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SZDB/ZSZDB/Z267—2017肉食品中雞源性成分實時熒光PCR檢測方法Real-timePCRfordetectionofchicken-derivedingredients2017-09-12發(fā)布2017-10-01實施深圳市市場監(jiān)督管理局發(fā)布I I 1 1 1 1 1 2 2 2 3 3 41GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方GB/T27403實驗室質(zhì)量控制規(guī)范COX3：細胞色素C氧化酶Ⅲ（cytochrodNTP：脫氧核糖核苷三磷酸（deoxy-PCR：聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerasROX：6-羧基-X-羅丹明（6-CaCTAB：十六烷基三甲基溴化銨（cetyltrithyEDTA：乙二胺四乙酸（ethylenediaminete2a)上游引物F：5'-TCTCACTTACACTACTTGCCACATCTT-3'a)下游引物R：5'-CGTGTGTGTCCTGTTTGGACTAG-3'b)探針序列P：5’-FAM-CACTGCAACCTACAGCCTCCGCATAAC–BHQ1-3’稱取上述混勻樣品50mg于1.5mL離心管中，加入600μL～800μL裂解液，65℃作用30min，期間不時振蕩混勻；12000r/min離心5min；轉(zhuǎn)移上清液于潔凈離心管中，加400μL三氯甲烷/異戊醇反應(yīng)體系：體積為20μL，包括2×ProbeqPCRMIX10μL（內(nèi)含DNA聚合酶、dNTP等）、50×ROX平均值作為最終結(jié)果。采用已知含有雞源性成分的雞肉提取的DNA作為陽性對照。采用已知不含雞源性3成分的其它動物組織（如羊肉、鴨肉）提取的DNA作為陰性對照。采用與模板等體積的雙蒸水作為空白
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