daam1蓬亂蛋白相關形態(tài)形成活化因子-1tc課件

蓬亂蛋白相關形態(tài)形成活化因子-1

〔Dishevelledassociatedactivatorofmorphogenesis-1，Daam1〕

對心臟發(fā)育是必須的

報告人：唐超2021-3-19背景簡介蓬亂蛋白相關形態(tài)形成活化因子-1〔Dishevelledassociatedactivatorofmorphogenesis-1，Daam1〕，是形成素〔formin〕蛋白家族成員之一。在人體各類組織中廣泛表達。并在介導線性肌動蛋白的裝配來調(diào)節(jié)肌動蛋白細胞骨架中起著重要的作用。早期研究說明在非洲爪蟾Daam蛋白主要對原腸有重要作用(Habasetal.,2001)而果蠅中DAAM突變表現(xiàn)出氣管缺陷(Matuseketal.,2006).這些早期的研究結(jié)果說明，Daam1影響的組織形態(tài)。

但在哺乳動物中Daam1的生理功能迄今都了解不多作者研究發(fā)現(xiàn)作者發(fā)現(xiàn)，Daam1在小鼠發(fā)育中的器官內(nèi)高效表達，包括心臟。研究使用Daam1-缺陷小鼠顯示，Daam1對于心臟形態(tài)發(fā)育是必不可少的在亞細胞水平，Daam1對于絲狀肌動蛋〔F-肌動蛋白〕組配和肌原組織以及細胞粘和定位是必須的。材料與方法五、細胞傷口愈合試驗分析六、超聲心電圖分析LTR報告基因，由上游啟動子起始表達；SA,剪接受體;GFNR,綠熒光硝基復原酶基因;pPKG,PKG啟動子;neo,新霉素抗性基因。基因誘捕載體系統(tǒng)(ROSA-GFNR)結(jié)構(gòu)示意圖結(jié)果1、說明Daam1基因缺陷的小鼠模型構(gòu)建成功2、Daam1在小鼠各處器官均有表達Daam1在正常小鼠中的表達譜圖B：8.5-10.5dDaam1在心臟和腦中PCR檢測Daam1突變小鼠中用半乳糖苷酶染色切片分析發(fā)現(xiàn)Daam1在小鼠全身表達，在心臟處高表達10.5d表達強烈Daam1gt/gt小鼠的心臟表型和功能特性。切片分析E14.5d、f：DORV畸形h、IVSD畸形切片分析P0d、f、h：DORV畸形j：VSD畸形2月齡Daam1小鼠的病理分析圖C：Daam1突變小鼠左心室壁出現(xiàn)腦回溝疏松結(jié)構(gòu)〔箭頭所示〕圖D-a：心臟與身體的比重。圖D-b：超聲波心電圖分析。說明Daam1突變型小鼠LV心肌變厚。Daam1gt/gt拯救小鼠通過NKx2.5Cre小鼠與Daam1gt/gt小鼠雜交獲得Daam1拯救型小鼠。圖A：基因示意圖圖B:E10.5半乳糖苷酶染色說明拯救成功1周齡小鼠組織切片。

daam1gt/+〔A，D〕和Daam1gt/gt/Nkx2-5Cre/+〔C，F(xiàn)〕小鼠表現(xiàn)出正常的室壁和小梁。Daam1gt/gt突變小鼠〔B，E〕顯示

心室致密。作者發(fā)現(xiàn)Daam1缺陷病不影響心肌細胞分化，增殖或凋亡通過Nkx2-5,Tbx20andGata4心臟早期發(fā)育基因,形態(tài)發(fā)生蛋白BMP10心室標志性基因MLC2A、MLC2V都無顯著差異表達圖A：只有Daam1gt/gt小鼠饑餓后F-肌動蛋白明顯降低表達圖B：E12.5心臟中肌動蛋白熒光分析說明，只有Daam1gt/gt小鼠肌動蛋白表達量很低以上結(jié)果說明：在心肌細胞中肌動蛋白細胞骨架的形成和橫紋肌組織的形成是需要Daam1的Daam1gt/gt小鼠在心肌細胞中橫紋肌的形成受到干擾圖A:E12.5Daam1gt/gt小鼠心肌細胞的粘附蛋白α-catenin和N-cadherin表達明顯混亂圖B：Daam1gt/gt小鼠橋粒連接異常圖C:E12.5Daam1gt/gt小鼠心肌黏接細胞排列無規(guī)那么圖D：Daam1gt/gt小鼠連接細胞變少圖d：為差異分析Daam1在心肌細胞中對細胞粘附是非常重要的Daam1缺陷小鼠新生