高考生物一輪復(fù)習(xí)課后限時(shí)集訓(xùn)39基因工程含解析新人教版

一輪復(fù)習(xí)精品資料(高中)PAGE1-基因工程(建議用時(shí)：40分鐘)1．(2020·贛州市高三模擬)濱藜在含鹽量0.6%以上的條件下生長(zhǎng)，是耐鹽堿基因開(kāi)發(fā)的理想材料。若將濱藜的耐鹽堿基因轉(zhuǎn)移到水稻等農(nóng)作物體內(nèi)，將會(huì)大大提高水稻等農(nóng)作物的種植面積。回答下列問(wèn)題：(1)從濱藜中獲得耐鹽堿基因需要用________酶處理，然后與含四環(huán)素抗性基因的Ti質(zhì)粒連接構(gòu)建________，并導(dǎo)入農(nóng)桿菌。在含有四環(huán)素的固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，目的是___________________________________________________。(2)用農(nóng)桿菌感染時(shí)，應(yīng)優(yōu)先選用水稻________(填“受傷的”或“完好的”)葉片與含重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌共同培養(yǎng)，選用這種葉片的理由是____________________________________。(3)導(dǎo)入耐鹽堿基因的植株細(xì)胞經(jīng)過(guò)________形成愈傷組織，然后________形成胚狀體，繼續(xù)發(fā)育形成轉(zhuǎn)基因水稻幼苗。(4)將生長(zhǎng)至4葉期的轉(zhuǎn)基因幼苗轉(zhuǎn)入高濃度的NaCl溶液(含鹽量0.6%以上)中培養(yǎng)，進(jìn)行耐鹽實(shí)驗(yàn)，用非轉(zhuǎn)基因幼苗作為對(duì)照。培養(yǎng)30天后觀察兩者的存活率差異。若__________________________________，則說(shuō)明轉(zhuǎn)基因植株獲得了耐鹽特性?！肌冀馕觥健?1)使用限制酶從濱藜中獲得耐鹽堿基因，與含抗生素抗性基因的Ti質(zhì)粒連接構(gòu)建基因表達(dá)載體(或重組質(zhì)粒)，并導(dǎo)入農(nóng)桿菌，將其在含有四環(huán)素的固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，目的是篩選出導(dǎo)入重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌。(2)當(dāng)植物體受到損傷時(shí)，傷口處的細(xì)胞會(huì)分泌大量的酚類化合物，吸引農(nóng)桿菌移向這些細(xì)胞，因此用農(nóng)桿菌感染時(shí)，優(yōu)先選用水稻受傷的葉片。(3)含有目的基因的植物細(xì)胞先脫分化形成愈傷組織，然后再分化形成根、芽和胚狀體，然后繼續(xù)發(fā)育形成轉(zhuǎn)基因幼苗。(4)將生長(zhǎng)至4葉期的轉(zhuǎn)基因水稻幼苗轉(zhuǎn)入含鹽量0.6%以上的環(huán)境中培養(yǎng)，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，用非轉(zhuǎn)基因幼苗作為對(duì)照。若轉(zhuǎn)基因植株存活率高于非轉(zhuǎn)基因植株，說(shuō)明轉(zhuǎn)基因水稻植株獲得了耐鹽特性?！肌即鸢浮健?1)限制性核酸內(nèi)切(或限制)重組質(zhì)粒(或重組DNA分子)篩選出導(dǎo)入重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌(2)受傷的葉片傷口處的細(xì)胞釋放出大量酚類物質(zhì)，可吸引農(nóng)桿菌移向這些細(xì)胞(3)脫分化再分化(4)轉(zhuǎn)基因植株存活率高于非轉(zhuǎn)基因植株2．(2020·全國(guó)卷Ⅲ)W是一種具有特定功能的人體蛋白質(zhì)。某研究小組擬仿照制備乳腺生物反應(yīng)器的研究思路，制備一種膀胱生物反應(yīng)器來(lái)獲得W，基本過(guò)程如圖所示。回答下列問(wèn)題：(1)步驟①中需要使用的工具酶有________。步驟②和③所代表的操作分別是________和________。步驟④稱為_(kāi)_______。(2)與乳腺生物反應(yīng)器相比，用膀胱生物反應(yīng)器生產(chǎn)W的優(yōu)勢(shì)在于不受轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的________(答出2點(diǎn)即可)的限制。(3)一般來(lái)說(shuō)，在同一動(dòng)物個(gè)體中，乳腺上皮細(xì)胞與膀胱上皮細(xì)胞的細(xì)胞核中染色體DNA所含的遺傳信息________(填“相同”或“不同”)，原因是________。(4)從上述流程可知，制備生物反應(yīng)器涉及胚胎工程，胚胎工程中所用到的主要技術(shù)有________(答出2點(diǎn)即可)?！肌冀馕觥健?1)步驟①是基因表達(dá)載體的構(gòu)建過(guò)程，該過(guò)程需要使用的工具酶有限制性核酸內(nèi)切酶(限制酶)和DNA連接酶，用限制酶分別切割載體和目的基因，用DNA連接酶將目的基因和載體連接起來(lái)。步驟②和③所代表的操作分別是顯微注射和體外培養(yǎng)。步驟④是將早期胚胎植入到代孕母體內(nèi)，稱為胚胎移植。(2)與乳腺生物反應(yīng)器相比，用膀胱生物反應(yīng)器生產(chǎn)W的優(yōu)勢(shì)在于不受轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的性別和年齡的限制。(3)乳腺上皮細(xì)胞和膀胱上皮細(xì)胞都是體細(xì)胞。一般來(lái)說(shuō)，在同一動(dòng)物個(gè)體中，其體細(xì)胞都是由同一個(gè)受精卵分裂、分化而來(lái)的，細(xì)胞在分裂、分化過(guò)程中，其細(xì)胞核中染色體DNA所含的遺傳信息一般是不變的，因此兩種上皮細(xì)胞的染色體DNA所含的遺傳信息相同。(4)據(jù)題述流程可知，胚胎工程中所用到的主要技術(shù)有體外受精、早期胚胎培養(yǎng)、胚胎移植等?！肌即鸢浮健?1)限制性核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶顯微注射體外培養(yǎng)胚胎移植(2)性別、年齡(3)相同兩種上皮細(xì)胞都是體細(xì)胞，且來(lái)源于同一個(gè)受精卵(4)體外受精、胚胎移植3．(2020·張家口市高三模擬)MAP30蛋白是一種能使Ⅰ型核酸核糖體失活的蛋白質(zhì)，存在于苦瓜果實(shí)和種子中。實(shí)驗(yàn)表明，MAP30蛋白具有抗腫瘤、抗菌、抗病毒等功能，近年來(lái)引起人們的廣泛關(guān)注。現(xiàn)有一科研團(tuán)隊(duì)欲培育高效表達(dá)該蛋白基因的馬鈴薯新品種。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：(1)若要獲取MAP30蛋白基因，人們可從________基因庫(kù)中獲得。獲得目的基因后可利用PCR技術(shù)對(duì)其進(jìn)行擴(kuò)增，所用的緩沖液中除目的基因外，應(yīng)包括________等物質(zhì)。(2)構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，需要使用到的酶是____________________________。為了避免出現(xiàn)“目的基因自我環(huán)化”“目的基因在運(yùn)載體上反向連接”的問(wèn)題，常用的解決辦法是__________________________________________________。(3)將基因表達(dá)載體導(dǎo)入馬鈴薯受體細(xì)胞后，可用________技術(shù)得到轉(zhuǎn)基因幼苗。檢測(cè)MAP30蛋白基因是否在受體細(xì)胞中成功表達(dá)，可用___________________________________________________________________。(4)科研人員為了研究MAP30蛋白抗弧菌的效果，用含不同濃度MAP30蛋白培養(yǎng)液培養(yǎng)弧菌，繪制弧菌生長(zhǎng)曲線如圖：由圖可以得出的結(jié)論是____________________________________________________________________________________________________________?！肌冀馕觥健?1)獲取目的基因，要從含有該基因的苦瓜基因庫(kù)中尋找。利用PCR技術(shù)擴(kuò)增該基因，PCR反應(yīng)體系的主要成分應(yīng)該包含4種脫氧核糖核苷酸、模板DNA、引物、熱穩(wěn)定DNA聚合酶、擴(kuò)增緩沖液等。(2)構(gòu)建基因表達(dá)載體需要使用到的酶是限制酶和DNA連接酶；為了避免出現(xiàn)“目的基因自我環(huán)化”“目的基因在運(yùn)載體上反向連接”的問(wèn)題，可分別使用兩種限制酶去剪切目的基因和運(yùn)載體。(3)可用植物組織培養(yǎng)技術(shù)得到轉(zhuǎn)基因幼苗，可通過(guò)抗原—抗體雜交技術(shù)檢測(cè)MAP30蛋白基因是否成功表達(dá)。(4)用含不同濃度MAP30蛋白培養(yǎng)液培養(yǎng)弧菌，根據(jù)圖中曲線顯示，隨著MAP30蛋白濃度的升高，MAP30蛋白對(duì)弧菌生長(zhǎng)的抑制作用增強(qiáng)；當(dāng)MAP30蛋白濃度達(dá)到或高于500g/mL時(shí)，弧菌生長(zhǎng)完全被抑制?！肌即鸢浮健?1)苦瓜4種脫氧(核糖)核苷酸、引物、熱穩(wěn)定DNA聚合酶(Taq酶)(2)限制酶和DNA連接酶分別使用兩種限制酶去剪切目的基因和運(yùn)載體(3)植物組織培養(yǎng)抗原—抗體雜交技術(shù)(4)隨著MAP30蛋白濃度的升高，MAP30蛋白對(duì)弧菌生長(zhǎng)的抑制作用增強(qiáng)；當(dāng)MAP30蛋白濃度達(dá)到或高于500g/mL時(shí)，弧菌生長(zhǎng)完全被抑制4．(2020·福建省高三一模)人體內(nèi)的t-PA蛋白能高效降解由纖維蛋白凝聚而成的血栓，是心梗和腦血栓的急救藥。然而，為心?；颊咦⑸浯髣┝康幕蚬こ蘴-PA會(huì)誘發(fā)顱內(nèi)出血，其原因在于t-PA與纖維蛋白結(jié)合的特異性不高。研究證實(shí)，將t-PA第84位的半胱氨酸換成絲氨酸，能顯著降低出血副作用。據(jù)此，先對(duì)天然的t-PA基因進(jìn)行序列改造，然后再采取傳統(tǒng)的基因工程方法表達(dá)該改造后的基因，可制造出性能優(yōu)異的改良t-PA蛋白。(注：如圖表示相關(guān)的目的基因、載體及限制酶。pCLY11為質(zhì)粒，新霉素為抗生素。)回答下列問(wèn)題：(1)已知人t-PA基因第84位半胱氨酸的模板鏈堿基序列為ACA，而絲氨酸的密碼子為UCU，因此改造后的基因決定第84位絲氨酸的模板鏈的堿基序列應(yīng)設(shè)計(jì)為_(kāi)_______。(2)若t-PA改良基因的黏性末端如圖所示，那么需選用限制酶________和__________切開(kāi)質(zhì)粒pCLY11，才能與t-PA改良基因高效連接，在連接時(shí)需要用到________酶。(3)應(yīng)選擇________(填“能”或“不能”)在加入新霉素的培養(yǎng)基中生存并形成菌落的大腸桿菌作為受體細(xì)胞，目的是________________________。在加入新霉素的培養(yǎng)基中形成菌落的受體細(xì)胞并非都是目的菌株，需選擇呈________色的菌落，進(jìn)一步培養(yǎng)、檢測(cè)和鑒定，以選育出能生產(chǎn)改良t-PA蛋白的工程菌株。(4)以上制造性能優(yōu)異的改良t-PA蛋白的過(guò)程稱為_(kāi)_______工程。〖〖解析〗〗(1)根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)的原則，絲氨酸的密碼子為UCU，則其編碼序列為TCT，所以模板鏈的堿基序列為AGA。(2)若要質(zhì)粒pCLY11與t-PA突變基因高效連接，需質(zhì)粒和突變基因切割后產(chǎn)生黏性末端能堿基互補(bǔ)配對(duì)，t-PA突變基因切割后的黏性末端分別為－GGCC和－CTAG，故質(zhì)粒pCLY11需要用XmaI和BglⅡ切割，連接時(shí)需要用DNA連接酶。(3)由于質(zhì)粒上以新霉素抗性基因作為標(biāo)記基因，所以選擇不能在加入新霉素的培養(yǎng)基中生存并形成菌落的大腸桿菌作為受體細(xì)胞，以便篩選出導(dǎo)入質(zhì)粒pCLY11的大腸桿菌。重組質(zhì)粒的mlacZ序列被破壞，表達(dá)產(chǎn)物使細(xì)胞呈白色，故在加入新霉素的培養(yǎng)基中形成菌落的受體細(xì)胞需選擇呈白色的菌落，進(jìn)一步培養(yǎng)、檢測(cè)和鑒定，以選育出能生產(chǎn)改良t-PA蛋白的工程菌株。(4)通過(guò)對(duì)基因的改造實(shí)現(xiàn)對(duì)蛋白質(zhì)的改造，稱為蛋白質(zhì)工程?！肌即鸢浮健?1)AGA(2)XmɑⅠBglⅡDNA連接(3)不能以便篩選出導(dǎo)入質(zhì)粒pCLY11的大腸桿菌白(4)蛋白質(zhì)5．(2020·淄博市高三二模)核酸疫苗是將編碼某種抗原蛋白的外源基因(DNA或RNA片段)導(dǎo)入動(dòng)物體細(xì)胞內(nèi)，通過(guò)宿主細(xì)胞的表達(dá)系統(tǒng)合成抗原蛋白，誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生對(duì)該抗原蛋白的免疫應(yīng)答，以達(dá)到預(yù)防或治療相應(yīng)疾病的一類新型疫苗。研究表明核酸疫苗不僅具有良好的免疫原性與安全性，且由于核酸更易于修飾與改造，較以往蛋白疫苗具有更大的靈活性和更廣闊的應(yīng)用前景。請(qǐng)回答：(1)研發(fā)DNA疫苗時(shí)，構(gòu)建含有病原體抗原基因表達(dá)載體的過(guò)程中需要用到的工具酶有____________________________。(2)圖中所用的載體是________，構(gòu)建基因表達(dá)載體的目的是______________________，基因表達(dá)載體中，驅(qū)動(dòng)病原體抗原基因轉(zhuǎn)錄的結(jié)構(gòu)________________。將該DNA疫苗導(dǎo)入受體細(xì)胞的方法是肌肉注射法或____________。(3)mRNA疫苗可以由計(jì)算機(jī)設(shè)計(jì)、制造并通過(guò)高速機(jī)器大批量生產(chǎn)。目前用于制造疫苗的RNA有兩種，非復(fù)制型mRNA和自我擴(kuò)增型mRNA，從圖中可以看出自我擴(kuò)增型mRNA的優(yōu)點(diǎn)是可在細(xì)胞內(nèi)____________________。mRNA常被包裹在脂質(zhì)體顆粒中注射到相關(guān)人員的手臂肌肉，脂質(zhì)體顆粒的作用是____________________________________。(4)病毒核酸檢測(cè)試劑盒通常以病毒獨(dú)特的基因序列為檢測(cè)靶標(biāo)。PCR擴(kuò)增時(shí)每一個(gè)循環(huán)分為_(kāi)_____________________三步，使靶標(biāo)DNA序列呈指數(shù)增加。每一個(gè)擴(kuò)增出來(lái)的DNA序列都與預(yù)先加入的一段熒光標(biāo)記________結(jié)合，產(chǎn)生熒光信號(hào)，擴(kuò)增出來(lái)的靶標(biāo)DNA序列越多，累積的熒光信號(hào)就越強(qiáng)。在沒(méi)有病毒的樣本中，因?yàn)闆](méi)有靶標(biāo)DNA序列擴(kuò)增，所以就檢測(cè)不到熒光信號(hào)增強(qiáng)?！肌冀馕觥健?1)構(gòu)建基因表達(dá)載體的過(guò)程中需要用到的工具酶有限制性核酸內(nèi)切酶(限制酶)、DNA連接酶。(2)圖中所用的質(zhì)粒可以充當(dāng)運(yùn)載體的作用，構(gòu)建基因表達(dá)載體可以使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在并遺傳給下一代，同時(shí)使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。基因表達(dá)載體中的啟動(dòng)子可以驅(qū)動(dòng)目的基因的轉(zhuǎn)錄。將該DNA疫苗導(dǎo)入受體細(xì)胞的方法是肌肉注射法或基因槍法。(3)從圖中可以看出自我擴(kuò)增型mRNA可在細(xì)胞內(nèi)大量復(fù)制，提高蛋白質(zhì)合成效率。mRNA常被包裹在脂質(zhì)體顆粒中注射到相關(guān)人員的手臂肌肉，其中的脂質(zhì)體顆?？梢员Ｗo(hù)mRNA，防止被酶降解。(4)PCR擴(kuò)增時(shí)每一個(gè)循環(huán)分為變性、復(fù)性、延伸三步，使靶標(biāo)DNA序列呈指數(shù)增加。每一個(gè)擴(kuò)增出來(lái)的DNA序列都與預(yù)先加入的一段熒光標(biāo)記探針結(jié)合，產(chǎn)生熒光信號(hào)，擴(kuò)增出來(lái)的靶標(biāo)DNA序列越多，累積的熒光信號(hào)就越強(qiáng)?！肌即鸢浮健?1)限制性核酸內(nèi)切酶(限制酶)、DNA連接酶(2)質(zhì)粒使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在并遺傳給下一代，同時(shí)使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用啟動(dòng)子基因槍法(3)大量復(fù)制，提高蛋白質(zhì)合成效率保護(hù)mRNA，防止被酶降解(4)變性、復(fù)性、延伸探針6．(2020·濰坊市高三二模)我國(guó)是大豆的原產(chǎn)地，但目前我國(guó)大豆嚴(yán)重依賴進(jìn)口。大豆細(xì)胞中與油脂合成相關(guān)酶的基因有DGAT2、FAD2、FAD3、KASⅠ、KASⅡ，它們通過(guò)控制多種酶的合成來(lái)控制油脂合成。采用基因工程育種能大幅度快速改良大豆品質(zhì)。研究人員通過(guò)RACE技術(shù)獲得轉(zhuǎn)錄因子WRI1，并將其在大豆中過(guò)量表達(dá)，結(jié)果顯示轉(zhuǎn)基因后代含油量比普通大豆提高8%以上，油酸和亞油酸的含量也顯著提高了。(1)RACE技術(shù)(cDNA末端快速擴(kuò)增技術(shù))是一種基于PCR技術(shù)的，利用低豐度的轉(zhuǎn)錄本(由一個(gè)基因轉(zhuǎn)錄形成的一種或多種mRNA)快速擴(kuò)增cDNA的有效方法，理論上通過(guò)此技術(shù)獲取大量目的基因需經(jīng)________和________兩個(gè)基本過(guò)程。(2)在大豆內(nèi)過(guò)量表達(dá)轉(zhuǎn)錄因子WRI1即可提高大豆含油量，表明WRI1基因在細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮的作用是________________________________。(3)質(zhì)粒P0具有四環(huán)素抗性基因(tetr)和氨芐青霉素抗性基因(ampr)，對(duì)其進(jìn)行酶切時(shí)應(yīng)注意__________________________________________，以便篩選重組DNA。研究人員所選限制酶EoRV的酶切位點(diǎn)為…GAT↓ATC…，經(jīng)其酶切后的片段還需經(jīng)酶處理為_(kāi)_______末端才能與目的基因連接。研究人員構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)往往使用產(chǎn)生后一種末端的限制酶，你認(rèn)為這樣做的理由是________________________________________________________________。(4)導(dǎo)入重組質(zhì)粒的細(xì)胞還需經(jīng)過(guò)________和________才能形成植株，在此過(guò)程中，____________________的協(xié)同調(diào)控作用非常重要?！肌冀馕觥健?1)cDNA是mRNA逆轉(zhuǎn)錄得到的，快速擴(kuò)增cDNA，理論上需經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄和(DNA)復(fù)制兩個(gè)基本過(guò)程。(2)大豆細(xì)胞中與油脂合成相關(guān)酶的基因有DGAT2、FAD2、FAD3、KASⅠ、KASⅡ，它們通過(guò)控制多種酶的合成來(lái)控制油脂合成。在大豆內(nèi)過(guò)量表達(dá)轉(zhuǎn)錄因子WRI1即可提高大豆含油量，表明WRI1基因在細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮的作用是調(diào)控(增強(qiáng))DGAT2、FAD2、FAD3、KASI、KASⅡ等基因的表達(dá)，促進(jìn)油脂合成。(3)質(zhì)粒P0具有四環(huán)素抗性基因(tetr)和氨芐青霉素抗性基因(ampr)，對(duì)其進(jìn)行酶切時(shí)應(yīng)注意所選限制酶的識(shí)別序列不能同時(shí)存在tetr和ampr中(不能同時(shí)酶切tetr和ampr)，否則標(biāo)記基因都被破壞，無(wú)法進(jìn)行后續(xù)重組DNA的篩選。研究人員所選限制酶EoRV的酶切位點(diǎn)為…GAT↓ATC…，經(jīng)其酶切后的片段還需經(jīng)酶處理為黏性末端才能與目的基因連接(圖示中目的基因含黏性末端)。相同黏性末端通過(guò)堿基互補(bǔ)能促進(jìn)連接過(guò)程，加快反應(yīng)速度(或DNA連接酶連接黏性末端的效率高于連接平末端)，因此研究人員構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)往往使用產(chǎn)生后一種末端(黏性末端)的限制酶。(4)導(dǎo)入重組質(zhì)粒的細(xì)胞(分化的體細(xì)胞)還需經(jīng)過(guò)脫分化(形成愈傷組織)和再分化(分化出相應(yīng)的器官、組織)才能形成植株。在此過(guò)程中，生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素的協(xié)同調(diào)控作用非常重要?！肌即鸢浮健?1)逆轉(zhuǎn)錄(DNA)復(fù)制(2)調(diào)控(增強(qiáng))DGAT2、FAD2、FAD3、KASI、KASⅡ等基因的表達(dá)，促進(jìn)油脂合成(3)所選限制酶的識(shí)別序列不能同時(shí)存在tetr和ampr中(不能同時(shí)酶切tetr和ampr)黏性相同黏性末端通過(guò)堿基互補(bǔ)能促進(jìn)連接過(guò)程，加快反應(yīng)速度(或DNA連接酶連接黏性末端的效率高于連接平末端)(4)脫分化再分化生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素7．實(shí)時(shí)熒光定量PCR簡(jiǎn)稱qPCR，靈敏度高特異性好，是目前檢測(cè)微小殘留病變的常用方法。將標(biāo)有熒光素的Taqman探針與待測(cè)樣本DNA混合后，在變性、復(fù)性、延伸的熱循環(huán)中，與待測(cè)樣本DNA配對(duì)結(jié)合的Taqman探針被Taq酶切斷，在特定光激發(fā)下發(fā)出熒光(如圖所示)，隨著循環(huán)次數(shù)的增加，熒光信號(hào)強(qiáng)度增加，通過(guò)實(shí)時(shí)檢測(cè)熒光信號(hào)強(qiáng)度，可得Ct值(該值與待測(cè)樣本中目的基因的個(gè)數(shù)呈負(fù)相關(guān))。注：R表示熒光基因，Q表示淬滅基因(1)做qPCR之前，需要先根據(jù)目的基因的核苷酸序列合成________。除此之外，qPCR的反應(yīng)體系還需要加入________、________和________。(2)在反應(yīng)過(guò)程中，________為新鏈的合成提供能量。(3)醫(yī)務(wù)人員對(duì)三位慢性粒細(xì)胞白血病患者(由B基因過(guò)量表達(dá)導(dǎo)致)進(jìn)行治療后，想檢測(cè)治療效果，利用上述技術(shù)寫(xiě)出實(shí)驗(yàn)思路和簡(jiǎn)要結(jié)果分析。實(shí)驗(yàn)思路：________________________；簡(jiǎn)要結(jié)果分析：_________________?！肌冀馕觥健?1)PCR需要根據(jù)目的基因的核苷酸序列合成引物，同時(shí)qPCR還需要Taqman探針與待測(cè)樣本DNA混合，所以還需要合成Taqman探針；在反應(yīng)體系中還需要添加待測(cè)樣本(模板DNA)、dNTP、熱穩(wěn)定的DNA聚合酶(Taq酶)。(2)在反應(yīng)過(guò)程中，dNTP為新鏈的合成提供能量。(3)根據(jù)題干信息“將標(biāo)有熒光素的Taqman探針與待測(cè)樣本DNA混合后，在變性、復(fù)性、延伸的熱循環(huán)中，與待測(cè)樣本DNA配對(duì)結(jié)合的Taqman探針被Taq酶切斷，在特定光激發(fā)下發(fā)出熒光，通過(guò)實(shí)時(shí)檢測(cè)熒光信號(hào)強(qiáng)度，可得Ct值(該值與待測(cè)樣本中目的基因的個(gè)數(shù)呈負(fù)相關(guān))”。所以設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)思路：三位患者分別編號(hào)甲、乙、丙，分別抽取適量血樣提取RNA，反轉(zhuǎn)錄得到cDNA，根據(jù)B基因的序列設(shè)計(jì)引物和探針，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，檢測(cè)熒光信號(hào)強(qiáng)度；結(jié)果：Ct值越小，說(shuō)明治療效果越好，反之，治療效果越差。〖〖答案〗〗(1)引物和Taqman探針待測(cè)樣本(模板DNA)dNTP熱穩(wěn)定的DNA聚合酶(Taq酶)(2)dNTP(3)三位患者分別編號(hào)甲、乙、丙，分別抽取適量血樣提取RNA，反轉(zhuǎn)錄得到cDNA，根據(jù)B基因的序列設(shè)計(jì)引物和探針，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，檢測(cè)熒光信號(hào)強(qiáng)度三位患者檢測(cè)的Ct值越小，說(shuō)明治療效果越好，反之，治療效果越差8．(2020·德州市高三一模)熒光蛋白(GFP)在紫外光下會(huì)發(fā)出綠色熒光，某科研團(tuán)隊(duì)將GFP基因插入質(zhì)粒P中構(gòu)建了重組質(zhì)粒載體P0，用于基因工程中基因表達(dá)載體(P1)的篩選和鑒定。部分過(guò)程如圖所示，下表為部分限制酶的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)?；卮饐?wèn)題：(1)過(guò)程①中用EcoRⅤ酶切獲得的目的基因具有________末端，過(guò)程②表示利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因，前提是要根據(jù)________________設(shè)計(jì)出引物，此外還需在引物的一端加上________序列，以便于P1的構(gòu)建和篩選。(2)過(guò)程③中，質(zhì)粒P0需用限制酶________切割，才能與擴(kuò)增出的目的基因在________酶作用下形成P1。(3)為了篩選出含有質(zhì)粒P1的菌落，需采用添加________的培養(yǎng)基平板進(jìn)行培養(yǎng)，在紫外光激發(fā)下________的菌落，即為含有P1的菌落。(4)提取經(jīng)上述篩選所得菌落的RNA，通過(guò)________獲得DNA，再進(jìn)行PCR擴(kuò)增，若最終未能檢測(cè)出目的基因，可能的原因是_____________________?！肌冀馕觥健?1)從表格中看出用EcoRⅤ酶切獲得的目的基因具有平末端；PCR擴(kuò)增目的基因，需要根據(jù)一段已知目的基因的核苷酸序列設(shè)計(jì)出引物；構(gòu)建P1時(shí)，限制酶Sau3AⅠ會(huì)破壞四環(huán)素抗性基因(標(biāo)記基因)，所以只能選擇BamHⅠ，還需要在引物的一端加上GATC序列。(2)根據(jù)(1)的分析，限制酶Sau3AⅠ會(huì)破壞四環(huán)素抗性基因(標(biāo)記基因)，而EcoRⅤ酶破壞復(fù)制原點(diǎn)，所以需要選擇BamHⅠ酶進(jìn)行切割，切割后的目的基因在DNA連接酶的作用下形成P1。(3)為了篩選含有質(zhì)粒P1的菌落，由于標(biāo)記基因是四環(huán)素抗性基因，所以需采用添加了四環(huán)素的培養(yǎng)基平板進(jìn)行培養(yǎng)，在紫外光激發(fā)下，由于使用BamHⅠ酶破壞了GFP基因，所以選擇不發(fā)出綠色熒光的菌落，即為含有P1的菌落。(4)所得菌落的RNA通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄(反轉(zhuǎn)錄)獲得DNA，再進(jìn)行PCR擴(kuò)增，若最終未能檢測(cè)出目的基因，可能的原因是目的基因未能在受體菌中轉(zhuǎn)錄?！肌即鸢浮健?1)平一段已知目的基因的核苷酸序列GATC(2)BamHⅠDNA連接(3)四環(huán)素不發(fā)出綠色熒光(4)逆轉(zhuǎn)錄(反轉(zhuǎn)錄)目的基因未能在受體菌中轉(zhuǎn)錄基因工程(建議用時(shí)：40分鐘)1．(2020·贛州市高三模擬)濱藜在含鹽量0.6%以上的條件下生長(zhǎng)，是耐鹽堿基因開(kāi)發(fā)的理想材料。若將濱藜的耐鹽堿基因轉(zhuǎn)移到水稻等農(nóng)作物體內(nèi)，將會(huì)大大提高水稻等農(nóng)作物的種植面積?；卮鹣铝袉?wèn)題：(1)從濱藜中獲得耐鹽堿基因需要用________酶處理，然后與含四環(huán)素抗性基因的Ti質(zhì)粒連接構(gòu)建________，并導(dǎo)入農(nóng)桿菌。在含有四環(huán)素的固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，目的是___________________________________________________。(2)用農(nóng)桿菌感染時(shí)，應(yīng)優(yōu)先選用水稻________(填“受傷的”或“完好的”)葉片與含重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌共同培養(yǎng)，選用這種葉片的理由是____________________________________。(3)導(dǎo)入耐鹽堿基因的植株細(xì)胞經(jīng)過(guò)________形成愈傷組織，然后________形成胚狀體，繼續(xù)發(fā)育形成轉(zhuǎn)基因水稻幼苗。(4)將生長(zhǎng)至4葉期的轉(zhuǎn)基因幼苗轉(zhuǎn)入高濃度的NaCl溶液(含鹽量0.6%以上)中培養(yǎng)，進(jìn)行耐鹽實(shí)驗(yàn)，用非轉(zhuǎn)基因幼苗作為對(duì)照。培養(yǎng)30天后觀察兩者的存活率差異。若__________________________________，則說(shuō)明轉(zhuǎn)基因植株獲得了耐鹽特性?！肌冀馕觥健?1)使用限制酶從濱藜中獲得耐鹽堿基因，與含抗生素抗性基因的Ti質(zhì)粒連接構(gòu)建基因表達(dá)載體(或重組質(zhì)粒)，并導(dǎo)入農(nóng)桿菌，將其在含有四環(huán)素的固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，目的是篩選出導(dǎo)入重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌。(2)當(dāng)植物體受到損傷時(shí)，傷口處的細(xì)胞會(huì)分泌大量的酚類化合物，吸引農(nóng)桿菌移向這些細(xì)胞，因此用農(nóng)桿菌感染時(shí)，優(yōu)先選用水稻受傷的葉片。(3)含有目的基因的植物細(xì)胞先脫分化形成愈傷組織，然后再分化形成根、芽和胚狀體，然后繼續(xù)發(fā)育形成轉(zhuǎn)基因幼苗。(4)將生長(zhǎng)至4葉期的轉(zhuǎn)基因水稻幼苗轉(zhuǎn)入含鹽量0.6%以上的環(huán)境中培養(yǎng)，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，用非轉(zhuǎn)基因幼苗作為對(duì)照。若轉(zhuǎn)基因植株存活率高于非轉(zhuǎn)基因植株，說(shuō)明轉(zhuǎn)基因水稻植株獲得了耐鹽特性。〖〖答案〗〗(1)限制性核酸內(nèi)切(或限制)重組質(zhì)粒(或重組DNA分子)篩選出導(dǎo)入重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌(2)受傷的葉片傷口處的細(xì)胞釋放出大量酚類物質(zhì)，可吸引農(nóng)桿菌移向這些細(xì)胞(3)脫分化再分化(4)轉(zhuǎn)基因植株存活率高于非轉(zhuǎn)基因植株2．(2020·全國(guó)卷Ⅲ)W是一種具有特定功能的人體蛋白質(zhì)。某研究小組擬仿照制備乳腺生物反應(yīng)器的研究思路，制備一種膀胱生物反應(yīng)器來(lái)獲得W，基本過(guò)程如圖所示?；卮鹣铝袉?wèn)題：(1)步驟①中需要使用的工具酶有________。步驟②和③所代表的操作分別是________和________。步驟④稱為_(kāi)_______。(2)與乳腺生物反應(yīng)器相比，用膀胱生物反應(yīng)器生產(chǎn)W的優(yōu)勢(shì)在于不受轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的________(答出2點(diǎn)即可)的限制。(3)一般來(lái)說(shuō)，在同一動(dòng)物個(gè)體中，乳腺上皮細(xì)胞與膀胱上皮細(xì)胞的細(xì)胞核中染色體DNA所含的遺傳信息________(填“相同”或“不同”)，原因是________。(4)從上述流程可知，制備生物反應(yīng)器涉及胚胎工程，胚胎工程中所用到的主要技術(shù)有________(答出2點(diǎn)即可)。〖〖解析〗〗(1)步驟①是基因表達(dá)載體的構(gòu)建過(guò)程，該過(guò)程需要使用的工具酶有限制性核酸內(nèi)切酶(限制酶)和DNA連接酶，用限制酶分別切割載體和目的基因，用DNA連接酶將目的基因和載體連接起來(lái)。步驟②和③所代表的操作分別是顯微注射和體外培養(yǎng)。步驟④是將早期胚胎植入到代孕母體內(nèi)，稱為胚胎移植。(2)與乳腺生物反應(yīng)器相比，用膀胱生物反應(yīng)器生產(chǎn)W的優(yōu)勢(shì)在于不受轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的性別和年齡的限制。(3)乳腺上皮細(xì)胞和膀胱上皮細(xì)胞都是體細(xì)胞。一般來(lái)說(shuō)，在同一動(dòng)物個(gè)體中，其體細(xì)胞都是由同一個(gè)受精卵分裂、分化而來(lái)的，細(xì)胞在分裂、分化過(guò)程中，其細(xì)胞核中染色體DNA所含的遺傳信息一般是不變的，因此兩種上皮細(xì)胞的染色體DNA所含的遺傳信息相同。(4)據(jù)題述流程可知，胚胎工程中所用到的主要技術(shù)有體外受精、早期胚胎培養(yǎng)、胚胎移植等。〖〖答案〗〗(1)限制性核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶顯微注射體外培養(yǎng)胚胎移植(2)性別、年齡(3)相同兩種上皮細(xì)胞都是體細(xì)胞，且來(lái)源于同一個(gè)受精卵(4)體外受精、胚胎移植3．(2020·張家口市高三模擬)MAP30蛋白是一種能使Ⅰ型核酸核糖體失活的蛋白質(zhì)，存在于苦瓜果實(shí)和種子中。實(shí)驗(yàn)表明，MAP30蛋白具有抗腫瘤、抗菌、抗病毒等功能，近年來(lái)引起人們的廣泛關(guān)注?，F(xiàn)有一科研團(tuán)隊(duì)欲培育高效表達(dá)該蛋白基因的馬鈴薯新品種。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：(1)若要獲取MAP30蛋白基因，人們可從________基因庫(kù)中獲得。獲得目的基因后可利用PCR技術(shù)對(duì)其進(jìn)行擴(kuò)增，所用的緩沖液中除目的基因外，應(yīng)包括________等物質(zhì)。(2)構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，需要使用到的酶是____________________________。為了避免出現(xiàn)“目的基因自我環(huán)化”“目的基因在運(yùn)載體上反向連接”的問(wèn)題，常用的解決辦法是__________________________________________________。(3)將基因表達(dá)載體導(dǎo)入馬鈴薯受體細(xì)胞后，可用________技術(shù)得到轉(zhuǎn)基因幼苗。檢測(cè)MAP30蛋白基因是否在受體細(xì)胞中成功表達(dá)，可用___________________________________________________________________。(4)科研人員為了研究MAP30蛋白抗弧菌的效果，用含不同濃度MAP30蛋白培養(yǎng)液培養(yǎng)弧菌，繪制弧菌生長(zhǎng)曲線如圖：由圖可以得出的結(jié)論是____________________________________________________________________________________________________________?！肌冀馕觥健?1)獲取目的基因，要從含有該基因的苦瓜基因庫(kù)中尋找。利用PCR技術(shù)擴(kuò)增該基因，PCR反應(yīng)體系的主要成分應(yīng)該包含4種脫氧核糖核苷酸、模板DNA、引物、熱穩(wěn)定DNA聚合酶、擴(kuò)增緩沖液等。(2)構(gòu)建基因表達(dá)載體需要使用到的酶是限制酶和DNA連接酶；為了避免出現(xiàn)“目的基因自我環(huán)化”“目的基因在運(yùn)載體上反向連接”的問(wèn)題，可分別使用兩種限制酶去剪切目的基因和運(yùn)載體。(3)可用植物組織培養(yǎng)技術(shù)得到轉(zhuǎn)基因幼苗，可通過(guò)抗原—抗體雜交技術(shù)檢測(cè)MAP30蛋白基因是否成功表達(dá)。(4)用含不同濃度MAP30蛋白培養(yǎng)液培養(yǎng)弧菌，根據(jù)圖中曲線顯示，隨著MAP30蛋白濃度的升高，MAP30蛋白對(duì)弧菌生長(zhǎng)的抑制作用增強(qiáng)；當(dāng)MAP30蛋白濃度達(dá)到或高于500g/mL時(shí)，弧菌生長(zhǎng)完全被抑制?！肌即鸢浮健?1)苦瓜4種脫氧(核糖)核苷酸、引物、熱穩(wěn)定DNA聚合酶(Taq酶)(2)限制酶和DNA連接酶分別使用兩種限制酶去剪切目的基因和運(yùn)載體(3)植物組織培養(yǎng)抗原—抗體雜交技術(shù)(4)隨著MAP30蛋白濃度的升高，MAP30蛋白對(duì)弧菌生長(zhǎng)的抑制作用增強(qiáng)；當(dāng)MAP30蛋白濃度達(dá)到或高于500g/mL時(shí)，弧菌生長(zhǎng)完全被抑制4．(2020·福建省高三一模)人體內(nèi)的t-PA蛋白能高效降解由纖維蛋白凝聚而成的血栓，是心梗和腦血栓的急救藥。然而，為心?；颊咦⑸浯髣┝康幕蚬こ蘴-PA會(huì)誘發(fā)顱內(nèi)出血，其原因在于t-PA與纖維蛋白結(jié)合的特異性不高。研究證實(shí)，將t-PA第84位的半胱氨酸換成絲氨酸，能顯著降低出血副作用。據(jù)此，先對(duì)天然的t-PA基因進(jìn)行序列改造，然后再采取傳統(tǒng)的基因工程方法表達(dá)該改造后的基因，可制造出性能優(yōu)異的改良t-PA蛋白。(注：如圖表示相關(guān)的目的基因、載體及限制酶。pCLY11為質(zhì)粒，新霉素為抗生素。)回答下列問(wèn)題：(1)已知人t-PA基因第84位半胱氨酸的模板鏈堿基序列為ACA，而絲氨酸的密碼子為UCU，因此改造后的基因決定第84位絲氨酸的模板鏈的堿基序列應(yīng)設(shè)計(jì)為_(kāi)_______。(2)若t-PA改良基因的黏性末端如圖所示，那么需選用限制酶________和__________切開(kāi)質(zhì)粒pCLY11，才能與t-PA改良基因高效連接，在連接時(shí)需要用到________酶。(3)應(yīng)選擇________(填“能”或“不能”)在加入新霉素的培養(yǎng)基中生存并形成菌落的大腸桿菌作為受體細(xì)胞，目的是________________________。在加入新霉素的培養(yǎng)基中形成菌落的受體細(xì)胞并非都是目的菌株，需選擇呈________色的菌落，進(jìn)一步培養(yǎng)、檢測(cè)和鑒定，以選育出能生產(chǎn)改良t-PA蛋白的工程菌株。(4)以上制造性能優(yōu)異的改良t-PA蛋白的過(guò)程稱為_(kāi)_______工程?！肌冀馕觥健?1)根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)的原則，絲氨酸的密碼子為UCU，則其編碼序列為TCT，所以模板鏈的堿基序列為AGA。(2)若要質(zhì)粒pCLY11與t-PA突變基因高效連接，需質(zhì)粒和突變基因切割后產(chǎn)生黏性末端能堿基互補(bǔ)配對(duì)，t-PA突變基因切割后的黏性末端分別為－GGCC和－CTAG，故質(zhì)粒pCLY11需要用XmaI和BglⅡ切割，連接時(shí)需要用DNA連接酶。(3)由于質(zhì)粒上以新霉素抗性基因作為標(biāo)記基因，所以選擇不能在加入新霉素的培養(yǎng)基中生存并形成菌落的大腸桿菌作為受體細(xì)胞，以便篩選出導(dǎo)入質(zhì)粒pCLY11的大腸桿菌。重組質(zhì)粒的mlacZ序列被破壞，表達(dá)產(chǎn)物使細(xì)胞呈白色，故在加入新霉素的培養(yǎng)基中形成菌落的受體細(xì)胞需選擇呈白色的菌落，進(jìn)一步培養(yǎng)、檢測(cè)和鑒定，以選育出能生產(chǎn)改良t-PA蛋白的工程菌株。(4)通過(guò)對(duì)基因的改造實(shí)現(xiàn)對(duì)蛋白質(zhì)的改造，稱為蛋白質(zhì)工程?！肌即鸢浮健?1)AGA(2)XmɑⅠBglⅡDNA連接(3)不能以便篩選出導(dǎo)入質(zhì)粒pCLY11的大腸桿菌白(4)蛋白質(zhì)5．(2020·淄博市高三二模)核酸疫苗是將編碼某種抗原蛋白的外源基因(DNA或RNA片段)導(dǎo)入動(dòng)物體細(xì)胞內(nèi)，通過(guò)宿主細(xì)胞的表達(dá)系統(tǒng)合成抗原蛋白，誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生對(duì)該抗原蛋白的免疫應(yīng)答，以達(dá)到預(yù)防或治療相應(yīng)疾病的一類新型疫苗。研究表明核酸疫苗不僅具有良好的免疫原性與安全性，且由于核酸更易于修飾與改造，較以往蛋白疫苗具有更大的靈活性和更廣闊的應(yīng)用前景。請(qǐng)回答：(1)研發(fā)DNA疫苗時(shí)，構(gòu)建含有病原體抗原基因表達(dá)載體的過(guò)程中需要用到的工具酶有____________________________。(2)圖中所用的載體是________，構(gòu)建基因表達(dá)載體的目的是______________________，基因表達(dá)載體中，驅(qū)動(dòng)病原體抗原基因轉(zhuǎn)錄的結(jié)構(gòu)________________。將該DNA疫苗導(dǎo)入受體細(xì)胞的方法是肌肉注射法或____________。(3)mRNA疫苗可以由計(jì)算機(jī)設(shè)計(jì)、制造并通過(guò)高速機(jī)器大批量生產(chǎn)。目前用于制造疫苗的RNA有兩種，非復(fù)制型mRNA和自我擴(kuò)增型mRNA，從圖中可以看出自我擴(kuò)增型mRNA的優(yōu)點(diǎn)是可在細(xì)胞內(nèi)____________________。mRNA常被包裹在脂質(zhì)體顆粒中注射到相關(guān)人員的手臂肌肉，脂質(zhì)體顆粒的作用是____________________________________。(4)病毒核酸檢測(cè)試劑盒通常以病毒獨(dú)特的基因序列為檢測(cè)靶標(biāo)。PCR擴(kuò)增時(shí)每一個(gè)循環(huán)分為_(kāi)_____________________三步，使靶標(biāo)DNA序列呈指數(shù)增加。每一個(gè)擴(kuò)增出來(lái)的DNA序列都與預(yù)先加入的一段熒光標(biāo)記________結(jié)合，產(chǎn)生熒光信號(hào)，擴(kuò)增出來(lái)的靶標(biāo)DNA序列越多，累積的熒光信號(hào)就越強(qiáng)。在沒(méi)有病毒的樣本中，因?yàn)闆](méi)有靶標(biāo)DNA序列擴(kuò)增，所以就檢測(cè)不到熒光信號(hào)增強(qiáng)?！肌冀馕觥健?1)構(gòu)建基因表達(dá)載體的過(guò)程中需要用到的工具酶有限制性核酸內(nèi)切酶(限制酶)、DNA連接酶。(2)圖中所用的質(zhì)?？梢猿洚?dāng)運(yùn)載體的作用，構(gòu)建基因表達(dá)載體可以使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在并遺傳給下一代，同時(shí)使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。基因表達(dá)載體中的啟動(dòng)子可以驅(qū)動(dòng)目的基因的轉(zhuǎn)錄。將該DNA疫苗導(dǎo)入受體細(xì)胞的方法是肌肉注射法或基因槍法。(3)從圖中可以看出自我擴(kuò)增型mRNA可在細(xì)胞內(nèi)大量復(fù)制，提高蛋白質(zhì)合成效率。mRNA常被包裹在脂質(zhì)體顆粒中注射到相關(guān)人員的手臂肌肉，其中的脂質(zhì)體顆粒可以保護(hù)mRNA，防止被酶降解。(4)PCR擴(kuò)增時(shí)每一個(gè)循環(huán)分為變性、復(fù)性、延伸三步，使靶標(biāo)DNA序列呈指數(shù)增加。每一個(gè)擴(kuò)增出來(lái)的DNA序列都與預(yù)先加入的一段熒光標(biāo)記探針結(jié)合，產(chǎn)生熒光信號(hào)，擴(kuò)增出來(lái)的靶標(biāo)DNA序列越多，累積的熒光信號(hào)就越強(qiáng)。〖〖答案〗〗(1)限制性核酸內(nèi)切酶(限制酶)、DNA連接酶(2)質(zhì)粒使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在并遺傳給下一代，同時(shí)使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用啟動(dòng)子基因槍法(3)大量復(fù)制，提高蛋白質(zhì)合成效率保護(hù)mRNA，防止被酶降解(4)變性、復(fù)性、延伸探針6．(2020·濰坊市高三二模)我國(guó)是大豆的原產(chǎn)地，但目前我國(guó)大豆嚴(yán)重依賴進(jìn)口。大豆細(xì)胞中與油脂合成相關(guān)酶的基因有DGAT2、FAD2、FAD3、KASⅠ、KASⅡ，它們通過(guò)控制多種酶的合成來(lái)控制油脂合成。采用基因工程育種能大幅度快速改良大豆品質(zhì)。研究人員通過(guò)RACE技術(shù)獲得轉(zhuǎn)錄因子WRI1，并將其在大豆中過(guò)量表達(dá)，結(jié)果顯示轉(zhuǎn)基因后代含油量比普通大豆提高8%以上，油酸和亞油酸的含量也顯著提高了。(1)RACE技術(shù)(cDNA末端快速擴(kuò)增技術(shù))是一種基于PCR技術(shù)的，利用低豐度的轉(zhuǎn)錄本(由一個(gè)基因轉(zhuǎn)錄形成的一種或多種mRNA)快速擴(kuò)增cDNA的有效方法，理論上通過(guò)此技術(shù)獲取大量目的基因需經(jīng)________和________兩個(gè)基本過(guò)程。(2)在大豆內(nèi)過(guò)量表達(dá)轉(zhuǎn)錄因子WRI1即可提高大豆含油量，表明WRI1基因在細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮的作用是________________________________。(3)質(zhì)粒P0具有四環(huán)素抗性基因(tetr)和氨芐青霉素抗性基因(ampr)，對(duì)其進(jìn)行酶切時(shí)應(yīng)注意__________________________________________，以便篩選重組DNA。研究人員所選限制酶EoRV的酶切位點(diǎn)為…GAT↓ATC…，經(jīng)其酶切后的片段還需經(jīng)酶處理為_(kāi)_______末端才能與目的基因連接。研究人員構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)往往使用產(chǎn)生后一種末端的限制酶，你認(rèn)為這樣做的理由是________________________________________________________________。(4)導(dǎo)入重組質(zhì)粒的細(xì)胞還需經(jīng)過(guò)________和________才能形成植株，在此過(guò)程中，____________________的協(xié)同調(diào)控作用非常重要?！肌冀馕觥健?1)cDNA是mRNA逆轉(zhuǎn)錄得到的，快速擴(kuò)增cDNA，理論上需經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄和(DNA)復(fù)制兩個(gè)基本過(guò)程。(2)大豆細(xì)胞中與油脂合成相關(guān)酶的基因有DGAT2、FAD2、FAD3、KASⅠ、KASⅡ，它們通過(guò)控制多種酶的合成來(lái)控制油脂合成。在大豆內(nèi)過(guò)量表達(dá)轉(zhuǎn)錄因子WRI1即可提高大豆含油量，表明WRI1基因在細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮的作用是調(diào)控(增強(qiáng))DGAT2、FAD2、FAD3、KASI、KASⅡ等基因的表達(dá)，促進(jìn)油脂合成。(3)質(zhì)粒P0具有四環(huán)素抗性基因(tetr)和氨芐青霉素抗性基因(ampr)，對(duì)其進(jìn)行酶切時(shí)應(yīng)注意所選限制酶的識(shí)別序列不能同時(shí)存在tetr和ampr中(不能同時(shí)酶切tetr和ampr)，否則標(biāo)記基因都被破壞，無(wú)法進(jìn)行后續(xù)重組DNA的篩選。研究人員所選限制酶EoRV的酶切位點(diǎn)為…GAT↓ATC…，經(jīng)其酶切后的片段還需經(jīng)酶處理為黏性末端才能與目的基因連接(圖示中目的基因含黏性末端)。相同黏性末端通過(guò)堿基互補(bǔ)能促進(jìn)連接過(guò)程，加快反應(yīng)速度(或DNA連接酶連接黏性末端的效率高于連接平末端)，因此研究人員構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)往往使用產(chǎn)生后一種末端(黏性末端)的限制酶。(4)導(dǎo)入重組質(zhì)粒的細(xì)胞(分化的體細(xì)胞)還需經(jīng)過(guò)脫分化(形成愈傷組織)和再分化(分化出相應(yīng)的器官、組織)才能形成植株。在此過(guò)程中，生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素的協(xié)同調(diào)控作用非常重要?！肌即鸢浮健?1)逆轉(zhuǎn)錄(DNA)復(fù)制(2)調(diào)控(增強(qiáng))DGAT2、FAD2、FAD3、KASI、KASⅡ等基因的表達(dá)，促進(jìn)油脂合成(3)所選限制酶的識(shí)別序列不能同時(shí)存在tetr和ampr中(不能同時(shí)酶切tetr和ampr)黏性相同黏性末端通過(guò)堿基互補(bǔ)能促進(jìn)連接過(guò)程，加快反應(yīng)速度(或DNA連接酶連接黏性末端的效率高于連接平末端)(4)脫分化再分化生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素7．實(shí)時(shí)熒光定量PCR簡(jiǎn)稱qPCR，靈敏度高特異性好，是目前檢測(cè)微小殘留病變的常用方法。將標(biāo)有熒光素的Taqman探針與待測(cè)樣本DNA混合后，在變性、復(fù)性、延伸的熱循環(huán)中，與待測(cè)樣本DNA配對(duì)結(jié)合的Taqman探針被Taq酶切斷，在特定光激發(fā)下發(fā)出熒光(如圖所示)，隨著循環(huán)次數(shù)的增加，熒光信號(hào)強(qiáng)度增加，通過(guò)實(shí)時(shí)檢測(cè)熒光信號(hào)強(qiáng)度，可得Ct值(該值與待測(cè)樣本中目的基因的個(gè)數(shù)呈負(fù)相