GXAS-沃柑中春雷霉素、雙胍辛烷基磺酸鹽農(nóng)藥及其代謝物殘留量的測(cè)定 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法編制說(shuō)明

PAGEPAGE15團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)制定（修訂）《沃柑中春雷霉素、雙胍辛烷基磺酸鹽農(nóng)藥及其代謝物殘留量的測(cè)定液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法》（征求意見稿）編制說(shuō)明一、項(xiàng)目來(lái)源根據(jù)《廣西標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)關(guān)于下達(dá)2023年第七十批團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)制修訂項(xiàng)目計(jì)劃的通知》（桂標(biāo)協(xié)〔2023〕231號(hào)）精神，由廣西分析測(cè)試協(xié)會(huì)提出，廣西博測(cè)檢測(cè)技術(shù)服務(wù)有限公司牽頭，與廣西壯族自治區(qū)產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)研究院、廣西益譜檢測(cè)技術(shù)有限公司、廣西綠保環(huán)境監(jiān)測(cè)有限公司、農(nóng)業(yè)農(nóng)村部亞熱帶果品蔬菜質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢測(cè)中心、廣西壯族自治區(qū)分析測(cè)試研究中心、百色市檢驗(yàn)檢測(cè)中心、廣西眾晨生物科技有限公司、廣西東盟食品檢驗(yàn)檢測(cè)中心、廣西壯族自治區(qū)林業(yè)科學(xué)研究院、南寧市武鳴區(qū)經(jīng)濟(jì)作物技術(shù)服務(wù)中心、橫州市綜合檢驗(yàn)檢測(cè)中心、廣西工商學(xué)校、崇左市江州區(qū)農(nóng)業(yè)農(nóng)村局、欽州市欽北區(qū)農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣站、鹿寨縣農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣中心等共同起草的《沃柑中春雷霉素、雙胍辛烷基磺酸鹽農(nóng)藥及其代謝物殘留量的測(cè)定液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法》（項(xiàng)目立項(xiàng)編號(hào)2023-7001）團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)的制定任務(wù)。二、項(xiàng)目背景及目的意義1、目的意義、必要性廣西地處我國(guó)華南地區(qū)，因其優(yōu)越的區(qū)位、氣候、自然資源條件，農(nóng)業(yè)優(yōu)勢(shì)產(chǎn)業(yè)發(fā)展極具特色，是全國(guó)水果主產(chǎn)區(qū)。據(jù)《中國(guó)農(nóng)村統(tǒng)計(jì)年鑒2021》廣西2020年柑橘園面積為 576.6千公頃。廣西2020年柑橘產(chǎn)量為1382.1萬(wàn)噸，2021年柑橘產(chǎn)量為1607.4萬(wàn)噸，增長(zhǎng)116.3%。當(dāng)今廣西柑橘已經(jīng)形成了北沙糖，南沃柑局面。近年來(lái)，武鳴沃柑產(chǎn)業(yè)迅猛發(fā)展，2020年底產(chǎn)果面積40萬(wàn)畝，產(chǎn)量120萬(wàn)噸，成為產(chǎn)值百億元的水果大產(chǎn)業(yè)。沃柑種植時(shí)，經(jīng)常噴施殺菌劑類農(nóng)藥防治柑桔潰瘍病；沃柑采摘后也通過(guò)殺菌劑類農(nóng)藥浸泡等方式為水果保鮮，延長(zhǎng)存儲(chǔ)周期。GB2763-2021《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中農(nóng)藥最大殘留限量》中柑果有44種殺菌劑類農(nóng)藥殘留項(xiàng)目最大殘留限量要求，其中36種殺菌劑類農(nóng)藥殘留項(xiàng)目在GB2763-2021《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中農(nóng)藥最大殘留限量》中有相應(yīng)的指定檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)方法。而雙胍三辛烷基苯磺酸鹽、春雷霉素、二氰蒽醌、噻唑鋅、溴菌腈、亞胺唑、毒菌酚和氟吡菌酰胺等8種殺菌劑類農(nóng)藥殘留項(xiàng)目雖有限量指標(biāo)卻無(wú)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)方法。查詢也沒(méi)有相應(yīng)的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)方法。為了保證食品安全，提高沃柑產(chǎn)品質(zhì)量。迫切需要建立沃柑中雙胍三辛烷基苯磺酸鹽、二氰蒽醌、噻唑鋅、溴菌腈、亞胺唑、毒菌酚、氟吡菌酰胺等農(nóng)藥殘留檢測(cè)新方法，發(fā)布相應(yīng)的農(nóng)藥殘留檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)來(lái)指導(dǎo)和規(guī)范沃柑中殺菌劑類農(nóng)藥殘留檢測(cè)。防止農(nóng)藥殘留超標(biāo)的不合格產(chǎn)品流入市場(chǎng)，為全國(guó)消費(fèi)者提供放心優(yōu)質(zhì)合格沃柑。指導(dǎo)廣大沃柑種植企業(yè)及農(nóng)戶正確使用殺菌劑類農(nóng)藥。提高沃柑產(chǎn)品質(zhì)量和商品經(jīng)濟(jì)價(jià)值，提高農(nóng)民經(jīng)濟(jì)效益，推動(dòng)廣西沃柑加工產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展，打造廣西沃柑品牌具有積極的促進(jìn)作用。并填補(bǔ)目前國(guó)內(nèi)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)、地方標(biāo)準(zhǔn)、團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)無(wú)沃柑中雙胍三辛烷基苯磺酸鹽、二氰蒽醌、噻唑鋅、溴菌腈、亞胺唑、毒菌酚、氟吡菌酰胺等農(nóng)藥殘留標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法的空白。2緊迫性沃柑上市的季節(jié)天氣悶熱潮濕，細(xì)菌、病菌極易繁殖，部分果農(nóng)保鮮技術(shù)掌握不充分，貯存方式不合理，導(dǎo)致沃柑大量損耗，質(zhì)量等級(jí)下降，造成果農(nóng)經(jīng)濟(jì)大量損失。為指導(dǎo)沃柑種植企業(yè)及農(nóng)戶正確采收沃柑，更好保障沃柑的新鮮度，提高沃柑產(chǎn)品質(zhì)量和商品經(jīng)濟(jì)價(jià)值，提高農(nóng)民經(jīng)濟(jì)效益，推動(dòng)廣西沃柑加工產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展，打造廣西沃柑品牌。廣西發(fā)布實(shí)施地方標(biāo)準(zhǔn)DB45/T2272-2021《沃柑采收及保鮮貯運(yùn)技術(shù)規(guī)程》和團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)T/GXAS107-2020《沃柑采收及采后商品化處理技術(shù)規(guī)程》，兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)推薦的保鮮溶液主要是2，4-D鈉鹽、雙胍三辛烷基苯磺酸鹽、咪鮮胺等三種農(nóng)藥組成。2021年初“泡藥沃柑”報(bào)道里提到的抑霉唑、咪鮮胺、24滴、百可得等殺菌劑類農(nóng)藥，并不是禁藥，按照標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)定使用抑霉唑、咪鮮胺、24滴等殺菌劑類農(nóng)藥為水果保鮮，延長(zhǎng)存儲(chǔ)周期，是全世界通用的做法。但從報(bào)道來(lái)看，使用殺菌劑類的環(huán)節(jié)明顯存在著諸多安全問(wèn)題。為確保消費(fèi)者品嘗到物美質(zhì)優(yōu)的沃柑，防止上市的沃柑農(nóng)殘不超標(biāo)，保障人民群眾“舌尖上安全”，加強(qiáng)沃柑中農(nóng)藥殘留檢測(cè)已是緊迫性問(wèn)題?；贕B2763—2021《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中農(nóng)藥最大殘留限量》中只有雙胍三辛烷基苯磺酸鹽、春雷霉素、二氰蒽醌、噻唑鋅、溴菌腈、亞胺唑、毒菌酚和氟吡菌酰胺等8種殺菌劑類農(nóng)藥殘留限量指標(biāo)而無(wú)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)方法，為此，建立沃柑中雙胍三辛烷基苯磺酸鹽、春雷霉素、二氰蒽醌、噻唑鋅、溴菌腈、亞胺唑、毒菌酚、氟吡菌酰胺等農(nóng)藥殘留檢測(cè)新方法，發(fā)布相應(yīng)的農(nóng)藥殘留檢測(cè)方法的標(biāo)準(zhǔn)。指導(dǎo)和規(guī)范沃柑中殺菌劑類農(nóng)藥殘留檢測(cè)，防止農(nóng)藥殘留超標(biāo)的不合格產(chǎn)品流入市場(chǎng)，為全國(guó)消費(fèi)者提供放心優(yōu)質(zhì)合格沃柑。配合廣西地方標(biāo)準(zhǔn)DB45/T2272—2021《沃柑采收及保鮮貯運(yùn)技術(shù)規(guī)程》和團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)T/GXAS107—2020《沃柑采收及采后商品化處理技術(shù)規(guī)程》等標(biāo)準(zhǔn)實(shí)施。狠抓沃柑標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)范化生產(chǎn)，全力打造“武鳴沃柑”的百億產(chǎn)業(yè)，打響“中國(guó)沃柑看武鳴”品牌。3市場(chǎng)化需求作為全國(guó)沃柑主要種植產(chǎn)區(qū)，近年來(lái)武鳴沃柑產(chǎn)業(yè)迅猛發(fā)展，出口品牌效應(yīng)持續(xù)加強(qiáng)，走俏國(guó)際市場(chǎng)。陸續(xù)出口到菲律賓、馬來(lái)西亞、印度尼西亞等東盟國(guó)家及加拿大等北美國(guó)家。主動(dòng)開拓國(guó)外銷售渠道，掌握柑橘的最新檢驗(yàn)檢疫要求，制定相應(yīng)的沃柑農(nóng)藥殘留檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，加強(qiáng)檢測(cè)，防止不合格產(chǎn)品流入市場(chǎng)，提供放心優(yōu)質(zhì)合格沃柑供應(yīng)國(guó)際市場(chǎng)。為此，旨在解決沃柑中雙胍三辛烷基苯磺酸鹽、春雷霉素、二氰蒽醌、噻唑鋅、溴菌腈、亞胺唑、毒菌酚、氟吡菌酰胺等農(nóng)藥殘留尚無(wú)檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)的問(wèn)題，廣西博測(cè)檢測(cè)技術(shù)服務(wù)有限公司成立沃柑殺菌劑類農(nóng)藥殘留檢測(cè)研究課題小組，并于2021年6月聯(lián)合南寧市武鳴區(qū)經(jīng)濟(jì)作物技術(shù)服務(wù)中心向南寧市科學(xué)技術(shù)局申請(qǐng)重點(diǎn)研發(fā)項(xiàng)目《沃柑中殺菌劑類農(nóng)藥殘留關(guān)鍵檢測(cè)技術(shù)的研究》，于2021年底獲批?！段指讨袣⒕鷦╊愞r(nóng)藥殘留關(guān)鍵檢測(cè)技術(shù)的研究》獲批后，課題小組克服新冠疫情等客觀條件對(duì)課題研究的影響，同時(shí)克服課題研究的化合物性質(zhì)各異的影響，不斷進(jìn)行提取凈化試驗(yàn)，研發(fā)了《沃柑中春雷霉素、雙胍辛烷基磺酸鹽農(nóng)藥及其代謝物殘留量的測(cè)定液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法》檢測(cè)方法，方法采用甲酸水溶液提取，經(jīng)HLB凈化后，分別經(jīng)SCX固相萃取柱和WCX固相萃取柱凈化，液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法同時(shí)檢測(cè)春雷霉素、雙胍三辛烷基苯磺酸鹽（雙胍辛胺），定性精確，定量準(zhǔn)確，快速高效，可提高監(jiān)管部門與檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)的工作效率。彌補(bǔ)了沃柑中春雷霉素、雙胍三辛烷基苯磺酸鹽（雙胍辛胺）檢測(cè)方法的空缺，順應(yīng)社會(huì)需求，具有先進(jìn)性、科學(xué)性、實(shí)用性。三、項(xiàng)目編制過(guò)程（一）成立標(biāo)準(zhǔn)編制工作組《沃柑中殺菌劑類農(nóng)藥殘留關(guān)鍵檢測(cè)技術(shù)的研究》課題的任務(wù)之一是制定相關(guān)的團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)。2021年12月獲批后，課題組及相關(guān)參與單位組成《沃柑中春雷霉素、雙胍辛烷基磺酸鹽農(nóng)藥及其代謝物殘留量的測(cè)定液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法》工作組，就團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)開展調(diào)研、試驗(yàn)、比對(duì)、編制等相關(guān)工作。由廣西博測(cè)檢測(cè)技術(shù)服務(wù)有限公司牽頭組織成立了標(biāo)準(zhǔn)編制工作組，制定了標(biāo)準(zhǔn)編寫方案，明確任務(wù)職責(zé)，確定工作技術(shù)路線，開展標(biāo)準(zhǔn)研制工作，具體由廣西壯族自治區(qū)產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)研究院、廣西益譜檢測(cè)技術(shù)有限公司、廣西綠保環(huán)境監(jiān)測(cè)有限公司、農(nóng)業(yè)農(nóng)村部亞熱帶果品蔬菜質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢測(cè)中心、廣西壯族自治區(qū)分析測(cè)試研究中心、百色市檢驗(yàn)檢測(cè)中心、廣西眾晨生物科技有限公司、廣西東盟食品檢驗(yàn)檢測(cè)中心、廣西壯族自治區(qū)林業(yè)科學(xué)研究院、南寧市武鳴區(qū)經(jīng)濟(jì)作物技術(shù)服務(wù)中心、橫州市綜合檢驗(yàn)檢測(cè)中心、廣西工商學(xué)校、崇左市江州區(qū)農(nóng)業(yè)農(nóng)村局、欽州市欽北區(qū)農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣站、鹿寨縣農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣中心等單位相關(guān)人員配合。（二）收集整理文獻(xiàn)資料標(biāo)準(zhǔn)編制工作組收集了國(guó)內(nèi)有關(guān)沃柑或植物中春雷霉素、雙胍辛烷基磺酸鹽農(nóng)藥及其代謝物殘留量的測(cè)定的相關(guān)技術(shù)文獻(xiàn)資料。主要有：GB2763食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中農(nóng)藥最大殘留限量GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法（三）研討確定標(biāo)準(zhǔn)主體內(nèi)容標(biāo)準(zhǔn)編制工作組在對(duì)收集的資料進(jìn)行整理研究之后，標(biāo)準(zhǔn)編制工作組召開了標(biāo)準(zhǔn)編制會(huì)議，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)的整體框架結(jié)構(gòu)進(jìn)行了研究，并對(duì)標(biāo)準(zhǔn)的關(guān)鍵性內(nèi)容進(jìn)行了初步探討。經(jīng)過(guò)研究，標(biāo)準(zhǔn)的主體內(nèi)容確定為液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定沃柑中春雷霉素、雙胍辛烷基磺酸鹽農(nóng)藥及其代謝物殘留量的檢測(cè)原理、試劑和材料、主要儀器設(shè)備、樣本采集與處理、檢測(cè)方法、結(jié)果計(jì)算。（四）調(diào)研及形成草案、征求意見稿、2023年7月，在前期工作的基礎(chǔ)之上，通過(guò)理清邏輯脈絡(luò)，整合已有的參考資料中有關(guān)液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定沃柑中春雷霉素、雙胍辛烷基磺酸鹽農(nóng)藥及其代謝物殘留量的要求，并結(jié)合液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定沃柑中春雷霉素、雙胍辛烷基磺酸鹽農(nóng)藥及其代謝物殘留量實(shí)際要求的基礎(chǔ)上，按照簡(jiǎn)化、統(tǒng)一等原則編制完成團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)《沃柑中春雷霉素、雙胍辛烷基磺酸鹽農(nóng)藥及其代謝物殘留量的測(cè)定液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法》（草案）。2023年10月，標(biāo)準(zhǔn)編制工作組對(duì)前期的研究和數(shù)據(jù)進(jìn)了整理并結(jié)合前期技術(shù)咨詢會(huì)、征求意見會(huì)、技術(shù)審查會(huì)的內(nèi)容針對(duì)液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定沃柑中春雷霉素、雙胍辛烷基磺酸鹽農(nóng)藥及其代謝物殘留量進(jìn)行多次討論、研究，最終形成團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)《沃柑中春雷霉素、雙胍辛烷基磺酸鹽農(nóng)藥及其代謝物殘留量的測(cè)定液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法》（征求意見稿）和編制說(shuō)明。四、標(biāo)準(zhǔn)制定原則（一）實(shí)用性原則本文件是在充分收集相關(guān)資料和文獻(xiàn)，分析春雷霉素、雙胍辛烷基磺酸鹽農(nóng)藥及其代謝物殘留量的檢測(cè)方法當(dāng)前現(xiàn)狀，調(diào)研春雷霉素、雙胍辛烷基磺酸鹽農(nóng)藥及其代謝物殘留量的檢測(cè)方法情況，在現(xiàn)有較少的春雷霉素、雙胍辛烷基磺酸鹽農(nóng)藥及其代謝物殘留量的檢測(cè)方法的基礎(chǔ)上，結(jié)合課題組轉(zhuǎn)化、提取、凈化、比對(duì)等系列實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)總結(jié)起草的。符合當(dāng)前沃柑中春雷霉素、雙胍辛烷基磺酸鹽農(nóng)藥及其代謝物殘留量的檢測(cè)方法的方向與需求，有利于行業(yè)的長(zhǎng)遠(yuǎn)發(fā)展，具有較強(qiáng)的實(shí)用性和可操作性。（二）協(xié)調(diào)性原則本文件編寫過(guò)程中注意了與沃柑中春雷霉素、雙胍辛烷基磺酸鹽農(nóng)藥及其代謝物殘留量的檢測(cè)方法相關(guān)法律法規(guī)的協(xié)調(diào)問(wèn)題，在內(nèi)容上與現(xiàn)行法律法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)協(xié)調(diào)一致。（三）規(guī)范性原則本文件嚴(yán)格按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的要求和規(guī)定編寫本標(biāo)準(zhǔn)的內(nèi)容，保證標(biāo)準(zhǔn)的編寫質(zhì)量。（四）前瞻性原則本文件通過(guò)液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定沃柑中春雷霉素、雙胍辛烷基磺酸鹽農(nóng)藥及其代謝物殘留量，驗(yàn)證分析生產(chǎn)中沃柑樣品，建立《沃柑中春雷霉素、雙胍辛烷基磺酸鹽農(nóng)藥及其代謝物殘留量的測(cè)定液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法》方法，彌補(bǔ)了沃柑中春雷霉素、雙胍辛烷基磺酸鹽測(cè)方法的空缺，順應(yīng)社會(huì)需求，具有先進(jìn)性、科學(xué)性、實(shí)用性。五、標(biāo)準(zhǔn)主要章節(jié)內(nèi)容及確定依據(jù)團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)《沃柑中春雷霉素、雙胍辛烷基磺酸鹽農(nóng)藥及其代謝物殘留量的測(cè)定液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法》主要內(nèi)容包括術(shù)語(yǔ)和定義、要求、原理、試劑和材料、主要儀器設(shè)備、試樣制備、分析步驟、結(jié)果計(jì)算。2022年起，課題小組克服新冠疫情等客觀條件對(duì)課題研究的影響，同時(shí)克服課題研究的化合物性質(zhì)各異的影響，不斷進(jìn)行和凈化試驗(yàn)，數(shù)據(jù)量豐富，在不斷的試驗(yàn)過(guò)程中試驗(yàn)方法得到不斷完善，最終形成準(zhǔn)確度高、可操作性強(qiáng)的液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法檢測(cè)沃柑中春雷霉素、雙胍辛烷基磺酸鹽農(nóng)藥及其代謝物殘留量方法。（一）原理試樣用甲酸水溶液提取，經(jīng)HLB凈化后，分別經(jīng)SCX固相萃取柱串聯(lián)和WCX固相萃取柱凈化，液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法檢測(cè)，外標(biāo)法定量。（二）試劑和材料除另有說(shuō)明外，在分析中僅使用分析純?cè)噭┖虶B/T6682中規(guī)定的一級(jí)水。1試劑1.1乙腈（CH3CN，CAS號(hào)：75-05-8）：色譜純。1.2甲醇（CH3OH，CAS號(hào)：67-56-1）：色譜純。1.3甲酸（HCOOH，CAS號(hào)：64-18-6）：色譜純。1.4鹽酸（HCl，CAS號(hào)：7647-01-0，純度36%~38%）。1.5二氯甲烷（CH2Cl2，CAS號(hào)：75-09-2）色譜純。1.6甲酸銨（HCO2NH4，CAS號(hào)：540-69-2）色譜純。2溶液配制2.1甲酸溶液（0.2%）：準(zhǔn)確吸取2mL甲酸，用水稀釋至1000mL，搖勻備用。2.2乙腈水溶液（3+1）：準(zhǔn)確吸取10mL乙腈，加入用30mL水，搖勻備用。2.3乙腈-水酸性溶液（2+1，V/V，0.1%甲酸）：取50mL乙腈，加入100mL水和0.15mL甲酸，搖勻備用。2.4甲酸乙腈溶液（10%）：準(zhǔn)確吸取10mL甲酸，用乙腈稀釋至100mL，搖勻備用。2.5鹽酸溶液（30mmol/L）：取0.25mL濃鹽酸，用水稀釋并定容至100mL。2.6甲醇-氨水溶液（95+5，V/V）：取950mL甲醇，加入50mL氨水，搖勻備用。2.70.4%甲酸-甲酸銨（5mmol/L）水酸性溶液：稱取0.3153g甲酸銨（5.1.6）溶于100mL水，加入4mL甲酸，用水定容至1000mL搖勻，過(guò)微孔過(guò)濾膜（有機(jī)相），現(xiàn)用現(xiàn)配。2.80.4%甲酸甲醇：加入4mL甲酸，用甲醇定容至1000mL搖勻，過(guò)微孔過(guò)濾膜（有機(jī)相），現(xiàn)用現(xiàn)配。3標(biāo)準(zhǔn)品3.1春雷霉素（C14H25N3O9，CAS號(hào)：6980-18-3）標(biāo)準(zhǔn)品：純度≥98%或春雷霉素鹽酸鹽（C14H25N3O9.HCl.H2O,CAS號(hào)：200132-83-8標(biāo)準(zhǔn)品：純度≥96%）；3.2雙胍辛胺醋酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品（C24H53N7O6，CAS：57520-17-9，標(biāo)準(zhǔn)品：純度≥90%3標(biāo)準(zhǔn)溶液配制3.1春雷霉素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（1000mg/L）：準(zhǔn)確稱取適量的春雷霉素（或春雷霉素鹽酸鹽）標(biāo)準(zhǔn)品(3.1)于10mL容量瓶中，用乙腈水溶液（2.2）溶解并定容至刻度，0～4℃貯存，有效期6個(gè)月。3.2雙胍辛胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（1000mg/L）準(zhǔn)確稱取適量的雙胍辛胺醋酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品(5.3.2)于10mL塑料容量瓶中，用甲醇（1.2）溶解并定容至刻度，避光-20℃及以下條件保存，有效期6個(gè)月。3.3混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液100μg/mL分別取適量上述標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液于10mL塑料容量瓶中，用乙腈-水酸性溶液（2.3）定容配制成100μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，再用乙腈-水酸性溶液（2.3）逐級(jí)稀釋，分別配制10μg/mL和1μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，0℃～4℃貯存，有效期1個(gè)月。4材料4.1HLB固相萃取柱：500mg，6ml或相當(dāng)者。4.2SCX固相萃取柱：500mg，6ml或相當(dāng)者。4.3WCX固相萃取柱：500mg，3ml或相當(dāng)者。4.4微孔過(guò)濾膜（有機(jī)相）:O.22μm，或相當(dāng)者。5儀器和設(shè)備5.1液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀：配有電噴霧離子源（ESI）。5.2分析天平：感量0.1mg和感量0.01g。5.3組織搗碎儀。5.4渦旋振蕩儀。5.5離心機(jī)：轉(zhuǎn)速不低于4500r/min。5.6旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。（三）試樣制備1試樣制備樣品取樣部位按照GB2763規(guī)定執(zhí)行。對(duì)于個(gè)體較小的樣品，取樣后全部處理；對(duì)于個(gè)體較大的基本均勻樣品，可在對(duì)稱軸或?qū)ΨQ面上分割或切成小塊后處理；用四分法取樣或直接放入組織搗碎機(jī)中搗碎成勻漿。勻漿后放入聚乙烯容器中。2試樣儲(chǔ)存將試樣按照測(cè)試和備用分別存放。于-18℃及以下條件儲(chǔ)存。（四）分析步驟1提取稱取10g試樣（精確至0.01g）于50mL聚丙烯離心管中，加入10mL甲酸溶液（2.1），再加入5mL二氯甲烷（1.5），渦旋振蕩5min后，以4500r/min離心5min，用吸管吸取上層清液轉(zhuǎn)移至25mL容量瓶中。再加入10mL甲酸溶液（2.1），重復(fù)提取一次，合并上清液，用甲酸溶液（2.1）定容。待凈化。2凈化（1）HLB柱凈化HLB柱依次用5mL甲醇（1.2）、5mL甲酸溶液（2.1）和2mL提取液預(yù)洗，棄去淋洗液，取7mL提取液過(guò)柱，接收流出液，待SCX柱和WCX固相萃取柱凈化（2）春雷霉素凈化（SCX柱凈化）SCX柱依次用5mL甲醇（1.2）、5mL水、5mL鹽酸溶液（2.4）預(yù)洗，棄去淋洗液。取3.0mL凈化液（1）過(guò)柱，待凈化液流盡，依次用5mL水、5mL甲醇（1.2）淋洗SCX柱，棄去流出液。用10mL甲醇-氨水溶液（2.5）洗脫SCX柱并收集至15mL聚丙烯離心管中，50℃下氮?dú)獯蹈?。?mL乙腈-水酸性溶液（2.3）溶解殘留物，經(jīng)0.22μm微孔濾膜過(guò)濾后備用。（3）雙胍三辛烷基苯磺酸鹽凈化（WCX柱凈化）WCX柱依次用5mL甲醇（1.2）和5mL水活化平衡，取3.0mL凈化液（1）過(guò)柱，待凈化液流盡，依次加入5mL水和5mL甲醇（1.2）淋洗小柱；再用10mL甲酸乙腈（2.4）洗脫WCX固相萃取柱并收集至15mL聚丙烯離心管中；于45℃水浴氮吹至近干，用1mL乙腈-水酸性溶液（2.3）溶解殘留物，經(jīng)0.22μm微孔濾膜過(guò)濾入PP進(jìn)樣瓶后備用。（4）分別移取0.5mL（2）春雷霉素凈化（SCX柱凈化）液和0.5mL（3）雙胍三辛烷基苯磺酸鹽凈化（WCX柱凈化）液于PP進(jìn)樣瓶，渦旋混勻供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定。如果只測(cè)春雷霉素，則（3）和（4）可省略；只測(cè)雙胍三辛烷基苯磺酸鹽，則（2）和（4）可省略。3測(cè)定3.1儀器參考條件a)色譜柱：C18-AQ2.1mm×100mm粒徑1.9μm，或相當(dāng)者；b)流動(dòng)相:流動(dòng)相：A相為0.4%甲酸-甲酸銨（5mmol/L）水酸性溶液（2.7），B相為0.4%甲酸甲醇（2.8），流動(dòng)相及其梯度條件見表1；c)流速:0.3mL/min；d)柱溫:40℃；e)進(jìn)樣量:3μL。表1流動(dòng)相及其梯度條件時(shí)間流動(dòng)相A(%)流動(dòng)相B（%）0.009553.009553.105956.005956.0195510.009553.2質(zhì)譜參考條件離子源類型:電噴霧離子源；掃描方式:正離子和負(fù)離子分開掃描；電噴霧電壓：正:離子4000V；離子源溫度:300℃；霧化氣壓力:0.242MPa；輔助加熱氣:0.242MPa；多反應(yīng)監(jiān)測(cè):每種農(nóng)藥分別選擇至少2個(gè)子離子。所有需要檢測(cè)的子離子按照出峰順序，分時(shí)段分別檢測(cè)。每種農(nóng)藥的保留時(shí)間、母離子、子離子及離子對(duì)質(zhì)譜參數(shù)，參見表2。表2春雷霉素、雙胍辛烷基磺酸鹽農(nóng)藥及其代謝物的保留時(shí)間、母離子、子離子及離子對(duì)質(zhì)譜參數(shù)序號(hào)農(nóng)藥中文名農(nóng)藥英文名電離方式保留時(shí)間(min)去簇電壓（V）離子對(duì)Ⅰ碰撞能(V)離子對(duì)Ⅱ碰撞能(V)1春雷霉素Kasugamycin正0.78895380.0/112.2-18380.0/199.9-82雙胍辛胺Iminoctadine正4.348120178.6/157.9-15178.6/187.4-163.3基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作曲線空白樣品按照（四）1、2進(jìn)行前處理得到空白基質(zhì)溶液。精確吸取定一定量的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，逐級(jí)用空白基質(zhì)溶液稀釋成質(zhì)量濃度為0.002mg/L、0.005mg/L、0.010mg/L、0.020mg/L、0.050mg/L、0.100mg/L、0.200mg/L、0.500mg/L的基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，根據(jù)儀器性能和檢測(cè)需要選擇不少于5個(gè)濃度點(diǎn)，供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定。以農(nóng)藥定量用子離子的質(zhì)量色譜圖面積為縱坐標(biāo).相對(duì)應(yīng)的基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作溶液質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，繪制基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。3.3定性及定量3.3.1保留時(shí)間被測(cè)試樣中目標(biāo)農(nóng)藥色譜峰的保留時(shí)間與相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)色譜峰的保留時(shí)間相比較.相對(duì)誤差應(yīng)在±2.5%之內(nèi)。3.3.2離子豐度比在相同實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行樣品測(cè)定時(shí).如果檢出的色譜峰I的保留時(shí)間標(biāo)準(zhǔn)樣相一致，并且在扣除背景后的樣品質(zhì)譜圖中，目標(biāo)化合物選擇的子離子均出現(xiàn)，而且同一檢測(cè)批次，對(duì)同一化合物，樣品目標(biāo)化合物的離子豐度比與質(zhì)量濃度相當(dāng)?shù)幕|(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液相比，其允許偏差不超過(guò)表3規(guī)定的范圍，則可判斷樣品中存在目標(biāo)農(nóng)藥。表3定性時(shí)離子豐度比的最大允許偏差離子豐度比（％）>50>20~50>10~20≤10允許相對(duì)偏差（％）±20±25±30±50本方法的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)LC-MS/MS多反應(yīng)監(jiān)測(cè)質(zhì)量色譜圖參見圖1-圖2。圖1春雷霉素多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)質(zhì)量色譜圖圖2雙胍三辛烷基苯磺酸鹽農(nóng)藥農(nóng)藥及其代謝物（雙胍辛胺）多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)質(zhì)量色譜圖3.4定量：外標(biāo)法定量；3.5試樣溶液的測(cè)定將基質(zhì)匹配目標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和試樣溶液依次注入液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀中，保留時(shí)間和離子豐度比定性，測(cè)得定量用子離子的質(zhì)量色譜圖峰面積，待測(cè)樣液中農(nóng)藥的響應(yīng)值應(yīng)在儀器檢測(cè)的定量測(cè)定線性范圍之內(nèi)，超過(guò)線性范圍時(shí)應(yīng)根據(jù)測(cè)定濃度進(jìn)行適當(dāng)倍數(shù)稀釋后再進(jìn)行分析。3.6平行試驗(yàn)按以上步驟對(duì)同一試樣進(jìn)行平行試驗(yàn)測(cè)定。3.7空白試驗(yàn)除不加試樣外，采用完全相同的測(cè)定步驟進(jìn)行平行操作。（五）結(jié)果計(jì)算試樣中各農(nóng)藥殘留量以質(zhì)量分?jǐn)?shù)ω計(jì)，單位為毫克每千克(mg/kg)，按公式(1)或公式(2)計(jì)算。 (AUTONUM)ω=ρ2×V3×式中：式中：ω—試樣中各被測(cè)物殘留量的數(shù)值，單位為毫克每千克(mg/kg);ρ1—基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中被測(cè)物的質(zhì)量濃度的數(shù)值，單位為毫克每升(mg/L);ρ2—從基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作曲線中得到的試樣溶液中被測(cè)物的質(zhì)量濃度的數(shù)值，單位為毫克每升(mg/L);A—試樣溶液中被測(cè)物的質(zhì)量色譜圖峰面積As—基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中被測(cè)物的質(zhì)量色譜圖峰面積V1—提取液的體積，單位為毫升(mL)；V2—移取凈化液的體積，單位為毫升(mL)；V3—樣液最終定容分取體積，單位為毫升(mL)；m—試樣質(zhì)量的數(shù)值，單位為克(g)；2—稀釋倍數(shù)，如果只測(cè)春雷霉素或雙胍三辛烷基苯磺酸鹽，可省略。（六）方法確定依據(jù)1基體效應(yīng)試驗(yàn)采用兩組樣品：其中一組是待測(cè)分析物的純標(biāo)品溶液，其進(jìn)樣測(cè)定的峰面積記為A，另一組按照（四）1、2進(jìn)行前處理得到空白基質(zhì)溶液，將待測(cè)分析物加入此溶液進(jìn)樣測(cè)定的峰面積記為B?；w效應(yīng)試驗(yàn)結(jié)果見表4。表4基體效應(yīng)試驗(yàn)結(jié)果純標(biāo)品溶液的峰面積記為A空白基質(zhì)的峰面積記為B春雷霉素基質(zhì)效應(yīng)因子（MF）=B/A*100春雷霉素1725383159445792.4雙胍辛胺3135356219588770.0表4結(jié)果表明：春雷霉素基質(zhì)效應(yīng)因子（MF）92.4%，雙胍辛胺基質(zhì)效應(yīng)因子（MF）70.0%，均為離子抑制效應(yīng)，春雷霉素基質(zhì)效應(yīng)因子的變動(dòng)未超過(guò)15%，雙胍辛胺基質(zhì)效應(yīng)因子變動(dòng)超過(guò)15%，為消除基質(zhì)效應(yīng)采用空白基質(zhì)配制標(biāo)準(zhǔn)溶液曲線。2、流動(dòng)相選擇試驗(yàn)在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，雙胍辛胺在0.1%甲酸+乙腈流動(dòng)相中，出現(xiàn)兩個(gè)峰，見圖3。兩個(gè)峰在系列標(biāo)準(zhǔn)曲線中都成線性，0.1%甲酸+0.1%甲醇流動(dòng)相也出現(xiàn)類似的情況。增加流動(dòng)相的酸度，可抑制此類現(xiàn)象。圖3雙胍辛胺0.1%甲酸+乙腈流動(dòng)相譜圖為此，進(jìn)行了流動(dòng)相優(yōu)化選擇試驗(yàn)，采用在不同的流動(dòng)相檢測(cè)200ng/mL春雷霉素、雙胍辛胺混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，考察春雷霉素、雙胍辛胺在不同的流動(dòng)相下的峰面積、峰高及峰型，結(jié)果見表5。表5春雷霉素、雙胍辛胺在不同流動(dòng)相峰面積、峰高數(shù)據(jù)流動(dòng)相1流動(dòng)相2流動(dòng)相3流動(dòng)相4流動(dòng)相50.4%甲酸-5mmol甲酸銨+0.4%甲酸甲醇0.2%甲酸-5mmol甲酸銨+0.2%甲酸甲醇0.4%甲酸+0.4%甲酸甲醇0.1%甲酸+0.1%甲醇0.1%甲酸+乙腈春雷霉素峰面積5499551057489405696814460峰高125001000015000125008000雙胍辛胺峰面積478931992989124490019105514446峰高1000003000080000300006000表5結(jié)果表明：春雷霉素最大峰面積在0.1%甲酸+0.1%甲醇流動(dòng)相體系中出現(xiàn)，雙胍辛胺最大峰面積出現(xiàn)在0.4%甲酸-5mmol甲酸銨+0.4%甲酸甲醇流動(dòng)相體系，而且春雷霉素峰面積與0.1%甲酸+0.1%甲醇流動(dòng)相體系的峰面積相差不大；綜上數(shù)據(jù)，本文使用0.4%甲酸-5mmol甲酸銨+0.4%甲酸甲醇作流動(dòng)相。2.3提取溶液選擇試驗(yàn)稱取10g沃柑空白基體試樣（精確至0.01g）于50mL離心管中，加入1mL的2000ng/mL春雷霉素、雙胍辛胺混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別以水、0.2%甲酸溶液、0.5%甲酸溶液、0.2%乙酸溶液作提取溶液，按（四）1.2前處理定容，檢測(cè)并計(jì)算春雷霉素、雙胍辛胺含量回收率。考察提取溶液選擇試驗(yàn)，試驗(yàn)結(jié)果見表6。表6提取溶液選擇試驗(yàn)結(jié)果提取溶液理論濃度春雷霉素雙胍辛胺(ng/mL)濃度(ng/mL)回收率（%）濃度(ng/mL)回收率（%）水12049.554141.3090.0575.040.2%甲酸溶液111.976193.31112.2093.50.5%甲酸溶液125.1261104.27104.9487.450.2%乙酸溶液93.832678.19103.8486.54表6數(shù)據(jù)表明，采用0.2%甲酸溶液，春雷霉素、雙胍辛胺都有好的回收率93%，方法采用0.2%甲酸溶液作為提取溶液。2.4凈化柱洗脫溶液及量選擇試驗(yàn)2.4.1WCX、SCX、MCX與HLB組合試驗(yàn)：稱取10g空白基體中加入在1000ng的春雷霉素、雙胍辛胺混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,按(四)1提取。按下列組合凈化后檢測(cè)春雷霉素、雙胍辛胺，考查加不下列組合春雷霉素凈化的回收率，試驗(yàn)結(jié)果見表7：表7凈化柱的選擇試驗(yàn)結(jié)果組合試驗(yàn)理論濃度春雷霉素雙胍辛胺(ng/mL)實(shí)測(cè)濃度(ng/mL)回收率（%）實(shí)測(cè)濃度(ng/mL)回收率（%）HLB柱與SCX柱組合120103.9186.59//HLB柱與MCX柱組合14.54912.12//MCX柱3.1622.64//SCX強(qiáng)陽(yáng)離子交換柱8.867.38//WCX柱+SCX柱組合21.0817.57/WCX弱陽(yáng)離子交換柱//96.6080.50HLB柱與WCX組合//101.5284.60表7結(jié)果表明：不使用HLB凈化柱，單純使用SCX強(qiáng)陽(yáng)離子交換柱或MCX混合陽(yáng)離子交換柱，或者使用WCX固相+SCX強(qiáng)陽(yáng)離子交換柱凈化組合凈化，春雷霉素回收率極差。而提取液先過(guò)HLB凈化柱，再通過(guò)SCX強(qiáng)陽(yáng)離子交換柱凈化，春雷霉素回收率高。單獨(dú)使用MCX柱或HLB柱與MCX柱組合，春雷霉素回收率低。SCX強(qiáng)陽(yáng)離子交換柱僅對(duì)春雷霉素有吸附作用，反之，WCX弱陽(yáng)離子交換柱僅對(duì)雙胍辛胺有吸附作用。先經(jīng)HLB凈化，再WCX弱陽(yáng)離子交換柱凈化，雙胍辛胺檢測(cè)更穩(wěn)定。本方法采用先HLB柱凈化，后再分別通過(guò)SCX強(qiáng)陽(yáng)離子交換柱、WCX弱陽(yáng)離子交換柱凈化。2.4.2SCX強(qiáng)陽(yáng)離子交換柱洗脫溶液氨水濃度選擇試驗(yàn)分別取1.00mL春雷霉素、雙胍辛胺標(biāo)準(zhǔn)溶液（100ng）過(guò)活化后SCX強(qiáng)陽(yáng)離子交換柱，淋洗后，分別用8mL甲醇-氨水溶液（98+2）、甲醇-氨水溶液（95+5）、甲醇-氨水溶液（90+10）洗脫，按方法氮吹干定容，考察SCX強(qiáng)陽(yáng)離子交換柱洗脫溶液不同氨水濃度回收率，試驗(yàn)結(jié)果見表8表8洗脫溶液氨水濃度的選擇試驗(yàn)結(jié)果洗脫溶液氨水濃度理論濃度(ng/mL)春雷霉素實(shí)測(cè)濃度(ng/mL)回收率（%）甲醇-氨水溶液（98+2）10085.190285.19甲醇-氨水溶液（95+5）102.19102.19甲醇-氨水溶液（90+10）103.80103.80表8數(shù)據(jù)表明，隨著甲醇-氨水溶液的氨水濃度增大，春雷霉素的回收率也增大，但甲醇-氨水溶液氨水濃度達(dá)到（95+5，體積比）后，春雷霉素的轉(zhuǎn)化率增長(zhǎng)的幅度不大，況且增大氨水濃度，后繼氮吹的時(shí)間加長(zhǎng)，方法采用SCX強(qiáng)陽(yáng)離子交換柱洗脫溶液采用甲醇-氨水溶液（95+5）。2.4.3SCX強(qiáng)陽(yáng)離子交換柱洗脫溶液氨水體積選擇試驗(yàn)分別取1.00mL春雷霉素、雙胍辛胺標(biāo)準(zhǔn)溶液（100ng）過(guò)活化后SCX強(qiáng)陽(yáng)離子交換柱，淋洗后，分別用5mL、10mL、15mL甲醇-氨水溶液（95+5）洗脫，按方法氮吹干定容，考察SCX強(qiáng)陽(yáng)離子交換柱洗脫溶液不同氨水濃度回收率，試驗(yàn)結(jié)果見表9表9洗脫溶液體積的選擇試驗(yàn)結(jié)果洗脫溶液體積理論濃度(ng/mL)春雷霉素實(shí)測(cè)濃度(ng/mL)回收率（%）5mL10025.40925.40910mL93.01293.01215mL93.8093.80表9數(shù)據(jù)表明，隨著甲醇-氨水溶液（95+5）體積增大，春雷霉素的回收率也增大，但甲醇-氨水溶液（95+5）體積達(dá)到10mL后，春雷霉素的轉(zhuǎn)化率增長(zhǎng)的幅度不大，況且增大氨水體積，后繼氮吹的時(shí)間加長(zhǎng)，方法采用SCX強(qiáng)陽(yáng)離子交換柱甲醇-氨水溶液（95+5）體積體積為10mL。2.4.4WCX弱陽(yáng)離子交換柱洗脫溶液甲酸濃度選擇試驗(yàn)分別取1.00mL春雷霉素、雙胍辛胺標(biāo)準(zhǔn)溶液（100ng）過(guò)活化后WCX弱陽(yáng)離子交換柱，淋洗后，分別用10mL5%甲酸乙腈、7.5%甲酸乙腈、10%甲酸乙腈、12.5%甲酸乙腈洗脫，按方法氮吹干定容，考察WCX弱陽(yáng)離子交換柱洗脫溶液不同甲酸濃度回收率，試驗(yàn)結(jié)果見表10表10洗脫溶液甲酸濃度的選擇試驗(yàn)結(jié)果洗脫溶液甲酸濃度理論濃度(ng/mL)雙胍辛胺實(shí)測(cè)濃度(ng/mL)回收率（%）5%甲酸乙腈10078.6878.687.5%甲酸乙腈90.2890.2810%甲酸乙腈95.1695.1612.5%甲酸乙腈96.1596.12表10數(shù)據(jù)表明，隨著甲酸乙腈的甲酸濃度增大，雙胍辛胺的回收率也增大，但甲酸乙腈的甲酸濃度達(dá)到10%后，雙胍辛胺的回收率增長(zhǎng)的幅度不大。方法采用WCX弱陽(yáng)離子交換柱洗脫溶液采用10%甲酸乙腈。2.4.5WCX弱陽(yáng)離子交換柱洗脫溶液甲酸乙腈體積選擇試驗(yàn)分別取1.00mL春雷霉素、雙胍辛胺標(biāo)準(zhǔn)溶液（100ng）過(guò)活化后WCX弱陽(yáng)離子交換柱，淋洗后，分別用5mL、10mL、15mL10%甲酸乙腈洗脫，按方法氮吹干定容，考察WCX弱陽(yáng)離子交換柱10%甲酸乙腈不同體積回收率，試驗(yàn)結(jié)果見表11。表11洗脫溶液體積的選擇試驗(yàn)結(jié)果洗脫溶液體積理論濃度(ng/mL)雙胍辛胺實(shí)測(cè)濃度(ng/mL)回收率（%）5mL10025.40945.40910mL95.1695.1615mL96.8096.80表11數(shù)據(jù)表明，隨著10%甲酸乙腈體積增大，雙胍辛胺的回收率也增大，但10%甲酸乙腈體積達(dá)到10mL后，雙胍辛胺的回收率增長(zhǎng)的幅度不大，況且增大甲酸乙腈體積，后繼氮吹的時(shí)間加長(zhǎng)，方法采用WCX弱陽(yáng)離子交換柱10%甲酸乙腈體積體積為10mL。2.5線性曲線本方法中春雷霉素、雙胍辛烷基磺酸鹽的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線圖見附圖4-圖5。圖4春雷霉素標(biāo)準(zhǔn)工作曲線圖圖5雙胍辛胺標(biāo)準(zhǔn)工作曲線圖從圖4-圖5可見，春雷霉素、雙胍辛烷基磺酸鹽在0.005mg/L～0.2mg/L范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)(r)均≥0.9995，具有較高的準(zhǔn)確性。2.6檢出限試驗(yàn)以3倍信噪比為檢出限，10倍信噪比為定量限，春雷霉素的檢出限為0.001mg·kg-1，定量限為0.004mg·kg-1；雙胍辛胺的檢出限為0.001mg·kg-1，定量限為0.004mg·kg-1。本方法對(duì)沃柑中春雷霉素、雙胍辛胺的定量檢測(cè)限均低于國(guó)家的限量標(biāo)準(zhǔn)，具有較高的靈敏性。2.7加標(biāo)回收試驗(yàn)稱取10g空白基體中加入在500ng（即0.05mg/kg）、2000ng（即0.2mg/kg）、4000ng（即0.4mg/kg）、8000ng（即0.8mg/kg）的春雷霉素、雙胍辛胺混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,按1.2前處理后檢測(cè)，考查加不同標(biāo)準(zhǔn)的回收率，結(jié)果見表12表12凈化柱的選擇試驗(yàn)結(jié)果組合試驗(yàn)理論濃度春雷霉素雙胍辛胺(ng/mL)實(shí)測(cè)濃度(ng/mL)回收率（%）實(shí)測(cè)濃度(ng/mL)回收率（%）500ng（即0.05mg/kg）3020.3667.88%、18.7962.64%2000ng（即0.2mg/kg）12083.4469.53%88.3473.62%4000ng（即0.4mg/kg）240193.280.5%202.4684.36%8000ng（即0.8mg/kg）480448.893.5%402.9683.95%春雷霉素加標(biāo)回收率在67.88%~93.5%；雙胍辛胺加標(biāo)回收率在62.64%~84.36%。不同濃度的加標(biāo)回收率滿足GB/T27404?2008《國(guó)家食品理化檢測(cè)?實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范》的相關(guān)要求。2.8精密度試驗(yàn)為驗(yàn)證方法的實(shí)用性，人為對(duì)沃柑產(chǎn)品添加含有春雷霉素、雙胍辛胺成分的標(biāo)準(zhǔn)溶液，按1.2前處理檢測(cè)，平行檢測(cè)7次，考查本方法的精密度，試驗(yàn)結(jié)果見表13。表13精密度試驗(yàn)結(jié)果春雷霉素雙胍辛胺1（ng/mL)49.10158.312（ng/mL)48.25755.253（ng/mL)46.42656.9654（ng/mL)49.06457.2535（ng/mL)49.83658.3346（ng/mL)48.13759.8867（ng/mL)45.96860.465平均值（ng/mL)48.11358.066標(biāo)準(zhǔn)偏差1.4331.780相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差%2.983.06結(jié)果表明：春雷霉素的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.98%、雙胍辛胺的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.06%。方法重現(xiàn)性好，精密度高，各化合物的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差滿足GB/T27404?2008《國(guó)家食品理化檢測(cè)?實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范》的相關(guān)要求。2.9方法的準(zhǔn)確度（機(jī)構(gòu)間比對(duì)）選取7個(gè)沃柑樣品，按照試驗(yàn)方法進(jìn)行測(cè)定，選擇3家實(shí)驗(yàn)室3個(gè)品牌液相質(zhì)譜聯(lián)用儀進(jìn)行比對(duì)測(cè)定，測(cè)定結(jié)果見表14。表14沃柑中春雷霉素、雙胍辛胺殘留量測(cè)定機(jī)構(gòu)間比對(duì)數(shù)據(jù)樣品名稱廣西博測(cè)檢測(cè)技術(shù)服務(wù)有限公司安捷倫1290-6410廣西壯族自治區(qū)產(chǎn)品質(zhì)量