《生物產(chǎn)品分析與檢驗(yàn)技術(shù)》課件-葡萄糖酸含量的測定

葡萄糖酸含量的測定葡萄糖酸簡介葡萄糖酸是一種有機(jī)化合物，是由葡萄糖的醛基經(jīng)氧化生成。天然葡萄糖酸存在于水果、蜂蜜和葡萄酒中。在食品生產(chǎn)中，葡萄糖酸主要用作蛋白凝固劑、食品防腐劑和酸度調(diào)節(jié)劑。在醫(yī)藥生產(chǎn)中，可用于生產(chǎn)葡萄糖酸鹽。葡萄糖酸測定方法葡萄糖酸的測定方法主要有異羥肟酸比色法、高碘酸氧化法、酶法和高效液相色譜法。發(fā)酵液中葡萄糖酸含量測定---異羥肟酸比色法測定原理

葡萄糖酸在酸性條件下發(fā)生內(nèi)酯化，形成的內(nèi)酯與羥胺堿反應(yīng)，生成異羥肟酸。異羥肟酸遇FeCl3能生成異羥肟酸-Fe3+有色絡(luò)合物，可以通過分光光度比色法定量分析葡萄糖酸的含量。儀器與器具

儀器設(shè)備

可見分光光度計(jì)電子天平可調(diào)式電爐

玻璃器皿比色管10mL容量瓶100ml移液管、移液槍試劑與溶液配制0.10mol/L的葡萄糖酸鈉標(biāo)準(zhǔn)儲備液和4mol/L的HCl溶液，低溫保存。在測定時(shí)分別取不同體積的葡萄糖酸鈉標(biāo)準(zhǔn)儲備液，配制成濃度分別為1、2、4、8mmol/L的葡萄糖酸鈉標(biāo)準(zhǔn)工作液，用4mol/L的HCl溶液調(diào)節(jié)pH值=1.5；備用。試劑與溶液鹽酸羥胺與NaOH混合試劑：

配制4mol/L鹽酸羥胺溶液和4mol/L的NaOH溶液，低溫保存。

使用時(shí)，將等體積的鹽酸羥胺和NaOH混合，混合后pH值為8.0。

配制的溶液應(yīng)在4h內(nèi)使用。FeCl3混合試劑：

事先配制好0.37mol/L的FeCl3溶液和0.1mol/L的HCl溶液。

使用時(shí)等體積混合。葡萄糖酸鈉標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

標(biāo)準(zhǔn)曲線系列濃度溶液的制備首先準(zhǔn)備好5支、10ml具塞比色管，用記號筆標(biāo)記為0、1、2、3、4；用移液槍分別移取濃度為1、2、4、8mmol/L的葡萄糖酸鈉標(biāo)準(zhǔn)工作溶液1ml，依次加入編號為“1、2、3、4”的具塞比色管中；同時(shí)移取1ml去離子水，加入“0”號空白比色管中，用4mol/L鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH=1.5；加熱30min，冷卻，依次加入2ml羥胺堿、1ml4mol/L的鹽酸溶液和1mLFeCl3試劑，顯色。葡萄糖酸鈉標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制按下表在各管中加樣，制備葡萄糖酸鈉標(biāo)準(zhǔn)曲線系列濃度溶液比色管編號01234標(biāo)樣濃度（mmol/L）0.01.02.04.08.0標(biāo)準(zhǔn)溶液體積/mL01.01.01.01.0去離子水/mL1.00000鹽酸羥胺和NaOH混合液/mL2.02.02.02.02.0FeCl3和HCl的混合溶液/mL1.01.01.01.01.0葡萄糖酸鈉標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制吸光度測定以空白管對照，在500nm波長下，測定溶液吸光度值；以葡萄糖酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)，進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。注意：測定工作在10min內(nèi)完成。要求提前打開分光光度計(jì)，調(diào)節(jié)到正常測定工作狀態(tài)，確保溶液吸光度值測定工作在10min內(nèi)完成。試樣中葡萄糖酸含量的測定步驟測定前將待測樣品稀釋一定倍數(shù)，制成樣品稀釋液。用移液槍分別移取1mL待測樣品稀釋液，用4mol/L的鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH=1.5，其余處理步驟同上；以空白做對照，完成樣品溶液吸光度測定。從標(biāo)準(zhǔn)曲線圖上查出樣品溶液葡萄糖酸的含量，并及時(shí)填寫檢測結(jié)果原始記錄單；結(jié)果記錄與計(jì)算式中：C---樣品溶液中葡萄糖酸的含量，mmol/L；C1---從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出的葡萄糖酸的含量，mmol/LF---樣品溶液的稀釋倍數(shù)。計(jì)算公式：課程小結(jié)