交技術(shù)重要用于制備單克隆抗體獲得雜種植株用途物理、化學(xué)辦法（同左）滅活的病毒物理（離心、振動(dòng)、電刺激）化學(xué)（聚乙二醇）誘導(dǎo)辦法使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合細(xì)胞融合的辦法細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性、植物細(xì)胞全能性原理動(dòng)物細(xì)胞融合植物體細(xì)胞雜交比較項(xiàng)目植物、動(dòng)物細(xì)胞融合的比較1.抗體是由何種細(xì)胞產(chǎn)生的？提問？二、單克隆抗體2.運(yùn)用已學(xué)知識(shí)，考慮如何得到抗體？

抗體抗原刺激漿細(xì)胞通過免疫的B淋巴細(xì)胞（漿細(xì)胞）動(dòng)物體內(nèi)抗體的傳統(tǒng)生產(chǎn)辦法從血清中分離抗體多個(gè)漿細(xì)胞動(dòng)物體內(nèi)多個(gè)抗體抗原

抗原動(dòng)物體內(nèi)刺激漿細(xì)胞

抗體抗原不純抗體不純不能增殖產(chǎn)生大量抗體二、單克隆抗體產(chǎn)量低、純度低，抗體特異性差3.此辦法得到的抗體的缺點(diǎn)是什么？該法制備抗體的特點(diǎn)：1、如何確保抗體的純度？如何獲得化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的高產(chǎn)抗體？（一）、單克隆抗體的制備設(shè)計(jì)方案：小鼠骨髓瘤細(xì)胞－－能無限增殖2、如何提高抗體的產(chǎn)量？一種B淋巴細(xì)胞－－只分泌一種特異性抗體雜種細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞－－能無限增殖一種B淋巴細(xì)胞－－只分泌一種特異性抗體BB-BB-瘤瘤-瘤瘤3、細(xì)胞融合后培養(yǎng)液中有幾個(gè)細(xì)胞？4、如何從中篩選出雜交瘤細(xì)胞？用特定的選擇性培養(yǎng)基進(jìn)行篩選：在培養(yǎng)液中加入氨基嘌呤，收集增殖的細(xì)胞5、如何選擇出分泌所需專一抗體的雜交瘤細(xì)胞？克隆化培養(yǎng)和抗體檢測。經(jīng)多次篩選，獲得足夠數(shù)量的能分泌所需專一抗體的細(xì)胞。體外大規(guī)模培養(yǎng)或注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖，從細(xì)胞培養(yǎng)液或小鼠腹水中，可提取大量的單克隆抗體。6、如何獲得大量單克隆抗體？總結(jié):單克隆抗體的制備過程分組討論，單抗制備過程分哪幾步？請(qǐng)用箭頭把下列代表單克隆抗體制備過程環(huán)節(jié)的圖解的字母按對(duì)的次序連接起來。次序是？（一）、單克隆抗體的制備誘導(dǎo)其融合的辦法有哪些？融合后培養(yǎng)液中有幾個(gè)細(xì)胞如何篩選出雜交瘤細(xì)胞，雜交瘤細(xì)胞有何優(yōu)點(diǎn)注射特定抗原的目的是什么為什么要進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和專一抗體檢測，多次篩選大量增殖雜交瘤細(xì)胞獲得單克隆抗體的辦法制備過程由單個(gè)B淋巴細(xì)胞通過無性繁殖（克?。?，形成基因型相似的細(xì)胞群，這一細(xì)胞群所產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體稱為單克隆抗體。單克隆抗體最重要的優(yōu)點(diǎn)：特異性強(qiáng)、敏捷度高并可能大量制備。①在基礎(chǔ)理論研究中含有重要意義

②（二）、單克隆抗體的應(yīng)用診療試劑——最廣泛應(yīng)用精確、高效、簡易、快速同位素標(biāo)記的單克隆抗體，在特定組織中成像，定位診療有關(guān)疾病運(yùn)載藥品(“生物導(dǎo)彈”—單抗導(dǎo)向，藥品為彈頭)③用于治療疾病和運(yùn)載藥品比較植物體細(xì)胞雜交和單克隆抗體的制備比較項(xiàng)目植物體細(xì)胞雜交單克隆抗體的制備原理融合前處理促融方法

用途過程第一步第二步第三步第四步細(xì)胞膜的流動(dòng)性、細(xì)胞的全能性膜的流動(dòng)性、細(xì)胞增殖酶解法去壁小鼠免疫解決、細(xì)胞分散物理法化學(xué)法物理、化學(xué)、生物法原生質(zhì)體的制備融合親本細(xì)胞的準(zhǔn)備原生質(zhì)體的融合與篩選動(dòng)物細(xì)胞融合與兩次篩選雜種細(xì)胞的形成與培養(yǎng)產(chǎn)特定抗體的雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)雜種植株的鑒定單克隆抗體的分離提純單抗有助于疾病的診療、治療、防止獲得具優(yōu)良性狀的雜種植株小結(jié)兩個(gè)過程動(dòng)物細(xì)胞融合過程單克隆抗體制備過程三個(gè)“一”一種誘導(dǎo)細(xì)胞融合的新辦法－－滅活病毒一種新細(xì)胞－－雜交瘤細(xì)胞一種優(yōu)勢－－單克隆抗體特異性強(qiáng)、敏捷度高的優(yōu)勢1、科學(xué)家用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與某種細(xì)胞融合，得到雜交瘤細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量的單克隆抗體，與骨髓瘤細(xì)胞融合的是A.通過免疫的B淋巴細(xì)胞B.不通過免疫的T淋巴細(xì)胞C.通過免疫的T淋巴細(xì)胞 D.不通過免疫的B淋巴細(xì)胞B不要灰心，再來一次！ADC不要灰心，再來一次！不要灰心，再來一次！恭喜你，答對(duì)了！再接再厲！知識(shí)闖關(guān)2、單克隆抗體制備過程中，骨髓瘤細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞融合后要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞。在這種培養(yǎng)基上不能存活、增殖的細(xì)胞是①B淋巴細(xì)胞②小鼠骨髓瘤細(xì)胞③B淋巴細(xì)胞本身融合細(xì)胞④小鼠骨髓瘤細(xì)胞本身融合細(xì)胞⑤雜交瘤細(xì)胞A.①②③④B.①③⑤C.②④D.①③B不要灰心，再來一次！ADC不要灰心，再來一次！不要灰心，再來一次！恭喜你，答對(duì)了！再接再厲！3、試管嬰兒、試管苗和克隆羊這三者能夠說是當(dāng)代生物科技的杰出成果,下列對(duì)其生物學(xué)原理及技術(shù)的敘述,對(duì)的的是A.都屬于無性生殖B.都運(yùn)用了細(xì)胞工程的某些技術(shù)C.都不會(huì)發(fā)生基因重組

D.都體現(xiàn)了已分化的細(xì)胞含有全能性B解題思路探究對(duì)克隆與組織培養(yǎng)、試管動(dòng)物(嬰兒)分辨不清克隆組織培養(yǎng)試管動(dòng)物(嬰兒)生殖方式無性無性有性遺傳物質(zhì)來源2個(gè)親本1個(gè)親本2個(gè)親本性別決定提供核親本一般沒有精子類型用途優(yōu)良種畜快速繁育,可選擇性別快速繁殖無病毒植株解決不孕不育4、將小鼠骨髓瘤細(xì)胞與一種B淋巴細(xì)胞融合，可使融合的細(xì)胞經(jīng)培養(yǎng)產(chǎn)生單克隆抗體，其根據(jù)是

A.B淋巴細(xì)胞能夠產(chǎn)生抗體，但不能無限增殖

B.B淋巴細(xì)胞只有與骨髓瘤細(xì)胞融合后才干產(chǎn)

生抗體

C.骨隨瘤細(xì)胞能夠無限增殖，但不能產(chǎn)生抗

體

D.骨髓瘤細(xì)胞能夠產(chǎn)生抗體，但不能無限增

殖多選題（A、C）下課啦！5、右圖為某同窗根據(jù)雜交瘤技術(shù)的辦法，設(shè)計(jì)的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌抗體的實(shí)驗(yàn)方案。據(jù)圖回答：⑴該方案能達(dá)成預(yù)期效果嗎？因素是⑵圖中②為過程，可在誘導(dǎo)下完畢。雜交瘤細(xì)胞繁殖進(jìn)行的是分裂，該細(xì)胞的特點(diǎn)是⑶淋巴細(xì)胞能與骨髓瘤融合成一種細(xì)胞，兩種細(xì)胞膜也能融合在一起，闡明細(xì)胞膜不能沒有抗原注入小鼠體內(nèi)，無法獲得產(chǎn)生此種抗體的B細(xì)胞細(xì)胞融合有絲滅活的病毒或聚乙二醇又能產(chǎn)生專一的抗體。既能快速大量繁殖，含有一定的流動(dòng)性⑷將誘導(dǎo)后產(chǎn)生的多個(gè)細(xì)胞，放在含培養(yǎng)基的多孔培養(yǎng)板上培養(yǎng)，篩選。⑸該方案的目的是。單克隆抗體的精擬定義為。A.一類特殊抗體B.無性繁殖系C.單一抗體細(xì)胞的無性繁殖系D.單一抗體細(xì)胞的有性繁殖系⑹單克隆抗體與普通的血清抗體相比，含有的優(yōu)點(diǎn)是。特定的選擇性制備單克隆抗體C特異性強(qiáng)，敏捷度高并可大量制備抗體是機(jī)體受抗原刺激后產(chǎn)生的、并能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合的含有免疫功效的球蛋白。什么是抗體？已知細(xì)胞合成DNA有D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基嘌呤阻斷。人淋巴細(xì)胞中有這兩條DNA合成途徑，但普通不分裂增殖。鼠骨髓瘤細(xì)胞中盡管沒有S途徑，但能不停分裂增殖。小資料：思考與探究1.植物體細(xì)胞雜交技術(shù)與動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)有什么不同？提示：植物體細(xì)胞雜交技術(shù)與動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)基本相似，不同的是植物體細(xì)胞融合前需去掉細(xì)胞壁，然后再融合；動(dòng)物細(xì)胞融合是兩個(gè)體細(xì)胞直接融合。思考與探究

2.制備單克隆抗體時(shí)，為什么要選用B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合形成雜交瘤細(xì)胞？提示：動(dòng)物在免疫反映的過程中，每一種B淋巴細(xì)胞能分泌一種特異性抗體，要想獲得大量的特異性抗體，必須使能分泌該單一抗體的B淋巴細(xì)胞大量增殖。B淋巴細(xì)胞含有產(chǎn)生單一抗體的能力，但不能在體外增殖；骨髓瘤細(xì)胞是一種癌細(xì)胞，它能在體外培養(yǎng)條件下無限增殖，但不能產(chǎn)生抗體。因此，把一種B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞融合，產(chǎn)生雜交瘤細(xì)胞，它會(huì)兼有兩個(gè)親本細(xì)胞的特性──在體外培養(yǎng)條件下能不停增殖，同時(shí)能產(chǎn)生出某種特異性的抗體。4.為什么不用兩個(gè)而要用多個(gè)細(xì)胞進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞間的融合？就現(xiàn)在慣用的細(xì)胞融合辦法來看，不管是用物理的、化學(xué)的辦法，還是生物的辦法，其融合率都不可能是100%。僅用兩個(gè)細(xì)胞融合，其效率太低，不一定能得到融合細(xì)胞。更重要的是，即使兩個(gè)細(xì)胞已發(fā)生融合，但并不一定是研究者盼望得到的細(xì)胞類型?，F(xiàn)在動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)最有價(jià)值的應(yīng)用就是單克隆抗體的制備。我們以制備單克隆抗體為例來闡明這一問題。我們懂得，體內(nèi)產(chǎn)生的特異性抗體種類可多達(dá)百萬種以上，但是每一種B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體，如果僅取一種脾細(xì)胞（含B淋巴細(xì)胞）和一種瘤細(xì)胞雜交，我們不能擬定該脾細(xì)胞分泌的抗體與否正是我們所需要的；若用大量的脾細(xì)胞和瘤細(xì)胞進(jìn)行融合，就能夠從融合細(xì)胞中篩選出能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞。5.如何進(jìn)行雜交瘤細(xì)胞的抗體檢測及克隆化培養(yǎng)？融合后的細(xì)胞經(jīng)選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)后，能存活的細(xì)胞就是雜交瘤細(xì)胞。但這些雜交瘤細(xì)胞并非都是能分泌所需抗體的細(xì)胞，普通用“有限稀釋法”來選擇。將雜交瘤細(xì)胞稀釋，用多孔細(xì)胞培養(yǎng)板培養(yǎng)，使每孔細(xì)胞不超出一種，通過培養(yǎng)讓其增殖。然后檢測各孔上清液中細(xì)胞分泌的抗體（慣用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)法），那些上清液可與特定抗原結(jié)合的培養(yǎng)孔為陽性孔。陽性孔中的細(xì)胞還不能確保是來自單個(gè)細(xì)胞，挑選陽性孔的細(xì)胞繼續(xù)進(jìn)行有限稀釋，普通需進(jìn)行3～4次，直至確信每個(gè)孔中增殖的細(xì)胞為單克隆細(xì)胞。該過程即為雜交瘤細(xì)胞的克隆化培養(yǎng)。對(duì)位訓(xùn)練3.運(yùn)用細(xì)胞工程辦法，以SARS病毒核衣殼蛋白為抗原制備出單克隆抗體。下列有關(guān)敘述對(duì)的的是（）A.用純化的核衣殼蛋白重復(fù)注射到小鼠體內(nèi)，產(chǎn)生的血清抗體為單克隆抗體B.體外培養(yǎng)單個(gè)B淋巴細(xì)胞能夠獲得大量針對(duì)SARS病毒的單克隆抗體C.將等量B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞混合，經(jīng)PEG誘導(dǎo)融合后的細(xì)胞均為雜交瘤細(xì)胞D.運(yùn)用該單克隆抗體與SARS病毒核衣殼蛋白特異性結(jié)合的辦法可診療出病毒感染者D1、從母羊甲的體細(xì)胞中取出細(xì)胞核，注入到母羊乙去掉核的卵細(xì)胞中，融合后的細(xì)胞經(jīng)卵裂形成早期胚胎，再植入到另一只母羊丙的子宮內(nèi)，出生小羊的大多數(shù)性狀() A.難以預(yù)測B.像甲C.像乙D.像丙2．（2004年，全國）用動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)獲取單克隆抗體，下列實(shí)驗(yàn)環(huán)節(jié)中錯(cuò)誤的是（）A．將抗原注入小鼠體內(nèi)，獲得能產(chǎn)生抗體的B淋巴細(xì)胞B．用纖維素酶解決B淋巴細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞C．用聚乙二醇作誘導(dǎo)劑，促使能產(chǎn)生抗體的B淋巴細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合D．篩選雜交資金積累細(xì)胞，并從中選出能產(chǎn)生所需抗體的細(xì)胞群，培養(yǎng)后提取單克隆抗體基礎(chǔ)訓(xùn)練鞏固BB3.動(dòng)物細(xì)胞融合和植物體細(xì)胞雜交的比較